哮喘患者外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的表达及临床意义

目的探讨哮喘患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的变化及意义。方法采用流式细胞技术检测40例哮喘患者和40例健康对照者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的表达水平,同时测定20例急性发作期哮喘患者肺功能。结果哮喘患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比为3.02±1.85%,明显低于健康对照组(P<0.01);急性发作期哮喘患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞明显低于非急性发作期(P<0.01);急性发作期患者外周血CD_4~+CD_(25)~+T细胞百分率与FEV1呈显著正相关(r=0.5874,P<0.01)。结论CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在哮喘的疾病活动中起着重要作用,是导致哮喘患者细胞免疫失调的重要原因。     

肺炎链球菌3型多糖对支气管哮喘小鼠气道炎症及Treg/Th17细胞的影响

目的观察肺炎链球菌3型多糖(T3P)对支气管哮喘小鼠气道炎症以及Treg/Th17细胞的影响,探讨T3P对哮喘小鼠的免疫调节作用。方法 BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和T3P组,每组8只。哮喘组以卵清蛋白(OVA)致敏、气道激发建立哮喘模型,对照组以PBS代替,T3P组在OVA致敏前皮下注射T3P进行干预。观察小鼠肺组织病理改变,对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-IgE)以及BALF中白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10、IL-17浓度,实时荧光定量PCR法检测肺组织中转录因子Foxp3和RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测Treg和Th17细胞占CD4~+细胞百分比。结果 T3P组小鼠肺组织炎症反应程度弱于哮喘组,血清OVA-IgE,BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞比例以及IL-4、IL-17浓度均低于哮喘组(P<0.05),IFN-γ、IL-10浓度高于哮喘组(P<0.05),小鼠肺组织Foxp3 mRNA表达水平及Treg占CD4~+细胞百分比均高于哮喘组(P<0.05),RORγt mRNA表达水平和Th17细胞占CD4~+细胞百分比均低于哮喘组(P<0.05)。哮喘组和T3P组小鼠肺组织Foxp3-mRNA/RORγt-mRNA比值及Treg/Th17细胞比例与BALF中嗜酸粒细胞数量呈负相关。结论 T3P可以通过抑制过敏原特异性IgE表达调节Th1/Th2、Treg/Th17细胞平衡,抑制气道炎症。     

平哮合剂对哮喘豚鼠气道T淋巴细胞凋亡的影响

目的：通过动物实验观察平哮合剂的疗效交探讨其作用的分子机制。方法：采用卵蛋白诱导的豚鼠哮喘模型以平哮合剂治疗，治疗1周后，观察其对哮喘潜状期的影响，并与氨茶碱治疗组进行比较。采用流式细胞仪分析豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中T淋巴细胞的凋亡率。结果：平哮合剂能显延长哮喘豚鼠的诱喘潜伏期，作用与氨茶碱相当（P＞0.05）。哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞的凋亡率与正常组比较有显性差异（P＜0.01），平哮合剂可显提高哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞凋亡率。结论：平哮合剂有明确的平喘作用，其途径之一可能是通过促进气道粘膜中淋巴细胞的凋亡而实现的。     

清肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症抑制作用的实验研究

目的:探讨中药复方清肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症的影响.方法:用卵白蛋白(OVA)致敏、雾化建立小鼠哮喘模型.末次抗原激发后48h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和骨髓标本,计数细胞总数和嗜酸性粒细胞(Eos),并行肺组织学检查.结果:清肺止哮汤抑制气道炎症的最合适剂量为2.5g/ml.清肺止哮汤可明显减少BALF中细胞总数[(66.66±6.42)×104]及Eos绝对数[(3.52±0.53)×104],能使肺组织中细支气管、血管周围的Eos浸润和粘液的过度分泌得到控制.但和布地奈德(BUD)组[(56.00±9.28)×104,(0.86±0.26)×104]相比仍有显著性差异.结论:清肺止哮汤能部分抑制哮喘小鼠气道炎症.     

