分割剂量射线照射富集宫颈癌肿瘤干细胞的研究

【目的】 研究分割剂量射线照射的宫颈癌Hela细胞表达肿瘤干细胞相关蛋白情况及裸鼠体内成瘤能力,探讨经此法富集宫颈癌肿瘤干细胞的可行性。【方法】 Hela细胞分组接受分割剂量分别为2、4、6、8、10及12 Gy的射线照射,总照射剂量24 ~ 42 Gy。流式细胞术检测各照射组及对照组细胞的ABCG2、CD44及CD133表达率;各组细胞接种裸鼠皮下,检测其体内成瘤能力。【结果】 各照射组细胞的ABCG2表达率均明显上调,以Hela-R2组(4 Gy×10次)细胞的表达率最高[(46.89±1.20)%],且随着照射次数的增加而升高(P < 0.05);各组细胞的CD44及CD133表达率变化均无明显趋势;Hela-R2组细胞的裸鼠体内成瘤能力最高,其次为Hela-R5组(10 Gy×3次)。【结论】 分割剂量射线照射可在体外富集宫颈癌肿瘤干细胞,以分割剂量为4 Gy组富集效果最好,诱导Hela细胞株表达ABCG2显著上调,及提高其裸鼠体内成瘤能力。     

人宫颈癌获得性放射抗拒细胞株(Hela-R)DNA修复能力的观察

目的观察人宫颈癌获得性放射抗拒细胞株(Heal-R)与其亲本细胞(Hela)DNA修复能力的差异。方法采用克隆形成实验测定细胞的放射敏感性;CCK-8细胞增殖实验检测增殖情况,流式细胞术检测凋亡及周期变化,彗星实验及5-乙基-2′-脱氧尿苷(EdU)掺入检测DNA的修复能力。结果 Hela-R细胞株的平均致死剂量显著高于Hela细胞株。X射线照射后,Hela-R细胞株早、晚期凋亡率均低于Hela细胞。24、48、72hHela和Hela-R细胞株的光密度值(OD)值分别为1.13±0.12、1.46±0.13(P<0.05);1.34±0.07、1.20±0.07(P<0.05);1.58±0.07、1.48±0.07(P<0.05)。Hela-R细胞株放疗后12～48hG2期细胞显著增多。Hela-R细胞株放疗后24h与48h,彗星尾长均短于Hela细胞株。X射线照射1h后,Hela-R细胞株EdU荧光强度为121.32±39.67(P<0.01),高于Hela细胞株。结论 Hela-R较Hela细胞株具有显著的放射抗拒性,DNA损伤修复能力的增强是其产生的重要机制之一。     

siRNA沉默Msi1表达对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法针对Msi1基因mRNA序列设计合成siRNA,转染人宫颈癌Hela细胞;实验分Msi1siRNA组、空白对照组、脂质体组及阴性对照组;通过RT-PCR法检测Msi1基因在mRNA水平的表达;分别利用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色试验、群体倍增时间及平皿克隆实验分析干扰Msi1基因对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制效应;通过细胞划痕实验观察干扰Msi1对细胞迁移能力的影响;利用Transwell小室实验观察干扰Msi1对细胞侵袭能力的影响。结果Msi1siRNA能有效抑制人宫颈癌Hela细胞中Msi1基因的表达;Msi1siRNA转染Hela细胞24、48、72h后,与其他各组比较,Msi1siRNA组Hela细胞的生长、增殖速度明显减缓（均P＜0.05）。空白对照组Hela细胞群体倍增时间为（20.18±0.01）h,而干扰Msi1基因处理后的Hela细胞,群体倍增时间延长至（35.68±0.04）h（P＜0.05）;同时平皿克隆实验结果发现,Msi1siRNA处理后的Hela细胞与其他各组相比,Hela细胞生长明显减慢（均P＜0.05）;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别显示处理后的Hela细胞其迁移和侵袭能力均明显下降,与其他各组相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭有负性调节作用。     

