利用裸鼠建立人泌尿生殖系统肿瘤细胞系

目的建立人泌尿系肿瘤无限细胞系,为泌尿系肿瘤研究提供实验模型.方法无菌取下肿瘤标本后,将标本剪成大小约1.0mm3的组织块,在裸鼠右后肢皮下包埋,当皮下肿瘤块发生明显增殖并长到一定程度后,再行裸鼠体内传代两次,最后取下组织块进行原代培养.培养细胞传代超过20代后按建系标准[2]进行检测.结果共取40例标本,裸鼠体内传代F1代成功6例,F3代成功3例,该3例标本行原代培养后建成3个无限细胞系人肾透明细胞癌RCC-9863,人膀胱癌BC-6,人前列腺癌PC-98106,全部细胞传代1年以上,生长稳定,传代周期固定,其形态结构,分化程度与原发瘤保持一致,染色体形态仍为人类核型.结论裸鼠肿瘤皮下种植法是泌尿系肿瘤建系的一个较好方法.     

裸鼠胶质瘤模型的建立及其病理

目的 建立裸鼠胶质瘤动物模型。方法 采用瘤细胞悬液接种法和瘤组织块接种法制作裸小鼠皮下移植瘤,并研究肿瘤的病理组织学特征。结果 两种方法所建肿瘤模型其成功率均为１００％,肿瘤生长状况良好,裸鼠无明显恶异质变化,肿瘤病理形态检查符合胶质瘤细胞的形态学特征,免疫组化证实体外培养的胶质瘤细胞和体内胶质瘤组织胶质纤维酸性蛋白均高表达。结论 该方法所建裸鼠皮下移植瘤模型能作为研究胶质瘤发病机制、生物学特性以     

泌尿生殖系统肿瘤无限细胞系的建立

目的 建立人泌尿系肿瘤无限细胞系,为泌尿系肿的基础研究提供实验模型。方法 无菌取下肿瘤手术标本,分别采用组织块直接培养法,细胞悬液法,裸鼠肿瘤移植模型法进行细胞原代培养。裸鼠皮下肿瘤块发生明显增殖并长到一定程度后,再行裸鼠体内传代两次,最后取下Ｆ３代组织块进行原代培养。培养细胞传代超过２０代后按建系标准进行检测。结果 共取４３例标本,其中３８例行组织块直接培养,１８例Ｆ１代培养成功,５例Ｆ３代培养     

人急性淋巴细胞白血病MOLT-4细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的　建立可移植于裸鼠的、潜伏期短、高致瘤性的人急性淋巴细胞白血病 MOL T- 4细胞株。　方法　初代移植后 ,通过单纯体内传代法进行皮下埋块和体内、体外交叉传代法进行体外传代培养后移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、细胞表面抗原表达、染色体核型等进行观察和检测。　结果　体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞裸鼠移植瘤平均潜伏期为 (2 1 .2 0± 1 .1 0 ) d,致瘤率 1 0 0 %。移植瘤的生长曲线呈“S”型 ;组织形态、超微结构和表面抗原表达特点符合 MOL T- 4细胞特点 ,染色体核型属人类染色体。　结论　通过体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞能成为潜伏期短、高致瘤性的细胞株 ,此法较单纯体内传代法快速、简便     

裸鼠不同部位皮下接种鼻咽癌瘤块成瘤特点比较

目的:分析比较裸鼠腋下和背部皮下瘤块接种移植成瘤的特点.方法:培养细胞制作细胞悬液腋下皮下注射长出瘤块,瘤块传代三次均长出实体瘤,然后将26只雌裸鼠按随机的原则分为两组,13只棵鼠前腿腋下接种,另13只裸鼠前腿根部后上方的背部皮下接种.观察记录统计分析两组瘤块生长情况.结果:腋下接种、背部接种瘤块最长径长至1cm天数有明显差异(P＜0.001),腋下接种瘤体生长较快.成瘤率、溃疡坏死率两组无明显差异.结论:腋下接种、背部接种瘤块移植法制作裸鼠鼻咽癌模型简便易行成瘤率高,腋下接种瘤体生长更快.     

