西格列汀对高糖条件下施万细胞增殖及3-NT含量的影响

目的 观察二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂西格列汀对高糖条件下大鼠施万细胞(RSC96)增殖、凋亡及3-硝基酪氨酸(3-NT)含量的影响.方法 通过体外培养RSC96细胞,建立高糖条件下D-葡萄糖100 mmol/L RSC96细胞模型,予以过氧亚硝基阴离子(ONOO-)抑制剂尿酸1 μmol/L及西格列汀1 μmol/L刺激48 h后,应用CCK-8及流式细胞技术观察尿酸及西格列汀对高糖条件下RSC96细胞增殖及细胞凋亡的影响.运用ELISA法检测尿酸及西格列汀对RSC96细胞内3-NT蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,高糖组抑制细胞增殖,促进细胞凋亡及胞内3-NT蛋白表达(P＜0.05);尿酸及西格列汀可促进高糖条件下RSC96细胞增殖,抑制细胞凋亡及胞内3-NT蛋白表达(P＜0.05).结论 西格列汀可能通过抑制细胞亚硝基化应激,从而增加高糖条件下RSC96细胞的增殖活性,抑制细胞凋亡,减轻高浓度葡萄糖对RSC96细胞的损伤.     

高糖环境对HSkMCs细胞株线粒体融合蛋白2表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨高糖对人骨骼肌细胞株(HSkMCs)线粒体融合蛋白2(mfn2)表达及细胞凋亡的影响。方法:体外培养HSkMCs细胞株,将细胞分别以5.55 mmol/L,11.10 mmol/L,22.20 mmol/L葡糖糖培养48 h,检测mfn2mRNA表达及细胞凋亡情况。RT-PCR法测定基因表达,流式细胞技术检测细胞凋亡。结果:以5.55 mmol/L葡萄糖组培养48 h为基础对照,11.10 mmol/L组mfn2表达较对照组下降12.3%(P<0.05);22.20 mmol/L组mfn2表达较对照组降低47.3%(P<0.05);对照组细胞凋亡率为(1.80±0.57)%,11.10 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率为(13.23±1.47)%,22.20 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率为(24.03±3.05)%,均较对照组显著增加(P<0.05)。结论:高糖可诱导HSkMCs细胞mfn2 mRNA表达下调,增加其凋亡。     

高糖对小鼠足细胞(原)肾素受体表达的影响

目的 体外观察高糖刺激肾小球足细胞后(原)肾素受体(prorenin receptor,PRR)的表达变化,及PRR对足细胞凋亡的影响.方法 条件永生性小鼠足细胞用35mmol/L高糖刺激不同时间(0、1、3、6、12h),用不同浓度葡萄糖[35mmol/L甘露醇对照组、正常对照组(含5mmol/L葡萄糖)、10、20、35mmol/L组]刺激3h,Western blot及real-time PCR技术检测PRR的蛋白和mRNA表达;再将细胞分为35mmol/L高糖组、PRR的多肽阻断剂柄区肽(handle region peptide,HRP)(10-6mol/L)预处理组、氯沙坦(10-6mol/L)预处理组、HRP+氯沙坦预处理组,流式细胞仪法检测足细胞凋亡率.结果 (1)35mmol/L高糖刺激3、6、12h细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照细胞显著上调(P＜0.05).(2)20mmol/L与35mmol/L浓度葡萄糖刺激足细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照和甘露醇刺激细胞显著升高(P＜0.05).(3)氯沙坦、HRP及HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较35mmol/L高糖刺激细胞显著降低(P＜0.05),HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较氯沙坦预处理细胞降低(P＜0.05).结论 高糖刺激足细胞可通过上调PRR导致足细胞凋亡.     

高糖通过上调Axl受体表达促进心肌成纤维细胞增殖

目的探讨不同浓度糖在心肌成纤维细胞增殖中的作用及Axl酪氨酸激酶受体在血糖调控心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法分别用不同浓度糖孵育乳鼠心肌成纤维细胞,48h后分别检测细胞增殖、细胞周期以及Axl mRNA的表达量。结果 (1)高糖组心肌成纤维细胞增殖显著高于正常糖组[OD490:正常糖组(5mmol/L)0.358±0.023;高糖组(25mmol/L)0.446±0.036;P<0.01]。(2)高糖显著促进Axl表达上调(Ct值:正常糖组28.996±0.579;高糖组27.253±0.548;相对表达量:1∶2.63;P<0.05)。(3)高糖显著促进心肌成纤维细胞进入增殖周期(正常糖组G1%73.89±5.52;G2+S+M%26.11±5.52;高糖组G1%63.22±6.52;G2+S+M%36.78±6.52;P<0.05)。结论高糖能够通过上调Axl受体表达促进离体培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖,Axl受体在糖尿病性心肌病变中有可能扮演重要作用。     