上调microRNA-205表达对HeLa细胞生物学特性的影响

【目的】探讨上调microRNA-205（miR-205）表达对HeLa细胞生物学特性的影响。【方法】实验分4组：miR-205上调组,阴性对照组,空白转染组和空白对照组。每种检测重复3次。利用脂质体siPORT NeoFX Transfection Agent,向miR-205上调组细胞转染Pre-miR-hsa-miR-205 miRNA Precursor,阴性对照组细胞转染Cy3 dye labeled PremiR Negative Control。荧光显微镜下评估转染情况,实时定量PCR方法检测miR-205表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和平板克隆形成实验分别检测细胞生长和增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,Transwell小室法检测细胞迁移能力。【结果】实时定量PCR结果显示,miR-205上调组miR-205的表达增加3061.5倍。与空白对照组相比,72hmiR-205上调组与阴性对照组活细胞数分别为（126&#177;41）%,（126&#177;39）%;两组克隆形成率分别为（79&#177;11）%,（63&#177;10）%;凋亡率分别为（4.6&#177;2.1）%,（4.1&#177;2.4）%;S期细胞比例分别为（19.2&#177;3.6）%,（23.4&#177;3.0）%;200倍镜视野下迁移细胞数分别为63&#177;17和68&#177;16。与对照组比,miR-205上调组细胞增殖能力增强但生长曲线不受影响,S期细胞比例降低,而凋亡率不变,细胞迁移能力无明显改变。【结论】上调miR-205表达后,HeLa细胞增殖能力及细胞周期改变,但生长曲线、凋亡率和迁移能力无变化。     

沉默环状RNA hsa_circ_0011021表达对宫颈癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

【摘要】 目的 探讨环状RNA（circRNA）hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和细胞株中的表达变化及其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 选取河南科技大学第一附属医院就诊的15例宫颈癌患者,取15对宫颈癌组织和癌旁组织。qRT PCR实验检测hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌癌旁组织（Hela和SiHa）细胞中的相对表达水平;CCK 8和克隆形成实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞活性和克隆形成能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织的相对表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）;hsa_circ_0011021在Hela和SiHa细胞中的相对表达水平明显高于人永生化表皮细胞HaCaT（P＜0.05）。在Hela细胞沉默hsa_circ_0011021,Hela细胞的活性和克隆形成能力显著降低,迁移距离明显减少,侵袭能力也明显下降（P＜0.05）。结论 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌细胞（Hela和SiHa）中的表达水平明显升高;沉默hsa_circ_0011021显著抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-7-5p调控三叶因子3对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究三叶因子3（TFF3）基因在宫颈癌组织和正常组织中的表达情况,同时探讨微小RNA-7-5p（miR-7-5p）调控TFF3对人宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 实时聚合酶链反应检测TFF3在30例宫颈癌及其邻近正常组织中的表达;采用脂质体转染法将TFF3-siRNA、miR-7-5p转染入宫颈癌HeLa及SiHa细胞中。采用CCK-8、Transwell实验和平板克隆实验检测瞬时转染TFF3-siRNA及miR-7-5p mimics对宫颈癌细胞增殖、迁移及克隆形成能力的影响;并利用双荧光素酶报告实验检测miR-7-5p与TFF3的相互关系。结果 TFF3在73.33%（22/30）宫颈癌组织中表达量明显高于其邻近正常组织（P＜0.001）。与阴性对照组比较,TFF3 siRNA转染宫颈癌细胞株HeLa和SiHa 3～5d后,细胞增殖明显受到抑制（P＜0.05）。Transwell细胞迁移实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组迁移细胞分别为（170±15）个/高倍镜视野和（155±10）个/高倍镜视野,TFF3干扰组迁移细胞分别为（70±20）个/高倍镜视野和（54±8）个/高倍镜视野,迁移能力被显著抑制（P＜0.05）。克隆形成实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组克隆形成数分别为（160±34）个和（183±17）个,TFF3干扰组细胞克隆数分别为（45±15）个和（33±12）个,形成能力明显减弱（P＜0.05）。荧光素报告系统表明miR-7-5p可抑制含野生型TFF3 3′UTR序列的荧光素酶活性（P＜0.01）,但对含突变型TFF3 3′UTR的荧光素酶活性影响不显著（P＞0.05）。与阴性对照组比较,miR-7-5p mimics转染宫颈癌细胞株HeLa和SiHa 4～5d后,增殖明显受到抑制（P＜0.05）。Transwell细胞迁移实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组迁移细胞为（364±48）个/高倍镜视野和（411±27）个/高倍镜视野,miR-7-5p mimics转染组迁移细胞为（165±15）个/高倍镜视野和（100±208）个/高倍镜视野,迁移能力被显著抑制（P＜0.05）。克隆形成实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组克隆形成数为（83±11）个和（129±21）个,miR-7-5p mimics转染组细胞克隆数为（25±7）个和（14±8）个,形成能力明显减弱（P＜0.05）。结论 TFF3基因的异常高表达可能会对宫颈癌的发生发展起促进作用,miR-7-5p抑制宫颈癌细胞TFF3的表达或可为将来宫颈癌的靶向治疗提供一定的实验基础。     

