骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞内负调控因子的研究

为研究MDS患者细胞凋亡与骨髓内不同T细胞亚群胞内负调控因子的关系，采用胞内细胞因子染色技术对骨髓内不同亚群T细胞胞内的TNF—α和IFN-γ水平进行检测和分析，用RT—PCR技术测定BMMNC的凋亡基因Fas的mRNA水平。结果表明，MDS患者骨髓内产生TNF-α增多的淋巴细胞为CD4^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RO^ 细胞，产生IFN-γ增多的为CD4^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RO^ 、CD8^ CD45RA^ 细胞，但均以CD8^ CD45RO^ 细胞为主；MDS患者T淋巴细胞产生的IFN-γ与Fas mRNA存在相关性，而TNF—α与Fas mRNA相关性不强。结论：MDS患者造血微环境中不仅T淋巴细胞亚群失调，而且各亚群分泌负调控因子增多；MDS患者髓内IFN-γ主要来自于T淋巴细胞。     

实时定量RT-PCR检测PML-RARα融合基因诊断APL的临床价值

目的探讨一步法实时定量RT-PCR（RQ-RT-PCR）技术在急性早幼粒细胞白血病（APL）患者诊断及微小残留病（MRD）检测中的临床价值。方法应用一步法RQ-RT-PCR、Taqman探针技术检测42例APL初诊患者和30例完全缓解（CR）患者骨髓PML-RARα融合基因的两种常见异构体转录本mRNA的表达。同时采用多参数流式细胞术（FCM）对部分患者骨髓MRD进行检测,并比较两种检测方法的一致性。结果①42例APL初诊患者的PML-RARα融合基因转录本中位标准拷贝数（NCN）为61%（13%～284%）,其中L型34例,S型8例。L型和S型异构体中位NCN分别为56%（28%～278%）和70%（13%～284%）,两者比较,P〉0.05;②30例APL患者经标准诱导治疗CR后PML-RARα融合基因转录本中位NCN为4.00%（0.00%～8.26%）;③一步法RQ-RT-PCR和FCM同时检测结果有较好的一致性（χ2=0.278,P=0.598）,总符合率83.3%。结论一步法RQ-RT-PCR具有操作简便、特异性好、灵敏度高、结果可靠、直观等特点,有利于对APL的诊断和MRD检测。     

再生障碍性贫血患者造血细胞凋亡与PML蛋白的关系

目的了解再生障碍性贫血患者血清对造血细胞凋亡的活性,及其对造血细胞PML蛋白表达和定位的影响。方法应用甲基纤维素半固体培养法,免疫荧光标记法及流式细胞技术分析12例再生障碍性贫血患者血清体外抑制正常人骨髓BFU-E、CFU-GM增殖及促进其集落细胞凋亡的作用,以共聚焦免疫荧光显微镜及流式细胞仪检测再生障碍性贫血患者血清与正常人骨髓造血细胞共同培养后,再生障碍性贫血患者血清对所形成集落细胞内的PML蛋白表达的影响。结果4例重型再生障碍性贫血(SAA)患者和8例非重型再生障碍性贫血(NSAA)患者血清在体外均可明显抑制正常人骨髓BFU-E、CFU-GM的增殖;SAA组、NSAA组和正常对照组血清作用后集落细胞内均表达一定量的PML蛋白,SAA组高于对照组。结论再生障碍性贫血患者血清具有诱导造血细胞凋亡的活性;再生障碍性贫血患者血清作用后PML蛋白在造血细胞内表达增加。     

白血病患者骨髓血管生成及调控因子的表达

目的探讨白血病患者骨髓血管新生情况及血清血管内皮生长因子(VEGF)水平与临床病情的关系。方法应用免疫组化染色法(EnVison两步法)检测38例初诊白血病患者治疗前后骨髓活检标本微血管密度(BM-MVD)变化;采用ELISA法测定38例白血病患者治疗前后VEGF的表达,并设对照组进行比较,同时检测骨髓幼稚细胞水平,分析VEGF与白血病类型、病情及预后的关系。结果初诊白血病患者骨髓MVD[(20.39±8.49)/hpf]明显高于对照组[(8.97±3.49)/hpf](P<0.01);白血病患者的血清VEGF水平明显高于正常对照组(P<0.01)。结论初诊白血病患者骨髓存在血管新生,骨髓MVD变化与临床病情有关,观察骨髓MVD有助于判断疗效和评估预后;白血病患者VEGF水平明显高于对照组,血清VEGF水平对白血病的诊断、治疗和预后的判断有一定意义。     