人甲状腺未分化癌细胞裸鼠皮下移植模型的建立

目的 :建立人甲状腺癌细胞裸鼠皮下移植模型。方法 :用人甲状腺未分化癌细胞系 TA- K细胞悬液裸鼠皮下注射及瘤块皮下植入的方法建立人甲状腺未分化癌裸鼠皮下移植模型 ,观察移植后肿瘤生长特点及组织学特征。结果 :皮下注射法与肿瘤块植入法均可出现皮下肿瘤 ,染色体检查证实裸鼠皮下移植瘤的染色体组型与人体肿瘤一致。皮下注射方法肿瘤注射后经过 1 1～ 1 8d的潜伏期后才进入倍增期 ,瘤块皮下植入方法则跨过潜伏期直接进入倍增期。结论 :利用人甲状腺未分化癌细胞系 TA- K成功建立人甲状腺癌裸鼠皮下移植模型 ,肿瘤块植入法比皮下注射法省时、经济、稳定 ,是对传统皮下注射法的改进     

兔VX2肿瘤的离体培养及有关生物学特性

目的:在体外分离纯化VX2肿瘤细胞,观察其生物学特性. 方法:采用组织块法和消化法结合对兔VX2肿瘤进行原代培养,体外传代观察,传代40次并对培养细胞进行形态学观察、细胞周期检查、核型分析、兔及裸鼠移植. 结果:纯化的兔VX2肿瘤细胞形态一致,呈圆形、多角形的上皮细胞,体积小,核浆比倒置,体外连续培养8 mo,传代50次以上,细胞倍增时间为26.4 h,细胞周期测定G1期为74.61%, G2期为7.78%, S期为17.6%. 染色体为亚三倍体核型,众数为60条. 高细胞浓度可保证同种移植成瘤率,裸鼠移植可成瘤, 无支原体污染. 结论:兔VX2肿瘤细胞系来源于Shope病毒致乳头瘤恶变形成的鳞状上皮细胞恶性肿瘤,目前已经纯化,可应用于进一步肿瘤实验研究.     

人胃癌裸鼠胃原位移植转移模型的建立

目的 :建立人胃癌裸鼠原位移植转移模型 .方法 :用人胃癌细胞悬殊液接种于裸鼠皮下 ,形成稳定传代的皮下移植瘤 ,将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆膜下 ,称为间接胃原位移植模型 ,并与直接用细胞悬液接种于裸鼠胃浆膜下、皮下、腹腔、尾静脉的移植瘤模型比较 ,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化及细胞动力学改变等生物学特性 .结果 :肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特片 ,尾静脉注射与直接原位接种成瘤率均为6 0 % ,间接原位接种模型移植成瘤率为 80 % ,皮下与腹腔接种成瘤率均为 10 0 % .间接胃原位移植模型肝脏转移率为6 0 % ,直接胃原位移植模型肝脏转移率为 33.3% (P <0 .0 5 )尾静脉移植瘤模型仅见肝脏转移 ,实验过程中裸鼠衰竭处死后的肺脏经连续组织切片未见瘤细胞侵袭 .移植瘤细胞具有分泌CEA的功能 ,细胞动力学检测显示以五倍体细胞为主 .结论 :人胃癌裸鼠皮下 -胃原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似 ,为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型 .     

兔肝癌裸鼠移植模型的建立

目的 建立兔肝癌裸鼠模型，为兔肝癌可移植模型的建立奠定基础。方法 利用二乙基亚硝胺诱发日本大耳白兔肝癌，将获得的肝细胞癌接种于裸鼠皮下，并反复传代，将传代瘤块经体外培养后回植于裸鼠皮下，并继续在裸鼠体内传代。结果 肝细胞癌组织前5代对裸鼠致瘤率约40％；经体外传代后移植瘤成活率100％，潜伏期7～10d，无自然消退，无转移。病理检查证实该移植瘤保持着兔肝细胞癌特征，肝细胞抗原阳性，甲胎蛋白阳性。结论兔肝部细胞经传代和体外培养可增加移植成功率，并可缩短时间。     

2种人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的比较

目的比较直接接种人卵巢癌COCl细胞和COCl细胞经体内传代后接种Balb／c—nu裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的成瘤率。方法雌性突变系Banb／c—nu小鼠40只，分为对照组及实验组，每组20只。COCl细胞注射于裸鼠一侧背部皮下，对照组细胞培养后即接种，观察统计数据后处死，取瘤体制成单细胞悬液再接种于实验组裸鼠，比较两种不同方法接种的成瘤率，并观察成瘤时间、瘤重及肿瘤生长速度。结果实验组成瘤率为70％，对照组仅为30％。结论经过裸鼠体内传代后的COCl细胞用于制备人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型具有较高的成瘤率。     