血管内皮生长因子C及膜突蛋白促宫颈癌恶性进展的作用研究

 【目的】 研究宫颈癌恶变过程中血管内皮细胞生长因子C （vascular endothelial growth factor C, VEGF-C）及膜突蛋白 （moesin）的表达变化，并在培养的宫颈癌细胞中初步探讨VEGF-C对膜突蛋白的调控作用。【方法】利用临床上活体取材的不同临床分期的宫颈癌组织标本及正常对照宫颈组织，蛋白免疫印迹法检测VEGF-C及moesin蛋白的表达情况。体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞，蛋白免疫印迹法测定VEGF-C对moesin蛋白的表达和磷酸化的调控作用。【结果】 随着宫颈癌临床分期的增高，VEGF-C、moesin蛋白及磷酸化moesin蛋白表达水平均随之增加。与正常宫颈组织比较，宫颈原位癌（CIN）组织中VEGF-C、moesin、磷酸化moesin蛋白表达分别增加了（45±9）％、（63±12）％、（74±16）％（P < 0.05）；宫颈鳞癌I期各蛋白增高幅度分别为（94±18）％、（104±27）％、（123±30）％（P< 0.01）；宫颈鳞癌Ⅱ期（未放疗化疗）各蛋白表达增高更为显著，其幅度分别为（186±24）％、（246±37）％、（194±28）％（P < 0.001）。在培养的宫颈癌细胞株HeLa细胞上，VEGF-C（100 ?g/L）处理24 h后，可显著增高moesin蛋白、磷酸化moesin蛋白的表达。VEGF-C单克隆抗体可抑制VEGF-C对moesin蛋白表达及磷酸化的上调作用。【结论】 VEGF-C、moesin蛋白表达与宫颈癌恶性程度密切相关，VEGF-C可能通过上调moesin表达及其磷酸化水平而促进宫颈癌的恶性进展。     

ABT737通过延迟宫颈癌细胞放射后DNA损伤修复及诱导凋亡而增敏放疗

【目的】 探讨类似BH-3的小分子物质ABT737诱导增敏放疗的作用及其分子机制?【方法】噻唑蓝法(MTT)检测不同浓度ABT737对HeLa细胞的生长抑制作用;细胞克隆形成实验检测ABT737联合放疗对放疗的增敏作用;免疫荧光法检测γ-H2AX观察DNA损伤修复情况;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法检测Caspase-3?PARP的表达观察凋亡?【结果】与对照组相比,ABT737能显著抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖(P < 0.05),并呈浓度依赖性,其IC50为15.7 μmol/L?体外培养克隆形成实验结果显示放疗+ABT737不同用药时间组的DEF值均大于1,放疗+8 μmol/L ABT737持续用药组为1.88,放疗+12 μmol/L ABT737用药72 h组为1.13,细胞存活分数(SF值)持续用药组为0.84,用药72 h组SF值为0.82;免疫荧光结果显示ABT737联合放疗处理HeLa细胞1 h后,放射线导致的γ-H2AX聚焦点数量及有γ-H2AX聚焦点生成的细胞数量均明显增加,上述处理24 h后,单纯放疗组γ-H2AX焦点消失,而联用ABT737处理组仍可观察到γ-H2AX焦点聚集?流式细胞术结果显示,单纯放疗组早期凋亡率(Annexin V+,PI-)为23.3%,ABT737联合放疗可以明显提高放射线诱导的细胞凋亡,早期凋亡率最高达50.3%?免疫印迹结果显示10 ?滋mol/L ABT737与2 Gy放射联合作用于Hela细胞后,凋亡蛋白cleaved Caspase-3与cleaved PARP的表达较单纯放疗组增加?【结论】 ABT737对宫颈癌Hela细胞具有放疗增敏作用,其机制与ABT737可延迟宫颈癌细胞放疗后DNA损伤修复及诱导凋亡有关?     

