T—AK细胞在体外和裸鼠体内抗人膀胱癌细胞株（Fen）的实？…

用可溶性肿瘤抗原和抗ＣＤ３单克隆抗体共同刺激外周单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＣＤ８＾＋Ｔ细胞为主的杀瘤细胞,称为＾－ＡＫ细胞。与ＬＡＫ细胞、ＣＤ３＝ＡＫ细胞比较,Ｔ－ＡＫ细胞扩增快、低依赖ＩＬ－２,培养１４天细胞数扩增２４倍,比ＣＤ３＝ＡＫ细胞中,比ＬＡＫ细胞高１５天,并能给持生长２１天。Ｔ－ＡＫ细胞中含ＣＤ３＾＋８９％,ＣＤ４＾＋２１％,ＣＤ８＾＋９５％,ＣＤ３１６＾１６２２％,ＣＤ２５＾＋４１％     

良恶性脑瘤患者手术前后免疫功能的变化

动态观察良恶性脑瘤患手术前后的外周血自然杀细胞活性，淋巴因子活化的杀伤细胞活性及Ｔ细胞亚群的变化。方法：良恶性脑瘤患分为两组，采用ＡＢＣ免疫组化法测定Ｔ淋巴细胞亚群的用＾３Ｈ－ＴｄＲ标记靶细胞杀伤释放法测定ＮＫ，ＬＡＫ活性。结果；两组患术后第３天的ＮＫ活性，ＬＡＫ活性的ＣＤ＾＋３，ＣＤ＾＋４细胞及ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋８比值明显低于术前，ＣＤ＾＋８细胞则明显高于术前，相差均非常显，术后第７天     

LAK和TIL细胞的表型测定

应用多种抗人淋巴细胞的单克隆抗体和流式细胞仪，分析用ＩＬ－２诱生患者淋巴细胞２周形成的ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞的表型。结果：ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（８５．０±２．５３）％，ＣＤ＿（１６）细胞为（８．３±１．０）％，证实ＬＡＫ细胞是以Ｔ细胞为主，包括有ＮＫ细胞的混合群体。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占８１．４８％，因而推测ＬＡＫ细细胞中，抗原特异性和ＭＨＣ限制性的ＣＴＬ细胞占有很大比例。ＴＩＬ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（６４．７±９．７）％，ＣＤ＿（１６）￣＋细胞为（１．６±０．２）％，Ｌｅｕ７￣＋细胞为（６．８±１．１）％。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占ＣＤ＿８￣＋细胞的８６．７６％，证实ＴＩＬ细胞主要是Ｔ细胞，ＮＫ细胞极少。     

静注CD_3AK细胞治疗晚期肝癌的初步观察

用培养７ｄ以上的ＣＤ３单抗激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）加ｒＩＬ－２静注治疗晚期肝癌２１例，其中ＣＲ１例，ＰＲ５例，临床有效率以ＣＲ＋ＰＲ计为２８．９％，明显高于ＬＡＫ细胞抗肝癌疗效。治疗后大多数病人临床症状改善，生活质量提高，外周血ＣＤ３＋、ＣＤ４＋升高，ＣＤ８＋下降，ＣＤ４＋／ＣＤ８＋升高，统计学检验均有显著差异。患者血清ＳＩＬ－２Ｒ水平明显降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：静脉注射ＣＤ３ＡＫ细胞可以降低肝癌患者机体瘤负荷，增强机体免疫力，从而对晚期肝癌产生较好的治疗效果。     

T大颗粒淋巴细胞白血病

目的：为了进一步认识Ｔ大颗淋巴细胞白血病（Ｔ－ＬＧＬＬ）的临床及生物学特性,提高诊断水平。方法：利用细胞形态学、细胞化学及免疫发型检查分析３例Ｔ－ＬＧＬＬ。结果：３例有朋颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ）明显升高。细胞化学染色：ＰＯＸ（－）,ＰＡＳ阳性率１００％,ＡＮＡＥ：Ｔ样酶型（＋）,ＡＣＰ（＋）,ＴＲＡＰ（－）,免疫表型ＣＤ２（＋）,ＣＤ３（＋）,ＣＤ４（－）,ＣＤ８（＋）,ＣＤ５７（＋）,ＴＣＲαβ（     

