旋毛虫DNA疫苗在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的　观察编码旋毛虫相对分子质量(Mr)31000抗原的DNA疫苗(重组真核表达质粒pcDNA3 TspE1)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的体外表达 ,并分析其表达产物的抗原性。　方法　通过用阳离子脂质体Lipofectamine2000将重组质粒pcDNA3 TspE1转染CHO细胞,G418筛选阳性克隆,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)、间接荧光抗体试验(IFAT)、十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质印迹法(Westernblotting)对表达产物进行鉴定。　结果　RT PCR结果显示,pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞在876bp处有一条带,而用空质粒pcDNA3转染的CHO细胞未出现条带,表明pcDNA3 TspE1转染细胞中有TspE1基因转录。IFAT结果显示,pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞与重组融合蛋白免疫小鼠血清反应呈现亮绿色荧光 ,而pcDNA3转染的CHO细胞及未转染细胞呈现橘黄色。Westernblotting显示在pcDNA3 TspE1转染的CHO细胞培养液中存在有一Mr约31000的蛋白带 ,且该条带能被重组融合蛋白免疫小鼠血清、旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫兔血清、感染旋毛虫的小鼠及旋毛虫病患者血清识别。　结论　重组质粒pcDNA3 TspE1可转染CHO细胞,旋毛虫TspE1基因可在转染的CHO细胞中表达,表达蛋白能分泌到细胞培养上清中且具有旋毛虫     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的皮肤组织细胞反应

目的 :探讨紫外线减毒血吸虫尾蚴免疫宿主的皮肤组织在抗攻击感染中的作用。方法 :88只小鼠分为 4组 ,1、2组分别以 50± 3条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫或日本血吸虫尾蚴感染 ,5wk后以 10 0 0± 10 0条尾蚴进行攻击感染 ;3、4组分别以减毒尾蚴或尾蚴 10 0 0± 10 0条免疫或初次感染。各组均于感染或接种后 6- 12 0 h定时取局部皮肤组织作病理观察。结果 :( 1)免疫攻击组皮肤组织内炎症细胞杀伤童虫现象最明显、炎症反应最强且持续时间最长 ,嗜酸性粒细胞( EOS)浸润百分数最高 ;( 2 )感染攻击组呈现相似炎症反应但程度略轻 ;( 3)免疫对照组减毒童虫在皮肤内滞留时间延长 ,至 12 0 h皮下仍可见较多童虫 ;( 4 )感染对照组皮肤内的童虫数于 72 h后明显减少 ,童虫周围轻微炎症反应。电镜观察可见免疫攻击组童虫内部结构破坏 ,虫体周围 EOS、淋巴细胞增多 ,肥大细胞颗粒溶解。结论 :提示皮肤组织的细胞免疫反应在血吸虫减毒尾蚴免疫的宿主抗攻击感染保护性免疫中起重要作用。     

一氧化氮对感染日本血吸虫小鼠肝脏纤维化程度的影响

目的　研究一氧化氮 (NO)对感染日本血吸虫小鼠早期肝脏纤维化的影响。方法　 NMRI小鼠感染日本血吸虫后第 2 3天起 ,连续用诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)的抑制剂氨基胍(Am inoguanidine,AMG)处理小鼠 ,同时设未经抑制的对照组 ,分别在感染后第 38、4 5天观察小鼠肝脏的病理变化。天狼猩红染色 -偏振光显微镜观察并结合图像分析的方法 ,分析肝脏中 、 型胶原的动态变化 ;化学显色法检测肝脏匀浆中能间接反映肝脏纤维化程度的羟脯氨酸的浓度。结果　感染后 38d,肝脏中 、 型胶原的增生程度及 、 型胶原面积比值明显高于对照组 ,但羟脯氨酸的含量与对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;感染后 4 5 d,肝脏中 型胶原的增生程度和 、 型胶原面积比值明显高于对照组 ,AMG处理组中羟脯氨酸的含量较对照组高 (P<0 .0 5 )。结论　 NO可抑制日本血吸虫感染小鼠肝脏早期纤维化     

城郊江滩野鼠 哨鼠感染血吸虫情况调查

有关资料表明在各种不同类型的血吸虫病疫区,传播血吸虫病的主要传染源是人、牛、猪等,而对城郊江滩的野鼠感染和传播血吸虫病的作用报道甚少.为此,我们于1993年在长江武汉段的江岸、汉阳、武昌、洪山、青山5个城郊江滩对野鼠和哨鼠(小白鼠)分别进行了感染性调查.方法1 时间 于1993年4—5月和10—11月(汛期前后)对江滩野鼠各调查一次,7—8月(汛期之中)对江水用哨鼠作疫水测定一次.2 地点 根据5个城区江滩螺情和病情的分布及感染情况,每区选择1—2个点,均为钉螺密度较高,有阳性螺点和时有急感病人发生及人畜常到之处,调查区域是江岸区35码头和滨江公园、汉阳区中南木材公司码头、武昌区月亮湾码头和长江大桥码头、青山区米面厂码头和一冶重件码头、洪山区青菱石(石且)和白浒山等共9处的江滩和江水.3 野鼠调查及哨鼠测定方法3.1 野鼠调查采用捕鼠铁匣为主,各点每次投放鼠匣50—100个,连续2—3d,(当晚投放,次晨查找),同时结合投放灭鼠药物(磷化锌等类)以提高捕鼠效果,对所捕获野鼠带回实验室进行解剖检查鼠肝和镜检虫卵.     

