内源性NO介导的Stargazin亚硝基化修饰在脑缺血再灌注后突触可塑性中的作用及机制

  目的  研究Stargazin-亚硝基化修饰在脑缺血再灌注后突触可塑性中的作用，并探讨NO调控AMPAR“Trafficking”的分子机理。  方法  采用线栓法阻塞大脑中动脉复制局灶性脑缺血再灌注（MCAO/R）损伤大鼠作为模型组，分别在每只大鼠MCAO/R模型内给予NMDAR抑制剂MK801、氧化还原剂DTT干预作为实验组。采用mNSS评分标准检测大鼠神经功能，TTC染色检测脑部缺血损伤情况，TUNEL染色检测以及WB检测缺血侧海马神经元凋亡情况，Griess法检测缺血侧海马组织中NO的含量，此外Western Blot检测海马组织中Stargazin-亚硝基化修饰水平以及AMPAR蛋白的表达和活化情况。  结果  给予MK801和DTT处理后MCAO/R模型中Stargazin-亚硝基化修饰水平（P < 0.01）以及NO含量（P < 0.01）下降；AMPAR亚基GluR2磷酸化水平降低（P < 0.0001）；抑制Stargazin亚硝基化修饰能够改善MCAO/R引起的神经损伤与凋亡（P < 0.001）。  结论  在MCAO/R模型中，抑制内源性NO和Stargazin亚硝基化水平可促进神经突触重塑，其机制可能是干预了Stargazin辅助蛋白与AMPAR亚基GluR2亲和力有关。     

PDE4抑制剂FCPR16对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的：研究PDE4抑制剂FCPR16对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的作用及可能的机制。方法：采用线栓法在SD大鼠中建立大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,缺血2 h后,大鼠腹腔注射2.5、5、10 mg/kg FCPR16,再灌注24 h。按照Zea-Longa评分表进行神经功能行为评分;进行TTC染色,测定FCPR16对MCAO模型大鼠脑梗死面积的影响;利用HE染色观察脑组织的形态学改变;利用ELISA方法和Western bolt法检测血清和脑组织中炎症因子的含量;检测脑组织Iba-1和GFAP的表达情况;TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况,Western bolt法检测凋亡相关蛋白的变化;测定脑组织中cAMP的含量,以及CREB、p-CRRB的表达情况。结果：FCPR16呈剂量依赖性地改善MCAO大鼠的神经功能症状,减少脑梗死面积,减轻脑组织的病理性变化;FCPR16能降低MCAO大鼠血清和脑组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量;免疫荧光和Western bolt结果表明FCPR16减弱MCAO大鼠缺血脑组织中GFAP和Iba-1的表达水平;TUNEL染色发现FCPR16减少MCAO大鼠的神经细胞凋亡,Western bolt结果显示FCPR16减少Caspase-3的含量,增加Bcl-2/Bax的比值和磷酸化Akt蛋白水平;FCPR16增加了MCAO大鼠脑组织中cAMP的含量以及磷酸化CRRB的表达水平。结论：FCPR16能改善MCAO大鼠的神经功能症状,减少脑梗死面积,改善脑组织病理性变化。其机制可能与减少炎症因子含量,抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活,减少神经细胞的凋亡,激活cAMP/CREB路通有关。     

远隔缺血预适应对大鼠局灶性脑缺血后诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：研究远隔缺血预适应（ remote ischemic preconditioning,RIPC）对大鼠脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的影响,以探讨 RIPC 保护脑缺血损伤的相关机制。方法应用线栓法制作大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,将21只健康雄性 SD 大鼠采用数字表法随机分为3组：假手术组（sham,n=7）,MCAO 组（n=7）,RIPC＋MCAO 组（n =7）。在 MCAO 手术前连续3 d,进行远隔肢体缺血预适应处理（双侧股动脉夹闭10 min/放开10 min,每天3次）。在缺血2 h-再灌注24 h 后进行神经功能评分,TTC 染色检测脑梗死体积,采用 Western blotting 方法检测梗死侧脑组织的 iNOS 蛋白表达水平。结果1）在 MCAO 手术过程中,3组实验动物的生理指标均在正常范围内,且组间差异无统计学意义。与 sham 组相比,MCAO 组大鼠再灌注24 h 时神经功能缺损评分显著升高、脑梗死体积明显增大（P〈0.05）。而 RIPC＋MCAO 组大鼠神经功能较 MCAO 组大鼠得到明显改善、脑梗死体积显著减少（P〈0.05）。2）再灌注24 h 时,与 sham 组相比,MCAO 组大鼠脑梗死侧 iNOS 蛋白表达显著增加（P〈0.05）。与 MCAO 组相比,RIPC＋MCAO 组大鼠脑梗死侧 iNOS 蛋白表达显著降低（P〈0.05）。结论 RIPC 处理对大鼠脑缺血损伤具有保护作用,其机制与降低脑缺血大鼠脑内 iNOS 蛋白表达有关。     

