多噻烷对肝微粒体和胞质中酶活性的影响及其Ⅰ相代谢产物的急性毒性作用

本文研究多噻烷对大鼠肝脏微粒体和胞质中尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶、谷胱苷肽S转移酶、脱甲基酶和细胞色素P-450活性的影响，以及多噻烷经P-450体外代谢产物对小鼠经口急性毒性。结果表明染毒剂量为25和50mg／kg体重的多噻烷能不同程度地诱导上述酶类，酶活性为对照组的1.07～1.66倍。多噻烷体外代谢产物对小鼠的经口LD_(50)为1513.6mg／kg，属低毒，远低于多噻烷本身对小鼠的经口LD_(50)(145.8mg/kg)。     

多噻烷对肝微粒和胞质中酶活性的影响及其I相代谢产物的急性…

本文研究多噻烷对大鼠肝脏微粒体和胞质中尿苷二磷酸葡萄转移酶、谷胱苷肽Ｓ转移酶、脱甲基酶和细胞色素Ｐ－４５０活性的影响，以及多噻烷经Ｐ－４５０体外代高等产物对小鼠经口急性毒性。结果表明染毒剂为２５和５０ｍｇ／ｋｇ体重的多噻烷能不同程度地诱导上述酶类，酶活性为对照组的１．０７—１．６６倍。多噻烷体外代谢物对小鼠的经口ＬＤ５０为１５１３．６ ｍｇ／ｋｇ，属低毒，远低于多噻烷本身对小鼠的经口ＬＤ５０（１４     

IGF-I在肝星形细胞过度表达的作用

目的：为探讨星形细胞中过度表达的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对肝细胞损害的保护作用。方法：分别选取肝星形细胞(HSC)中转基因IGF-I过度表达的转基因小鼠(TG)，并以转基因IGF-I在HSC中无表达的同窝野生型小鼠(wT)对照组，用四氯化碳诱导小鼠急性肝损害模型，以玉米油灌胃作安慰剂对照；并检测以下指标：血浆ALT、AST水平测定，四氯化碳灌胃前后测定体重，肝脏病理组织学检查。结果：在四氯化碳诱导小鼠急性肝损害模型中，WT组血浆AST水平明显高于WT正常对照组(P＜O．0001)，而TG组无显著差异(P-0．25)；TG和wT组的血浆ALT均增高，但TG组升高程度较少；而且TG组的体重明显高于WT组(P＜0．01)；进一步观察病理片，TG组仅有小面积的肝细胞坏死，炎症局限于肝小叶的中央区，肝小叶仍保持完整，损害较WT组轻。结论：小鼠的肝星形细胞中IGF-I过度表达对四化碳诱导小鼠急性肝损害有保护作用。     

柴胡皂苷d对肝星状细胞内雌激素受体转录激活的影响

【目的】观察柴胡皂苷d对大鼠肝星状细胞内的雌激素受体转录激活的调节作用,探讨柴胡皂苷d的药理机制。【方法】体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,将雌激素受体的特异性报告基因ERE-tk-Luc用人工细胞膜介导细胞瞬时转染法转入HSC-T6细胞中,在不同药物浓度、不同时间作用点及加用雌激素受体抑制剂ICI182.780等条件下,采用双荧光素酶报告基因检测系统观察柴胡皂苷d及雌二醇对转染细胞荧光素酶(Luc)表达的影响。【结果】柴胡皂苷d浓度为0.01~5μmol/L、雌二醇浓度为0.01~1μmol/L时,荧光素酶活性呈剂量依赖性递增;柴胡皂苷d为5μmol/L,而雌二醇为1μmol/L时,荧光素酶活性最高;当雌二醇浓度到达5μmol/L时,效应减弱。且以5μmol/L柴胡皂苷D、1μmol/L雌二醇分别诱导细胞24 h时,荧光素酶表达活性最高。ICI182.780可明显抑制柴胡皂苷d、雌二醇对荧光素酶活性的诱导作用。【结论】柴胡皂苷d可促进HSC-T6细胞内雌激素受体转录激活。     