植物血凝素激活的LAK细胞激活培养条件与其生物学特性关系的研究

将ＰＨＡ和ｒＩＬ ２合理配伍应用于ＬＡＫ细胞的激活培养中，研究了ＰＨＡ ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒活性及表型。结果表明：培养条件中加入适量ＰＨＡ可促进ＰＨＡ ＬＡＫ的增殖（Ｐ＜０．０５），不影响其细胞毒活性。ＰＨＡ／ｒＩＬ ２共同预刺激组于培养第２ｄ细胞数明显下降（３０％～４０％），但其到达增殖高峰的时间、峰值及扩增倍数与同一培养条件下的ＰＨＡ单独预刺激组相比，差别无显著性（均为Ｐ＞０．０５）；但前者对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ的杀伤高峰值大于后者（Ｐ＜０．０１）。各组ＰＨＡ ＬＡＫ中有０．６０～０．７７的细胞为ＣＤ３＋Ｔ细胞，但ＰＨＡ ＬＡＫ／ｒＩＬ ２共同预刺激者的ＣＤ３＋、ＣＤ８＋细胞所占比率较ＰＨＡ单独预刺激者为高（Ｐ＜０．０５）。     

γδT淋巴细胞与常规LAK动物学特性的比较研究

用自建体外快速扩增人γδＴ细胞法，对正常人γδＴ细胞和常规ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞的生物学特性比较。结果：γδＴ细胞在体外的增殖能力、生存时间、细胞毒活性明显优于Ｃ－ＬＡＫ；免疫表型分析；γδＴ细胞高表达ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ２５分化原，不表达或低表达ＣＤ１６、ＣＤ５６，而Ｃ－ＬＡＫ细胞则以ＣＤ１６、ＣＤ５６表型为主；γδＴ细胞经反复冻存，复苏后，上述生物学特性无明显变化。表明，γδＴ细胞作为一种新     

A－LAK细胞与LAK细胞体外增殖及抗肿瘤作用的比较

本实验观察了Ａ－ＬＡＫ细胞的体外扩增及其抗肿瘤作用，并与ＬＡＫ细胞进行了比较。结果表明，Ａ－ＬＡＫ细胞在短期内大量扩增，在培养第７天时达到增殖高峰，Ａ－ＬＡＫ细胞增加１２．０２倍，而ＬＡＫ细胞增加２．６９倍，培养３周后Ａ－ＬＡＫ细胞增加５３．５０倍，而ＬＡＫ细胞仅增加４．４５倍。１８小时ＬＤＨ－Ｌ释放试验表明，Ａ－ＬＡＫ细胞对Ａｎｉｐ９７３和Ｋ５６２细胞均显示较高的杀伤活性，与ＬＡＫ细胞相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。通过ＦＡＣＳ细胞表型分析显示，Ａ－ＬＡＫ细胞大量表达ＣＤ１６、ＣＤ５６抗原，提示Ａ－ＬＡＫ细胞可能来源于ＬＧＬ－ＮＫ细胞群。     

CD3AK细胞加IL—2治疗恶性肿瘤体外与临床应用研究

ＣＤ３ＡＫ细胞在体外对体外癌细胞系细胞杀伤活性最强，对自体细胞杀伤活性与ＴＩＬ细胞接近，且均显著大于ＬＡＫ细胞，ＣＤ３ＡＫ细胞ＩＬ－２治疗癌症患者３０例中，ＣＲ＋ＰＲ１４例，有效率为４６％，Ｋｅｒｎｏｆｓｋｙ的生活质量标准评分治疗后有显著提高（Ｐ〈０．０１），血浆ＩＬ－２活性治疗后有明显提高（Ｐ〈０．０５），Ｔ４／Ｔ８治疗后有所提高。     