丹酚酸B对代谢记忆环境下RSC96细胞的保护作用

目的:探讨丹酚酸B对代谢记忆环境下离体培养的RSC96细胞凋亡及炎性因子变化规律的影响。方法:RSC96细胞分别培养于低糖培养组(5.6 mmol/L)、代谢记忆(125 mmol/L高糖培养48 h,5.6 mmol/L低糖培养24 h)、丹酚酸B组(125 mmol/L高糖+1μmol/L丹酚酸B培养48 h,5.6 mmol/L低糖培养基+1μmol/L丹酚酸B培养24h)中,流式法检测ROS含量,Western blot法检测Cleaved-caspase 9,Cleaved-caspase 3,P65,IL-1β的表达。结果:代谢记忆环境可下调ROS含量,下调Cleaved-caspase 9,Cleaved-caspase 3,P65,IL-1β等蛋白的表达;丹酚酸B可上调ROS含量,下调Cleaved-caspase 9,Cleaved-caspase 3,P65,IL-1β等蛋白的表达。结论:代谢记忆环境下,丹酚酸B可能通过下调ROS引起细胞凋亡及炎性损伤保护RSC96细胞。     

氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用

目的：探讨氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用。方法：体外培养的MC3T3-E1细胞,分为正常对照组、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)组、11.0 mmol/L高糖组、11.0 mmol/L高糖+NAC组、22.0 mmol/L高糖组、22.0 mmol/L高糖+NAC组。应用Annexin V-FITC/PI处理不同组别细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;Honchest33258 染色观察细胞核形态;采用MTT法检测细胞增殖;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧类（reactive oxygen species,ROS）的生成。结果：①11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加（P=0.004）;22.0 mmol/L高糖组较正常对照组和11.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显增加（P=0.000;P=0.000）。②11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞增殖轻微下降（P=0.305）;与正常对照组和11.0 mmol/L高糖组相比,22.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞增殖显著降低（P=0.001;P=0.009）。③11.0 mmol/L和22.0mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞胞内ROS水平均明显增加（P=0.000;P=0.000）,但无明显浓度依赖性,抗氧化剂NAC可明显降低ROS水平,改善高糖所致的凋亡增加和增殖下降。结论：高糖可通过增加成骨细胞胞内ROS生成引起MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加、增殖下降。     

高糖对视网膜色素上皮细胞Toll样受体2表达的影响

目的观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制。方法各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-α抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇)。Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE-19细胞TLR2的mRNA表达水平。结果与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P<0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P<0.05)。与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P<0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P<0.01)。结论高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达。     

胃饥饿素通过抑制内质网应激减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡

目的 研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法 将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预，高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型，高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞，高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10μmol/L衣霉素联合处理细胞，所有细胞均培养48 h。采用AnnexinⅤ-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达。结果 与对照组比较，高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高糖组相比，高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较，高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P&...     

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症反应和增殖的影响

目的:观察霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及增殖的影响。方法:大鼠肾小球系膜细胞分为低糖组、高糖组、高糖加不同浓度霉酚酸组培养,测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及神经生长因子(NGF)的表达,及细胞增殖的情况。结果:①低浓度(0.1μmol/L)霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达有显著的抑制作用,但霉酚酸浓度的成倍增加(0.1-10μmol/L)对于以上效果并无明显的加强作用。②霉酚酸有浓度依赖性抑制高糖所致的系膜细胞增殖的作用。结论:体外霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎性因子ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达和高增殖有显著的抑制作用。     

西地那非对高糖培养施旺细胞保护作用的机制研究

目的 探讨西地那非对高糖培养施旺细胞保护作用的研究。方法 培养并纯化后的大鼠施旺细胞为研究对象,分为正常对照组、高糖组、渗透压对照组、高糖加不同浓度西地那非组。CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS),Tunnel法检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞Nrf-2的表达。结果 高糖组施旺细胞内Nrf-2蛋白表达降低[高糖组(0.33±0.04),正常对照组(1.00±0.05)],ROS水平增高[高糖组(50.61±6.75),正常对照组(23.44±4.18)],细胞凋亡率升高[高糖组(36.62±3.15),正常对照组(4.53±0.26)],细胞活性下降[高糖组(0.91±0.17),正常对照组(1.65±0.25)]。不同西地那非能上调高糖培养施旺细胞内Nrf-2蛋白表达,降低细胞内ROS水平,抑制细胞凋亡,提高细胞活性。结论 西地那非可能通过激活Nrf-2信号通路诱导抗氧化应激保护高糖环境下的施旺细胞。     

