亚硒酸钠诱导K562细胞凋亡作用及机制探讨

目的:探讨亚硒酸钠诱导K562细胞凋亡的作用及机制.方法:不同浓度亚硒酸钠作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖抑制,电镜和TUNEL法检测K562细胞的凋亡,RT-PCR检测Bcl-2和Bax的mRNA表达变化,分光光度法检测Caspase-3的活性变化.结果:亚硒酸钠能抑制K562细胞的生长增殖,诱导其凋亡.20μmol/L亚硒酸钠作用K562细胞48h后,Bcl-2表达明显降低,Bax表达明显升高,Caspase-3活性升高,与对照组相比具有显著的统计学意义(P＜0.01).结论:亚硒酸钠能够诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax,活化Caspase-3有关.     

活性氧激活线粒体凋亡通路是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的重要机制

目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,活性氧引起的线粒体膜电位丧失及凋亡作用的相关机制。方法 用活性氧荧光探针DCFH-DA探测经亚硒酸钠诱导的NB4细胞内活性氧的含量。流式细胞术检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化。Westem blot检测胞浆中细胞色素C含量的变化及细胞总蛋白中Bcl-xl、Bax和Bid的含量变化及切割行为。同时应用活性氧清除剂MnTmPy及活性氧激活剂BSO预处理细胞,观察Bid及凋亡的变化。结果 活性氧清除剂MnTmPy可有效抑制亚硒酸钠诱导的NIM细胞凋亡、线粒体膜电位丧失及Bid的切割;而BSO可促进线粒体膜电位丧失。结论 亚硒酸钠诱导NIM细胞凋亡的可能机制是通过刺激细胞产生活性氧,一方面下调抗凋亡蛋白Bcl-xl,另一方面激活线粒体打孔蛋白Bax和Bid,损伤线粒体使膜电位降低,促使线粒体释放细胞色素C。     

双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡

目的：探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞的凋亡作用和机制。方法：用二甲氧唑黄（XTT）细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase3活性变化。结果：双氢青蒿素对HL-60细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性,并能诱导HL-60细胞凋亡,使线粒体膜去极化,增强Caspase3活性。结论：双氢青蒿素能抑制人急性髓系白血病HL-60细胞生长,并诱导细胞凋亡,可能和线粒体凋亡通路有关。     

双氢青蒿素人对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用和机制.方法 用二甲氧唑黄细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase-3活性变化.结果 双氢...     

鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用。方法MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cytc的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cytc蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P0.01)。流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Bax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cytc释放有关。     

亚硒酸钠诱导NB4细胞中细胞色素c氧化酶亚基IV的下调机制

目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基IV(COX IV)表达的变化情况及其机制和意义.方法 用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX IV蛋白和mRNA表达的变化.活性氧清除剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化以及caspase-3的激活.caspase-3抑制剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化.瞬时转染干扰NB4细胞中COX IV表达后,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 亚硒酸钠诱导NB4细胞COX IV蛋白表达显著下调,但mRNA表达水平无变化.活性氧清除剂能完全逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调与caspase-3激活.caspase-3抑制剂能部分逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调.干扰COX IV表达后,亚硒酸钠诱导的细胞凋亡显著增加.结论 在亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,COX IV在蛋白水平显著下调.活性氧介导COX IV下调与caspase-3激活,caspase-3在一定程度上参与COX IV表达下调,抑制COX IV能显著提高NB4细胞对亚硒酸钠诱导凋亡的敏感性.     

阳和汤小鼠血清促进淋巴细胞增殖和阿霉素诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察阳和汤小鼠血清对淋巴细胞增殖和阿霉素致肿瘤细胞死亡的影响。方法:MTT法检测细胞增殖,Western blotting检测bax/bcl-2表达,Histone/DNA ELISA检测细胞凋亡,ELISA与分光光度法分别检测细胞色素C释放和caspase-3激活,流式细胞检测线粒体膜电位。结果:阳和汤小鼠血清能增强小鼠淋巴细胞增殖和对阿霉素的抵抗,但促进阿霉素引起的HL-60细胞生长抑制、DNA断裂、细胞色素C释放和caspase-3激活,上调其bax/bcl-2表达比率,增加细胞凋亡。结论:阳和汤有增强阿霉素抗肿瘤作用,激活肿瘤细胞凋亡通路可能是其化疗增敏的主要机制。     

