大鼠β-防御素rBD-2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达

从大鼠皮肤提取总RNA, 以P1 5′→3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和P2 5′→3′ GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物,采用RT-PCR技术扩增得到一cDNA片段,经核苷酸序列测定,并根据其推导的氨基酸序列与人β-防御素-2和大鼠β-防御素-1进行同源性比较,结果显示,该cDNA片段编码的氨基酸序列具高度同源性(其成熟肽与hBD-2的同一性为50%,相似性为32%),均含6个典型的半胱氨酸,这表明所克隆的cDNA为大鼠β-防御素-2亚类,因此命名为rBD-2.大鼠β-防御素-2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强,与人hBD-2的表达相似,能够被诱导表达.以上结果提示,β-防御素-2可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质.     

HMGN2分子体外抗乙型肝炎病毒活性研究

目的： 我们先前的研究证明HMGN2（high mobility group nucleosomal-binding domain 2）是人LAK细胞抗菌的一个新的效应分子,本研究欲检测其体外抗乙型肝炎病毒的活性。方法: 应用反向高效液相色谱技术从人淋巴结组织酸溶性提取物中分离纯化批量HMGN2分子,用质谱精确分子量测定、Western blotting和抗菌试验对分离纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。采用MTT法检测HMGN2分子对稳定转染复制型HBV重组质粒的肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞的细胞毒性;用不同浓度HMGN2分子作用于HepG2.2.15细胞,分别在第3 d和第6 d收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg）,采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBV DNA的含量。结果: 从人淋巴结组织中分离纯化获得纯度较高的HMGN2蛋白;在检1-100 mg/L范围内,HMGN2分子对HepG2.2.15细胞无细胞毒性;HMGN2分子在1-5 mg/L水平即可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,可显著降低HBV DNA拷贝数。结论: HMGN2分子在体外具有较强的抗HBV活性。     

小鼠小肠抗生素肽的初步分离

目的 初步分离小鼠小肠抗生素肽.方法 将12只健康ICK小鼠剖腹切取从屈氏韧带到回盲部的小肠,以10%乙酸溶液冲洗肠腔收集灌洗液,并以30%乙酸溶液制备小肠组织匀浆,反复离心,聚乙二醇浓缩后透析,冰冻干燥,进行AU-PAGE、Tricine-SDS-PAGE、考马斯亮蓝R-250染色或银染显示多肽条带,然后进行凝胶成像分析和杀菌试验.结果 小鼠小肠组织匀浆和灌洗液中均含有可杀灭细菌、真菌的抗生素多肤,其中组织匀浆中所含的此类多肽较多;小鼠小肠抗生素肽的杀菌作用具有剂量依赖关系,且对不同细菌、真菌的杀灭作用也不同;小鼠小肠抗生素肽的分子量主要集中于3.0kD～14.3kD和29.0kD.结论 小鼠小肠含有多种抗生素肽,具有广谱的杀灭微生物的作用.     

抗菌肽的基因表达调控研究进展

抗菌肽在宿主抵抗病原微生物感染中起重要作用 ,是天然免疫的重要介质。果蝇抗菌肽受imd基因编码物质通路和TollNF κB通路的调控。人α 防御素主要在中性粒细胞、帕内特 (Paneth )细胞分化过程合成并贮存于胞浆颗粒中 ,于感染时释放。β 防御素主要由上皮细胞生成。LPS、TNF α、IL 1β等炎症介质可诱导人β 防御素hBD 2基因的表达 ,但hBD 1基因对这些刺激因子却不起反应。hBD 2的诱导性表达与其基因调控序列中κB元件有关。     

RT-PCR法检测HNP1基因在气管上皮细胞转染后的表达

采用脂质体转染法将人中性粒细胞防御素（ Ｈ Ｎ Ｐ１ ）的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 重组真核表达质粒ｐ Ｂａｂｅ Ｎｅｏ Ｈ Ｎ Ｐ１导入无血清培养的人和兔的气管粘膜上皮细胞,利用逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ）法,在核酸水平检测 Ｈ Ｎ Ｐ１ 在气管上皮细胞的表达。结果：在人和兔的转染上皮细胞中均可检测到 Ｈ Ｎ Ｐ１ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达,而在未转染的上皮细胞中 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ检测结果呈阴性。这一结果与作者先前用免疫组化法在蛋白质水平上检测的结果一致,并证明ｐ Ｂａｂｅ Ｎｅｏ Ｈ Ｎ Ｐ１ 转染至气管粘膜上皮细胞后能得到有效表达。     

大鼠β-防御素rBD-1cDNA克隆

为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究,作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ,并重组到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ 载体,经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定,证实所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。     

IL-12表达调节的研究进展

IL-12（interleukin-12）在天然免疫与获得性免疫之间起重要的作用。IL-12的缺乏，可增高机体对病原菌的易感性；IL-12过度表达又会导致机体出现一系列病理变化。因此对IL-12的表达进行调节有助于改善许多疾病的病理状态。     

女性生殖道人Beta-防御素基因的表达

目的 :检测人 β-防御素 (HBDs)基因在女性生殖道各段组织及妊娠相关组织的表达 ,探讨内源性抗菌肽在女性生殖道粘膜天然抵抗致病微生物侵袭机制中的作用。方法 :采用逆转录多聚酶链反应法 (RT -PCR)检测正常女性生殖道各段组织及怀孕妇女生殖相关组织中HBD - 1、HBD - 2的表达情况 ,以 β -actin为阳性对照。 结果 :细胞株ME - 180表达HBD - 1mRNA ,而不表达HBD - 2mRNA ;正常女性阴道、子宫颈、子宫内膜、输卵管、卵巢等 5个组织中均发现有HBD - 1mRNA的表达 ,除阴道、卵巢外其余组织也有HBD - 2mRNA的表达 ;绒毛膜、绒毛…     

PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体及其功能的研究

目的 :用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL 39基因突变体 ,并比较研究FALL 39及其突变肽的功能。方法 :采用PCR体外定点突变技术 (PCR SDM ) ,设计一对方向相反的引物 ,其中一个引物引入一个突变点 ,应用高保真的PolybestDNA多聚酶进行含FALL 39肽的PGEXλ1T质粒的PCR扩增 ,使FALL 39第 2 2位密码子由CAG突变为AAG ,将扩增片段自身连接后克隆入工程菌JM1 0 9中使其表达其突变肽 (FALL 39 lys2 2 ) ,纯化后与FALL 39进行抗菌活性比较。结果 :DNA测序结果表明在预期位点发生突变 ,突变后FALL 39 lys2 2抗菌活性…     

人β-防御素-2基因5′-端转录调控区DNA片段的克隆及序列初步分析

人 β-防御素 (hBD)主要由上皮细胞生成 ,包括hBD - 1、hBD - 2等亚类 ,是皮肤、粘膜免疫的重要分子。其中hBD - 2是富含半胱氨酸阳离子的由 4 1个氨基酸组成的低分子抗菌肽。通常hBD - 2在健康组织中为低水平表达 ,但当皮肤、肺、气道组织有病菌入侵时可诱导hBD - 2的大量表达。对牛气道防御素 (TAP)受LPS刺激诱导表达的转录机制的研究表明NF -κB和NF -IL6共同调控TAP基因的转录。本研究将人 β -防御素 - 2基因上游序列输入Matinspector软件 ,应用Matinspector软件于转录因子数据库 (http ://tansfac gbf de/TRANSFAC)中…