咳喘中医治疗探讨

哮喘是呼吸道的过敏性疾病，属于祖国医学的“哮”、“喘”、“痰饮”等疾病范畴。传统医学多从痰论治。现代医学认为哮喘是由多种炎性细胞及多种细胞因子、化学介质等共同参与的气道慢性炎症，其中T淋巴细胞的活化起关键作用。在特应症患者体内TH：型细胞占优势是其主要特征。我们认为哮喘发作时的主要病理环节是痰阻气闭、痰气互结、胸阳不足、气道孪急，故拟宽胸理气、通阳散结、化痰解痉等多法联用，整体调节，创制中药止哮平喘方。临床及实验研究证明止哮平喘方是治疗哮喘的有效方剂。     

调节性T细胞/Th 17在支气管哮喘小鼠气道炎症过程中的变化

目的 通过观察支气管哮喘小鼠模型T淋巴细胞亚群调节性细胞(Treg)、Th17的变化,探讨淋巴细胞亚群Treg和Th17在哮喘发病中的作用.方法 采用卵清蛋白致敏方法 建立支气管哮喘小鼠模型,Balb/c小鼠16只随机分为正常对照组和哮喘组各8只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌-洗液(BALF)、血清中白细胞介素-10(1L-10)、白细胞介素17(IL-17)水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症程度;采用流式细胞仪检测各组Treg、Th17细胞占CD4+细胞百分率情况.结果 哮喘组淋巴细胞亚群CD_4+~CD_(25)+~Foxp_3~+细胞占CD_4~+细胞百分率显著低于正常对照组(P<0.01);CD_4+IL-17~+细胞占CD_4~+细胞百分率显著高于正常对照组(P<0.01).CD_4~+CD_(25)~+Foxp_3~+细胞/CD_4~+IL-17细胞比值与嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数呈负相关(r=-0.894,-0.957,-0.886;P均<0.01).结论 Treg/Th17在小鼠哮喘模型中存在失衡表达,提示Treg/Th17失衡参与了哮喘的发病过程,是对哮喘发病免疫机制的重要补充.     

吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症影响的研究

目的:研究吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症的影响,探讨肝素治疗哮喘的可能机制。方法:建立哮喘豚鼠模型,用肝素雾化吸入,观察支气管灌洗液(BALF)和支气管或细支气管壁的细胞成分变化。光镜和电镜下观察气道及肺组织病理变化。结果:肝素治疗组BALF中淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、上皮细胞较哮喘模型组有显著减少(P<0.01),在支气管或细支气管壁,肝素治疗组肥大细胞数显著高于哮喘模型组(P<0.01),嗜酸性粒细胞有显著下降(P<0.01),光镜和电镜下气道损伤减轻。结论:肝素可以抑制哮喘豚鼠气道炎症,减轻哮喘豚鼠气道炎症损伤。     

平哮合剂对哮喘豚鼠气道T淋巴细胞凋亡的影响

目的 :通过动物实验观察平哮合剂的疗效并探讨其作用的分子机制。方法 :采用卵蛋白诱导的豚鼠哮喘模型以平哮合剂治疗 ,治疗 1周后 ,观察其对哮喘潜伏期的影响 ,并与氨茶碱治疗组进行比较。采用流式细胞仪分析豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中T淋巴细胞的凋亡率。结果 :平哮合剂能显著延长哮喘豚鼠的诱喘潜伏期 ,作用与氨茶碱相当 (P >0 0 5 )。哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞的凋亡率与正常组比较有显著性差异 (P <0 0 1 ) ,平哮合剂可显著提高哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞凋亡率。结论 :平哮合剂有明确的平喘作用 ,其途径之一可能是通过促进气道粘膜中淋巴细胞的凋亡而实现的。     