小鼠多噻烷急性中毒的解毒研究

为研究多噻烷急性中毒的解毒药物，首先建立小鼠多噻烷急性中毒模型；给小鼠５０％的多噻烷２５０ｍｇ／ｋｇ（ＬＤ５０１８９．３ｍｇ／ｋｇ），经口灌胃染毒，使其引起重度中毒，选用１６种药物，以不同的剂量、时间和途径给药，结果表明：依地酸二钠钙（ＣａＮａ２ＥＤＴＡ）、二氯化钴、硝酸钴、氢溴酸东莨菪碱、二巯基丙磺酸钠（ＤＭＰＳ）、枸橼酸铁铵、氢化可的松加维生素Ｃ加１０％葡萄糖等均有解毒作用，提示小鼠多噻烷急性中毒可用多种药物解毒，其中以依地酸二钠钙、二氯化钴、硝酸钴、氢溴酸东莨菪碱等效果最佳。     

多噻烷的迟发神经毒性研究

目的：研究新型农药多噻烷有无迟发神经毒性。方法：按农药登记毒理学试验方法(GB15670—1995)进行试验。结果：多噻烷对动物体重有影响但无任何迟发神经毒性症状，病理组织学检查神经系统各部位均无组织坏死及炎症变化。结论：多噻烷无迟发神经毒性作用。     

携带GFAP启动子的慢病毒载体介导外源基因在肝星状细胞的特异表达

 目的  旨在构建包含由GFAP启动子介导的荧光素酶的慢病毒载体,检测体内外靶向肝星状细胞的外源基因表达的特异性和效率。方法  通过报告基因实验筛选介导效率较高的GFAP启动子,以CMV 启动子作为阳性对照分别介导荧光素酶在小鼠肝星状细胞(JS1)、人肝星状细胞(LX-2)及人肝细胞(L-02)中的表达。通过尾静脉注射将包装的慢病毒注射到四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠体内,通过活体成像和Western blot检测慢病毒颗粒在小鼠体内的分布,并通过免疫双荧光染色检测肝星状细胞的特异表达。结果  人GFAP启动子比小鼠GFAP启动子驱动基因表达的效率高,而且在LX-2和JS1细胞中,人GFAP启动子介导的荧光素酶的活性及表达显著高于L-02细胞。活体成像显示小鼠腹部有荧光素酶的表达。GFAP启动子介导的荧光素酶可以与肝星状细胞的特异性生物标记蛋白GFAP、Desmin和α Sma共定位。结论  成功构建包含由GFAP启动子介导的荧光素酶的慢病毒载体,在体外细胞系以及小鼠体内肝中均可以实现荧光素酶在肝星状细胞中特异性表达。     

槲皮素对小鼠免疫功能影响研究

目的：研究槲皮素对小鼠免疫作用的影响。方法：将小鼠分为低、中、高3个剂量组，分别为0．23、0．46、0．69g／kg槲皮素组和空白对照组、溶剂为对照组。小鼠连续灌胃30天后开始试验，分别进行免疫指标测定。结果：各剂量组与空白组比较，小鼠淋巴器官／体重比值差异均无显著性。中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应、明显增强小鼠碳廓清能力、明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、明显升高小鼠血清溶血素含量、明显增强抗体生成细胞能力；高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能；各剂量组对NK细胞活性增强无显著性。结论：按照增强免疫力功能作用评价程序规定，该受试物具有增强免疫力功能作用。     

科学家揭开肝癌性别差异的奥秘

肝细胞癌（HCC）是肝脏最常见的恶性肿瘤，其起病隐匿、恶性程度高、预后差，且存在显著性别差异，男女发病约3—5：1。Naugler等对二乙基亚硝胺（DEN）诱导的HCC小鼠模型研究发现，DEN可明显增加雄性小鼠血清IL-6浓度，去除IL-6的小鼠形成肝癌则无明显性别差异；DEN通过Toll样受体（TLR）衔接蛋白-My D88增加肝Kupffer细胞IL-6的产量，而雌激素可抑制Kupffer细胞IL-6的分泌，减少雄鼠循环中IL-6的量，敲除MyD88可较大程度阻止雄鼠HCC形成。因此，认为雌激素介导肝Kupffer细胞抑制IL-6可减少HCC的发生，并将这一发现发表于7月6日出版的《科学》杂志上（Science，2007，317，121-124）。     

