结核分枝杆菌Hsp60 影响小鼠巨噬细胞抗原提呈相关分子表达的研究

目的:探讨结核分枝杆菌热休克蛋白60(MTB Hsp60)对小鼠骨髓巨噬细胞MHCⅡ类分子表达的影响。方法:采用50 ng/ml、100 ng/ml的MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞,分别在24 h、48 h、72 h收集细胞提取mRNA,采用实时荧光定量PCR检测PⅣ、PⅢ、PⅠ、IL-27、CⅡTA的mRNA表达水平;分别用50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml的MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ/F4/80、CD86/F4/80的百分比。结果:50 ng/ml MTB Hsp60刺激后CⅡTA、PⅣ、IL-27、PⅠ在3个时间点的总体比较差异有统计学意义(P0.05),3个时间点两两比较,CⅡTA在72 h的表达与24 h的表达相比明显降低(0.543±0.034 vs 1.859±0.689,P0.017),PⅣ在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(0.442±0.061 vs 0.834±0.030,P0.017),IL-27在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(1.519±0.041 vs 1.711±0.016,P0.017),72 h的表达与24 h的表达相比明显增高(2.606±0.193 vs 1.711±0.016,P0.017),PⅠ在48 h的表达与24 h的表达相比明显降低(1.221±0.019 vs 1.567±0.037,P0.017);100 ng/ml MTB Hsp60刺激后CⅡTA、IL-27、PⅠ在3个时间点的总体比较差异有统计学意义(P0.05),3个时间点两两比较,IL-27在48 h、72 h的表达与24 h的表达相比明显增高(2.609±0.246/0.867±0.049 vs 0.602±0.096,P0.017),PⅠ在72 h、48 h的表达与24 h的表达相比明显增高(0.811±0.085/1.361±0.199 vs 0.526±0.140,P0.017)。100 ng/ml MTB Hsp60刺激后的PⅢ、PⅠ、CⅡTA的mRNA表达水平相较于50 ng/ml MTB Hsp60刺激后有所下调(P0.05),而PⅣ的mRNA表达水平增高(P0.05)。MHCⅡ/F4/80的表达百分比在3个不同浓度刺激后比较差异具有统计学意义(P0.05):MHCⅡ/F4/80的表达在200 ng/ml MTB Hsp60刺激后相较于50 ng/ml MTB Hsp60的刺激有所下调,而CD86/F4/80的mRNA表达水平增高。结论:MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬细胞后CⅡTA、PⅣ、IL-27、PⅠ、PⅢ的mRNA表达有显著变化且受到MTB Hsp60浓度和时间的影响,MHCⅡ类分子随MTB Hsp60刺激浓度的增加而减少,CD86随MTB Hsp60刺激浓度的增加而增加,提示MTB Hsp60抑制小鼠骨髓巨噬细胞MHCⅡ类分子的表达,促进黏附分子的表达,即Hsp60可能抑制巨噬细胞抗原提呈功能从而影响其抗原提呈相关分子的表达,使MTB逃避巨噬细胞的免疫杀伤,进一步导致MTB慢性感染和潜伏感染。     

M2型巨噬细胞标志物CD163与肿瘤的研究进展

CD163是清道夫受体超家族重要成员，主要表达于单核细胞和巨噬细胞表面，被认为是一种高特异性的M2型肿瘤相关巨噬细胞标志物。CD163既可作为免疫调节剂抵抗炎症，又作为肿瘤相关巨噬细胞家族成员对肿瘤的增殖、转移等产生重要影响。CD163分子在恶性肿瘤中的表达日益受到关注，已有研究表明CD163与乳腺癌、膀胱癌、肺癌及结直肠癌等恶性肿瘤密切相关。本文对CD163的结构功能及在多种肿瘤的研究进展进行综述。     

重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应中血清IL-10及其抗体的检测

目的检测重组人白细胞介素-10(recombinant human interleukiu-10,rhIL-10)作用后皮肤移植家兔血清中IL-10及其抗体的变化,探讨外源性hIL-10诱生IL-10增强抑制效应和外源性hIL-10有无免疫原性,为rhIL-10的应用提供实验依据。方法家兔分为6组:①组rhIL-10低剂量,②组rhIL-10高剂量,③组环孢菌素(CsA)低剂量,④组CsA高剂量,⑤组rhIL-10+CsA低剂量联合,⑥组生理盐水组。移植术前1d开始用药,连续用药10d,肌肉注射。术前1d、术后1d、4d、7d、14d、21d、28d分别取外周血,分离血清,以ELISA方法检测血清中IL-10及IL-10抗体水平。结果①移植家兔血清IL-10检测,术后各组结果较术前均有升高,在术后7d达到高峰,术后4d、术后7d rhIL-10低剂量及高剂量组IL-10水平高于其余各组(P<0.05)。CsA低剂量及高剂量组IL-10水平低于rhIL-10组及联合组(P<0.05)。②移植家兔血清抗IL-10抗体检测,术后各组检测结果较术前均无明显升高(P>0.05),与抗体阳性对照比较有显著差异(P<0.05)。结论 rhIL-10抗家兔皮肤移植反应中,家兔血清IL-10含量在皮肤移植后明显升高,表明外源IL-10诱导内源性IL-10分泌,从而增强抑制排斥反应;外源IL-10注射后家兔血清中没有检测出特异性抗体,外源性rhIL-10进入机体没有免疫原性。     