菱角提取物诱导 HL-60 细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨菱角提取物对人早幼粒细胞性白血病细胞株 HL-60 细胞增殖和凋亡的影响及凋亡的分子机制。方法 采用 MTT 法检测菱角提取物对 HL-60 细胞的增殖抑制作用;吖啶橙染色和 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;比色法测定 Caspase-3、9 蛋白活性。结果 菱角提取物能抑制 HL-60 细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。菱角提取物可诱导 HL-60 细胞凋亡并显示一定的剂量依赖关系。与对照组比较,菱角提取物可明显降低 HL-60 细胞线粒体膜电位,上调 Caspase-3、9 蛋白活性。结论 菱角提取物可抑制 HL-60 细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位、激活 Caspase-3、9 蛋白继而诱导 HL-60 细胞凋亡有关。     

姜黄油诱导人肝癌细胞凋亡及其机制

探讨姜黄油的抗肝癌作用及其作用机制,采用二甲基噻唑蓝比色法(MTT)检测肝癌细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率以及线粒体膜电位的变化,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9以及细胞色素C的表达。结果发现,姜黄油能时间依赖性地抑制肝癌细胞的生长,降低线粒体膜电位并诱导其凋亡;升高细胞内Bax与Bcl-2的比值;诱导细胞色素C从线粒体中的释放并激活caspase-9和caspase-3。结果提示姜黄油可能通过线粒体途径诱导肝癌细胞的凋亡。     

131I-GM-CSF诱导HL-60/ADM细胞凋亡机制研究

目的:研究131I-GM CSF诱导HL-60/ADM细胞凋亡机制.方法:采用体外放射免疫治疗模型,通过透射电子显微镜、流式细胞术及免疫细胞化学检测等方法,研究131I-GM-CSF辐射一定时间后HL-60/ADM细胞的凋亡率、凋亡形态学上的改变、相关基因的表达和线粒体膜电位的改变.结果:显示131I-GM-CSF可诱导HL-60/ADM细胞凋亡,在诱导细胞凋亡过程中,HL-60/ADM细胞超微结构明显破坏,细胞线粒体膜电位降低,Bax表达上调,Bcl-2、Bcl xl表达下调.结论:131I-GM-CSF作为放射导向治疗药物能诱导HL-60/ADM细胞凋亡,具有抗白血病的作用,其诱导凋亡的机制与开放线粒体膜的通透性转换孔(MPT)、降低线粒体膜电位(MTP),上调Bax,下调Bcl-2、Bcl-xl有关.     

亚硒酸钠对HL-60细胞的胞浆游离钙的影响

研究亚硒酸钠对LH-60细胞的生长增殖和细胞浆游离钙的影响。结果表明,亚硒酸钠抑制HL-60细胞的生长增殖,对静息水平与激动剂刺激水平的胞浆游离钙均有显著的抑制作用。     

亚硒酸钠对人结肠癌细胞的抑制机制

目的:研究亚硒酸钠对人结肠癌细胞的抑制机制。方法:通过DNA末端原位标记染色法(TUNEL)检测亚硒酸钠溶液对人结肠癌细胞株SW-111C凋亡的影响;应用免疫组织化学染色技术观察亚硒酸钠对人结肠癌细胞株SW-111C p16,p21,PCNA,CD44基因表达的影响;并测定亚硒酸钠对小鼠T淋巴细胞亚群的影响。结果:TUNEL染色法表明亚硒酸钠作用细胞后凋亡指数明显升高(P<0.01),且具有剂量-效应关系;亚硒酸钠作用后人结肠癌细胞SW-111C p16和p21基因的蛋白表达上调,PCNA和CD44基因的蛋白表达下调;亚硒酸钠能使小鼠CD3 ,CD4 细胞数增加,而且CD4 /CD8 比值升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:亚硒酸钠可通过诱导细胞凋亡,影响p16,p21,PCNA,CD44基因表达和提高机体的免疫功能而抑制SW-111C的生长。     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达COX-2mRNA的调控

目的:观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞(RGMC)表达环氧化酶-2(COX-2)的影响,从而研究硒在抗糖尿病肾病中的作用机制.方法:分别以高葡萄糖、糖基化终产物,高胰岛素和过氧化氢孵育RGMC;先给予亚硒酸钠预处理细胞后,再分别给予上述4种因素孵育RGMC,观察细胞COX-2 mRNA的表达.结果:4种刺激因素均可作为独立因素,导致RGMC COX-2 mRNA表达量的增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的COX-2 mRNA的表达.结论:亚硒酸钠通过抑制COX-2 mRNA在RGMC中的表达,从而有效地防治糖尿病肾病的发生发展.     