通过改良方法建立人口腔癌细胞系的探讨

目的:建立癌细胞系是非常困难的工作,通常需要经过多次失败才能成功,本研究旨在通过对传统建立癌细胞系方法的改进以探讨一种容易建立癌细胞系的方法。方法:将获取的癌瘤标本分成两部分,一部分按传统的方法直接培养,另一部分首先将肿瘤标本接种在裸小鼠皮下形成皮下移植瘤,当移植瘤直径达到1cm时,取出肿瘤再在裸小鼠体内连续传代,从第3代开始将移植瘤的一部分做细胞培养。结果:按传统方法培养没有获得所需要的癌细胞,经过裸小鼠传代后的肿瘤组织再做培养很容易获得第1代肿瘤细胞,并且培养周期较短。利用这种方法我们成功地建立了一株舌癌细胞系TSCCa。结论:经过裸小鼠体内连续传代后的肿瘤组织较其原肿瘤组织容易建立癌细胞系。     

细胞注射法和组织块移植法在构建血管瘤动物模型中的比较

目的比较原代细胞注射法和组织块植入法在血管瘤动物模型建立中的可行性。方法收集新鲜增殖期婴幼儿血管瘤标本,取50%组织块植入12只BALB/c裸鼠双侧腋下为组织块组,另外50%组织块培养血管瘤内皮细胞,并将传代细胞植入12只BALB/c裸鼠双侧腋下为细胞组,观察不同生长时期瘤体变化,观察至第7、30、60天分别切取移植瘤组织,HE染色并进行病理学检查。结果第7天,细胞组瘤体小,质软,镜下细胞增殖旺盛,有少量血管生成。组织块组瘤体与机体融合,质软,镜下有大量小血管;第30天,细胞组瘤体体积变大,质稍硬,镜下细胞继续增殖,大量血管生成。组织块组瘤体体积未变化,质硬,有大量的炎细胞,仅残存少量血管;第60天,细胞组瘤体变小,质硬,镜下血管开始萎缩、减少。组织块组瘤体变小,质软,镜下大部分已脂肪化,仅血管周围有少量移植物残留。结论组织块移植法难以建立可靠、稳定的血管瘤模型;原代血管瘤内皮细胞裸鼠皮下注射可以建立可靠的血管瘤模型。     

人膀胱肿瘤细胞的荧光标记及其移植模型的整体荧光成像

目的对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行荧光标记并建立其可在活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移的简便、可靠的原位移植模型。方法以绿色荧光蛋白作为标记基因导入人类膀胱移行细胞癌T24细胞株中,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养,然后接种于裸小鼠膀胱壁内及颈部皮下,活体荧光成像系统直接观察肿瘤的生长与转移,并与常规石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色比较。结果经绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,并可在体内、外持续稳定表达。膀胱原位接种5×105个转染后的膀胱肿瘤细胞后1周即可在荧光成像系统下观察到下腹部新生膀胱肿瘤发出绿色荧光,2周后膀胱肿瘤可被触及,4周后经解剖可在荧光成像系统下观察到腹膜后及盆腔淋巴结等远处转移。结论绿色荧光蛋白能够在T24人膀胱肿瘤细胞中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞建立的裸鼠原位移植模型为进一步研究膀胱肿瘤提供了一种简便、可行的新方法。     

人胃癌细胞悬液裸小鼠原位移植模型建立及其部分生物学特性

目的 建立人胃癌裸小鼠原位移植模型,观察其部分生物学特性。方法 用人胃低分化腺癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）悬液种植于小裸小鼠胃壁,观察原位移植瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。结果 原位移植成功率（成瘤率）为６７％。移植瘤的局部淋巴结转移率８５％,远处淋巴结转移率５０％,肝转移发生率３０％。荷瘤鼠的中位生存期为１６周,晚期出现消瘦和全身衰竭。结论 该裸小鼠原位移植模型具有人胃癌自然生长过程     