右美托咪定抑制大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡

  目的  探讨右美托咪定（DEX）对创伤性脑损伤（TBI）的神经保护作用是否与抑制神经细胞凋亡有关，是否涉及SIRT1信号通路。  方法  将SD大鼠随机分为Sham组、TBI + NS组、TBI + DEX组和TBI + DEX + EX527组。采用干/湿重法评估脑创伤后脑组织含水量；神经功能缺损评分检查神经功能受损情况；Western blot法检测大鼠皮质Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。  结果  实验结果显示DEX干预后可减少脑创伤后促凋亡的调控蛋白Bax表达，差异有统计学意义（P < 0.05），增加抑制凋亡的调控蛋白Bcl-2表达，差异有统计学意义（P < 0.05），减轻脑水肿，差异有统计学意义（P < 0.05）和改善神经功能，差异有统计学意义（P < 0.05），上述观测指标的变化可被SIRT1抑制剂EX527逆转。  结论  提示DEX通过抑制神经细胞凋亡而减轻脑创伤后的继发性损害，该神经保护作用与SIRT1信号通路之间存在一定相关性。     

基于扩散张量成像初探苍艾挥发油对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

  目的  利用MRI扩散张量成像技术研究经鼻吸入苍艾挥发油对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的神经保护作用。  方法  24只健康成年雄性 SD 大鼠,按照随机分配原则,分为假手术组、中动脉阻闭再灌注（middle cerebral artery occlusion, MCAO）组和苍艾挥发油（volatile oil of Cang Ai, VOCA）组。采用Zea Longa评分于造模后即刻和造模后第7天对各组大鼠神经功能损伤程度进行评估。用 7.0T磁共振对3组大鼠在造模成功后3 h、3 d、7 d行冠状位扩散张量成像（diffusion tensor imaging, DTI）扫描,对最大梗死层面的纹状体区和运动平层区DTI的表观扩散系数（apparent diffusion coefficient, ADC）和各向异性分数（fractional anisotropy, FA）进行测量,然后计算相对表观扩散系数(rADC)和相对各向异性分数（rFA）。造模7 d后采用 TTC 染色法对各组大鼠脑梗死体积进行评估,并对rFA、rADC与神经功能缺损评分进行相关性分析。  结果  假手术组苏醒后无神经功能缺损,MCAO组与VOCA组均有不同程度神经功能缺损,造模后7 d时VOCA组神经功能缺损评分小于MCAO组（P<0.05）。DTI扫描结果显示,造模后3 h以及3 d,VOCA组大鼠纹状体rADC值均高于MCAO组（P<0.05）,7 d时3组无明显差异（P>0.05）。VOCA组运动皮层区rADC值在造模后3 h高于MCAO组（P<0.01）,3 d、7 d时差异无统计学意义。VOCA组纹状体rFA值在造模后3 d和7 d均高于MCAO组（P<0.05）。MCAO组与VOCA组大鼠运动皮层区rFA值在3个时间点的组间差异均无统计学意义。TTC染色结果显示假手术组无梗死区,VOCA组脑梗死体积小于MCAO组（P<0.05）。相关性分析显示MCAO组和VOCA组大鼠纹状体rFA值（r=?0.847）、运动皮层rADC值（r=?0.647）、运动皮层rFA值（r=?0.660）与神经功能缺损评分均呈明显相关性（P<0.05）。  结论  VOCA在脑缺血再灌注后能有效通过降低缺血区细胞的毒性水肿及加快神经纤维束恢复来保护MCAO大鼠的神经功能。rFA、rADC值可作为评价脑缺血再灌注后神经功能恢复的有效指标。     

小鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤期转运蛋白的表达

  目的  评估小鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后72 h内(早期脑损伤期)脑组织中转运蛋白(translocator protein,TSPO)的表达。  方法  将44只C57BL/6J小鼠随机分成两组,Sham组17只,SAH组27只。SAH组通过血管内穿刺法构建SAH模型,Sham组不刺破血管。造模前(0 h),造模后6 h、24 h、48 h、72 h,两组采用改良加西亚评分对小鼠进行神经功能评分,造模后各时点处死SAH组小鼠(Sham组仅取造模后24 h处死),以Western blot、正电子发射计算机断层显像(positron emission tomography-computed tomography,PET-CT)和免疫荧光染色评价TSPO在脑组织中的表达,免疫荧光染色评估TSPO与小胶质细胞的共定位。  结果  SAH组小鼠神经功能评分造模后随时间先降低后增加,脑组织中TSPO表达量造模后随时间先增加后降低,两者呈负相关(r=-0.615 6,P < 0.01)。PET-CT提示SAH后小鼠脑组织示踪剂摄取量较Sham组升高,差异有统计学意义(P < 0.05)。免疫荧光染色提示SAH组出血侧顶叶皮层和基底皮层均有TSPO表达增加,且与小胶质细胞标记物Iba-1共定位。  结论  SAH后早期脑损伤期,TSPO在脑组织中的表达部位广泛增加,表达量呈现先增加后减少的趋势,可能参与小胶质细胞的激活,并调控SAH后脑损伤的发生与发展。     

螯合锌离子对局灶性脑缺血再灌注大鼠半暗带区低氧诱导因子-1α表达的影响

目的 利用大脑中动脉梗塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠模型,观察脑缺血再灌注后脑组织低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）表达的动态变化,并给予脑缺血大鼠锌离子螯合剂［N,N,N’,N ’-tetrakis（2-pyridylmethyl）ethylenediamine,TPEN］进行干预,研究锌离子对MCAO大鼠脑组织HIF-1α表达的影响,探讨锌离子介导脑缺血再灌注损伤的相关机制。方法 采用数字表法将45只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组：假手术组（Sham）、MCAO组和MCAO+TPEN组（于MCAO前30 min腹腔注射TPEN,剂量为15 mg/kg）,每组15只。使用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血90 min再灌注模型。术中监测大鼠肛温及平均动脉压,使其维持在正常范围。分别于再灌注3、12和24 h处死大鼠,迅速取脑,用免疫组化染色检测大鼠脑组织冰冻切片内缺血半暗带区HIF-1α的表达水平,用免疫荧光双标对HIF-1α在缺血脑组织的表达进行细胞定位。结果 假手术组大鼠未见HIF-1α染色阳性细胞,MCAO组大鼠脑组织缺血半暗带区HIF-1α的表达随再灌注时间延长逐渐增加（P<0.01）。给予15 mg/kg TPEN后,缺血再灌注各时间点大鼠脑组织缺血半暗带区内HIF-1α的表达比MCAO组明显减少（P<0.01）。缺血再灌注大鼠脑组织缺血半暗带区内,HIF-1α免疫荧光染色与神经元标志物NeuN免疫荧光染色共定位。结论 大鼠局灶性脑缺血再灌注后,脑组织神经元内HIF-1α表达随再灌注时间延长递增。螯合细胞内锌离子下调缺血再灌注大鼠脑内HIF-1α浓度,提示锌离子可能通过促进HIF-1α表达介导脑缺血损伤。     

mTOR在SD大鼠TMJOA髁突软骨中表达变化的实验研究

  目的  明确mTOR在SD大鼠TMJOA髁突软骨中的表达变化。  方法   采用偏侧咀嚼的方法建立SD大鼠TMJOA模型，并设立相应假手术组。建模后2、4、8周分别取右侧髁突。使用HE染色、番红O-固绿染色进行病理学检查；通过免疫组织化学染色检测SOX9、mTOR的表达量。  结果   苏木精-伊红（HE）染色和番红O-固绿染色显示对照组标本髁突软骨结构层次清晰，表面平滑完整，蛋白多糖分布均匀。随着时间推移，实验组（TMD组）髁突软骨结构出现明显的退行性病变（P < 0.05），且病损在4周时最高。免疫组织化学染色显示，在实验组大鼠髁突软骨组织中SOX9的表达水平在2周（P < 0.01）、4周（P < 0.05）、8周（P < 0.05）依次下降且均低于对照组，mTOR的表达水平在2周（P < 0.05）、4周（P < 0.001）时下降，但在8周（P < 0.05）时相对上升。  结论   随着炎症进展，mTOR在SD大鼠TMJOA髁突软骨中呈现出早期下调，晚期上调的趋势，在将保护性自噬转变为破坏性的凋亡中发挥了关键作用。     

