黄芪多糖通过JAK2/STAT3通路调控人膝骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡

目的 研究黄芪多糖(APS)对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3通路的影响。方法 无菌分离人膝骨关节炎软骨细胞,设空白对照组,APS低、中、高剂量(25、50、100mg/L)组和塞来昔布(20mg/L)组。药物干预48h后,MTT法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,PI染色法检测细胞周期分布,Western blot法检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、cyclin D1、p21、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 与空白对照组比较,APS中、高剂量组和塞来昔布组细胞增殖活力升高、凋亡率降低(P<0.01),处于G₀/G₁期细胞比例降低、S期细胞比例升高(P<0.05);p-JAK2、p-STAT3、cyclin D1、Bcl-2表达上调而p21、cleaved caspase-3、Bax表达下调(P<0.01),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Bcl-2/Bax比值升高(P<0.01)。与塞来昔布组比较,APS高剂量组细胞增殖活力升高、凋亡率降低(P<0.01);G₀/G₁期细胞比例降低、S期细胞比例升高(P<0.01);p-JAK2、p-STAT3、cyclin D1表达上调且p21、cleaved caspase-3、Bax表达下调(P<0.01),p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Bcl-2/Bax比值升高(P<0.01)。结论 APS具有促进人膝骨关节炎软骨细胞增殖并抑制其凋亡的作用,其机制可能与激活JAK2/STAT3通路有关。     

肉豆蔻-8散提取物对过氧化氢诱导心肌细胞损伤的影响

研究肉豆蔻-8散提取物对过氧化氢(H₂O₂)诱导乳鼠心肌细胞损伤的影响，并探讨其作用机制。分离并培养大鼠乳鼠心肌细胞，建立H₂O₂诱导心肌细胞损伤模型。倒置显微镜下观察肉豆蔻-8散提取物对心肌细胞形态学的影响；采用MTT法检测心肌细胞活力；使用全自动生化分析仪检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量；采用试剂盒法检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量；采用Hoechst荧光细胞核染色观察心肌细胞凋亡形态；使用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率。100 μmol/L H₂O₂作用2 h能明显造成约50%心肌细胞损伤。H₂O₂模型组出现细胞间隙增大、细胞数减少、细胞胞浆空泡等明显损伤现象。与H₂O₂模型组比较，肉豆蔻-8散提取物各剂量组，心肌细胞形态不同程度好转；能明显降低H₂O₂损伤心肌细胞培养液中LDH、CK、AST含量；显著降低H₂O₂损伤心肌细胞内MDA和NO含量，并提高SOD活力，能明显抑制H₂O₂损伤心肌细胞凋亡。通过改善细胞生存状态、提高细胞活力、降低氧化应激损伤、抑制炎症反应、抑制细胞凋亡，肉豆蔻-8散提取物可改善H₂O₂诱导心肌细胞损伤状态，从而对H₂O₂损伤的心肌细胞起到保护作用。     

cZNF292对缺氧缺血性脑损伤细胞氧化及凋亡的影响

目的　建立原代神经元缺氧缺血性脑损伤细胞模型,探讨cZNF292对脑缺血损伤后神经元细胞氧化及凋亡的影响。方法 首先选取胎鼠原代神经元细胞,采用10mmol/LNa₂S₂O₄和无糖培养基处理细胞4 h,培养24 h后复氧,建立脑缺血缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)细胞模型。通过细胞骨架蛋白和β3-微管蛋白免疫荧光染色观察原代神经元细胞形态变化,FITC标记鬼笔环肽观察不同浓度Na₂S₂O₄对原代神经元细胞存活率的影响。ELISA检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(Malodialdehyde,MDA)、超过氧化物歧化酶(supeoxide dismutase,SOD)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的表达水平检测。Western Blot检测Caspase 3及细胞周期蛋白G1(cyclin G1, CCNG1)的表达水平。结果　成功建立缺氧缺血性脑损伤细胞模型和cZNF292敲减细胞模型,并发现4h缺氧时间后复氧,10mmol/L的Na₂S₂O₄对原代神经元的生长抑制率最高。cZNF292表达水平在复氧15h后最高。OGD细胞模型使胎鼠体内血清ROS和MDA浓度呈上升趋势, SOD和LDH浓度呈下降趋势。敲减cZNF292后,胎鼠体内血清ROS和MDA浓度呈下降趋势, SOD和LDH浓度呈上升趋势(P<0.05)。敲减cZNF292可使Caspase 3和CCNG1表达水平下降。结论　脑缺血可以诱导原代神经元细胞增加cZNF292表达,敲减cZNF292可以减少原代神经元细胞在缺血缺氧环境下发生氧化损伤,抑制原代神经元细胞凋亡及增殖。     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞JAK/STAT3通路抑制作用的研究