大麻素对人和小鼠视网膜神经节细胞GABA电流的调控差异

目的 比较人和小鼠视网膜内源性大麻素类受体1(cannabinoid receptor,CB1)的表达差异,观察大麻素受体激动剂WIN55212-2对不同种属视网膜神经节细胞GABA电流的调控作用.方法 采用冰冻切片免疫荧光染色,观察CB1受体在视网膜中的表达.制备视网膜薄片,行全细胞膜片钳记录.在神经节细胞上给予100 μmol/L GABA快速加药诱导出电流I GABA,而后观察孵育大麻素受体激动剂WIN55212-2时GABA诱导的IGABA及同时孵育WIN 55212-2和大麻素受体拮抗剂SR141716A的电流IGABA.结果 人和小鼠视网膜CB1受体的分布有所不同,人的内核层、外核层、神经节细胞层有显著的CB1表达,但小鼠CB1受体主要表达在内网状层、外网状层上;膜片钳结果显示不管是在人还是在小鼠的视网膜上,孵育WIN55212-2后的GABA诱导电流幅度均有显著减小.不同的是,在人视网膜神经节细胞上,WIN55212-2明显减慢了GABA电流的反应速度,表现在电流达峰时间明显延长,恢复时间缩短(P＜0.05).WIN55212-2对小鼠视网膜神经节细胞GABA的反应速度无明显差别(P＞0.05).结论 CB1受体在人和小鼠视网膜中有差异性分布,对神经节细胞的GABA电流影响也不同.孵育WIN55212-2可抑制人和小鼠神经节细胞GABA电流幅度,但仅对人的神经节细胞的GABA电流的动力学速度有影响.     

放射线对肝癌细胞中端粒酶启动子活性的影响

目的:研究放射线对不同的肝癌细胞株中人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子活性的影响。方法:报告质粒phTERTp-Luc经脂质体METAFECTENE介导瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,给予2 Gyγ射线照射,观察照射组与非照射组中荧光素酶的表达。结果:瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,检测到照射可经hTERT启动子而诱导荧光素酶的表达增强,即hTERT启动子在2 Gy照射组中比在非照射组中具有更高的活性。结论:2Gyγ射线可以诱导肝癌细胞中hTERT启动子活性增强,有望用于增强肝癌细胞中hTERT启动子介导的靶向基因治疗,并为进一步深入研究奠定了基础。     

Improvement of Chemically-activated Luciferase Gene Expression Bioassay for Detection of Dioxin-like Chemicals

To improve the chemically-activated luciferase expression (CALUX)bioassay for detection of dioxin-like chemicals (DLCs) based on the toxicity mechanisms of DLCs. Method A recombinant vector was constructed and used to transfect human hepatoma (HepG2). The expression of this vector was 10-100 folds higher than that of pGL2used in previous experiments. The transfected cells showed aromatic hydrocarbon receptor (AhR)-meditated luciferase gene expression. The reliability of luciferase induction in this cell line as a reporter of AhR-mediated toxicity was evaluated, the optimal detection time was examined and a comparison was made by using the commonly used ethoxyresoufin-Odeethylase (EROD) activity induction assay. Result The results suggested that the luciferase activity in recombinant cells was peaked at about 4 h and then decreased to a stable activity by 14 h after TCDD treatment. The detection limit of this cell line was 0.1 lpmol/L, or 10-fold lower than in previous studies, with a linear range from 1 to 100pmol/L, related coefficient of 0.997, and the coefficient of variability (CV) of 15-30%,Conclusion The luciferase induction is 30-fold more sensitive than EROD induction, the detection time is 68 h shorter and the detection procedure is also simpler.     