天花粉蛋白体外诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:本研究探讨天花蛋白(Trichosanthin,TCS)对HL-60细胞凋亡的影响。方法:采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;光学显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:TCS抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,随作用时间的延长、TCS浓度的增加,增殖抑制及促凋亡作用更加明显。结论:TCS对HL-60细胞有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应。     

丙戊酸钠对急性髓系白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响

目的研究丙戊酸钠（VPA）对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,探讨其可能作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞生长抑制率;经瑞氏-姬姆萨（Wright—Giemsa）染色,光镜下观察经VPA处理后细胞的形态学改变;应用流式细胞仪检测细细胞周期和细胞凋亡率。结果VPA对HL-60细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。经2．0mmol／LVPA处理HL-60细胞48h后,显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体。经1．0和2．0mmol／LVPA处理HL-160细胞48h后,流式细胞仪检查结果表明细胞凋亡率由处理前的（1．25±0．457）％分别上升为（3．27±0．984）％和（10．3±3．4）％,差并有统计学意义（P〈O．05）;G0／G1期细胞比例逐渐上升,S期细胞比例及细胞增殖指数（PI）呈下降趋势,细胞被阻滞在G0／G1期（P〈0．01）。结论VPA对HL-60细胞具有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。且呈剂量一时间依赖性;作用机制与细胞周期阻滞有关。     

Inhibition of NF-κB by mutant IκBα enhances TNF-α-induced apoptosis in HL-60 cells by controlling bcl-xL expression

Backgound The aim of this study was to explore whether the inhibition of nuclear factor-κB (NF-κB)activation by mutant IκBα (S32,36→A) can enhance TNF-α-induced apoptosis of leukemia cells and to investigate the possible mechanism. Methods The mutant IκBα gene was transfected into HL-60 cells by liposome-mediated techniques. G418 resistant clones stably expressing mutant IκBα were obtained by the limiting dilution method. TNF-α-induced NF-κB activation was measured by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). The expression of bcl-xL was detected by RT-PCR and Western blot after 4 hours exposure of parental HL-60 and transfected HL-60 cells to a variety of concentrations of TNF-α. The percentage of apoptotic leukemia cells was evaluated by flow cytometry (FCM). Results Mutant IκBα protein was confirmed to exist by Western blot. The results of EMSA showed that NF-κB activation by TNF-α in HL-60 cells was induced in a dose-dependent manner, but was almost completely inhibited by mutant IκBα repressor in transfected cells. The levels of bcl-xL mRNA and protein in HL-60 cells increased after exposure to TNF-α, but changed very little in transfected HL-60 cells. The inhibition of NF-κB activation by mutant IκBα enhanced TNF-α-induced apoptosis. Thecytotoxic effects of TNF-α were amplified in a time- and dose-dependent manner. Conclusions NF-κB activation plays an important role in the resistance to TNF-α-induced apoptosis. The inhibition of NF-κB by mutant IκBα could provide a new approach that may enhance the antileukemia effects of TNF-α or even of other cytotoxic agents.     

蟾酥灵对HL-60/ADR作用的研究

目的 :探讨中药蟾酥灵对HL -60 /ADR耐药细胞在抑制生长、诱导凋亡方面的作用和影响。方法 :①MTT比色法观察对细胞的抑制 ;②流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 :①蟾酥灵抑制HL -60 /ADR耐药细胞的生长 ,药物浓度与HL -60 /ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系 ;②随着药物浓度的增加 ,HL -60 /ADR细胞凋亡率也增加。结论 :蟾酥灵可抑制HL -60 /ADR细胞生长 ,促进细胞凋亡呈剂量依赖性     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

环氧化酶-抑制剂对白血病HL-60细胞的影响

研究环氧化酶 2（COX 2）抑制剂塞来考昔（Celecoxib）对急性白血病HL 60细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制。方法：以不同浓度的Celecoxib作用于体外培养的HL 60细胞，MMT法检测细胞生长抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，应用Hoechst 33258 荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化，并对细胞凋亡前后的Caspase3活性进行检测。 结果：COX 2抑制剂 Celecoxib可显著的抑制细胞的生长，并诱导细胞发生凋亡，在细胞凋亡过程中Caspase3活性显著升高，并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：COX 2抑制剂 Celecoxib对HL 60细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用，升高Caspase3活性可能是其重要作用机制之一，这为COX 2抑制剂进一步用于临床治疗白血病提供了有利的实验依据。