急性鸭乙型肝炎病毒感染病毒清除机理研究

目的 :进一步阐明嗜肝病毒自然感染过程中病毒清除机理。方法 :7只 2～ 3月龄成年重庆麻鸭静脉接种 10～ 2 0mlDHBV阳性血清 (5× 10 8～ 1× 10 9genome) ,接种后每周采血检测外周血中DHBVDNA、DHBsAg和特异抗体的产生 ;感染后第10、35天分离外周血单个核细胞用于抗原特异细胞增殖实验 ;第 5、30、6 0天取肝组织标本进行DHBVDNASouthern杂交、DHB sAg免疫组化及肝组织病理检测。结果 :DHBV感染成年鸭在 1～ 2w潜伏期后出现急性、一过性感染 ,感染高峰期肝内存在多拷贝的DHBV所有复制中间体形式 ,包括cccDNA。进一步分析显示病毒血症的消失是在快速抗原特异细胞增殖反应和高滴度特异抗体产生之后 ;与此同时 ,整个急性感染期间 ,肝细胞并无明显的损害。结论 :非细胞直接损伤机制在嗜肝病毒清除过程中发挥了重要作用。     

几种肿瘤特异性启动子在人肝癌细胞系中的活性比较

目的 克隆甲胎蛋白(AFP)、survivin(SUR)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子,检测并评价其在不同肝癌细胞系和正常组织细胞中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据.方法 采用PCR法扩增获得AFP、SUR、hTERT基因的启动子片段,将之克隆到表达虫荧光素酶基因的报告质粒上,检测AFP、SUR、hTERT基因启动子在肝癌细胞系和正常组织中的转录活性,评价其转录活性水平和肿瘤特异性.结果 成功克隆了AFP、SUR、hTERT启动子,证实AFP、SUR、hTERT启动子在肝癌细胞中具有肿瘤特异性转录活性,SUR启动子活性最高,其活性水平为AFP启动子的52～98倍;hTERT启动子次之,其活性水平为AFP启动子的14～30倍;AFP启动子活性最低.结论 hTERT和SUR启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性和显著的肿瘤特异性,可望开发成为新型的肝癌靶向性基因治疗工具.     

重组腺病毒IkBαM在裸鼠体内对人肝癌细胞HepG2的凋亡作用

细胞核因子kB(NF—kB)是一种广泛存在于细胞中的具有多向性调节作用的蛋白质分子，其活性受到一个强抑制物核因子kB抑制物(IkB)的抑制，在外界刺激剂的作用下，IkB发生磷酸化并降解，核因子kB转入核内与靶基因kB的基序结合，增强其表达。Kucharczak等证实核因子kB在肿瘤增殖和抗凋亡中扮演重要角色。     

鸭乙型肝炎病毒感染特异细胞介导免疫检测方法的建立

目的：建立简便、特异的鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染特异细胞介导免疫（CMI）检测方法。方法：分别从DHBV强阳性的血清和肝组织中纯化DHBsAg、DHBcAg,Bradford法定量后，用于急性DHBV感染重庆麻鸭CMI的检测。结果：急性感染后10d鸭外周血单个核细胞（PBMC）快速出现对DHBsAg、DHBcAg的不同程度增殖反应，5周内下降至正常水平。7份刺激细胞上清DuIFN-γ检测结果为阳性，OD540nm读数介于0．062－0．108之间，细胞因子的表达水平与PBMC增殖反应强度呈现较好的相关性。结论：DHBV感染重庆麻鸭CMI检测方法的建立，为了解感染鸭特异免疫应答状态提供了重要参考。     

人乳头瘤病毒基因亚型与宫颈病变的关系研究

目的研究人乳头瘤病毒基因亚型(HPV-DNA)与宫颈病变程度的关系,以探讨本地区不同基因型的致癌性及分型检测在临床诊断和判断预后的应用价值。方法选择我院妇科门诊患者5000例,利用核酸分子快速导流杂交基因分型技术进行21种HPV-DNA亚型检测,阳性者行TCT及阴道镜下定位活检。根据病理学诊断分组:①正常与炎症组;②LSIL组;③HSIL组。对≥CINⅡ或CINI无随访条件者予手术或物理治疗,术后于3、6、12个月行HPV-DNA、TCT、阴道镜检查。分析三组宫颈病变感染各种HPV亚型的阳性率、多重感染率及术后转阴率。结果①HSIL组的HPV-H阳性率明显高于另两组,组间差异显著,P<0.001;IHPV-H在HSIL组的阳性率递减顺序前五位是16、52、58、18、33,其中HPV-16型在HSIL组的阳性率为50.1%,明显高于另两组,p<0.001,尤其宫颈癌患者.HPV-16型阳性率最高占90.6%,其次HPV-18型占8.0%。②HSIL组的HPV多重感染率为50.2%,明显高于另两组,p<0.001。③手术与物理治疗共708例,在HSIS组、LSIL组、正常与炎症组累计12个月HPV-H转阴率分别为86.4%、91.9%、95%,p<0.05。术后HPV转阴性者未发现有宫颈病变存在。12个月内发现宫颈病变11例,同期检出的HPV-H为16、52、58、18型。结论宫颈病变级别越高,高危亚型阳性率和多重感染率越高;导致清远市妇女发生宫颈病变的主要HPV亚型是16、52、58、18、33;致癌性最强的亚型是16型,其次是18型,可作研究特异疫苗的参考依据。手术与物理治疗可有效促使HPV转阴与病灶消除,HPV分型检测用于CINⅡ、CINⅢ的诊断和判断病灶残留、复发、预示发展状况的可靠指标之一,具有临床推广应用价值。     