芪枝渴痹通方对高糖诱导大鼠雪旺细胞RSC96活性氧含量及凋亡的影响

目的 探讨芪枝渴痹通方对高糖诱导的大鼠雪旺细胞(RSC96)活性氧(ROS)含量及凋亡率的影响.方法 使用高糖诱导RSC96细胞,建立DPN细胞模型,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测ROS含量及凋亡率.结果 不同浓度的葡萄糖对RSC96细胞的存活率呈剂量依赖性降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);不同浓度的甘露醇对RSC96细胞的存活率无影响;50、100、150μg·mL-1浓度的芪枝渴痹通方对RSC96细胞具有增殖作用(P<0.05,P<0.001);芪枝渴痹通方可提高高糖诱导RSC96细胞存活率(P<0.01,P<0.001);芪枝渴痹通方可降低高糖诱导RSC96细胞ROS含量及细胞凋亡率(P<0.01,P<0.001).结论 芪枝渴痹通方可显著降低高糖诱导RSC96细胞ROS含量并抑制细胞凋亡率.     

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用

目的 研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用.方法 大鼠胰岛素瘤细胞系(INS-1)细胞以RPMI 1640培养基常规培养.实验分对照组(11.1 mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3 mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3 mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5 μmol/l)干预组)3组.以荧光定量RT-PCR检测IKKβmRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(P＜0.01),INS-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与高糖相比较,高糖+NF-κB抑制剂组IKKβ mRNA水平显著下降(P＜0.01),胞核内P65蛋白表达显著减少(P＜0.01),INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡.     

姜黄素对高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞血红素氧化酶-1表达的影响

目的 观察高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞(mesangial cell,MC)血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达及姜黄素对HO-1表达的影响.方法 将MC分为6组,正常对照组给予正常培养液,高糖刺激各组给予含 30 mmol/L葡萄糖的培养液,分别于培养6、12、24、48 h后收集细胞,另1组给予含30 mmol/L葡萄糖和33.33 mmol/L姜黄素的培养液共孵育6 h后收集细胞.分别用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western blot分析法检测各组系膜细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达情况.结果 正常MC有微量的HO-1 mRNA表达,高糖刺激后HO-1 mRNA表达量明显增加,于6 h达到高峰, HO-1蛋白表达的变化趋势与mRNA变化趋势相同.MC加高糖和姜黄素共孵育6 h后,HO-1表达较单纯高糖刺激6 h组显著增强,其mRNA吸光度相对值分别为(1.987±0.236)、(1.195±0.167)(P<0.01),HO-1蛋白吸光度值分别为(23 560±1 867)、(14 072±1 333)(P<0.01).结论 高糖刺激下,系膜细胞HO-1 mRNA和蛋白表达呈时间依赖性变化,姜黄素可诱导高糖刺激下系膜细胞HO-1表达增强,从而保护细胞.     

高糖环境肾小管上皮细胞Smad1的表达

目的模拟糖尿病条件,观察人肾小管上皮细胞(HK-2)生长情况和Smad1表达的变化,探讨高糖对肾小管上皮细胞的损伤机制。方法用DMEM/F12细胞液培养HK-2细胞,分为对照组,中糖组(12.5mmol/L葡萄糖),高糖组(25mmol/L葡萄糖),分别培养24h、48h、72h后倒置显微镜下观察HK-2的形态和数量变化,采用蛋白印迹技术检测Smad1的蛋白表达。结果高糖组刺激72h后,与对照组相比HK-2细胞数为(105.333±6.429)×105/m L,而对照组HK-2细胞数为(50.333±2.51)×105/m L,差异有统计学意义(P<0.01);高糖组HK-2细胞形态改变,Smadl蛋白表达明显增加。结论高糖能够诱导肾小管上皮细胞数量及形态发生改变,并且这一作用可能与Samd1表达增加有关。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞fractalkine表达及其凋亡的研究

目的探讨高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)fractalkine(FKN)表达与细胞凋亡的可能机制。方法对数生长期的HUVECs,分为正常组(N)、高糖组(HG)、氯化锂(lithium chloride,LiCl)组(LiCl)、高糖+LiCl组(HG+LiCl)。5.5 mmol/L的低糖DMEM培养的HUVECs种板10 h后按以上分组加入10 mmol/L的LiCl预处理2 h,再用33.3 mmol/L的高糖干预48 h后,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测β-catenin及p-GSK-3β(Ser9),免疫荧光FITC法检测FKN蛋白水平变化,RT-PCR检测GSK-3β和FKN mRNA水平变化。结果①与正常组比较,高糖诱导的HUVECs凋亡率明显增加(P<0.05)。与高糖组比较,LiCl可明显降低高糖环境下HUVECs的凋亡率(P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05)。②与正常组比较,高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P<0.05);GSK-3βmRNA水平及FKN蛋白和mRNA水平升高(P<0.05)。③与高糖组比较,LiCl+高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达升高(P<0.05),GSK-3βmRNA水平(P<0.05)及FKN蛋白和mRNA(P<0.05)水平降低。结论高糖诱导的HUVECs凋亡可能与Wnt信号通路抑制和抑制FKN表达上调有关。     