骨髓增生异常综合征患者血清造血抑制活性的研究

目的　探讨骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ） 患者血清对正常骨髓粒系及红系造血祖细胞的抑制作用。方法　应用甲基纤维素体外培养法,以ＤＮＡ 末端标记及流式细胞术分析观察患者血清体外抑制正常人骨髓造血祖细胞增殖及对正常人造血细胞凋亡的作用。结果　２３ 例患者中有３ 例的血清具有抑制正常骨髓粒系祖细胞生长的作用,４ 例血清具有抑制正常骨髓红系祖细胞生长的作用。４例对正常骨髓红系祖细胞生长有抑制作用的患者中有３ 例患者血清的抑制活性可被抗肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）单克隆抗体中和。２ 例具有抑制正常骨髓红系祖细胞生长活性的血清在体外可促进正常骨髓造血细胞凋亡。结论　部分ＭＤＳ患者血清中存在造血抑制因子,这种抑制因子主要是ＴＮＦα,ＴＮＦα诱导造血细胞凋亡是致部分ＭＤＳ患者无效造血的重要原因     

骨髓增生异常综合征骨髓胞内Y干扰素水平与T细胞亚群的关系

目的 :探讨骨髓 T细胞亚群的变化与淋巴细胞活化后产生胞内负调细胞因子 IFN- γ在骨髓增生异常综合征 (MDS)发病中的作用。方法 :应用流式细胞术及胞内细胞因子检测技术。结果 :MDS患者骨髓中 CD3 细胞明显高于正常人 ,主要是 CD8 细胞增多。细胞比值 CD8 / CD3 明显高于正常对照。细胞比值 CD4 / CD8 严重倒置。MDS骨髓中 CD3 细胞产生 IFN-γ的水平明显高于正常人 ,且主要是 CD8 细胞表达 IFN-γ增多。结论 :推荐使用该法检测骨髓 T细胞亚群胞内的 IFN- γ水平。     

网织血小板检测在血小板减少症诊断中的意义

目的 :探讨血小板减少症外周血中网织血小板 (RP)百分比及绝对值的临床意义。方法 :用噻唑橙 (TO )染色法流式细胞仪 (FCM )检测了 3 6例特发性血小板减少性紫癜 ,12例慢性再障贫血 ,10例骨髓增生异常综合征 ,10例脾功能亢进患者外周血RP百分比和绝对值 ,并与对照组比较。结果 :ITP组和MDS组患者RP百分比明显高于对照组 ,ITP组RP百分比又高于MDS组。CAA与脾功能亢进组RP百分比与对照组接近。各组绝对值均低于正常对照组。结论 :RP反映骨髓血小板生成能力 ,检测RP百分比有助于对血小板减少症病因的鉴别     

血液病患者骨髓粒-单核祖细胞的研究

采用体外血浆凝块培养技术对55例各种血液病(包括急性白血病，慢粒，MDS，再障，原因不明白细胞减少及粒缺)作了CFU-GM培养，讨论了这些疾病的发病机制及体外CFU-GM培养对判断疗效和预后的价值。     

初治成人急性白血病48例免疫表型分析

目的：探讨初治成人急性白血病(AL)的免疫表型的分布和特征。方法：用流式细胞仪—单克隆抗体双色直接免疫荧光标记法检测初治成人AL48例骨髓细胞的免疫标志。结果：系列专一型占64．6％，其中急性髓细胞白血病(AML)中纯系表达占70．4％，急性淋巴细胞白血病(ALL)中纯系表达占63．2％；系列非专一型占25％，其中AML伴淋巴细胞系表达占22．2％，ALL伴髓细胞系表达31．6％；混合型占4．2％。结论：白血病细胞具有高度异质性；FAB分型(French—American—British Carcinoma staging)与免疫分型结合可互相补充，提高诊断率。