整合素α5β1与大鼠肝纤维化发生的实验研究

[目的]肝星状细胞（HSC）活化是肝纤维化的病理基础，本研究旨在探讨整合素受体在HSC活化及肝纤维化过程中的作用。[方法]制作大鼠肝硬化模型，同时进行体外细胞株HSC—T6实验。用免疫组化法观察仅平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、整合素α5β1及纤维连接蛋白（FN）的表达。HSC细胞株在FN包被的皿上培养，测定细胞活化、α-SMA、整合素α5β1蛋白表达。[结果]（1）模型组肝组织FN、α-SMA和α5β1蛋白表达增多。（2）FN包被明星促进HSC—T6的活化、α—SMA及α5β1的表达。[结论]FN促进整合素α5β1表达是活化HSC、促进肝纤维化的重要途径。     

双氢青蒿素对胆管结扎致大鼠肝纤维化的治疗作用研究

目的 探究双氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对胆管结扎（Bile duct ligation, BDL）所致的大鼠肝纤维化的初步治疗作用。方法 采用BDL诱导大鼠肝纤维化模型,DHA（14mg/kg）及阳性药物秋水仙碱（0.1mg/kg）干预处理,末次给药24h后,取血清检测ALT、AST、Bilirubin;HE染色、马松染色和天狼猩红染色检测肝组织病理变化;Western blot检测肝组织中肝星状细胞（HSC）活化指标α-SMA与α1(Ⅰ) collagen的表达;免疫荧光检测肝组织TGFβ-RⅡ的表达。体外培养活化的HSC-T6,并用DHA干预处理,Western blot检测α-SMA、α1(Ⅰ) collagen以及TGFβ-RⅡ、p-Smad2、Smad2的表达。结果 血清学指标结果显示,与空白对照组比较,模型组SD大鼠ALT、AST、Bilirubin显著升高,DHA能降低血清中ALT、AST、Bilirubin水平;HE、马松染色、天狼猩红染色结果显示,与模型组比较,DHA能够明显改善肝脏病理组织结构以及胶原纤维的沉积;Western blot结果显示,DHA还可抑制HSC活化的标志物α-SMA、α1(Ⅰ) collagen以及TGFβ-RⅡ、p-Smad2的表达。结论 DHA对BDL诱导的肝纤维化具有显著的保护作用,这一效应主要与其抑制HSC活化以及调控TGF-βⅡ/Smad2信号通路相关。      

PPAR-γ调控的自噬通路在染料木黄酮抑制肝星状细胞激活过程中的作用

目的探讨染料木黄酮在体外抑制肝星状细胞（HSC）活化的效应以及PPAR-γ调控的自噬通路在其中发挥的作用。方法 将体外培养的HSC细胞分别给予不同浓度的染料木黄酮作用48 h后,用Western blot法测定HSC激活标志蛋白α-SMA、α1（I） collagen的表达以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ\p62和PPAR-γ的表达;利用自噬抑制剂和PPAR-γ抑制剂验证自噬在染料木黄酮抑制 HSC激活过程中的作用以及PPAR-γ对自噬的调控作用。结果染料木黄酮作用于HSC细胞后,HSC活化标志蛋白α-SMA、α1 （I）collagen的水平明显降低（P<0.05）,而自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达明显升高、泛素结合蛋白p62水平明显降低,同时PPAR-γ 表达明显增加（P<0.05）;与单纯染料木黄酮刺激组相比,用3-MA处理后HSC活化标志蛋白α-SMA、α1（I）collagen的表达明显 升高;并且加入PPAR-γ抑制剂后,自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达明显降低、泛素结合蛋白p62 水平明显增加（P<0.05）。结论 PPAR-γ调控的自噬通路在染料木黄酮抑制HSC细胞激活的过程中发挥着重要作用。     

肝纤维化过程中肝星状细胞的移行机制

目的探讨肝纤维化过程中肝星状细胞（HSC）移行的机制和肝纤维化病变过程中新的病理生理机制。方法运用改良的Boyden腔系统,在体外条件下模拟体内正常Disse间隙的微环境及肝纤维化时的相关改变,以HSC为研究对象,通过细胞迁移实验、明胶酶谱和凝胶免疫印迹等实验方法,研究肝纤维化时致纤维化生长因子和细胞外基质促进HSC移行的机制。结果肝纤维化时增高的血小板衍化生长因子BB（PDGF—BB）、转化生长因子β1（TGF—β1）以及上皮细胞生长因子（EGF）均可以刺激活化的HSC分泌基质金属蛋白酶2（MMP-2）,而MMP-2通过降解胶原又可以促进HSC的移行（4．9倍）;HSC的移行是由其表面的整合素α1和以所α2,不同致纤维化生长因子诱导HSC移行时依赖着不同的整合素的介导;由HSC分泌的细胞外基质对HSC自身的行为有反馈调节作用,间质类基质可促进HSC的移行（3．2倍）,而基底膜样的基质则可抑制HSC的移行（1．2倍）。结论肝纤维化时Disse间隙微环境的改变导致了HSC的移行,其机制与促进HSC高表达MMP-2相关;肝纤维化时HSC的移行由整合素α1和以所α2;不同的细胞外基质对HSC的移行行为有着不同的调节作用。     