Wnt/β-catenin信号通路在高糖诱导足细胞转分化中的作用机制研究

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在高糖诱导的足细胞转分化中的作用机制。方法收集原代培养的大鼠足细胞,设置正常糖组(D-葡萄糖5 mmol/L)、高糖组(D-葡萄糖15 mmol/L、30 mmol/L)、高渗对照组(甘露醇25 mmol/L+D-葡萄糖5 mmol/L)。观察细胞形态并采用间接免疫荧光法检测nephrin和Wt-1的表达;免疫印迹半定量检测nephrin、α-SMA、活化β-catenin及Wnt-1的表达。结果 nephrin以颗粒状及线状表达于足细胞胞膜、胞质及胞核周围,Wt-1表达于胞核。48 h后,正常糖组nephrin相对表达量为(0.967±0.065),15 mmol/L高糖组为(0.771±0.068),30 mmol/L高糖组为(0.112±0.042),高渗对照组为(1.096±0.104),差异有统计学意义(F=106.848,P=0.000);正常糖组α-SMA相对表达量为(0.360±0.023),15 mmol/L高糖组为(0.430±0.008),30 mmol/L高糖组为(0.524±0.040),高渗对照组为(0.320±0.030),差异有统计学意义(F=18.149,P=0.001)。高糖作用12 h后,足细胞Wnt-1及活化β-catenin表达开始升高,24 h时达到高峰。DKK1有助于增加高糖诱导的nephrin的表达,降低α-SMA的表达。结论高糖可诱导足细胞发生表型转化,而Wnt/β-catenin信号通路可能参与了高糖诱导的足细胞表型转化。     

肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨肌肽对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响.方法 体外培养细胞,通过高糖(25mmol/L)诱导细胞凋亡模型,并给予肌肽(20 mmol/L)建立高糖加肌肽组,同时设立正常糖对照组和正常糖加肌肽组.应用电镜观察细胞超微结构;AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况.结果 电镜显示25 mmol/L葡萄糖诱导细胞呈凋亡早期形态,流式细胞仪检测高糖组细胞凋亡率显著高于正常糖组(P<0.05),而高糖加20mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著抑制细胞凋亡的作用(p<0.05).结论 肌肽能够抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡.     

硫化氢抑制高糖诱导的内皮细胞损伤的研究

目的观察高糖环境下细胞内硫化氢的生成及硫化氢对高糖诱导的内皮细胞损伤的影响并探讨其机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为4组:A组为正常糖浓度组(5.5 mmol/L),B组为高糖组(25 mmol/L),C组为高糖(25 mmol/L)+硫氢化钠(50μmol/L)组,D组为正常糖浓度(5.5 mmol/L)+硫氢化钠(50μmol/L)组,处理48 h后,测定细胞内硫化氢的含量,M TT检测细胞存活率,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3的表达。结果①与A组相比,B组硫化氢生成量明显减少(P<0.05),与B组相比,C组硫化氢生成量明显增多(P<0.05);②与A组相比,B组的细胞存活率明显减少(P<0.05),而C组的细胞存活率较B组显著升高(P<0.05);③与A组相比,B组Bax表达显著升高(P<0.05),Bcl-2的表达显著降低(P<0.05),而Caspase-3活性明显增强(P<0.05);与B组相比,C组Bax水平显著降低(P<0.05),Bcl-2水平显著升高(P<0.05),Caspase-3活性显著下降(P<0.05)。与A组相比,D组各指标表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论高糖对内皮细胞硫化氢的生成具有抑制作用;外源性硫化氢可保护高糖诱导的内皮细胞损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。【方法】将大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:正常对照组、高糖刺激组(给予葡萄糖30 mmol/L,作用48 h)及黄芪甲苷干预组(给予葡萄糖30 mmol/L刺激的同时加用黄芪甲苷100μmol/L,48 h)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖能力;采用Westernblot法检测促凋亡蛋白cleaved-caspase-3及同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ的表达。【结果】黄芪甲苷可有效缓解高糖对细胞增殖的抑制作用(P 0.01)。高糖可上调NRK-52E细胞促凋亡蛋白cleaved-caspase-3,线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(均P 0.01);而黄芪甲苷干预可显著下调上述促凋亡蛋白及线粒体自噬相关蛋白的表达(P 0.05或P 0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞NRK-52E的凋亡,减轻其由PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。