金银花叶片中DNA分子的提取分离

以ＤＮＡ分子遗传标记技术用于中草药的分析鉴定，其关键步骤为完整ＤＮＡ分子的制备。本文以金银花叶片为材料，提取分离其ＤＮＡ，为从分子水平进行中药材鉴定的后续工作提供分析研究的物质前提。     

CD59基因的亚克隆

目的 构建ｐＵＣ１８－α珠蛋白ＤＮＡ－ＣＤ５９ｃＤＮＡ重组分子。方法 采用人心肌组织作为ＲＮＡ的来源,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到ＣＤ５９基因的ｃＤＮＡ片段。以ｐＵＣ１８质粒为载体;人α－球蛋白ＤＮＡ为启动子,并提供ｐｏｌｙＡ＋尾巴;以编码全部ＣＤ５９蛋白质的核苷酸序列的ｃＤＮＡ作为目标基因,三者拼接成重组分子。结果 经酶切鉴定,重组分子拼接成功。结论 该重组分子可作为转基因构件,经微注射液入供体动物受     

中药材鳖甲的位点特异性PCR鉴定研究

目的 本研究旨在建立一种简便、实用的鳖甲DNA分子鉴定方法。方法 根据中华鳖和鳖甲混淆品原动物的125rRNA基因片段的序列数据库,找出中华鳖与其它鳖科动物有明显区别的位点,设计1对能特异性鉴别中华鳖的引物,然后利用鳖甲中残存的DNA,通过PCR拉增,即可准确鉴别鳖甲。结果 用这对引物对不同来源的10块鳖甲进行鉴定结果表明,其中有3块为伪品,结果与DNA序列分析鉴定一致。还测定了斑龟和鳖甲一伪品12SrRNA基因片段序列。结论 该引物配置药材鉴定试盒可在鳖甲类药材鉴定使用。     

大鼠β-防御素rBD-1cDNA克隆

为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究,作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ,并重组到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ 载体,经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定,证实所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。     

大鼠β—防御素rBD—1cDNA克隆

为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究,作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ,并重组到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体,经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定,评定所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ。     

丝誊具菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡从菌菌丝本中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电脉等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法匀可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．     

丝状真菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡土从菌菌丝体中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ—ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电泳等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法均可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．８３ｍｇ），方法简便，对人体无毒害，是较理想的提取真菌ＤＮＡ的方法     

鳖甲防治肝纤维化研究进展

鳖甲具有滋阴潜阳,退热除蒸,软坚散结的功效,临床多用于治疗肝纤维化、肝硬化,以鳖甲为君药的多种中医复方制剂,如复方鳖甲软肝片、鳖甲煎丸等用于防治肝纤维化,疗效甚好。本文从传统中医药入手,对近年来鳖甲及鳖甲复方制剂的相关化学成分和抗纤维化作用机制的实验研究进行了汇总及论述,以期更综合全面地为临床中医药防治肝纤维化提供理论依据。     

显微切割技术鉴定病毒核内包涵体

建立应用显微切割技术鉴定病毒核内包涵体的新方法。方法通过光学显微镜直视下用显微操纵系统进行显微切割结合ＤＮＡ提取和ＰＣＲ方法,对在组织切片上获得病毒核内包涵体的来源进行分子生物学鉴定。结论显微切割技术可用于病毒核内包涵体的鉴定,为病毒包涵体病变的分子病理学研究建立了一种新的方法。     

不同的液化方法对痰液DNA提取的影响

为探讨不同固定液化方法对痰液中ＤＮＡ提取的影响，应用３种不同的痰液液化固定方法即：Ｓａｃｃｏｍａｎ ｎｏ法；ＤＴＴ法；Ｓａｃｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ法联合应用。对经３种方法处理的痰液分别提取ＤＮＡ，应用分光光度仪测量其波长为２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处光密度值（ＯＤ值），以ＯＤ２６０／ＤＤ２８０作为衡量ＤＮＡ纯度的指标。结果表明用Ｓａｃｌｏ ｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ活联合应用方法固定和液化的痰液中ＤＮＡ提取效果最佳，这为痰液作为呼吸系统疾病分子诊断样本提供依据。     

炮制对直序商陆毒性成分的影响

采用薄层扫描法测定直序商陆不同炮制饮片中商陆毒素的含量,结果显示清蒸品、醋煮品及醋炙品中商陆毒素的含量仅分别为原药材的16．73％、21．88％及45．95％。另对直序商陆中是否含有组织胺作了定性检查,未发现其存在。     

