妊娠早期外周血和蜕膜CD4~+CD25~+FoxP3~+/CD127~-T细胞检测及意义

目的 研究妊娠早期外周血和蜕膜组织中CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-T细胞的数量变化,并探讨相关性.方法 17例原因不明复发性流产(URSA)患者(URSA组)和20名正常健康早孕者(对照组)于人工流产时分别采集外周血和蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞悬液,分别加入CD4-PE-Cy5.5、CD25-FITC或CD25-APC和细胞表面标记CD127-PE或细胞内标记FoxP3-PE,流式细胞仪检测样本中CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-T细胞的百分比,并进行线性相关分析.结果 与对照组比较,URSA组蜕膜组织中CD4+CD25+ FoxP3+和CD4+CD25+ CD127-T细胞百分比明显降低(均P<0.05);两组间外周血CD4+CD25+ FoxP3+和CD4+CD25+ CD127-T细胞百分比比较差异无统计学意义.组内比较显示,两组外周血和蜕膜组织中CD4+CD25+FoxP3+与CD4+CD25+CD127-T细胞百分比比较,差异均无统计学意义(均P﹥0.05).相关分析显示,两组CD4+CD25+ FoxP3+与CD4+CD25+ CD127-T细胞的百分比在外周血(r=0.9858, r=0.6870)和蜕膜组织(r=0.6089, r=0.9583)均呈显著正相关(均P﹤0.05).结论 URSA的发生可能与蜕膜CD4+CD25+ 调节性T细胞数量减少有关,而外周血CD4+CD25+调节性T细胞可能不参与URSA的免疫发病机制.细胞表面标记CD127可能成为鉴定和分离CD4+CD25+调节性T细胞的一种新的特异性标记物.     

哮喘患者外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞测定

目的：比较不同研究对象外周血Rho激酶及CD4+CD25+调节性T细胞的表达规律，探讨Rho激酶和CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘患者中的变化和相关性。方法：选取中、重度哮喘患者16例，健康对照组14例，通过年龄、性别配对，ELISA测定所有研究对象血清Rho激酶水平，流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞水平，所有研究对象经肺功能仪测定肺功能。结果：哮喘组外周血Rho激酶表达水平高于对照组(P<0.05)，外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平低于对照组(P<0.05)；两组外周血Rho激酶与肺功能第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second，FEV1)占预计值百分比(FEV1%)无相关关系(r=-0.491，P>0.05)；两组外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与肺功能FEV1%呈轻度正相关关系(r=0.380，P=0.038)；两组外周血Rho激酶与CD4+CD25+调节性T细胞水平无相关关系(r=-0.438，P>0.05)。结论：哮喘患者外周血Rho激酶水平升高，CD4+CD25+调节性T细胞水平降低，可能在哮喘发病过程中起一定的作用。     

Th17及CD4~+CD25~+调节性T细胞在结肠癌患者外周血中的表达

目的检测结肠癌患者外周血Th17及CD4+CD25+调节性T细胞水平及功能状态,探讨其在结肠癌发病过程中的免疫机制。方法应用流式细胞仪测定结肠癌患者及对照组外周血中Th17和CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比,采用ELISA法测定两组患者外周血IL-17、IL-23、TGF-β1和IL-6的水平。结果结肠癌患者外周血Th17、CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比及各相关的细胞因子较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);中晚期结肠癌组外周血Th17、CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比及各相关的细胞因子较早期结肠癌组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Th17、CD4+CD25+调节性T细胞分化失衡与结肠癌发生、发展密切相关,为结肠癌免疫治疗提供新思路。     

HBV转基因小鼠CD4+CD25+调节性T细胞免疫抑制功能的研究

目的 通过对HBV转基因小鼠CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量和免疫抑制功能的研究,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在乙肝免疫耐受中的作用.方法 用流式细胞术对12只HBV转基因小鼠和12只正常小鼠外周血CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞的频率进行检测;磁珠分选小鼠脾CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞,分为HBsAg刺激组和ConA刺激组体外单独和共培养,ELISA方法检测诱生的细胞因子IL-2.结果 与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠外周血CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量差异无统计学意义(P＞0.05).HBsAg刺激组,CD4+CD25-T细胞单独或共培养,HBV转基因小鼠CD4+CD25-T细胞诱生IL-2水平显著低于正常小鼠(P＜0.01);ConA刺激组,HBV转基因小鼠CD4+CD25-T细胞诱生IL-2水平与正常小鼠相比则差异无统计学意义(P＞0.05);两组小鼠CD4+CD25-T细胞单独培养时诱生IL-2水平均显著高于共培养(P＜0.01).结论 与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量和免疫抑制功能差异无统计学意义,但T细胞水平对乙肝病毒存在特异性免疫耐受.CD4+CD25+调节性T细胞可抑制CD4+、CD8+T细胞.     