多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela细胞毒性和放射增敏作用的研究

目的探讨多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela的细胞毒性和放射增敏作用。方法MTT法检测多西紫杉醇对Hela的细胞毒性以及1.0nM多西紫杉醇对Hela不同分割放疗方式的增敏效果;克隆形成实验分析不同浓度多西紫杉醇对Hela细胞生长抑制的影响,多靶单击拟合模型方程测定的各组细胞放射增敏比,评价增敏效果。结果0.1￣20.0nM多西紫杉醇对Hela细胞的细胞毒性有明显剂量和时间依赖性,20.0nM以上浓度及药物作用超过48h多西紫杉醇的细胞毒性并无明显增加。1.0nM和5.0nM多西紫杉醇放射增敏比分别为1.26和1.69。1nM多西紫杉醇对2.0Gy/次、1.0Gy/次(×2)、0.5Gy/次(×4)分割放疗组的放射增敏比分别为:2.03、2.51、3.57;多西紫杉醇增敏比分别为:1.41、1.82、2.92,每组中放射增敏比较多西紫杉醇增敏比高。结论多西紫杉醇对宫颈癌细胞系Hela有良好的细胞毒性和放射增敏作用,对低剂量分割放射的增敏作用更强。     

基于CRISPR-Cas9系统构建GSTZ1基因敲除模型并探索其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：通过CRISPR/Cas9系统在HepG2肝癌细胞系中构建人谷胱甘肽S-转移酶ζ1（glutathione S-transferase zeta,GSTZ1）基因敲除模型并探索GSTZ1敲除对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法：设计并合成长度20 bp的靶向GSTZ1的sgRNA寡核苷酸序列,退火后克隆到LentiCRISPR-V2载体上,与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,包装慢病毒并感染HepG2细胞,用合适浓度的嘌呤霉素筛选阳性细胞株,有限稀释法获得单克隆细胞。所有实验均分成3组：parental组、KO1组和KO2组,采用MTS实验、克隆形成实验和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力。结果：Western blot和DNA测序鉴定GSTZ1敲除的单克隆细胞构建成功;MTS检测不同时间点下各组HepG2细胞的增殖能力变化情况。结果显示,48 h时,KO1组[（24.758±1.508）%]相比亲本组[（20.185±0.720）%],增殖能力明显增强,差异有统计学意义（P=0.002）。72 h时,相比亲本组[（23.903±0.840）%],KO1组[（28.634±1.848）%]增殖能力明显增强（P=0.014）。96 h和120 h时,KO1组相比亲本对照组,其增殖能力也明显增强（P<0.05）。在KO2细胞中观察到同样现象,说明敲除GSTZ1后能够促进HepG2细胞的增殖能力。克隆形成实验表明,GSTZ1敲除细胞株（KO1和KO2）克隆形成数（73.330±1.528、82.330±4.163）相比亲本细胞克隆形成数（42.330±2.517）增多,差异有统计学意义（P=0.000,P=0.000）,提示GSTZ1基因敲除可以明显促进肝癌细胞的增殖能力。划痕实验结果显示,GSTZ1敲除细胞株KO1和KO2在48 h的迁移相对比分别为0.327±0.041、0.371±0.013,与亲本细胞（0.184±0.045）相比明显增加（P=0.003,P=0.001）,提示GSTZ1基因敲除可明显促进肝癌细胞的迁移能力。结论：GSTZ1缺失明显促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,提示GSTZ1可能作为抑癌基因调控肝癌的发生和进程。     