黄精生品及不同炮制品对糖皮质激素致肾阴虚模型大鼠的作用比较

目的 比较黄精生品及不同炮制品对肾阴虚模型大鼠滋阴益肾作用的影响。方法 采用大剂量灌胃氢化可的松方法制备肾阴虚大鼠模型。将70只SD大鼠随机分成空白组、模型组、阳性药组（六味地黄丸组）、生品组（黄精生品组）、两蒸组（黄精两蒸组）、四蒸组（黄精四蒸组）、九蒸组（黄精九蒸组）,每组10只。各给药组大鼠按相应剂量灌胃给药,每天给药1次,连续11 d,空白组和模型组灌胃等量蒸馏水;实验开始后8~11 d,除空白组外,其余各组均灌胃氢化可的松注射液（50 mg/kg）。实验期间观察大鼠一般体征,测量大鼠体质量、体温;末次灌胃氢化可的松后,腹主动脉采血,分离血清和血浆,测定血清肌酐（creatinine,Cr）、皮质酮（corticosterone,CORT）以及血浆中环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）、环磷酸鸟苷（cyclic guanosine monophosphate,cGMP）水平;摘取肾上腺组织,苏木精-伊红染色法进行病理学观察。结果 与空白组比较,模型组大鼠各指标差异均有统计学意义（P＜0.05）,肾上腺组织细胞损伤较为明显。与模型组比较,两蒸组、四蒸组大鼠的体质量显著升高（P＜0.05）,生品组、两蒸组大鼠体温显著降低（P<0.05）;各给药组大鼠的血浆cAMP水平均显著降低（P＜0.05）,除生品组外其余各给药组大鼠血浆cGMP水平均显著升高（P＜0.05）,血清CORT、Cr水平及cAMP/cGMP比值显著降低（P＜0.05）。与生品组比较,四蒸组大鼠血浆cGMP水平显著升高（P<0.05）,四蒸组、九蒸组大鼠血清CORT、Cr水平显著降低（P<0.05）。各给药组均能在一定程度上改善受损的肾上腺组织。结论 黄精生品及不同炮制品对肾阴虚大鼠症状均有一定程度的改善,酒制后黄精的滋阴益肾作用得到增强。其中四蒸黄精对肾阴虚模型大鼠环核苷酸系统、下丘脑-垂体-肾上腺轴激素水平及肾上腺组织形态的改善效果最优。     

6对通用引物检测不同型别人乳头瘤病毒效果分析

目的: 比较6对通用引物检测9种不同型别人乳头瘤病毒（HPV）的效果,为临床提供一种快速简便的HPV检测方法。方法: 收集女性宫颈脱落细胞标本954例,使用HPV分型试剂盒进行HPV DNA检测并分型。分别使用6对通用引物（① GP5/GP6,② GP5+/GP6+,③ CP Ⅰ/CP ⅡS,④ CP I/CP ⅡG,⑤ 外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+,⑥ SPF1/GP6++）对HPV-DNA阳性标本进行PCR检测,比较6对通用引物检测9种不同类型HPV DNA效果。结果： 采用HPV分型试剂盒从954例标本中共检出263例HPV-DNA阳性标本,阳性率为27.57%。在阳性标本中,采用通用引物SPF1/GP6++检出的阳性例数为223例,检出率为84.79%;采用巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检出的阳性例数为207例,检出率为78.71%。上述两对通用引物均可以检出9种型别HPV DNA。结论： 通用引物SPF1/GP6++检测效果最佳,但引物含次黄嘌呤,成本较高;巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检测效果次之,且合成成本较低。在HPV研究中可以根据实际情况选用。     

浸泡时间、加热方式对川乌饮片质量的影响

以总生物碱含量和酯型生物碱含量为指标，比较川乌不同的炮制工艺。结果表明：浸泡时间越长，总生物碱含量越低，而对酯型生物碱影响不大。以１．ｓｋｇ／ｃｍ’（１１０～１１５Ｃ）压力蒸４０分钟与药典法水煮６小时的含量接近；高压蒸１５０分钟与药典法常压蒸８小时含量基本一致。药典法中的常水煮６小时与蒸８小时相比较，总碱含量明显降低，酯型碱含量略有升高。     