目的 研究三氧化二砷（As₂O₃)诱导人骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内JAK/STAT3信号转导通路抑制与细胞增殖之间存在的关系。方法 采用MTT法观察As₂O₃对骨髓瘤细胞作用的半数抑制浓度（IC₅₀）,流式细胞技术检测As₂O₃作用前后细胞周期的改变情况,甲基化特异性PCR法检测As₂O₃作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的变化,Western blotting法检测As₂O₃作用前后磷酸化STAT3蛋白的表达差异。结果 As₂O₃作用72 h后,骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内磷酸化STAT3蛋白表达水平明显降低,同时伴随SOCS-1基因启动子区CpG岛甲基化程度明显减弱至消失,细胞增殖发生G₀/G₁期阻滞,上述三者变化均与As₂O₃浓度呈正相关（r=0.85,P<0.05）。结论 As₂O₃可诱导骨髓瘤细胞增殖受抑,与As₂O₃诱导细胞内JAK/STAT3信号转导通路抑制存在一定关系,且与细胞内SOCS-1基因甲基化状态改变相关。     

Na2SO4、Na2S2O3和NaSCN水盐体系313.15 K相平衡

利用等温溶解平衡法测定了三元水盐体系Na₂SO₄-Na₂S₂O₃-H₂O、Na₂S₂O₃-NaSCN-H₂O及Na₂SO₄-NaSCN-H₂O在313.15 K时的固液相平衡数据,并结合X射线衍射确定相平衡时的固相,绘制了三元体系相图。3种体系在313.15 K时均无复盐或固溶体形成,属于简单共饱和体系。对应相图中均包含1个共饱和点、2个单盐结晶区和2条单变量曲线。在三元体系中,Na₂SO₄-Na₂S₂O₃-H₂O平衡固相分别为Na₂SO₄和Na₂S₂O₃·5H₂O;Na₂S₂O₃-NaSCN-H₂O平衡固相分别为Na₂S₂O₃·5H₂O和NaSCN;Na₂SO₄-NaSCN-H₂O的平衡固相分别为Na₂SO₄和NaSCN。结果表明,Na₂S₂O₃和NaSCN对Na₂SO₄有较强的盐析作用。     

大肠癌中自噬相关蛋白与JAK2/STAT3 信号通路的相关性

目的 探讨大肠癌发生、发展过程中自噬相关蛋白LC3、p62 与JAK2/STAT3 信号通路的关系。 方法 采用免疫组织化学法检测93 例大肠癌组织和癌旁组织中LC3、p62、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表 达,并对其阳性表达率进行比较分析。结果 大肠癌中LC3、p-JAK2 和p-STAT3 阳性表达率高于癌旁组织 （P <0.05）,高中分化大肠癌LC3、p-JAK2 和p-STAT3 蛋白阳性表达率低于低分化大肠癌（P <0.05）,有淋 巴结转移患者LC3、p-JAK2 和p-STAT3 蛋白阳性表达率高于无淋巴结转移（P <0.05）。大肠癌p62 蛋白阳 性表达率低于癌旁组织（P <0.05）,高中分化大肠癌p62 蛋白阳性表达率高于低分化大肠癌（P <0.05）,有淋 巴结转移患者p62 蛋白阳性表达率低于无淋巴结转移（P <0.05）。LC3 蛋白表达与p-JAK2、p-STAT3 蛋白 表达均呈正相关（r s=0.315 和0.295,P <0.05）,而p62 蛋白与p-JAK2、p-STAT3 蛋白表达均呈负相关（r s=-0.320 和-0.326,P <0.05）。结论 LC3、p62 在大肠癌中表达增加可能与JAK2/STAT3 信号通路有关,为大肠癌的 发病机制研究提供可能的理论基础。     