外周血中3种标记的Tregs细胞表达频率比较 邢应如1*,孟阿娜1,胡 东2,张荣波2

目的:分析CD4+CD25High?CD4+CD25+CD127Low/–?CD4+CD25+FoxP3+ 3种标记的Tregs细胞比例的相关性,探讨不同荧光素组合标记Tregs细胞的鉴定效果?方法:随机抽取健康体检者60例,平均分成2组(Ⅰ组?Ⅱ组),Ⅰ组用CD25-APC/CD127-PE/CD4-FITC 三色抗体标记,Ⅱ组用CD25-PE/CD127-Alexa Fluor■647/CD4-PerCP-Cy5.5标记;另选Ⅰ组10例,用CD25-FITC/FoxP3-PE/CD4-PerCP-Cy5.5/CD127-Alexa Fluor■647 四色抗体标记;流式细胞仪检测,CellQuest 软件分析,比较Tregs细胞结果差异,分析FoxP3+与CD127Low/–的相关性?结果:CD25+CD127Low/–Tregs细胞Ⅱ组(7.89 ± 1.37)%明显高于Ⅰ组(6.37 ± 1.83)%(P=0.001),2组中CD4+CD25High和CD4+CD25+CD127Low/–的相关系数(r)分别是0.944?0.916;(94.08 ± 1.93)%的CD25+FoxP3+细胞低表达CD127,CD25+FoxP3+和全血检测CD25+CD127Low/–的Tregs细胞有较高的相关性(r=0.846),结果差异不明显(P=0.774)?结论:CD25+CD127Low/–是Tregs细胞特异性标志,适合临床应用?全血检测Tregs细胞,用CD25-APC?CD127-PE?CD4-FITC荧光素组合检测结果与FoxP3相关度高?     

不同临床类型HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞分布比例

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)感染后不同临床类型感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的分布比例。方法:流式细胞术检测59例不同临床类型HCV感染者(慢性丙型肝炎35例、丙型肝炎肝硬化14例、HCV感染后痊愈者10例)及33例健康对照者的外周血CD4+CD25+调节性T细胞。结果:慢性丙型肝炎、丙型肝炎肝硬化、HCV感染后痊愈者和健康对照者外周血CD4+CD25+调节性T细胞分布比例的差异有统计学意义(F=13.944,P<0.001),慢性丙型肝炎和丙型肝炎肝硬化组明显高于HCV感染后痊愈和健康对照组。HCV慢性感染者、丙型肝炎肝硬化患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞分布比例与HCV RNA载量呈正相关(r=0.780和0.870,P<0.05)。结论:外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平影响HCV感染后疾病进程。     

胃癌患者外周血中 CD4+CD25+ 调节性 T 细胞和 Th17 细胞的表达和临床意义

目的检测CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞在胃癌患者外周血中的表达,探讨两种细胞在胃癌中的临床意义。方法随机选取我院收治的胃癌患者30例,作为胃癌组,另选取同期在我院进行健康体检人员30例作为正常组,对两组外周血中CD4、CD25、Foxp3、IL-17的表达进行检测,分析CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的数量和比例。结果胃癌组外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的表达均高于正常组(P0.05);胃癌组中晚期、T3+T4、有淋巴结转移患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞的表达分别高于早期、T1+T2、无淋巴结转移患者(P0.05),但不同肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移患者之间Th17细胞的表达差异均不显著(P0.05)。结论胃癌患者外周血中CD4~+CD25调节性T细胞和Th17细胞的表达均显著升高,且提示肿瘤进展和CD4~+CD25~+调节性T细胞相关,但与Th17细胞无明显统计学相关。     