神经胶质瘤干细胞样细胞的分离鉴定及其生物学特性初探

目的分选神经胶质瘤C6细胞中的侧群(SP)细胞,探讨其相关生物学特性。方法 Hoechst33342染色流式细胞仪分选SP细胞,另取非侧群(NSP)细胞作为对照。MTT法绘制细胞生长曲线,平板克隆法检测细胞克隆形成能力,无血清悬浮培养观察细胞的球囊形成能力,裸鼠移植瘤实验检测细胞的成瘤能力,流式细胞仪检测细胞CD133的表达。结果神经胶质瘤C6细胞中SP细胞的比例为(4.24±1.36)%。SP细胞的生长速度显著快于NSP细胞(P<0.05)。SP细胞在无血清条件下培养有形成球囊的特性,而NSP细胞无球囊性生长的特性。SP细胞的克隆形成率为(31.24±6.48)%显著高于NSP细胞的(9.63±1.16%)(P<0.01)。103、104、105、106个SP细胞接种裸鼠皮下,成瘤率分别为40.00%、60.00%、80.00%和100.00%,而NSP细胞的成瘤率分别为0、0、60.00%和70.00%,两组之间差异有显著性(P<0.05)。SP细胞CD133表达的量为(61.74±7.32)%显著高于NSP的(1.06±0.81)%(P<0.01)。结论神经胶质瘤中存在SP细胞,SP细胞高表达干细胞标志蛋白CD133,SP细胞分选可以富集神经胶质瘤肿瘤干细胞样细胞。     

甲氨蝶呤的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响

目的研究甲氨蝶呤(MTX)的两种给药方式对宫颈癌Hela细胞生长的不同影响,以探索更好的给药方法。方法培养Hela细胞,设生理盐水对照组、常规化疗组(MTX 12 mg/mL,72 h)和节律化疗组(MTX2 mg/mL,12 h/次,72 h给药6次),分别用MTT法检测各组的细胞增殖改变,Hoechst 33342/PI双染色检测细胞凋亡和死亡情况,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达。结果与生理盐水对照组比较,两个MTX化疗组Hela细胞均有不同程度的增殖抑制和凋亡(P<0.01);与常规化疗组比较,节律化疗组Hela细胞的增殖抑制率和凋亡率更高(P<0.05),Hela细胞的死亡率更低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,两个MTX化疗组Hela细胞中Caspase-3的表达高于生理盐水对照组;而节律化疗组Hela细胞Caspase-3的表达显著高于常规化疗组。结论甲氨蝶呤节律化疗比常规化疗对宫颈癌Hela细胞的抑制作用更强、毒性更小。     

斑蝥素抑制舌癌细胞生长及转移能力

摘 要:【目的】 观察斑蝥素(Cantharidin)对舌癌细胞株Tca8113?CAL-27生长及转移能力的抑制作用?【方法】 舌癌细胞株Tca8113?CAL-27处理组采用斑蝥素处理,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长能力;通过流式细胞术检测细胞的细胞周期分布;通过实时定量PCR和Western-blot检测p21?细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)?基质金属蛋白酶-2?9(MMP-2,9)基因表达的变化;通过Transwell小室及划痕实验检测斑蝥素对细胞侵袭和迁移能力的影响?【结果】 斑蝥素抑制舌癌细胞生长,呈剂量和时间依赖性(P﹤0.01)?斑蝥素处理后G2/M期细胞比例上升(P﹤0.01),呈G2/M期阻滞?斑蝥素处理后,抑制G2/M周期转换的p21表达上调(P﹤0.01),而促进G2/M周期转换的CDK1表达下调(P﹤0.01)?斑蝥素可显著抑制舌癌细胞的侵袭能力,处理24 h使Tca8113?CAL-27细胞侵袭力分别下降(93.50 ± 3.32)%(P﹤0.01),(61.33 ± 4.11)%(P﹤0.01)?斑蝥素处理后MMP-2?9 mRNA表达量显著降低?划痕实验显示斑蝥素可显著抑制舌癌细胞的迁移能力(P﹤0.01),处理12 h使Tca8113?CAL-27细胞迁移能力分别下降(57.60 ± 8.98)%(P﹤0.01),(49.94 ± 5.63)%(P﹤0.01)?【结论】 斑蝥素通过阻滞细胞周期抑制舌癌细胞的生长,并通过抑制舌癌细胞迁移和对基质的降解,抑制舌癌细胞转移?     