黄连素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响以及机制. 方法 用不同浓度的黄连素 (0、10、20、40) g/ml处理人乳腺癌细胞株MCF-7,细胞培养72 h后,MTT法检测 MCF-7 细胞增殖抑制率;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot法检测JAK2、p-JAK2、p-STAT3、STAT3、 Bax、 Bcl-2、 Cleavage-PARP 和 Cleavage-Caspase3表达. 结果 黄连素呈浓度依赖性地诱导MCF-7细胞的增值抑制和凋亡,上调Bax、Cleavage-PARP和Cleav-age-Caspase3表达,下调 p-JAK2、p-STAT3 和 Bcl-2,对 JAK2和STAT3表达无明显影响. 但高表达p-STAT3的MCF-7细胞可以抑制黄连素的减少增殖和促进凋亡作用. 结论 黄连素诱导MCF-7细胞增殖抑制和凋亡的机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路.     

血管紧张素Ⅱ2型受体活化促进缺氧/复氧损伤PC12细胞的生长

目的 探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)活化对缺氧/复氧(H/R)损伤PC12细胞生长的影响。方法PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株,具有神经内分泌细胞的一般特征。将PC12细胞用连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)处理后复制H/R损伤的神经细胞模型;H/R损伤PC12细胞分别予以AT2R拮抗剂(PD123319)、AT2R激动剂(CGP42112)进行处理,采用MTT法观察细胞存活率的变化;以逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化。结果PC12细胞经40mmol/LNa₂S₂O₄处理1 h后,MTT法检测的细胞存活率约为55~60%,提示复制H/R损伤模型成功;H/R损伤PC12细胞经CGP42112处理后,细胞存活率显著增高,而Bax mRNA 表达下调,Bcl-2 mRNA 表达上调;而PD123319处理后,细胞存活率显著下降, Bax mRNA 表达上调,Bcl-2 mRNA 表达则下调。结论AT2R活化可改善H/R损伤的PC12细胞的生长,其机理可能与其上调Bcl-2/Bax的比值有关。     

大承气汤对重症急性胰腺炎大鼠回肠组织JAK2/STAT3信号通路的影响

【目的】基于Janus激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨大承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道的保护作用。【方法】采用3.5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管内注射制备SAP大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、JAK2抑制剂组(术前2 h给予鲁索替尼灌胃)、STAT3抑制剂组(术前2 h给予Stattic腹腔注射)、大承气汤组(术前2 h给予大承气汤灌胃),另设假手术组(逆行胆胰管内注射生理盐水);再将各组大鼠分为造模后3、6、12、18 h亚组。采用苏木素—伊红染色观察末端回肠组织的病理改变,逆转录—定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测回肠组织JAK2 mRNA、STAT3mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测回肠组织p-JAK2蛋白、p-STAT3蛋白表达。【结果】SAP大鼠肠组织病理损害严重,JAK2 mRNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达;大承气汤、JAK2抑制剂和STAT3抑制剂可明显保护肠道结构,抑制JAK2 m RNA、STAT3 m RNA、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白过度表达。【结论】活化的JAK2/STAT3通路在SAP肠损害中起重要作用。大承气汤可能通过抑制活化的JAK2/STAT3通路保护SAP大鼠肠道。     

鱼藤酮通过调控JAK/STAT3通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的：探究鱼藤酮通过调控酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：将口腔鳞状细胞癌SCC25细胞分为对照组、低浓度鱼藤酮组(5μmol/L)、中浓度鱼藤酮组(10μmol/L)、高浓度鱼藤酮组(20μmol/L)、JAK2抑制剂AG490组(40μmol/L AG490)。MTT法检测各组SCC25细胞活力;克隆形成实验检测SCC25细胞增殖情况;流式细胞术检测SCC25细胞凋亡情况;Western blotting检测SCC25细胞中增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况。结果：与对照组比较,低浓度鱼藤酮组、中浓度鱼藤酮组、高浓度鱼藤酮组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平呈剂量依赖性显著降低,而凋亡率、caspase-3、Bax表达水平呈剂量依赖性显著增加(P<0.05～P<0.01),AG490组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平显著降低,...     

IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移

目的 研究白介素(IL)-17通过IL-6/1L-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移.方法 以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Westem blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中IL-6、IL-6R、JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3的表达变化.迁移、侵袭实验观察IL-17的刺激对Hep-2细胞侵袭、迁移的影响.结果 Western blot实验中,在IL-17刺激下,1、50、100 ng/ml浓度组较0 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(p＜0.01),50、100 ng/ml浓度组较1 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、1L-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01),100 ng/ml浓度组较50 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01);各组间JAK1、STAT3的表达无明显变化.侵袭与迁移实验显示IL-17可以促进Hep-2细胞的侵袭和迁移.结论 IL-17可能通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞的侵袭和转移.     

基于IL-6、JAK2/STAT3信号通路探讨复方当归注射液在缺血性卒中炎性反应中的作用

目的基于IL-6和JAK2/STAT3信号通路,探讨复方当归注射液在缺血性卒中炎性反应中的作用。方法将大鼠随机分为空白对照组、假手术组和造模组。采用线栓法建立大脑中动脉栓塞致局灶性缺血损伤模型,造模成功后,再将造模大鼠随机分为模型组、复方当归注射液组和依达拉奉组,各组给予相应药物干预7 d,于末次给药24 h后处死取脑组织,采用TTC染色法观察各组大鼠的脑梗死情况;采用HE染色法观察各组大鼠脑组织病理学情况;采用ELISA法检测各组大鼠血浆中IL-6的含量;采用Western Blot法检测各组大鼠脑组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3的表达情况。结果复方当归注射液组可缩小缺血性卒中大鼠的脑梗死区域,减轻脑组织神经元的异常形态变化;复方当归注射液组IL-6的含量及p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平均低于模型组(P<0.01)。结论复方当归注射液可通过降低缺血性卒中大鼠IL-6及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的表达,抑制炎性反应,发挥神经保护作用。     

温阳消癥方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及其机制

目的：观察温阳消癥方对5/6肾切除小鼠残肾功能及肾脏纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法：随机从32只小鼠中取24只制作5/6肾切除慢性肾功能衰竭肾纤维化模型,2周后根据血清肌酐值将24只小鼠分为5/6肾切除组、代文组和温阳消癥方组,另8只作为假手术组。治疗8周后,Western blot检测各组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、I型胶原蛋白（Col-I）、III型胶原蛋白（Col-III）、α-SMA蛋白表达水平,免疫组织化学染色法测定小鼠肾组织Col-I、Col-III、α-SMA水平,用RT-qPCR法测定TGF-β1、Smad3 mRNA水平。结果：治疗8周后,模型组小鼠肾组织JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达均较假手术组上调（P＜0.01）,模型组小鼠肾组织TGF-β1、Smad3 mRNA表达较假手术组上调（P＜0.01）;与模型组比较,代文组、温阳消癥方组JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1、Smad3、Col-I、Col-III、α-SMA蛋白表达和TGF-β1、Smad3 mRNA表达均下调（P＜0.01）;与代文组比较,除TGF-β1、α-SMA外,温阳消癥方组其余指标均下调（P＜0.01）。结论：温阳消癥方能够保护5/6肾切除小鼠残肾功能,减轻肾纤维化病变程度,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3、JAK2/STAT3通路相关。     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.     