乳腺癌患者CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的变化

目的 检测临床乳腺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)和外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的变化,并探讨其意义.方法 分离22例乳腺癌患者PBMCs和TILs, 用流式细胞仪检测CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的比例,同时检测其Foxp3的表达;进一步用流式细胞仪检测CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞记忆分子CD45RO、CD44和CD62L的表达水平;用3H-TdR增殖实验观察CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用.结果 乳腺癌患者PBMCs和TILs中CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的比例明显增加,并在肿瘤局部存在显著的富集;CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞高表达Foxp3,在体外能有效抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,并高表达记忆分子CD45RO、CD44,低表达CD62L,显示了效应/记忆样表型.结论 CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞在乳腺癌患者肿瘤局部有明显富集,这可能是肿瘤长期免疫逃逸的重要原因.     

FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞细胞增殖及功能的影响

目的探讨FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)比例及功能的影响。方法选择43例胃癌术后化疗患者,于化疗前1天、化疗结束后第5天采集外周血。采用流式细胞法检测外周血Treg细胞的比例;RT-PCR法检测外周血Treg细胞FoxP-3 mRNA表达水平;将分选的Treg细胞和CD4+CD25-T细胞按单纯Treg细胞组、1∶1混合细胞组,单纯CD4+CD25-T细胞组培养,3H-TdR掺入法检测Treg细胞体外抑制CD4+CD25-T细胞增殖的能力。结果 43例胃癌患者化疗前1天外周血Treg细胞占CD4+T细胞的比例为17.63%±6.31%,化疗后降至13.79%±4.82%(P<0.01);化疗后FoxP-3表达水平较化疗前显著下降(P<0.01);化疗后Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的增殖抑制率由化疗前的54.64%±5.15%下降至24.63%±2.34%(P<0.01)。结论 FOLFOX化疗方案可减少胃癌患者外周血Treg细胞数量,下调其表面标志物FoxP3基因的表达水平,减弱Treg细胞的免疫抑制功能,有利于诱生抗肿瘤免疫效应。     

大鼠脊髓损伤前后外周血CD3+ CD8+ CD28-和CD3+ CD8+ CD28+细胞亚群的变化

目的：：探讨SD大鼠脊髓损伤( spinal cord injury,SCI)前后外周血抑制性T细胞( suppress T lymphocytes,Ts)和细胞毒性T细胞( cytotoxic T lymphocytes,Tc)亚群的变化规律。方法：取10只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学脊髓损伤撞击仪制作重物坠落SCI模型。于SCI前及后1、3、5、7、14、21、28和56 d收集外周血,流式细胞术检测外周血淋巴细胞CD3+CD8+CD28-Ts 和CD3+CD8+CD28+Tc亚群的变化规律。结果：SCI前,正常大鼠外周血中Ts和Tc亚群占CD3+总T细胞的百分比分别为(30.27±12.09)%和(14.75±4.29)%。损伤后1 d,Ts的比例为(22.58±12.12)%。术后5 d时其百分比下降至最低,为(20.86±10.41)%。术后7~21 d,其比例恢复至术前水平,28 d时显著升高,其比例为(37.90±12.98)%。56 d时其比例为(33.79±11.44)%,恢复至损伤前水平(P>0.05)。 Tc和Ts亚群的变化趋势相反,在损伤后1、5、21和28 d时其比例分别为(17.29±7.10)%、(20.02±6.24)%、(23.89±6.78)%和(13.81±11.21)%。但56 d时其比例没有恢复至术前水平,而是进一步下降至(8.71±6.44)%(P<0.01)。结论：在SCI后的早期阶段,SD大鼠外周血Tc占明显优势,提示Ts功能抑制、Tc功能增强是SCI免疫损伤机制之一。 SCI后5~21 d是进行免疫调节治疗的关键时间窗。     

CD_4~+ CD_(25)~+调节性T细胞与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,而且炎性反应的起始与持续都有先天性和获得性免疫应答的参与。CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg)是一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群,能够抑制效应T细胞的活性。过去许多研究已证实,CD4+ CD25+ Treg在动脉粥样硬化中起着重要作用,本文综述了CD4+ CD25+ Treg与动脉粥样硬化的关系。     

慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化

目的研究慢性肝炎外周血淋巴细胞亚群的变化。方法健康医护人员10例，乙肝病毒携带11例，慢性乙型肝炎21例通过流式细胞术进行外周血CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋检测。结果CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋比值、CD3^＋CD8^＋百分率在三组间有显著性差异（P〈0．01，P〈0．05）。CD3^＋CD4^＋百分率，CD3^＋百分率在慢性乙型肝炎组，乙肝病毒携带组与对照组无统计学意义。结论慢性乙型肝炎患者体内存在细胞免疫功能障碍，外周血CD3^＋CD8^＋百分率升高，CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋比值降低，无CD3^＋CD4^＋百分率变化，可能与其功能变化有关。     

原发性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+细胞亚群的分析

目的研究原发性肝癌(HCC)病人外周血CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子的表达.方法用流式细胞仪对20例原发性肝癌病人的CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子(即CD8+CD28+和CD8+CD28)的表达进行检测.结果HCC病人CD8+细胞百分率升高,CD8+CD28+细胞百分率降低,CD8+CD28细胞百分率升高,与对照组相比具有显著性差异.CD8+CD28+、CD8+CD28-细胞百分率与CD8+T细胞百分率的相关性研究表明,CD8+CD28-细胞数与CD8+T细胞数之间呈正相关.结论HCC病人CD8+细胞升高,CD8+细胞上CD28分子的表达是异常的,即CD8+CD28-细胞数升高,CD8+CD28+细胞数降低;CD8+T细胞的升高是CD8+CD28-细胞亚群升高的结果.     

分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD_4~+、CD_8~+表达及CD_4~+/CD_8~+值的变化

目的探讨儿童肥大腺样体T淋巴细胞亚群免疫失衡与反复发作性分泌性中耳炎的关系。方法72例反复发作性分泌性中耳炎组患儿及30例单纯腺样体肥大组患儿腺样体组织,采用免疫组化方法检测T淋巴细胞CD+4、CD+8的表达并计算CD+4/CD8+值,分析2组间是否有差异。结果反复发作性分泌性中耳炎组患儿腺样体组织中CD4+、CD+8细胞数及CD+4/CD+8值分别为42±9,20±7,2.10±0.17,高于单纯腺样体肥大组16±8,11±6,1.39±0.15,差异有统计学意义(P<0.01);其中CD+4细胞数明显多于CD+8细胞数。结论反复发作性分泌性中耳炎的形成与T淋巴细胞亚群免疫失衡有关。     

Expression of CD8+ CD28+ and CD8+ CD28- in the peripheral blood of pancreatic cancer patients

目的 探讨胰腺癌患者外周血CD8+T淋巴细胞亚群及CD8+T淋巴细胞上CD28分子和CD103分子的表达及其临床意义.方法 应用流式细胞术对52例胰腺癌患者(胰腺癌组)和40名健康体格检查者(对照组)的外周血淋巴细胞中CD8及CD28分子表达情况进行检测;再选取10例胰腺癌患者,分别检测其外周血、癌组织及癌旁组织中CD103分子的表达.结果 胰腺癌组CD8+ CD28+T淋巴细胞比例为(9.88±4.32)％,较对照组的(14.12±4.95)％显著降低(P＜0.01) ;CD8+ CD28-T淋巴细胞比例为(13.13±5.52)％,与对照组[(11.41±4.01)％]的差异无统计学意义(P＞0.05).淋巴结转移组CD8+ CD28+、CD8+CD28-T淋巴细胞比例分别为(10.92±4.54)％、(13.62±4.52)％,无淋巴结转移组分别为(10.54±3.83)％、(14.15±3.27)％,两组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).Ⅲ期胰腺癌患者CD8+ CD28+T淋巴细胞比例为(6.45±1.22)％,显著低于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ期的(13.01±2.31)％、(10.79±1.64)％、(10.5±1.45)％(P值分别＜0.01或0.05).胰腺癌患者癌组织中CD8+T淋巴细胞上CD103分子表达率为26％,显著高于外周血及癌旁组织中的2％及8％(P值均＜0.01).结论 胰腺癌患者外周血中CD8+ CD28+T淋巴细胞的比例下降和功能减退,E-cadherin/αEβ7信号通路异常,可能与胰腺癌患者机体免疫力下降有关.     