日本血吸虫表皮膜蛋白的研究:Ⅱ、生化及免疫活性分析

为了寻找理想的抗原物质,对血吸虫表皮膜进行了研究,目的是找出特异的可供临床诊断用的表皮膜抗原;同时探讨是否具有预防作用。采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PACE)及酶联免疫印斑技术(ELIB)结合使用,不仅能分辨出不同分子量蛋白质,而且能鉴别具有免疫活性的蛋白组分,本文对日本血吸虫表皮膜蛋白进行提取和分离,并对其     

旋毛虫肌幼虫核酸疫苗的构建及其在小鼠体内的表达

目的　构建和表达旋毛虫肌幼虫编码相对分子质量 (Mr) 31000抗原结构基因 (TspE1)的重组质粒。　方法　通过逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)特异性扩增TspE1基因 ,构建重组质粒 pUC18-TspE1,并将TspE1基因亚克隆入真核表达载体 pcDNA3中。用基因枪免疫小鼠 ,通过苏木素 伊红 (HE)染色及免疫组化观察重组质粒在皮肤组织内的表达情况。　结果与结论　成功构建 pcDNA3-TspE1重组质粒 ,并在小鼠体内表达。     

不同地域株华支睾吸虫基因差异的研究

目的探讨湖北、广东、辽宁和韩国4地华支睾吸虫的基因差异,为华支睾吸虫种下分型提供依据。方法取湖北、广东两地的华支睾吸虫,提取基因组DNA,PCR特异性扩增18S rDNA V4区并测序;登陆GenBank,检索中国辽宁(AF217100)和韩国(AF408144)的华支睾吸虫18S rDNA的登录序列,应用系统发生学分析法对所有序列进行排列比较,分析4地华支睾吸虫的基因差异,并构建系统发生树,分析其亲缘关系。结果获得的湖北和广东两地华支睾吸虫18S rDNA V4区的碱基数分别为392 bp和440 bp。通过对18S rDNA V4区基因序列的比较与进化树的构建,证实4个地域株华支睾吸虫的18S rDNA V4区具有较高的同源性(98%~100%),彼此间遗传距离较小(0~0.013);在系统发生树中,湖北株和广东株华支睾吸虫形成一个支系,韩国株和辽宁株华支睾吸虫形成另外一个支系。结论以18S rDNA V4区为分子标记的DNA序列分析表明,湖北、广东、辽宁和韩国4地华支睾吸虫存在基因差异,但亲缘关系较近,即起源于共同的祖先。     

日本血吸虫Mr 26000 GSTDNA疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫的保护作用研究

目的 观察日本血吸虫Mr26000谷胱甘肽S-转移酶(Sj26)DNA疫苗和重组蛋白(rSj26GST)疫苗联合免疫对小鼠的保护作用。方法 将Sj26基因克隆入含有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N3,构建重组质粒pEGFP-Sj26,并转染幼仓鼠肾细胞(BHK),用荧光显微镜和蛋白质印迹法(Western blotting)检测蛋白的表达。联合免疫组BALB/c小鼠分别在第0、2周用pEGFP-Sj26免疫2次,第4周再用rSj26GST加强免疫1次;而单独免疫的pEGFP-Sj26组及rSj26GST组,与上组同步各自免疫3次。末次免疫后2周进行感染攻击,45d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵。同时设PBS对照组。结果 pEGFP-Sj26在BHK中能有效表达。联合免疫组的减虫率为50·8%,显著高于pEGFP-Sj26(28.0%)和rSj26GST组(25.5%)(P值均<0.01)。联合免疫组以及pEGFP-Sj26、rSj26GST组减卵率分别为32.7%、20.6%、33.0%;联合免疫组及rSj26GST组,肝组织中每条雌虫平均产卵数显著低于PBS对照组(P值均<0.01)。结论 联合免疫组的保护作用优于pEGFP-Sj26和rSj26GST单独免疫组。     

脑垂体血吸虫病一例

脑垂体血吸虫病一例同济医科大学寄生虫学教研室武汉４３００３０龚红，李雍龙同济医科大学附属同济医院神经外科武汉４３００４０周游，张昌干患者女性，４２岁，工人，武汉市人。因多饮多尿４个月，伴头痛和继发性闭经５个月，于１９９２年９月１４日入院。体检：神志清...     

紫外线减毒尾蚴预防水牛感染血吸虫的研究

日本血吸虫病是一种严重危害健康的人畜共患寄生虫病。目前耕牛的血吸虫病防治尚存在许多困难。我们根据中国实际情况,首次采用紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫水牛,观察对同种血吸虫产生的特异保护力,以求保护水牛不受感染,降低血吸虫病传播来源和对人的危害,并且为人体血吸虫病疫苗的研制创造一定条件。