银杏叶提取物通过JAK2/STAT3信号通路调控食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的研究

目的 探讨银杏叶提取物对食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及机制。方法 食管癌细胞EC9706分为对照组（不做任何处理）、不同浓度银杏叶提取物组（100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物）、银杏叶提取物+白细胞介素-6（IL-6）组（20 ng/ml IL-6和400 mg/L银杏叶提取物）。采用CCK-8法检测各组细胞的光密度（OD）值;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭;Western blotting检测细胞增殖核抗原Ki-67、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、磷酸化酪氨酸激酶2（p-JAK2）、磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）蛋白相对表达量。结果 对照组,100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物组,银杏叶提取物+IL-6组细胞OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与对照组相比,不同浓度银杏叶提取物组EC9706细胞OD值均降低（P <0.05）,细胞活性降低,且呈浓度依赖性;银杏叶提取物+IL-6组较400 mg/L银杏叶提取物组EC9706细胞活性升高（P <0.05）。5组的细胞凋亡率比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与对照组相比,不同浓度银杏叶提取物组EC9706细胞凋亡率升高（P <0.05）,且呈浓度依赖性;银杏叶提取物+IL-6组EC9706细胞凋亡率较400 mg/L银杏叶提取物组降低（P <0.05）。5组细胞的Ki-67、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;不同浓度银杏叶提取物组Ki-67蛋白相对表达量较对照组均降低（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组Ki-67蛋白相对表达量较400 mg/L银杏叶提取物组升高（P <0.05）;不同浓度银杏叶提取物组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量较对照组均升高（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量较400 mg/L银杏叶提取物组降低（P <0.05）。对照组、400 mg/L银杏叶提取物组、银杏叶提取物+IL-6组细胞的MMP-2、MMP-9、p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;400 mg/L银杏叶提取物组较对照组均降低（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组较400 mg/L银杏叶提取物组均升高（P <0.05）。对照组、400 mg/L银杏叶提取物组及银杏叶提取物+IL-6组EC9706细胞迁移数、细胞侵袭数比较,差异有统计学意义（P <0.05）;400 mg/L银杏叶提取物组EC9706细胞迁移数、细胞侵袭数较对照组减少（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组EC9706细胞迁移数、细胞侵袭数较400 mg/L银杏叶提取物组增多（P <0.05）。结论 银杏叶提取物可能通过阻断JAK2/STAT3信号通路抑制食管癌细胞EC9706增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。     

JAK2-STAT3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用

目的研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用。方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Western blot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测。结果白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337±0.216),8 h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24 h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P<0.05)。加用抑制剂后,8 h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P<0.05),平滑肌细胞变化程度下降。结论炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系。     

基于JAK2/STAT3/VEGF通路探讨周氏固金消瘤汤抗人肺腺癌A549细胞的机制研究

目的   研究周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)对人肺腺癌A549增殖、凋亡和血管生成的影响及其机制。方法   通过CCK-8法检测ZSGJXLT对细胞活性的影响;Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;体外血管形成实验观察血管生成情况;Western blot法检测Bcl-2、Bax、VEGF、JAK2、p-JAK2、STAT3及p-STAT3表达;构建小鼠A549肺癌皮下移植瘤模型,并给予不同浓度ZSGJXLT治疗,21 d后处死小鼠称取瘤质量,计算抑瘤率。结果   ZSGJXLT显著抑制A549的活性(P < 0.01),具有时间及浓度依赖性;ZSGJXLT诱导A549细胞凋亡(P < 0.05~0.01),具有浓度依赖性;ZSGJXLT显著抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外小管形成(P < 0.01),呈浓度依赖性;Western blot结果显示ZSGJXLT能引起Bax/Bcl-2表达明显上调(P < 0.05~0.01),VEGF、p-STAT3/STAT3和p-JAK2/JAK2的表达明显下调(P < 0.01);小鼠体内实验结果表明,与模型组比较,不同浓度ZSGJXLT(0.25、1、4 g/kg)均可显著抑制肿瘤生长(P < 0.05~0.01),抑瘤率分别为21.66%、35.52%和48.24%。结论   周氏固金消瘤汤可以通过影响JAK2/STAT3/VEGF通路的活化,发挥抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抗血管生成等多途径抗人肺腺癌A549的作用。为开发新型抗肺癌中药复方ZSGJXLT提供了实验依据。      