融合蛋白胸腺素α-干扰素与干扰素α对2.2.15细胞抗原表达的影响

临床上许多学者把α干扰素（IFN-α）和胸腺素α（TA1）联合起来治疗慢性乙型肝炎,结果发现联用效果明显优于单用IFN-α或TA1[1].     

丙型肝炎病毒5′非翻译区 DNA 序列在 HepG2细胞中的启动子活性

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组5′非翻译区(5′UTR)DNA 序列在 HepG2细胞中 的启动子活性，以了解 HCV 的复制调控机制。方法 分别构建 HCV 基因组5′UTR DNA 正反向序列驱动 虫荧光素酶基因表达的质粒5′UTR-Luc(+)/(-)和5′UTR DNA 序列驱动绿色荧光蛋白基因表达的质粒5′ UTR-EGFP(+)/(-)，分别转染 HepG2细胞，用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平，逆转录 聚合酶链反应检测虫荧光素酶基因 m R N A 水平，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白基因的表达水平，并与相应 对照作比较，来证实 HCV 基因组5′UTR DNA 序列的启动子活性。结果 5′UTR-Luc(+)有明显的虫 荧光素酶表达，但比 pGL3 control 表达水平低(Luc/R为0．690±0．086，Luc/RL 为4．210±0．340)，而5 ′UTR-Luc(-)和 pGL3 enhancer 无明显虫荧光素酶表达(Luc/RL 分别为0．095±0．008和0．044±0． 005)；逆转录聚合酶链反应结果与之相符，5′UTR-Luc(+)检测到虫荧光素酶基因 mRNA，而5′UTR- Luc(-)则未检测到。5′UTR-EGFP(+)观察到较强绿色荧光，而5′UTR-EGFP(-)无荧光表达。 结论 HCV 基因组5′U TR DNA 序列具有明显的启动子活性，能启动下游基因的表达，在 HCV 基因组复 制过程中有重要作用。     

短发夹状RNA抑制survivin基因在肝癌细胞中的表达

目的 构建抗凋亡因子survivin的短发夹状RNA(shRNA)，观察其在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中对survivin基因表达的抑制作用。方法 设计，合成两对survivin编码基因的反向重复序列，中间分别间隔4和8个nt，分别定向克隆至载体pTZU6 1的U6转录启动子下，构建pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2重组质粒，与表达survivin基因的质粒pEGFP—Cl—survivin共转染肝癌细胞株HepG2和SMMC—7721，荧光显微镜下观察融合蛋白中GFP的表达以分析pshRNA—survivin对survivin基因表达的抑制作用。结果 酶切分析和测序证实pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2构建成功；两组shRNA对survivin的表达均有明显的抑制作用，抑制率达80％以上；两重组质粒在HepG2和SMMC—7721两种细胞中抑制目的基因的作用无明显差异；反向重复序列中间隔4或8个nt构建的shRNA，对抑制目的基因的表达无显著差异。结论 构建的pshRNA—survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中的表达。     

宫腔镜联合子宫动脉栓塞术在剖宫产切口瘢痕妊娠中应用的优势及可行性

目的:研究分析对于剖宫产(术后瘢痕妊娠)的患者采用宫腔镜联合子宫动脉栓塞术来治疗剖宫产切口瘢痕妊娠的优势及可行性。方法:选取行剖宫产(术后瘢痕妊娠)的30例患者,患者均采用宫腔镜联合子宫动脉栓塞术进行剖宫(入院后行子宫动脉栓塞术,术后1~2 d行宫腔镜下清宫)。观察患者子宫剖宫产后疤痕妊娠状况。结果:所有的患者在治疗后的2天血β-HCG下降到(193.76±116.99)U/L,当治疗后的24 d患者的血β-HCG下降到(111.62±36.26)U/L,及患者的病灶直径由(3.64±1.02)cm缩小到(3.10±0.89)cm,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:宫腔镜联合子宫动脉栓塞术可以有效治疗剖宫产切口瘢痕妊娠,在临床上值得更深入的研究分析。