复方肝毒清对铁超载肝星状细胞活化和凋亡的影响

【目的】观察复方肝毒清对铁超载肝星状细胞（HSC）活化和凋亡的影响【方法】体外培养HSC—T6细胞,分为正常对照组、模型组、中药组（给药浓度为0．08g/L）。以柠檬酸铁胺（FAC）与HSC—T6细胞共同温育,建立HSC铁超载模型。采用免疫组化法检测HSC—T6细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,半定量聚合酶链反应（PCR）法检测细胞转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的表达,TUNEL法检测HSC—T6细胞的凋亡,电镜观察HSC—T6细胞超微结构。【结果】正常对照组和模型组HSC-T6细胞α-SMA大量表达,未见或仅见有较少细胞发生凋亡,而中药组HSC细胞α-SMA表达明显减少,TGF-β1 mRNA表达显著降低（P〈0．05）,且出现明显细胞凋亡。【结论】中药复方肝毒清可能通过调节细胞铁的代谢,抑制HSC活化并诱导其发生凋亡,从而在体外发挥抗肝纤维化作用。     

丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内细胞外信号调节激酶信号转导通路的抑制作用

目的：探讨丹参酚酸B盐（salvianolicacidB,SA—B）对转化生长因子βl（transforminggrowthfactor-β1,TGF—β1）活化的大鼠肝星状细胞（hepaticstellatecell,HSC）内细胞外信号调节激酶（extracellularsignal—regulatedkinase,ERK）信号转导通路的影响。方法：采用原位灌流酶消化及Nycodenz密度梯度离心的方法分离正常大鼠HSC,将TGF—β1和SA—B直接添加于原代HSC的无血清培养液中。蛋白印记法检测HSC内磷酸化和总ERK,以及有丝分裂原激活蛋白激酶激酶MEK、有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶Raf、α平滑肌肌动蛋白（α—smoothmuscleactin,α—SMA）和工型胶原蛋白的表达。结果：SA—B可抑制正常原代HSC及TGFp1刺激的HSC内ERK上游激酶MEK的磷酸化;而对正常原代HSC及TGF—β1刺激的HSC内MEK上游激酶Raf-1的磷酸化无明显抑制。SA—B对TGF-β1刺激的HSC内α—SMA表达有明显的抑制作用,SA—B与ERK阻断剂联用,几乎接近完全阻断α-SMA的表达。SA—B对正常培养的HSC和经TGF—β1刺激的HSCI型胶原蛋白的合成都有明显的抑制作用。结论：SA—B抑制TGF—β1刺激的HSC内ERK信号转导通路的作用环节在于抑制了MEK的磷酸化。SA—B通过抑制TGF-β1的ERK信号转导通路,减少了因HSC活化导致的α—SMA表达和工型胶原蛋白合成增加。     

紫杉醇影响TGF⁃β1诱导的原代人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的：研究紫杉醇（paclitaxel,PTX）对重组人转化生长因子?β1（recombinant human transform growth factor?β1,rhTGF?β1）诱导人肺成纤维细胞（human lung fibroblasts,HLFs）向肌成纤维细胞转化的影响及其相关机制。方法：培养HLFs,药物处理分为对照组、TGF?β1组（5 ng/mL）、TGF?β1+PTX（0.01 nmol/L）组、TGF?β1+ PTX（0.1 nmol/L）组、TGF?β1+ PTX（1 nmol/L）组、PTX组（1 nmol/L）。采用CCK8法测定细胞活性;显微镜下观察并分析细胞形态学变化;Transwell实验检测细胞迁移能力;免疫荧光观察细胞内α?平滑肌肌动蛋白（α?SMA）表达及分布情况;real?time PCR和Western blot检测各组α?SMA、纤连蛋白（fibronectin）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（collagen Ⅲ）mRNA水平及蛋白含量;Western blot检测各组细胞内p?Smad3、Smad3、p?p38和p38蛋白含量。结果：CCK8结果显示,1 nmol/L PTX对细胞无毒性作用,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs活性增加,0.1和1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs活性增加;细胞形态学结果显示,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs胞体宽度增加,0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs胞体宽度增加;Transwell实验结果显示,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF?β1诱导的HLFs迁移,0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF?β1诱导的HLFs迁移;免疫荧光结果显示,0.01 nmol/L PTX不能降低TGF?β1诱导的HLFs内α?SMA荧光强度,0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF?β1诱导的HLFs内α?SMA荧光强度;real?time PCR和Western blot结果显示,0.01 nmol/L PTX不能降低TGF?β1诱导的HLFs表型转化标志物α?SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagenⅢ含量及p38的磷酸化水平,0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF?β1诱导的HLFs表型转化标志物α?SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagen Ⅲ含量以及Smad3和p38的磷酸化水平。结论：紫杉醇可以抑制TGF?β1诱导原代HLFs向肌成纤维细胞表型转化,这种作用可能与抑制TGF?β/Smad/MAPK信号通路激活有关。     