CD3AK细胞治疗对原发性肝癌患者免疫功能影响的研究

为了观察ＣＤ３ＡＫ细胞对原发性肝癌（简称肝癌）患者免疫功能的影响。采用ＣＤ３ＡＫ细胞治疗６５例不能切除的肝癌患者，分别于治疗前后测定患者Ｔ细胞亚群（ＡＰＡＡＰ法）和血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平（ＦＬＩＳＡ法）。结果ＣＤ３ＡＫ细胞治疗后肝癌患者Ｔ细胞亚群ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋升高，ｓＩＬ－２Ｒ水平下降，统计学有显著性差异（Ｐ〈０．０５）。提示ＣＤ３ＡＫ细胞治疗肝癌对提高     

可溶性肿瘤抗原对小鼠CD_3AK细胞生物免疫功能的影响

目的:观察可溶性肿瘤抗原(STA———由S180 细胞提取)对小鼠CD3AK细胞的体外增殖、体外杀瘤活性以及体内抑瘤作用的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),分别检测小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性和杀瘤效应细胞体外杀瘤活性,并通过测定实体瘤质量来分析杀瘤效应细胞的体内抑瘤作用。结果:STA协同增强小鼠CD3 单抗诱导的小鼠脾脏单个核细胞的体外增殖活性。由STA联合小鼠CD3 单抗共同诱导的T- AK细胞,不仅在体外对S180 细胞杀瘤活性强于CD3AK细胞,且在小鼠体内抑制S180 肿瘤细胞的生长和扩散作用也强于CD3AK细胞。结论:STA能增强小鼠CD3AK细胞的体外增殖活性和杀瘤活性     

恶性肿瘤患者自体CIK细胞的实验研究

目的通过比较CIK细胞和LAK细胞的增殖、表型和抗瘤效应,为临床应用CIK细胞过继免疫治疗提供资料。方法取12例恶性肿瘤患者外周血,常规分离成单个核细胞,用不同细胞因子培养诱导出LAK细胞和CIK细胞,观察两种细胞的增殖、表型和抗瘤效应。结果培养后12天,CIK细胞数量达原来的11.5倍,而LAK细胞数量只有原来的5.2倍;比较培养前后CIK细胞的表型,可发现CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+在培养后均有明显增高(P<0.05或0.001)。CIK细胞杀伤K562细胞和Raji细胞的能力均明显优于LAK细胞(P<0.05或0.001)。结论CIK细胞不仅具有强大的增殖功能,并且对不同的肿瘤细胞系显示出较LAK细胞更强的杀伤活性。因此,它是一种新型的过继免疫治疗方法。     

肺癌患者淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关分析

目的观察非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达水平,分析其表达水平与肺癌肿瘤免疫逃逸的相关性。方法采集34例肺癌患者外周血,按照TNM分期分为早期组(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期组(Ⅲ期、Ⅳ期),用流式细胞仪检测外周血,分析淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关性。结果晚期组CD3+CD4+的表达水平较早期组降低,而CD3+CD8+的表达水平升高(P<0.05);晚期组肺癌患者CD3+CD4+NKG2D表达率(6.69±3.58%)高于早期组的表达率(2.38±1.13%),CD3+CD4+NKG2A表达率(2.28±0.88%)低于早期组的表达率(5.46±2.09%)(P<0.01);晚期组肺癌患者CD3+CD8+NKG2D表达率(90.57±2.49%)低于早期组的表达率(93.51±3.19%),CD3+CD8+NKG2A表达率(12.32±4.24%)高于早期组的表达率(7.15±3.30%)(P<0.01)。结论非小细胞肺癌病理分期间淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+表达水平的改变,NKG2D、NKG2A在CD3+CD4+和CD3+CD8+表面的表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