重组hIL-10抗家兔皮肤移植反应中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化

目的:检测家兔皮肤移植经rhIL-10作用后,血清中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化,探讨CC、IL-8/CXCL8趋化因子在rhIL-10抗免疫排斥机制中的作用。方法:皮肤移植家兔分6组:①rhIL-10低剂量,②rhIL-10高剂量,③CsA低剂量,④CsA高剂量,⑤rhIL-10+CsA低剂量联合和⑥生理盐水组;每只家兔均于术前1天开始肌注给药,连续注射10天;各组分别于术前1天、术后1、4、7、14、21、28天取外周血,分离血清,以ELISA法检测移植家兔血清CC、IL-8/CXCL8趋化因子水平。结果:(1)术后各组IL-8水平均升高,术后4天、7天⑥组IL-8水平高于各组(P<0.05)。(2)术后各组MCP-1水平明显升高,术后1天、4天,⑥组MCP-1水高于各组(P<0.05),术后7天⑥组MCP-1水平高于①组、⑤组(P<0.05);术后7天、14天CsA抑制组高于联合组(P<0.05)。(3)术后各组MIP-1α明显升高,术后4天⑥组MIP-1α水平高于①、③、⑤组,术后7天⑥组MIP-1α水平高于各组(P<0.05);(4)术后各组MIP-1β水平升高,但同时间段组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CC、IL-8/CXCL8趋化因子在皮肤移植后明显升高,表明在急性排斥反应中发挥了重要作用,随排斥反应加重而进一步增高,皮片排斥后下降,可作为观察和诊断移植排斥的合适标志物。     

HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热相关性的研究

目的：探讨HIA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热（EHF）的关联性。方法：采用群体研究方法，应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术对100例流行性出血热患者（患者组）和100例健康对照者（健康对照组）进行HIA-DR、DQ基因分型，比较其等位基因频率（GF），并计算其相对危险度（RR）。结果：EHF患者组HLA-DRB1＊16基因频率较对照组明显增高（Pat=3．58，χ^2=4．916，P=0．0266〈0．05）；患者组HIA-DQ各等位基因频率与对照组比较差异无显著性。结论：研究提示在遵义地区汉族人群中，HLA-DRB1＊16基因与EHF呈正相关，HLA-DRB1＊16基因可能是EHF的易感基因。     

空肠弯曲菌DNA疫苗构建及其疫苗免疫程序研究

目的:构建空肠弯曲菌peb1A基因真核表达载体,探讨DNA疫苗不同免疫程序的免疫效果。方法:以重组pET28a(+)-peb1A质粒为模板,将空肠弯曲菌peb1A基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染COS-7细胞中表达,Western blot鉴定表达蛋白;昆明小鼠随机分组:设空白对照组、空载体对照组、pcDNA3.1(-)-peb1A实验组,用ELISA法检测免疫后的昆明小鼠血清IgG和IgM抗体水平。结果:重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A经双酶切和PCR鉴定,构建正确。peb1A基因测序结果与GenBank中peb1A基因序列一致。重组质粒成功转染COS-7细胞,并能正确表达重组蛋白。裸DNA组IgG水平均高于两对照组,有显著性差异(P<0.05)。同一剂量短时间(0、10、20天)免疫程序优于长时间(0、15、25、35天)免疫程序(P<0.05)。结论:成功构建空肠弯曲菌真核表达重组质粒pcDNA3.1(-)-peb1A,其经肌肉注射免疫小鼠,具有较好的免疫原性,短时间免疫程序免疫效果好。     

重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植排斥反应中Toll样受体的变化

背景:现已认识到Toll样受体的活化与器官移植后排斥反应的关系十分密切,Toll样受体与移植免疫也逐渐成为研究的热点问题。目的:观察重组人白细胞介素10抗皮肤移植排斥反应中受体兔血清Toll样受体的变化。方法:制备兔背部缺损模型,将受体家兔分为6组,重组人白细胞介素10低、高剂量组、环孢素A低、高剂量组、联合用药组和生理盐水组,分别于移植前1d开始肌肉注射5,10μg/(kgd)重组人白细胞介素10,5,10mg/(kgd)环孢素A,5μg重组人白细胞介素10+5mg环孢素A,1mL/d生理盐水,连续用药10d。结果与结论:各组移植后Toll样受体4,7,8,9水平均较移植前升高,移植后14d达到高峰。移植后4,7d生理盐水组Toll样受体4水平高于联合用药组(P<0.05)。移植后7d生理盐水组Toll样受体7高于其他各组(P<0.05),Toll样受体8高于环孢素A高剂量组(P<0.05)。各组移植不同时间点Toll样受体9水平差异无显著性意义(P>0.05)。提示重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植反应中,Toll样受体4,7,8,9水平在皮肤移植后明显升高,当皮片排斥后达到高峰,之后逐渐下降,表明Toll样受体参与排斥反应过程。     

卓越医师班人体结构学课程体系中系统解剖学授课初探

卓越医师培养的核心任务是改革医学人才培养体制,包括人才培养观念、培养模式、课程体系建设、教学内容更新、教学方法改革及考核评价体系等各个方面。就遵义医学院基础医学院开设的人体结构学新课程体系中系统解剖学知识的讲授方式,即将互助式、讨论式、案例式等多种教学模式融入教学当中并取得的成绩作一阐述,以期能够为其他学科提供借鉴。     

HLA与免疫性疾病的研究进展

近年来,分子生物学技术的发展及其在HLA研究中的应用,使HLA研究取得了极大的进展,人类主要组织相容性复合体即HLA复合体,已完成全部基因的测序工作,基因图发表于1999年10月底的Nature杂志。HLA研究推动了HLA与疾病关联的分子机理研究,这有助于了解遗传因素在疾病发病机制中的作用,而且对促进疾病发病机理、基因调控、诊断及防治等方面的研究起到了积极作用,也是一个揭示MHC功能及其免疫调节机制的极佳切入口。