栝楼桂枝汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后PARP-1表达的影响

目的观察栝楼桂枝汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中多聚（腺苷二磷酸核糖）聚合酶-1（PARP-1）表达的影响,探讨栝楼桂枝汤的神经保护机制。方法用线栓法制备大脑中动脉闭塞大鼠模型,手术当日大鼠清醒后用栝楼桂枝汤干预,每日1次,7天后用Longa评定法评价神经功能损伤程度,TTC染色检测脑梗死体积,HE染色检测缺血侧大脑皮层的病理改变,免疫组化法检测缺血侧大脑皮层PARP-1的表达。结果与模型组比较,栝楼桂枝汤组能明显改善MCAO模型大鼠的神经功能缺损症状,缩小脑梗死体积,减轻大脑皮层病理损伤,减少大脑皮层PAPR-1的表达。结论栝楼桂枝汤能有效降低缺血再灌注后脑组织的PARP-1表达,具有较好的神经保护作用。     

意向性运动干预影响局部脑缺血大鼠GLUA2和N-cadherin表达的影响

目的 研究意向性运动干预治疗对大脑局部缺血大鼠行为学及梗死灶周围组织中GluA2和N-cadherin表达的影响.方法 利用鱼线栓堵法将大鼠制成大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型共144只,随机分成模型(MCAO)组、生活环境变化(environment m...     

miR-373通过P2X7R影响抑郁症小鼠行为的作用机制

  目的  探讨miR-373对抑郁症小鼠模型抑郁样行为，小胶质细胞激活和焦亡的影响。  方法  采用慢性不可预知应激构建抑郁症小鼠模型。蔗糖偏好，强迫游泳，尾部悬挂和社会实验评估小鼠的抑郁样行为。免疫荧光双染小胶质细胞标志物Iba-1和小胶质细胞活化标志物OX-42以评估小鼠海马层中小胶质细胞增殖和活化状态。TUNEL试剂盒检测小胶质细胞的凋亡。荧光定量PCR检测miR-373的表达水平。蛋白质印记检测P2X7R和细胞焦亡相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-373和P2X7R的靶向关系。  结果  慢性不可预知应激处理的小鼠，蔗糖偏好度和社交时间显著下调，并且强迫游泳和尾部悬挂不动时间显著增加（P < 0.05）。miR-373在抑郁症模型小鼠中异常高表达，且能够缓解小鼠的抑郁样行为（P < 0.05）。miR-373靶向负调控小鼠海马层小胶质细胞中P2X7R的表达水平（P < 0.01）。miR-373抑制小鼠海马层中小胶质细胞增殖和激活（P < 0.01）。miR-373抑制小胶质细胞中Caspase-1，C-caspase-1，NLRP3，IL-1β和IL-18表达，并抑制小胶质细胞凋亡（P < 0.05）。  结论  miR-373通过靶向抑制P2X7R的表达，从而缓解抑郁症小鼠模型的抑郁样行为，并抑制其海马层中小胶质细胞活化和焦亡。     