Ⅰ、Ⅱ型精神分裂症患者血清免疫指标的对照分析

目的　探讨Ⅰ、Ⅱ型精神分裂症患者免疫指标的变化。方法　对 6 2例精神分裂症患者和 30例健康对照者的血清T细胞亚群及白细胞介素 6 (IL - 6 )的水平进行检测。结果　Ⅰ、Ⅱ型精神分裂症患者治疗前CD3 、CD4、CD8、CD4/CD8均显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,IL- 6水平显著高于对照组 (P <0 .0 1)。治疗后Ⅰ型患者CD3 、CD4水平及CD4/CD8比值均显著升高 (P <0 .0 1) ;Ⅱ型患者CD3 水平显著升高 (P <0 .0 1) ,而两型患者CD8、IL - 6水平均显著下降 (P <0 .0 1)。治疗后比较 ,Ⅰ型患者CD3 、CD4、CD4/CD8比值显著高于Ⅱ型患者 ,CD8显著低于Ⅱ型患者 (P <0 .0 5 )。结论　Ⅰ、Ⅱ型精神分裂症患者的免疫功能处于活化状态     

肺癌模型小鼠肿瘤和主要免疫器官组织中调节性T细胞和NK细胞的数量变化及其意义

目的：探讨肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）和自然杀伤细胞（NK）在外周免疫器官和肿瘤组织中数量的变化,阐明其对肿瘤发展的影响。方法：C57BL/6小鼠分为Lewis肺癌细胞系（LLC）注射组和正常对照组,LLC注射组小鼠采用LLC腋窝注射制备皮下肿瘤模型,正常对照组小鼠采用生理盐水等量注射。采用细胞表面和细胞内特异荧光抗体染色和流式细胞术检测肺癌小鼠脾脏、淋巴结和肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺T细胞、Treg细胞及脾脏组织中NK细胞数量。结果：与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏和淋巴结中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显升高（P < 0.05）,CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg细胞数量也明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。LLC接种组小鼠肿瘤组织中CD4⁺CD25⁺ T细胞占CD4⁺T细胞比例及Foxp3⁺在CD4⁺CD25⁺T细胞中的表达比例明显高于脾脏和淋巴结（P < 0.05）。与正常对照组比较,LLC注射组小鼠脾脏组织中NK细胞比例明显降低（P < 0.05）。结论：肺癌小鼠主要免疫脏器官组织中Treg细胞比例和数量升高,NK细胞比例降低,其可促进肿瘤发展,抑制机体对肿瘤细胞的免疫应答。     

两种自体LAK、IL2疗法对肺癌末梢血T细胞亚群的影响及预后

目的:研究原发性肺癌术后两种自体LAK/IL2疗法对末梢血T细胞亚群的影响,探讨与预后的关系。方法:原发性肺癌术后病人24例,男12例,女12例。术中取肿癌周围淋巴结及采集末梢血淋巴细胞,分别在IL2存在下培育制备Rn-LAK和Pb-LAK细胞。结合化疗或放疗进行自体LAK/IL2治疗,每2个月~3个月1次,持续2年。LAK治疗前后分别检测末梢血CD3、CD4、CD8和CD4/CD8比值。将其结果分为24例全组、3年以上生存组、2年内死亡组做统计学SPSS10.0配对t检验处理。结果:24例全组中免疫治疗后CD8升高,t=-4.016,P=0.001;CD4下降,t=2.66,P=0.014;CD4/CD8下降,t=2.982,P=0.007。3年以上生存组中CD8上升,t=-4.032,P=0.005。2年内死亡组中CD8下降,t=3.65,P=0.022。其他指标也有变化,但无统计学显著差异。结论:两种自体LAK/IL2治疗原发性肺癌引起末梢血T细胞亚群的变化,CD8+细胞的升高,提示着良好的预后,是治疗有效的指标。     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

CD28单抗对CD3-AK细胞增殖作用和杀伤效果

目的探讨CD28单抗对细胞增殖效果及细胞毒作用,分析CD28单抗对CD3-AK肿瘤杀伤活性的调节作用。方法制备CD28单克隆抗体,诱导CD3-AK细胞,用倒置显微镜观察细胞数量和形态,用MTT法测定CD3-AK细胞对骨髓瘤细胞的抑制率。结果CD3-AK细胞加入CD28单抗,细胞数量明显增多（t=10.6,P〈0.05）;对肿瘤细胞的杀伤活性明显增高。结论CD28单抗与CD3单抗联合,具有较强的协同作用,能有效提高CD3-AK的肿瘤杀伤活性。