直序商陆炮制品毒性成分测定

目的：探讨炮制对直序商陆毒性成分的影响。方法：采用薄层扫描法测定直序商陆不同炮制饮片中商陆毒素的含量。结果：清蒸品、醋煮品及醋品中商陆毒素的含量仅分别为原药材的１６．;７３％、２１．８８％及４５．８５％。结论：清蒸法和醋煮法为直序商陆炮制的最佳工艺。     

何首乌清蒸工艺的探讨

目的：研究何首乌不同蒸制时间糖类成分的含量变化。方法：用硫酸一苯酚法测定何首乌及其炮制品中还原性糖．水溶性糖和多糖的含量。结果：何首乌炮制后均较生品含糖量高，其中蒸制35h，100℃干燥，还原性糖和水溶性糖含量最高。结论：清蒸何首乌最佳条件为蒸制35h，100℃干燥。     

肺吸虫抗原与日本血吸虫病兔血清的交叉反应

肺吸虫成虫粗抗原与日本血吸虫病兔血清可出现交叉反应,煮沸后的成虫粗抗原与血吸虫病兔血清也存在交叉反应。成虫粗抗原经Sephadex G-200过柱后得到两个蛋白峰,环状沉淀试验、对流免疫电泳和间接血凝试验证实,第1个蛋白峰与血吸虫病兔血清存在交叉反应,第2个蛋白峰无交叉反应。成虫粗抗原、煮沸的成虫粗抗原和过柱后得到的两个蛋白峰,分别经圆盘电泳后作过碘酸雪夫(PAS)染色,证实第2个蛋白峰不含糖蛋白。由此推断,肺吸虫成虫粗抗原与抗血吸虫血清发生交叉反应的成分是一类热稳定的糖蛋白。     

利用荧光标记的通用引物检测基因芯片的制备质量

【目的】报告一种新的基因芯片质量控制方法。【方法】采用限制性显示技术制备一种两端具有1段特异通用引物互补序列的探针,分别以不同浓度梯度的荧光标记通用引物（Cy3-UP）和随机引物（Cy3-RP）与芯片杂交,比较两者杂交效率。【结果】Cy3-UP的杂交结果显著优于Cy3-RP的杂交结果,在较低浓度就可显示较强的荧光信号。【结论】这种新的基因芯片质量控制方法具有较好的敏感性和特异性,可以用于基因芯片的质量控制。     

测序法及液相芯片杂交法对生殖道人乳头瘤病毒感染分型的比较

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）分型方法在临床标本应用中的特异性及敏感性。方法采用通用型引物用PCR方法对尖锐湿疣及宫颈细胞内瘤变组织标本进行HPV DNA检测,测序法及液相芯片杂交法（luminex法）对其进行分型。结果在单型感染中测序法较为准确,而在多型感染中luminex法占一定优势。结论测序法结合luminex法可以运用在HPV感染标本中的分型。     

PCR测肝硬化腹水中细菌DNA的研究

目的探讨用PCR方法检测肝硬化患者腹水中细菌DNA的可行性,了解肝硬化患者发生细菌移位的高危因素。方法在细菌16S rRNA基因保守区设计一对通用引物,对7种对照菌株、人基因组DNA、HBV-DNA、37份肝硬化患者腹水进行PCR扩增。腹水中细菌DNA阳性者纯化后经核苷酸测序鉴别细菌种类,同时收集患者临床资料,运用SPSS11.5软件对患者基本临床特征及主要检验结果进行统计分析。结果7种对照菌株均得530bpDNA片段,而与人基因组DNA、HBV-DNA无交叉阳性反应,敏感性试验可检测出1pg的细菌DNA。37份腹水中有9份获得530bp DNA片段(24.3%),而腹水细菌培养阳性率为5.4%(2/37),二者比较有显著性差异(P<0.05)。腹水中细菌DNA阳性和阴性的两组肝硬化患者在上消化道出血的发生率、血清总胆红素水平、凝血酶原活动度、Child-Pugh积分、腹水总蛋白浓度、外周血白细胞总数等比较,有显著性差异(P<0.05)。结论用通用引物通过PCR方法扩增细菌16S rRNA基因具有高度敏感性、特异性,可应用于肝硬化患者腹水中细菌DNA的检测及细菌移位的研究。肝功能损害、腹水调理活性低下和上消化道出血是肝硬化患者发生细菌移位的高危因素。