非病毒载体在siRNA体内递送中的应用

RNAi是一种由siRNA触发的特异基因沉默机制。自其发现以来,RNAi技术迅速发展为药物靶标确认和功能基因组学研究的新策略,并有望成为一种疾病基因治疗学方法。然而,由于siRNA体内不稳定的理化性质,递送siRNA成为RNAi发展的最大障碍。因此研发能够保护siRNA、促进细胞吸收、正确细胞定位和包内体逃逸,结合具有高生物相容性与减少非特异沉默和毒性反应的体内递送系统是RNAi成功用于临床治疗的关键。本文就体内非病毒载体方式递送siRNA的研究进展进行综述。     

抗人骨肉瘤单克隆抗体5D3的特异性鉴定

目的 鉴定抗人骨肉瘤单克隆抗体（mAb)5D3的特异性。方法 用免疫组化染色法检测mAb 5D3与骨肉瘤细胞系、骨肉瘤组织、其它肿瘤组织及正常组织的反应性。结果 免疫组化染色检测发现，mAb 5D3相应抗原在部分骨源性肿瘤，特别是骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系呈高度表达，中度以上染色者占阳性总数的77％以上，主要分布于细胞核上。14种正常组织中未见阳性反应。结论 mAb 5D3具有高度特异性，为骨肉瘤的早期诊断及免疫治疗提供了可能性。     

骨肉瘤HER2基因表达增加肺转移发生危险度

目的:研究骨肉瘤中HER2基因表达与骨肉瘤患者发生肺转移的关系。方法:对43例骨肉瘤患者的临床病理资料进行回顾性研究,应用HER2单克隆抗体对组织切片进行免疫组织化学染色,并将上述资料与随访患者发生肺转移情况进行统计学分析。结果:骨肉瘤患者HER2表达与患者发生肺转移相关(P<0.05),HER2高表达的骨肉瘤患者发生肺转移的可能性大。结论:HER2检测是判断骨肉瘤发生肺转移的一项有价值的指标;同时,HER2基因为骨肉瘤的生物治疗提供一种可能的靶点。     

人骨形成蛋白2反义RNA对骨肉瘤细胞OS-9901生物学活性的影响

探讨骨形成蛋白（BMP）对人骨肉瘤细胞的作用及意义．方法：将重组人BMPZ基因的反义核酸逆转录病毒表达载体PDOR－AB用脂质体导入BMP表达阳性的骨肉瘤细胞OS－99OI，观察骨肉瘤细胞OS－99OI的BMP表达、增殖活性、肿瘤抑制基因＂m23的表达、细胞周期和电镜下形态改变．结果：转染后，OS－99o1细胞中内源性的BMP表达产物明显下降；增殖活性明显下降；肿瘤转移抑制基因＂m23表达未见改变；细胞周期分析表明：GI期细胞比例上升，S期比例下降；电镜观察可见细胞质中溶酶体增多，染色质有断裂现象．结论：反义核酸技术阻断BMPZ在OS－99o1细胞中的表达后，肿瘤细胞的增殖活性降低，证实骨肉瘤细胞中BMP的表达增加了肿瘤细胞的增殖活性．     

骨形态发生蛋白复合材料修复狗股骨微波灭活骨缺损的实验研究

用脱钙骨基质颗粒、骨水泥和骨形态发生蛋白复合后的材料修复狗股骨微波诱导高温原位灭活骨缺损。显露狗右侧股骨中段 ,微波诱导高温 5 0℃、2 0min原位灭活 ,造成 2 5cm× 1 0cm骨缺损 ,植入复合材料 ,左侧单纯植入骨水泥做对照。分别于术后不同时间行X线照相、99mTc MDP骨显像、组织学观察和生物力学测定。结果发现 ,该复合材料极易塑形 ,能用于修复各种形状的骨缺损并能早期负重 ,其内部存在有利于新生血管长入的不规则间隙 ,最终与宿主骨达到“生物铆定”。     