人乳腺癌MCF-7细胞系中肿瘤干细胞的富集与鉴定

采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞系,第5、10、15天拍照,观察干细胞球的生成。悬浮培养第5天可以开始观察到悬浮细胞球形成,细胞球形成效率为(0.6±0.5)%,第10天时细胞球形成效率为(2.4±1.2)%,比第5天时明显增多,培养第15天时细胞球形成效率达到(3.8±1.8)%,MCF-7悬浮成球细胞中侧群细胞(SP)细胞含量为(3.9±1.4)%,高于常规培养的MCF-7贴壁细胞(1.1±0.5)%(P<0.05),采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从MCF-7细胞系中简便、高效地富集乳腺癌干细胞。     

3种常用抗癌药物对宫颈癌Hela细胞和肿瘤干细胞抑制作用研究

目的:探讨3种常用抗肿瘤药物对宫颈癌Hela细胞和Hela肿瘤干细胞的抑制率。方法:采用无血清悬浮培养法从宫颈癌Hela细胞中分离出Hela肿瘤干细胞,鉴定后研究丝裂霉素、顺铂和紫杉醇等3种抗癌药物对Hela细胞和Hela肿瘤干细胞的抑制率并进行比较。结果:不同质量浓度的3种抗肿瘤药物对肿瘤细胞和肿瘤干细胞均有抑制作用,且呈剂量依赖性(r=0.944,P<0.05)。在最高终浓度40 mg/L时,丝裂霉素对肿瘤细胞和肿瘤干细胞的抑制率分别为(88.75±2.59)%和(38.95±5.37)%;顺铂的抑制率分别为(92.28±1.57)%和(52.68±3.55)%;紫杉醇的抑制率分别为(75.22±0.99)%和(36.71±2.42)%。结论:3种药物对肿瘤干细胞的抑制率均明显低于肿瘤细胞的抑制率(P<0.05);比较发现对于肿瘤细胞和肿瘤干细胞,顺铂抑制率均最高,其次是丝裂霉素,紫杉醇的抑制率最低(P<0.05),说明宫颈癌肿瘤干细胞对目前常用的3种治疗药物有不同程度的耐受。     

肿瘤转移相关因子RhoGDI2蛋白在肺癌95D细胞侵袭转移中的作用

目的研究肿瘤转移相关因子RhoGDI2蛋白在肺癌95D细胞侵袭转移中的作用。方法应用细胞培养技术培养95D细胞,分别10,30μg/L不同浓度rhHGF作用95D细胞48 h后收集细胞沉淀,利用蛋白印迹方法检测RhoGDI2蛋白表达情况。结果无血清培养的95D细胞中RhoGDI2蛋白的表达,高于正常10%胎牛血清培养的细胞组,而10%胎牛血清培养的细胞组与10ng/mL rhHGF组RhoGDI2蛋白的表达水平相当,但30ng/mL rhHGF组RhoGDI2蛋白表达明显降低。结论促进肺癌95D细胞生长、侵袭转移的因素与RhoGDI2的表达成负相关。     