麻芍平喘汤对哮喘大鼠气道重塑及TGF-β1、PDGF-BB的影响

[目的]探讨麻芍平喘汤对哮喘大鼠气道重塑及转化生长因子(TGF-β1)、血小板源性生长因子BB型(PDGF-BB)的影响。[方法]将70只SD大鼠随即分为正常组(A)、模型组(B)、麻芍平喘低剂量组(C)、麻芍平喘中剂量组(D)、麻芍平喘高剂量组(E)、地塞米松组(F)、阳和平喘组(G)。卵白蛋白(OVA)多点致敏激发大鼠制作哮喘气道重塑模型,在实验第28~42天,正常组与模型组分别予生理盐水灌胃,其余各组予相应药物干预。实验结束后HE染色观察哮喘大鼠肺组织病理形态改变及气道形态学变化;免疫组织化学染色法检测支气管肺组织TGF-β1、PDGF-BB的蛋白表达。[结果]麻芍平喘汤能够减轻哮喘大鼠气道炎性细胞浸润及气道重塑;与A组比较B组大鼠TGF-β1、PDGF-BB的蛋白含量均明显升高(P0.01);与B组相比,中药组和西药组TGF-β1、PDGF-BB水平明显降低(P0.01);与F组相比,E组TGF-β1、PDGF-BB水平降低明显(P0.05);与G组相比,E组效果更好(P0.01)。[结论]麻芍平喘汤能延缓哮喘气道重塑,控制炎症,其中TGF-β1、PDGF-BB与气道重塑呈正相关。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的 探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4+ CD25+ Foxp3+ T 细胞)及气道炎症的影响.方法 28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7).治疗组 1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组).分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL．10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达.以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7).结果 哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异.与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加.各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异.结论 哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平.提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用.     

黄芪对新生儿缺氧缺血性脑病的神经功能保护和免疫调节作用

[目的]探讨黄芪对新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的治疗及免疫调节作用。[方法]HIE患儿50例,随机分为治疗组及对照组。两组常规治疗方法相同,治疗组加用黄芪注射液2mL·kg-1·d-1静脉滴注。观察治疗前后临床症状及体征改善时间、新生儿行为神经测定(NBNA)评分及外周血T淋巴细胞亚群变化。[结果]治疗组临床症状恢复时间较对照组平均缩短1.4 d,两组比较差异有显著性意义(t=2.06,P<0.05)。NBNA评分第7天已显示治疗组优于对照组(t=2.18.P<0.05),第14天治疗组优势更明显(t=2.79,P<0.01)。治疗组第14天外周血T淋巴细胞亚群CD3、CD4回升,CD8下降,PCD4／PCDB比值恢复正常,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。[结论]黄芪用于治疗新生儿缺氧缺血性脑病能缩短疗程,促进新生儿行为神经功能的恢复,减轻脑损伤,调节细胞免疫功能。     

清热复方对热休克大鼠肝、肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用

[目的]探讨清热复方对大鼠热休克蛋白 70(HSP70)表达的调控作用。[方法]将 70只大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组和正常对照组7组,每组10只。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对热休克模型组、内毒素模型组和正常对照组大鼠的肝、肺组织进行了HSP70 mRNA表达的检测,观察清热复方白虎汤和黄连解毒汤分别对两种模型大鼠肝、肺组织 HSP70 mRNA表达的影响。【结果】热休克模型组、热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组中HSP70 mRNA的表达高于正常对照组(P<0.05);热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组均高于热休克模型组(P<0.05);内毒素模型组、内毒素加白虎汤组和内毒素加黄连解毒汤组之间的HSP70 mRNA表达以及与正常对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。[结论]提示不同因素导致的热证状态下HSP70的基因表达不一致,清热复方可诱导热休克大鼠肝、肺组织中HSP70表达的增加,从而提高细胞的耐受力,避免细胞组织的损伤。     

加味茯苓甘草汤防治慢性常压缺氧性肺动脉高压的实验研究

目的：探讨中药复方制剂加味茯苓甘草汤（茯苓、甘草、桂枝、桃仁、苇茎等组成）对慢性肺动脉高压（HPH）的防治作用。方法：常压缺氧法建立HPH大鼠模型，以生理盐水为对照药，设对照组、缺氧组和中药治疗组，灌胃3周，检测平均肺动脉压力（mPAP)，观察右心室与左心室加室间隔重量之比[mR/(mL mS]、血浆及肺匀浆中磷脂酶A2（PLA2）、血栓素B2（TXB2）、6－酮－前列腺素（6－keto-PGF1α）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的变化。结果：①缺氧组大鼠mPAP、mR/(mL mS)、 PLA2、TXB2、MDA含量增加，6－keto-PGF1α、SOD含量下降，与对照组相比有显著性差异（P＜0．01）；②加味茯苓甘草汤能降低mPAP、mR/(mL mS)，与缺氧组相比，前者有显著性差异（P＜0．01）；③加味茯苓甘草汤能使肺组织中PLA2、6－keto-PGF1α、TXB2、MDA含量降至正常水平，与缺氧组相比差异有显著性（P＜0．01或P＜0．05）；④加味茯苓甘草汤能使血浆中PLA2、6－keto-PGF1α、SOD含量下降，与缺氧组相比差异有显著性（P＜0．05或P＜0．01），TXB2、MDA含量无明显变化。结论：长期使用加味茯苓甘草汤可有效防治慢性缺氧性肺动脉高压，其机理与抑制PLA2及相关炎性介质，降低自由基的毒性有关。     