葛根素抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用

  目的  探索葛根素（Puerarin）治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的作用和机制。  方法  将C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组、Puerarin处理EAE组（Puerarin组）。从诱导EAE当日开始，Puerarin组用葛根素（80 mg/kg）灌胃，其余2组用同体积生理盐水灌胃，每日1次。每天记录神经功能评分及体重变化；劳克坚劳蓝（luxol fast bBlue，LFB）髓鞘染色检测脊髓脱髓鞘情况；ELISA法检测血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-22和TGF-β的水平；Western 印迹法检测脊髓组织NF-κB、IκBα、IL-17、Foxp3等蛋白表达。  结果  Puerarin组小鼠神经功能评分及平均分均较EAE组明显降低（P < 0.01），而体重明显增加（P < 0.01）。应用葛根素后，EAE小鼠脱髓鞘面积（P < 0.01）及病理评分（P < 0.05）均明显下降。Puerarin组小鼠促炎因子IL-6、IL-17和IL-22水平显著降低（P < 0.01），抑炎因子IL-10和TGF-β显著增加（P < 0.05）。应用葛根素后:NF-κB及IL-17表达明显减少（P < 0.05）；IκBα及Foxp3表达显著增加（P < 0.01）。  结论  葛根素可缓解EAE小鼠症状，减少脱髓鞘。作用机制是抑制NF-κB通路，调节IL17/Tregs平衡，实现对免疫功能的调节。     

白细胞介素-4在脂多糖诱导急性肺损伤模型中的保护作用

  目的  探讨白细胞介素-4（IL-4）在急性肺损伤（acute lung injury,ALI）中的保护作用。  方法  脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导A549细胞形成ALI细胞模型。使用不同浓度的IL-4（0.1 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL）在不同时长下干预该模型,通过流式细胞术检测A549细胞凋亡率,ELISA法测定A549细胞分泌IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α、TNF-γ情况。  结果  IL-4可降低ALI模型中A549细胞凋亡率、抑制Caspase3表达（P < 0.05）,其效果随IL-4浓度增加及干预时长延长而加强;同时促进Bcl-2表达（P < 0.05）,IL-4浓度1 μg/mL干预12 h时效果最佳。上述条件下,IL-4可降低ALI模型中A549细胞的IL-1、IL-6、TNF-α、TNF-γ,并增加IL-10（P < 0.05）。  结论  IL-4可以通过改善ALI体外模型中细胞因子分泌情况,在急性肺损伤中发挥正向调节作用。     

miR-208a通过调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

  目的   研究miR-208a调控QKI5表达对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制。  方法  将雄性SD大鼠32只随机选择分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、I/R+antagomir阴性对照组（I/R+anta-miR-NC组）和I/R+miR-208a antagomir 组 （I/R+anta-miR-208a组）,构建大鼠心肌I/R模型后检测各组大鼠心脏左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和左室每搏量（SV）;ELISA法检测血清肌酐激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（cTnI）以及IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF-α）水平;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化,采用TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡;RT-PCR检测心肌组织miR-208a和QKI5 mRNA表达,Western blot检测心肌组织QKI5蛋白和凋亡蛋白Caspase-3的相对表达水平。  结果  与Sham组比较,I/R组中LVEF、LVFS、SV值降低,心肌细胞凋亡率升高,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达升高,而QKI5表达水平降低（P < 0.05）;与I/R+anta-miR-NC组比较,I/R+anta-miR-208a组中LVEF、LVFS、SV值升高,心肌细胞凋亡率降低,血清中CK-MB、cTnI和IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织中miR-208a和Caspase-3表达水平降低,而QKI5表达升高（P < 0.05）。相关性分析发现miR-208a与QKI5表达呈负相关。  结论  抑制miR-208a可能通过调控QKI5表达减轻心肌缺血再灌注损伤中炎症反应,发挥心肌保护作用。     

丁苯酞对急性脑梗死患者NIHSS及血液流变学的影响

  目的  探讨丁苯酞治疗急性脑梗死（Acute cerebral infarct）患者神经功能缺损评分（national institute of health stroke scale ,NIHSS）及血液流变学影响。  方法  选取昆明市第二人民医院神经内科2020年3月至2021年4月医院接收的66例急性脑梗死患者,采用数字随机表法分为研究组和对照组。对照组设为常规治疗,研究组在对照组常规治疗基础上联合丁苯酞进行治疗,并检测对比2组血液流变学、治疗前后2组疗效、神经功能缺损评分以及日常生活能力不良反应。  结果  治疗后,研究组总有效率高于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）;治疗后,研究组NHISS评分低于对照组,Barthel指数高于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）;治疗后,研究组血液流变学指标（全血比黏度、血浆比黏度、红细胞压积、血小板聚集率）均低于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）;治疗后,研究组不良反应率与对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。  结论  采用丁苯酞对急性脑梗死患者进行治疗,其效果较好,患者神经功能缺损情况以及血液流变学指标得到改善,且安全性较高,值得应用及推广。