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1d（HIF-1α）、多药耐药基因（MDR1）及多药耐药相关蛋白（MRP1）在脊索瘤细胞系CM－319中的表达及临床意义。[方法]用RT—PCR检测HIF－1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF－1α、MRPl蛋白在CM－319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF～1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达（P〈0．01）,间接免疫荧光及免疫细胞化学可以检测到HIF-1α表达在细胞浆及核中,而MRP1主要表达在细胞浆中。[结论]HIF-1α与MRP1的过度表达在脊索瘤的放化疗抵抗中可能具有重要作用,而MDR1表达未被检测到,提示脊索瘤的放化疗抵抗主要与HIF－1α和MRP1相关。     

中低温度热疗诱导骨肉瘤细胞株凋亡

目的:研究加热诱导成骨肉瘤细胞株(OS-9901)凋亡,为中低温度热疗辅助成骨肉瘤综合治疗提供理论依据. 方法:成骨肉瘤OS-9901细胞株分别经不同温度的热疗作用1 h,用TUNEL法染色及计数、透射电子显微镜观察其对骨肉瘤细胞株的诱导凋亡作用. 同时通过免疫组织化学染色,观察43℃ 1 h热疗对成骨肉瘤细胞株OS-9901的Bcl-2蛋白表达的影响. 结果:43℃作用1 h的成骨肉瘤细胞株继续培养6 h后出现大量异常细胞,透射电镜观察可见有典型的细胞凋亡特征性形态改变. TUNEL法染色后通过计数可见有42%的细胞凋亡比例. 免疫组织化学显示,43℃作用1 h的成骨肉瘤细胞株6 h后Bcl-2蛋白的表达明显减少. 结论:43℃作用1 h可以诱导成骨肉瘤细胞株OS-9901凋亡. 加热后成骨肉瘤细胞Bcl-2表达减少,从而进一步诱导发生细胞凋亡,为热疗诱导肿瘤细胞凋亡的机制提供了部分理论依据.     

tBid基因的表达及其对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用

目的：观察tBid基因在骨肉瘤细胞中的表达及其对转染的SOSP-9607细胞的凋亡作用。方法：采用脂质体转染的方法,将tBid基因转染骨肉瘤细胞,间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达和细胞形态学变化,进一步电镜观察其超微结构改变。MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况,通过Annexin V、染色流式细胞仪检测来观察其促凋亡作用。结果：转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测tBid的表达,细胞出现凋亡。电镜观察呈现出典型的凋亡特征。MTT实验发现细胞的增殖被明显抑制。Annexin V染色流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,与对照组细胞（凋亡率为6%）相比,其凋亡率为35.8%。结论：tBid基因可以在转染的SOSP-9607细胞中表达,并可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

Repair with decalcified bone matrix,bone cement and bone mor phogenetic protein for canine femoral defect caused by microwave-induced hyperthermia

Itiscommontomeetinorthopedicclinicthebonedefectscausedbybonetumorsortraumawhichhavenoidealmethodstorepairatpresent.Howeverhenoticeableclinicalresultshavebeengotbythesurgicaltreatmentforbonetumorswithmicrowave-inducedhyperthermia[1－4],andtheallograftdecalcifiedbonematrix(DBM)combinedwithbonecement(BC)hadbeenusedtorepairthebonedefectscausedbymicrowave-inducedhyperthermiainrecentyears[3,4]Inordertofurtherimprovetheboneformationinduc-tiveactivity,wetrytomixthebovinebonemorpho-geneticprotein(bBM…     

人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607的建立及其生物学特性的观察

目的 建立人成骨肉瘤细胞系。方法 采用原代组织培养法对成骨肉瘤手术标本进行培养,对存活细胞进行形态学观察、组织化学染色、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶谱、细胞周期检查、核型分析、异种移植。结果 建立细胞系ＳＯＳＰ－９６０７,其形态学表现、组织化学染色、ＬＤＨ同工酶谱等均符合成骨肉瘤的特征。经１年体外培养,已连续传代１２０次,细胞倍增时间２９．８ｈ,细胞周期测定Ｇ１期为４８．２％、Ｇ２期为２０．９％、Ｓ