人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404的建立和生物学特性

目的:研究骨巨细胞瘤细胞体外培养的生物学特性,并建立人骨巨细胞瘤细胞系. 方法: 采用原代组织块培养法培养骨巨细胞瘤手术标本,对存活细胞进行形态学观察、免疫组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、裸鼠移植. 结果: 建立人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404,其形态学表现、免疫组织化学染色均符合骨巨细胞瘤纤维母细胞样基质细胞的特征. 经过近1 a的体外培养,现已传代100次,细胞倍增时间39.7 h,细胞周期测定G1期为67.5%,G2期为8.9%,S期为23.6%. 染色体具有三倍体核型. 裸鼠移植成瘤率100%,无支原体污染. 结论: 人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404可以用于对骨巨细胞瘤的研究.     

环氧合酶-2抑制剂抑制胃癌转移的实验研究

目的研究环氧合酶-2抑制剂SC236对胃癌转移的影响，并初步探讨其作用机制。方法用人胃癌细胞株SGC7901建立裸鼠人胃癌原位移植瘤模型，随机分为实验组和对照组，分别经尾静脉注射SC236和生理盐水，观察各组生存期和肿瘤转移情况，并通过免疫组化方法检测移植瘤MVD、VEGF及MMP-2蛋白的表达。结果与对照组相比，SC236可明显延长荷瘤鼠生存期，抑制胃癌转移，降低移植瘤MVD，减低移植瘤VEGF及MMP2蛋白的表达。结论SC236能有效抑制胃癌的转移。其机制可能与其抑制肿瘤的血管生成、减低MMP-2的表达有关。     

两种破坏粘膜的方法对原位膀胱癌模型建立的影响

目的比较两种不同的膀胱粘膜损伤方法对细胞移植法原位膀胱癌模型建立的影响及优缺点。方法4～6周龄裸鼠两组,每组10只。麻醉后经尿道置入膀胱静脉留置针,导尿后一组注入100ul10％胰酶保留30min,另一组注入100ul0．1mol·L^-1Hcl15s．PBS冲洗后将浓度为1×10^7L^-1L。的人膀胱癌T24细胞悬液注入两组鼠膀胱保留1～2h。另设一组5只导尿冲洗后直接注入细胞保留1～2h。定期观察裸鼠一般情况。28d后断颈处死,解剖观察膀胱成瘤及转移情况,并取膀胱及可疑肾脏行病理学检查。结果胰酶破坏组到2w有2只间断出现淡红色血尿,下腹肿块不明显。到28d后处死,肉眼2只成瘤,约占膀胱50％以上。病理检查证实成瘤2只,多局限于粘膜,未突破肌层。盐酸破坏组约12d开始出现血尿,其中4只可及下腹肿块,2只于2d死亡。到28d处死．共8只大体成瘤,2只见右肾肿大。病理检查示8只成瘤,细胞结构紊乱,未突破浆膜层,两只肾转移。未行粘膜破坏组无明显变化,也无瘤形成。结论胰酶破坏膀胱粘膜对动物损伤轻,但成瘤率低;盐酸破坏粘膜对动物损伤稍大,但成瘤率满意,在细胞移植法建立原位膀胱癌模型可明显提高成瘤率。     

人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及三种方法比较

目的：建立胃癌裸鼠原位移植和转移模型，并比较三种不同方法的结果。方法：将胃癌肿瘤细胞悬液、胃癌裸鼠皮下移植瘤块和胃癌裸鼠原位移植瘤块种植于裸鼠胃壁，形成原位移植瘤，观察和比较三种方法所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率。常规HE染色，观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移的病理切片。结果：细胞悬液种植的原位胃癌成瘤率为50％，淋巴结广泛转移率为37．5％，肝转移发生率为25％；皮下瘤块的原位成瘤率为100％，淋巴结广泛转移率为62．5％，肝转移发生率为50％，腹水形成率为6．25％；而胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％，淋巴结广泛转移率为87．5％，肝转移发生率为75％，腹水形成率为12．5％。细胞悬液成瘤时间较皮下肿瘤组织块和胃癌裸鼠原位移植块再次移植延迟2—3周，而后两者无差异。结论：三种原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，以胃癌裸鼠原位移植块再次移植为最优，且更具有人胃癌的生物学活性。