清毒饮和养正片对L7212白血病小鼠Fas基因及其可溶性受体的影响

[目的]探讨复方中药清毒饮和养正片抗急性白血病的疗效机理。[方法]采用L7212白血病小鼠模型,用原位末端标记法(TUNEL)观察清毒饮(由七叶一枝花、白花蛇舌草、大青叶、山慈菇等组成)、养正片(由黄芪、人参、补骨脂、赤灵芝、三七片等组成)和足叶乙甙(VP16)化疗对L7212的白血病细胞凋亡的影响;用免疫组化法检测L7212白血病小鼠骨髓有核细胞的Fas基因表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测可溶性Fas(sFas)。[结果]清毒饮组、养正片组、化疗组都可见较多凋亡阳性白血病细胞,清毒饮组优于养正片组,与化疗合用则更明显,凋亡指数均大于模型组(P<0.01);L7212白血病细胞Fas表达减低,给予清毒饮、养正片、化疗处理后Fas升高,清毒饮组亦较养正片组明显,清毒饮加化疗组则尤其明显(P<0.01);清毒饮组sFas较模型组明显降低(P<0.05),并接近正常空白组水平(P>0.05),养正片组则无明显变化。[结论]清毒饮、养正片能诱导L7212小鼠白血病细胞凋亡,并可促进化疗的诱导凋亡作用,以清毒饮尤为明显;清毒饮、养正片均能提高Fas的表达水平,清毒饮还可使L7212小鼠增高了的sFas水平降低。提示在急性白血病早期,采用祛邪攻毒中药可诱导其细胞凋亡并与化疗有协同作用;而此期采用扶正补虚中药则作用较差。     

不同液体小容量复苏对内毒素休克大鼠肺损伤的影响

【目的】 探讨不同液体小容量复苏对大鼠内毒素休克所致肺损伤的影响&#65377;【方法】 清洁级SD大鼠30只随机分为5组,正常对照组(C组)&#65380;内毒素(LPS)对照组(LPS,E组)&#65380;75 g/L高渗氯化钠(HSS)组(LPS + HSS, HSS组)&#65380;羟乙基淀粉液130/0.4(HES)组(LPS + HES,HES组)&#65380;75 g/L高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液(HSH)组(LPS + HSH,HSH组)&#65377;各组在静注LPS(1 mg/kg) 30 min后予小容量复苏(4 ml/kg)干预&#65377;观察各组大鼠肺组织病理学变化,测定肺组织干/湿质量比例,测定肺泡灌洗液中蛋白浓度,测定肺组织丙二醛(MDA)的浓度以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性&#65377;【结果】 与空白对照组比较,内毒素模型各组病理改变均加重,肺泡灌洗液蛋白浓度均升高(P < 0.05),内毒素对照组病理评分升高(P < 0.01),干/湿质量比例下降(P < 0.05),SOD活性下降(P < 0.01),内毒素对照组和75 g/L高渗氯化钠组MDA浓度升高;与内毒素对照组比较,75 g/L高渗氯化钠组,羟乙基淀粉130/0.4溶液组和75 g/L高渗氯化钠羟乙基淀粉40组,病理改变减轻,肺病理评分&#65380;MDA浓度下降(P < 0.01),干/湿质量比例升高(P < 0.05),SOD活性升高(P < 0.01)&#65377;羟乙基淀粉130/0.4溶液组和75 g/L高渗氯化钠羟乙基淀粉40组肺泡灌洗液中蛋白浓度下降(P < 0.05, P < 0.01)&#65377;【结论】 使用75 g/L高渗氯化钠,羟乙基淀粉130/0.4溶液和75 g/L高渗氯化钠羟乙基淀粉40进行小容量复苏对大鼠内毒素休克所致肺损伤有明显保护作用&#65377;相比75 g/L高渗氯化钠,羟乙基淀粉130/0.4溶液和75 g/L高渗氯化钠羟乙基淀粉40在减轻肺毛细血管通透性方面作用更佳&#65377;     