2型糖尿病大血管病变患者血清诱导的人脐静脉内皮细胞中JAK2/STAT3信号通路的表达

目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在2型糖尿病大血管病变发病机制中的作用.方法 取健康志愿者、单纯2型糖尿病患者和2型糖尿病大血管病变患者的血清孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路,并将细胞按不同处理方式分为对照组(NC组)、单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病大血管病变组(DV组)、单纯糖尿病+AG490组(DM+AG490组)及糖尿病大血管病变+AG490组(DV+AG490组),各30例.采用实时定量PCR技术检测各组细胞JAK2、STA T3、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(FLT1)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测JAK2、STAT3和磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白表达量.结果 与NC组比较,DM组和DV组HUVEC细胞内JAK2、STA T3mRNA和JAK2、p-STAT3的蛋白表达水平均上调(P＜0.05),且DV组JAK2、STA T3 mRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平均高于DM组(P＜0.05).DM+AG490组和DV+AG490组的JAK2、STA T3 rnRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平分别低于DM组、DV组(P＜0.05).与NC组和DM组比较,DV组VEF和FLT1 mRNA的表达水平上调(P＜0.05);而与DV组比较,DV+AG490组VEGF和FLT1 mRNA的表达水平均下调(P＜0.05).结论 JAK2/STAT3信号通路可能参与2型糖尿病大血管病变的发病过程.     

雷公藤甲素抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的炎症和迁移： 基于circRNA 0003353/JAK2/STAT3信号通路

目的 探讨雷公藤甲素（TPL）通过调控环状非编码RNA（circRNA）0003353对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）炎症和细胞迁移的作用机制。方法 纳入我院风湿科住院RA患者50例和正常人30例,收集外周血单个核细胞（PBMCs）及血清,检测circRNA 0003353的表达、免疫炎症指标[类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、anti-CCP、IgA、IgG、IgM、C3、C4]和计算DAS28评分;采用最佳浓度10 ng/mL TPL处理RA-FLS,并转染circRNA 0003353过表达质粒。采用CCK-8法和Transwell实验检测RA-FLS细胞活力、迁移能力;ELISA法检测细胞因子IL-4、IL-6、IL-17;RT-qPCR法检测circRNA 0003353、Western blot检测p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3蛋白。结果 circRNA 0003353在RA患者PBMCs中表达升高,在协助诊断RA方面有良好效能（AUC=90.5%,P<0.001,95% CI：0.83-0.98）,circRNA 0003353与ESR、RF、DAS28呈正相关（P<0.05）;TPL呈时间依赖性降低circRNA 0003353表达,抑制RA-FLS的细胞活力和迁移能力,降低促炎细胞因子IL-6、IL-17,升高抑炎细胞因子IL-4（P<0.01）;TNF-α刺激后,RA-FLS中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高,而TPL干预后降低（P<0.01）;在TPL干预基础上,转染circRNA 0003353过表达质粒,RA-FLS中circRNA 0003353表达升高,细胞活力和迁移能力升高,IL-4降低,IL-6、IL-17升高,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高（P<0.01）。结论 circRNA 0003353在RA-PBMCs和RA-FLS中表达均升高,TPL可通过circRNA 0003353,调控JAK2/STAT3信号通路,抑制RA-FLS炎症和细胞迁移。