microRNA-101a在尿酸诱导的肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的研究尿酸对肾小管上皮细胞间充质转分化的影响及microRNA-101a在其中的作用。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）,分别以0、10、100、500μmol/L的尿酸诱导细胞,采用实时定量PCR检测各组α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）、I型胶原（ColⅠ）及E钙蛋白mRNA的表达水平;Wersten blot检测各组中α- SMA的表达,免疫荧光检测各组中胶原蛋白I（COL）表达水平,观察细胞是否发生转分化。再用实时定量PCR检测各组中miR-101a及COX-2mRNA的表达水平,Wersten blot检测各组中COX-2的表达。进一步实验选择100μmol/L尿酸诱导细胞,并转染miR-101a mimics,分为3组,miR-101a组：先转染miR-101a mimics,再以100μmol/L尿酸培养基培养;空白对照组：以100μmol/L尿酸培养基培养;阴性对照组：细胞转染随机合成的miRNA NC片段,再以100μmol/L尿酸培养基培养。检测各组中α- SMA、ColⅠ、E钙蛋白及COX-2mRNA的表达量。结果培养基中尿酸浓度越高,α- SMA、ColⅠ表达水平也越高,E钙蛋白越低,提示细胞发生转分化,同时miR-101a表达减少,COX-2mRNA表达增多。miR-101a组与空白对照组和阴性对照组比较,α- SMA、ColⅠ及COX-2的表达明显降低（P＜0.05）,E钙蛋白明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论尿酸诱导肾小管上皮细胞转分化可能呈浓度依赖性, miR-101a及COX-2可能参与尿酸诱导肾小管上皮细胞转分化的调节过程。     

褪黑素对PDGF诱导肝纤维化的影响及其可能机制

目的：　探讨褪黑素（melatonin,Mel）对血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）诱导的肝星状细胞-T6（hepatic stellate cell-T6,HSC-T6）中JAK2/STAT3信号通路的影响。方法：　将HSC-T6细胞分为6组：对照组、模型组、实验组（Mel 1 nmol/L、Mel 1 μmol/L、Mel 0.1 mmol/L）、抑制剂组（AG490为JAK2/STAT3通路的抑制剂）,实时荧光聚合酶链式反应检测HSC-T6中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ,collagen-Ⅰ）mRNA表达,免疫组化检测HSC-T6细胞中JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达。结果：　与对照组比较,PDGF能明显激活HSC-T6增殖,明显上调HSC-T6中α-SMA、collagen-ⅠmRNA及JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3表达;与模型组比较,褪黑素及JAK2/STAT3通路抑制剂可抑制PDGF诱导的HSC-T6增殖,明显下调α-SMA、collagen-ⅠmRNA及JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3表达。结论：　褪黑素可抑制PDGF诱导的HSC-T6活化与增殖,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关,这可能是褪黑素改善肝纤维化的机制之一。     

丹酚酸B对PDGF及MDA诱导的人鼠原代肝星状细胞增殖的影响

目的：探讨丹酚酸B（SAB）对血小板生长因子（PDGF）和丙二醛（MDA）刺激的大鼠原代肝星状细胞（HSC）增殖的影响。方法：采用原位灌注法消化大鼠肝脏，108g／L Nycodenz密度梯度离心，分离HSC，以MTT法观察细胞的增殖能力。免疫组化法检测血小板生长因子受体（PDGFR）含量。结果：MDA组与正常组相比可明显增加MTT吸光度（P〈0．05），PDGF组亦较正常组明显增加MTT吸光度（P〈0．01）；1μmol／LSAB和10μmol／L SAB不仅可显著抑制MDA刺激的HSC吸光度增加（P均〈0．01），也可抑制PDGF—BB刺激的HSC吸光度增加（P均〈0．01）。PDGF及MDA作用后细胞PDGFR的表达均明显增加，而10μmol／L SAB则可抑制PDGFR的表达。结论：SAB可通过抑制PDGFR的表达而抑制体外培养HSC的增殖．这种抑制作用与SAB的抗氧化作用有一定的关系。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点，诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据，做出准确诊断，给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂，腹腔内疾病占64．63％，共17种病因；腹腔外疾病占35．37％，共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查，在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。