喘康平合剂对感染副流感病毒3型豚鼠气道反应性和气道炎症的影响

目的：探讨病毒感染与哮喘气道高反应性（ＡＨＲ）的关系及喘康平合剂对ＡＨＲ的影响。方法：致敏豚鼠感染副流感染病毒３型（Ｐ－３）后,对其进行气道反应性测定、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中各种细胞计数及ＢＡＬＦ中Ｐ物质含量测定。结果：致敏豚鼠接种Ｐ－３后,与对照组比较,气道反应性明显增高（Ｐ〈０．０１）,ＢＡＬＦ中巨噬细胞和嗜酸性细胞明显增多（Ｐ〈０．０１）,Ｐ物质含量多（Ｐ〈０．０５）;预先给予喘康平     

养心康对心肌肥大型心力衰竭大鼠血浆ET、CGRP含量的影响

目的：探讨心肌肥大型心力衰竭大鼠血浆内皮素（ET）和降钙素基因相关肽（CGRP）水平的变化及养心康（由人参、麦冬、毛 冬青等组成）的作用机理。方法：大鼠皮下注射异丙肾上腺素共13d以制备心肌肥大型心力衰竭模型，采用放射免疫分析法观察各组动物血浆ET、CGRP水平的变化。结果：模型组大鼠血浆ET含量比正常对照组显著升高（P＜0．01），CGRP含量则比正常对照组显著降低（P＜0．01），而养心康能降低ET（P＜0．01）和升高CGRP含量（P＜0．01），其大剂量组的疗效接近地高辛。结论：ET、CGRP是参与心力衰竭发病的重要体液因素，二者之间的失衡是心力衰竭发生、发展的重要原因。而养心康的作用机理与纠正失衡的ET／CGRP比值有关。     

潜阳定眩饮治疗阴虚阳亢型高血压病的疗效观察

[目的]观察潜阳定眩饮(主要由石决明、生牡蛎、生龙骨、珍珠母、葛根、夜交藤、白芍、竹茹、桑寄生、钩藤、熟地、黄芩、天麻、牛膝、杜仲、僵蚕等中药组成)治疗阴虚阳亢型高血压病的疗效。[方法]以潜阳定眩饮治疗高血压病60例,另设阳性对照组30例(服用马来酸依那普利片和阿斯匹林肠溶片),比较两组症状疗效。[结果]治疗组总有效率93.3％,对照组总有效率76.7％,治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。两组治疗后收缩压(psystolic)、舒张压(pdiastolic)均比治疗前降低(P<0.05),但两组降压疗效无显著性差异(P>0.05);在症状疗效方面,治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。[结论]提示潜阳定眩饮降血压效果与马来酸依普利片加阿斯匹林肠溶片相仿,在改善症状方面优于对照组。     

疏肝健脾汤治疗缺铁性贫血的临床研究

[目的]观察疏肝健脾汤(由柴胡、陈皮、党参、黄芪、紫河车、阿胶、白术、山楂、大枣等中药组成)治疗缺铁性贫血(IDA)的临床疗效,并初步探讨其作用机制。[方法]171例缺铁性贫血患者按就诊先后顺序分为治疗组和对照组.治疗组用疏肝健脾汤,对照组用硫酸亚铁,均连续用药4周,观察治疗后贫血症状、体征改善情况,并检测两组治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、血清铁蛋白(SF)等指标以评价两种药物对IDA的疗效。[结果]两组治疗后IDA的症状、体征、贫血及缺铁状态均有不同程度改善(与治疗前比较P<0.01),治疗组促进IDA体征、贫血及缺铁状态的改善明显优于对照组(均P<0.01),且在治疗过程中未出现不良反应。[结论]疏肝健脾汤治疗缺铁性贫血疗效优于硫酸亚铁。