CD69在慢性乙肝患者CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达

目的：观测慢性乙肝患者外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞早期激活标志CD69的表达.方法：静脉采集慢性乙肝患者普通肝素抗凝血2 ml，在植物血凝素（PHA）20μg/ml条件下进行全血培养，4 h后用双色免疫荧光标记流式细胞术检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达。结果：正常人外周血只有很少量CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子，经PHA刺激后CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达率明显升高,较刺激前有统计学差异（P＜0.01）。同样,慢性乙肝患者在激活前后也有统计学差异（P＜0.01）；慢性乙肝患者在PHA刺激前有一部分CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子,明显高于对照组（P＜0.01）。结论：本研究结果可能与乙肝患者体内病毒免疫紊乱有关系。     

分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD4+、CD8+及CD4 +/CD8+值的表达

目的 探讨儿童肥大腺样体T淋巴细胞亚群免疫失衡与反复发作性分泌性中耳炎的关系.方法 72例反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织及34例非反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织.采用免疫组化方法检测上述二组T淋巴细胞CD4 +、CD8+的表达及CD4+/CD8 +值,统计分析二组之间是否有差别.结果 反复发作性分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD4+ 、CD8+细胞数及CD4+/CD8+ 分别为41.9±9.07,20.45±7.08,2.10±0.17;较非反复发作组17.4±6.85,13.02±5.88,1.33±0.11有显著性差异(P <0.05);其中CD4+细胞数明显多于CD8+细胞数.结论 反复发作性分泌性中耳炎的形成与T淋巴细胞亚群免疫失衡有关.     

IL-15诱导CD4+CD25- T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞转化的机制探讨

目的初步探讨IL-15诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)转化的机制。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的CD4+CD25-T细胞,依据加入细胞因子不同分为4组:对照组、IL-15组、拮抗1组、拮抗2组,其中后3组均于培养的第1天加入IL-15,而拮抗1组和拮抗2组分别于培养第1、3天加入STAT5a封闭性肽。流式细胞仪检测细胞表型变化,3H-TdR掺入法检测IL-15诱导产生的Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western blot法检测细胞内p-STAT5的变化。结果与对照组比较,IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达上调,IL-15诱导生成的Tregs具有较天然Tregs稍弱的免疫抑制功能。Western blot检测结果显示,IL-15组p-STAT5表达较对照组明显上调。加入STAT5a封闭性肽后,拮抗1组和拮抗2组中CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达下调,但拮抗2组[细胞表型分别为(47.9±6.0)%、(20.7±3.4)%]改变较拮抗1组[细胞表型分别为(30.7±8....     

小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离纯化及鉴定

目的:调节性T细胞(Treg)是近年来免疫学研究的热点.文中研究获取高纯度Treg的方法及其表型的鉴定.方法:流式细胞术(FACS)分析正常小鼠脾脏中CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25-3个细胞亚群的表型;采用二步磁性细胞分选法(MACS)纯化小鼠脾细胞中CD+CD25+Treg,并对分离后的细胞表型进行鉴定.结果:①依CD25表达水平不同将小鼠天然CD4+T细胞划分为3群,转录因子Foxp3、细胞毒T淋巴细胞相关分子-4( CTLA-4/CD152)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR )、CD69在CD4+CD25+细胞亚群呈显著性高表达(P<0.01),CD4+CD25+T细胞主要存在于CD45RB低表达细胞亚群,CD28的表达在CD4+CD25+细胞亚群明显下降(P<0.05).②使用二步MACS法从正常小鼠脾脏中分离CD4+CD25+T淋巴细胞的得率为1%～1.2%,纯度为87.29%～92.04%.FACS分析结果显示,Foxp3优先表达于CD4+CD25+T细胞亚群,表达率为(66.60±1.03) %,而在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群呈低水平表达,分别为( 23.97±2.00)%和(16.78±3.24%).CTLA-4在CD4+CD25+T细胞亚群表达率为(77.37±1.67) %,明显高于在CD4+ 和CD4+CD25-T细胞亚群的表达[(21.97±2.39)%和(18.04±3.16)%].纯化的CD4+CD25+T细胞亚群表现为CD127的低表达.结论:MACS阴性加阳性二步分选法避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+ Treg细胞表型及功能特征的细胞.