食管癌细胞株中肿瘤干细胞样细胞的分离培养及生物学鉴定

目的:用无血清培养基方法从人食管癌细胞株KYSE-150?TE-1中分离富含肿瘤干细胞的细胞球并鉴定其生物学特性?方法:运用无血清培养基培养KYSE-150?TE-1细胞,观察细胞球的生成及在有血清培养基中的分化情况,利用MTT法以及Transwell小室法研究食管癌细胞球的增殖情况和侵袭能力,流式细胞仪检测分子标志CD44?CD271的表达?结果:KYSE-150?TE-1细胞在无血清培养基培养条件下可以获得可稳定传代的细胞球,细胞球细胞的增殖能力和侵袭能力均高于其亲本细胞;无血清培养基培养下KYSE-150细胞球中CD44+?CD271+?CD44+CD271+细胞分别为(64.92 ± 11.04)%?(28.27 ± 6.79)%?(24.07 ± 5.39)%,均显著高于亲本细胞[(37.04 ± 6.30)%?(3.69 ± 0.49)%?(1.64 ± 0.11)%,P均< 0.05]?TE-1细胞球中CD44+?CD271+?CD44+CD271+细胞占(6.41 ± 0.87)%?(2.58 ± 0.17)%?(0.27 ± 0.53)%,均显著高于亲本细胞[(1.87 ± 0.18)%?(0.44 ± 0.10)%?(0.09 ± 0.02)%,P均< 0.05]?结论:应用无血清培养基可以从KYSE-150?TE-1细胞系中分离出具有干细胞特性的食管癌细胞球,CD44?CD271分子可能是食管癌干细胞的标志?     

电离辐射促羟基磷灰石纳米载体介导的hGM-CSF基因在人肝癌HepG2细胞中的转移及表达

目的观察电离辐射对羟基磷灰石(HA)纳米载体介导的质粒pOR F-hGM-CSF基因转染的影响,并探索能提高HA转染效率的方法。方法转染细胞前,依据不同辐射剂量下的HepG2细胞剂量-存活曲线选出2、4和6 Gy3种不同剂量进行分组照射。48 h后R T-PCR检测HepG2细胞内hGM-CSF的mR NA表达水平以比较转染效率。结果电离辐射可以促进HA纳米载体介导的基因在HepG2细胞中的转移和表达,在辐射剂量为6和4 Gy时,hGM-CSF基因mRNA相对表达量可达(0.9941±0.0703)和(0.9501±0.5619),与剂量为0 Gy的表达量差异有显著性(P<0.05),但与Lipofectamin 2000组比较差异无显著性(P>0.05),故当辐射剂量为6和4 Gy时,HA纳米载体的转染效率可接近Lipofectamin 2000的转染效率。辐射剂量为6、4、2和0 Gy时,培养基中hGM-CSF的分泌量分别为(499.20±5.76)、(497.06±4.54)、(472.53±3.91)和(428.65±7.16)ng/106cell。结论电离辐射可以提高HA纳米载体的转染效率,并且HA纳米载体转hGM-CSF基因的自体肿瘤疫苗联合放疗治疗人类肝细胞癌有望成为可能。     

肝癌细胞株Bel-7402中侧群细胞的分离和致瘤能力

【目的】 分选肝癌Bel-7402细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性?【方法】 采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将Bel-7402细胞分为SP细胞和非侧群(NSP) 细胞2亚群?实验分组:SP组与NSP组?细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力;RT-PCR法检测SP细胞和NSP细胞的CD133?三磷酸腺苷结合盒转动蛋白G2(ABCG2)表达;流式细胞术分析细胞凋亡率;无血清培养法检测SP细胞及NSP细胞成球率;非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性?【结果】 Bel-7402细胞中分选出的SP细胞比例为(2.4 ± 0.0)%?生长曲线表明SP细胞的增殖速度快于NSP细胞(P < 0.05)?SP?NSP细胞的克隆形成率分别为(20.5 ± 2.6)%?(5.1 ± 0.9)%,两者差异明显(P < 0.05)?SP细胞ABCG2 mRNA和CD133 mRNA平均表达水平分别是NSP细胞的3.03倍(P < 0.01)和1.98倍(P < 0.01)?SP细胞凋亡率为(0.89 ± 0.23)%,低于NSP细胞 (P < 0.05)?在无血清培养基中,SP细胞成球率为(14.1 ± 1.9)%,高于NSP细胞(P < 0.05)?1 × 103?104?105数量的SP细胞形成皮下移植瘤(P > 0.05,P < 0.05,P < 0.05),而1 × 105 NSP细胞则还不能成瘤?【结论】 肝癌 Bel-7402细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞?