α1,3GT siRNA打靶杂合子猪肝细胞阴性表达半乳糖转移酶

目的 研究联合应用基因敲除及RNA干扰(siRNA)技术对猪α1，3半乳糖转移酶(α1，3GT)基因修饰后，阳性猪杂合子( ／-)肝细胞的GT基因是否获得有效沉默并影响人天然抗体介导的细胞毒性作用。方法用pPNTloxPneo和PMXSV／U6载体构建猪GT基因敲除并siRNA载体，转染中国实验用小型猪的肝细胞，筛选获取杂合子克隆( ／-)。Northern blot检测GT mRNA表达，四甲基偶氮唑盐方法评估天然抗体细胞毒性。结果 野生型和pPNTloxPGT转染的杂合子猪肝细胞的inRNA表达阳性，而pPNTloxPGTsiRNA载体转染的杂合猪肝细胞阴性表达α1，3GT mRNA;pPNTloxPGT转染细胞( ／-)和野生型( ／ )猪肝细胞对人天然抗体介导的细胞毒性实验敏感，而pPNTloxPGTsiRNA转染细胞( ／-)则对毒性试验敏感性明显下降，只检测到17％细胞毒性。结论 对猪GT联合应用基因敲除及SiRNA能够在阳性猪杂合子肝细胞内有效沉默GT基因，降低猪肝细胞对人天然抗体细胞毒的敏感性。     

新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究

目的：研究骨髓基质细胞(MSCs)在兔组织工程膀胱中的应用．方法：按献改进方法制作膀胱无细胞基质(BAMG)，从兔胫骨中分离出MSCs，体外扩增后接种于BAMG外表面，在低糖DMEM(LG—DMEM)培养12h，与BAMG复合成组织工程膀胱，对同一兔实施膀胱次全切术，用组织工程膀胱替代．20只兔实施了保留三角区的膀胱次全切术．实验随机分为3组．A组6只直接缝闭三角区；B组7只用膀胱形状的BAMG进行重建；C组7只用复合自体MSCs的组织工程膀胱进行替代手术．术前术后分别记录膀胱测压和放射线造影资料．12wk时无痛处死动物，进行大体解剖和组织染色分析．结果：体外扩增时间平均为21d．A，B和C组膀胱容积分别为术前的22％，85％和95％，顺应性分别为术前的11％，104％和107％．大体解剖显示A组仅有很小的储水能力，而B，C组具有正常膀胱形态，组织染色分析A，B组显示上皮层正常，粘膜下纤维组织增生而肌层较薄；C组则显示了与自体膀胱相似的正常的3层组织结构．结论：膀胱次全切除后原位缝合膀胱容积和顺应性均不能恢复，单纯应用BAMG膀胱容积和顺应性能够恢复正常，但逼尿肌层较薄，应用BAMG复合自体ASCs或MSCs的组织工程膀胱替代，术后12wk膀胱容积和顺应性能够恢复正常，膀胱壁组织结构与正常膀胱相似．提示膀胱次全切除后应用BAMG复合自体MSCs的组织工程膀胱替代可以获得良好功能和组织结构．     

前列腺恶性黑色素瘤1例

患者７２岁。因排尿困难４０天,尿线细,无力,尿频,伴尿疼,下腹胀疼２０天,在外院插尿管后,于１９９８－０８－２８入院。体检：体温３７℃,心肺听诊正常,肝脾未触及肿大,双肾未触及,肾区无叩击痛,膀胱区无膨隆,无压疼。肛门指诊：前列腺Ⅱ°增大,左侧叶增大...     

去顶减压治疗成人多囊肾(附7例报告)

去顶减压治疗成人多囊肾（附７例报告）１４８医院泌尿外科（山东周村２５５３００）王洪同刘恩靖严泉剑目前尽管对多囊肾治疗存在手术与非手术两种不同意见，但大量临床资料已证明，囊肿去顶减压术可使病人临床征象消失或缓解，提高生活质量。自１９９３－０６，笔者选择...     

非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞用于核移植构建重组胚

目的研究非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体,以体外成熟去核兔卵母细胞作为受体进行核移植构建重组胚胎的可行性及囊胚形成率. 方法首先利用新西兰兔骨髓和脂肪为来源分别培养骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞,然后用他们作为核供体,采用卵细胞胞质内直接注射法构建重组胚胎,7 d后比较囊胚形成率. 结果核移植操作后卵细胞存活率达80.0%,骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体重组胚胎囊胚形成率分别为88/522 (16.9%)和73/464 (15.7%), (P>0.05, Yates corrected). 结论处于非休眠期的成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞移植到去核卵母细胞后能够进行早期胚胎发育,两者囊胚形成率无明显差别.     

胃癌差异表达基因的克隆测序及临床应用

目的 筛选数个在胃癌及癌前病变中检出率高的胃癌差异表达片段。方法 以筛选了的gcys-10,gcys-12,gcys-13,gcys-16这4个新基因片段为研究对象，将它们克隆入T载体中进行测序，根据序列设计引物，采用RT－PCR方法检测胃癌细胞株GC7901、胃粘膜细胞株GES－1以及胃癌、胃粘膜活检标本。结果 4个差异基因表达片段测序后经过同源性检索均为新基因，被基因库收录，收录呈为AF054171，AF071052，071053,某某071056。根据这些基因设计的4对引物均能从GC7901总RNA中扩增出相应产物，而gcys-10的引物未能从GES－1细胞株中扩增出相应产物。gcys-10在50例活检标本中的检出率分别为：萎缩性胃炎83.3%，肠腺化生81.8%，疣状胃炎58.3%，胃癌88.9%，胃溃疡50.0%，十二指肠溃疡0，急性胃炎0。在17例胃癌手术标本的检出率为94.1%。结论gcys-10,gcys-12,gcys-13,gcys-16均为胃癌差异表达基因，其中gcys-10在胃癌及胃癌前病变中检出率非常高，其表达的变化可能对胃癌的早期发展有意义。     

生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算

0　引言　目前细胞群体倍增时间的计算方法有两种 ,而我们基于计数法绘制细胞生长曲线所获数据 ,利用 SPSS软件进行理论推导而得的理论倍增时间计算方法计算相对简单实用 ,现介绍如下 .1　材料和方法　指数函数拟合模型 (Exponential)中 ,Y=b0 × 2 b1 ×t要比 Y=b0 × eb1 × t更符合细胞的生物学特性 ,因为细胞增殖为二分裂生长 .Y=b0 × 2 b1 ×t在 SPSS的曲线模拟功能选项中并没有此函数拟合模型 ,故将原始数据的自变量时间变量作一转换 ,即将原自变量乘以 ln2即可 ,理论依据为Y=b0 × 2 b1 × t=b0 × eb1 × tln2 =b0 × eb1 ×…     

保肾手术治疗脓肾的体会

目的 :探讨保肾手术治疗脓肾的方法。方法 :对 31例脓肾中的 19例行一期手术 ,12例术前行经皮肾造瘘引流 ,然后行二期手术。 31例术中在解除梗阻后留置输尿管内支架管 ,5例同时置肾造瘘管。结果 :2 8例术后获得良好疗效 ,1例住院期间需 2次手术切肾 ,2例随访期间因再发脓肾而行肾切除。结论 :如果处理方法得当 ,多数脓肾不需切肾。     

球囊扩张治疗肾盂输尿管交界处狭窄19例

肾盂输尿管交界处狭窄开放性手术存在一定的副作用。1995～1998年,我们对此种狭窄用球囊扩张法治疗19例,疗效满意。1　临床资料1.1　本组男12例,女7例;年龄18～50岁,平均36.4岁。其中左侧10例,右侧7例,双侧2例。肾结石术后2例,游走肾极血管压迫1例。临床表现为腰腹胀痛10例,肾绞痛5例,反复尿路感染4例,肉眼或镜下血尿6例,合并肾盂、输尿管末端结石各1例。静脉尿路造影示:肾盂、肾盏扩张15例,6例肾脏因积水严重而只显部分肾盂、肾盏或不显影。B超检查:均示患肾增大,中央集合系统扩张、分离,最大无回声区15cm×10cm×9cm,术前扩张集合系统的…     

气囊扩张术治疗输尿管狭窄

输尿管狭窄导致肾积水及肾功能损害，需积极治疗。过去以手术治疗为主，随着腔内技术的不断发展，气囊扩张术用于输尿管疾病的治疗日逐增加。我院１９９５－０１～２０００－１０应用透视下输尿管气囊扩张术治疗输尿管狭窄２５例，报告如下。１临床资料１．１一般资料本组共２５例。男１６例，女９例。年龄１８～６２岁，平均３８．８岁。左侧１１例，右侧１４例。原发性肾盂输尿管连接部（UPJ）狭窄１０例，开放手术后UPJ狭窄２例，输尿管切开取石术后狭窄９例，输尿管先天性狭窄４例。２５例术前均行B超及静脉尿路造影（IVU）检查。B…