转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝癌细胞系的凋亡与p53及Smad4活化相关

目的:明确转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝肿瘤细胞系凋亡及其与Smad的关系.方法:选用3种含有不同p53基因状态的人肝肿瘤细胞系,应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF-β1诱导的肝肿瘤细胞的凋亡进行了定量检测.为明确凋亡机制,还应用LF2000把含有Smad结合元件和荧光素酶基因的TGF-β1可诱导的荧光素酶报告质粒对细胞进行了转染,后经TGF-β1作用,分别检测其相对荧光素酶活性.结果:在应用TUNEL检测的3个细胞系中,TGF-β1仅能诱导HepG2细胞(野生型p53)凋亡,而Huh-7(突变型p53)和Hep3B细胞(缺失型p53)则凋亡较少.荧光素酶检测显示,HepG2细胞对TGF-β1反应较强,而Huh-7和Hep3B细胞其荧光素酶的表达较低.结论:HepG2细胞系比Huh-7和Hep3B细胞系更易发生TGF-β1诱导的凋亡,Smad4也许是TGF-β1信号转导途径的主要调控因子之一.     

转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝癌细胞系的凋亡与p53及Smad4活化相关

目的:明确转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝肿瘤细胞系凋亡及其与Smad的关系.方法:选用3种含有不同p53基因状态的人肝肿瘤细胞系,应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF-β1诱导的肝肿瘤细胞的凋亡进行了定量检测.为明确凋亡机制,还应用LF2000把含有Smad结合元件和荧光素酶基因的TGF-β1可诱导的荧光素酶报告质粒对细胞进行了转染,后经TGF-β1作用,分别检测其相对荧光素酶活性.结果:在应用TUNEL检测的3个细胞系中,TGF-β1仅能诱导HepG2细胞(野生型p53)凋亡,而Huh-7(突变型p53)和Hep3B细胞(缺失型p53)则凋亡较少.荧光素酶检测显示,HepG2细胞对TGF-β1反应较强,而Huh-7和Hep3B细胞其荧光素酶的表达较低.结论:HepG2细胞系比Huh-7和Hep3B细胞系更易发生TGF-β1诱导的凋亡,Smad4也许是TGF-β1信号转导途径的主要调控因子之一.     

人肝癌细胞株VEGF/VEGFR的检测及意义探讨

目的：筛选血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）高表达肝癌细胞株，为进一步研究VEGF在肝癌治疗中的作用提供理论依据。并探讨VEGF受体在肝癌细胞株的表达及意义。方法：ELISA法及Western blot法分别检测人肝癌细胞株培养上清及细胞内VEGF蛋白的表达。免疫细胞化学方法检测VEGFR在人肝癌细胞中的表达。结果：5株肝癌细胞株均见VEGF蛋白表达，其中SMMC-7721的VEGF表达量最高，VEGF特异性受体Fit-1在HepG2、HHCC、SMMC-7721、Bcl-7402见阳性表达，KDR在HepG2、HHCC、Bel-7402、QGY-7701见阳性表达。结论：肝癌细胞株中VEGF表达量不尽一致，VEGF在肝癌发生发展中可能存在自分泌作用方式。     

TGF- β 1/SMAD SIGNALING PATHWAY MEDIATES p5 3 -DEPENDENT APOPTOSIS IN HEPATOMA CELL LINES

HEPATOCELLULARcarcinoma(HCC)isoneofthemostcommonanddevastatingmalignanttumors,withanestimatedannualincidenceofonemillioncases,mainlyinAfricanandAsianregions.Inrecentyears,importantadvanceshavebeenmadeinunder standingthemolecularpathogenesisofHCC,butonlyli…     

番荔枝内酯单体Desacetyluvaricin对肝癌细胞株生长和凋亡的影响

 [目的]探讨Desacetyluvaricin在体外对肝癌HpG2.2.15细胞株生长和凋亡的作用及机制。[方法]处于生长期的人肝癌HepG2.2.15细胞分为3组：对照组,Desacetyluvaricin组和顺铂组。用MTT法检测各组肿瘤细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期、细胞调亡以及凋亡基因Fas的表达情况,比较Desacetyluvaricin与顺铂的疗效。[结果]Desacetyluvaricin对肝癌细胞增殖的抑制率高达62.2%。Desacetyluvaricin抑制肝癌细胞增殖的机制可能为阻滞肝癌HepG2.2.15细胞从G1期进入S期,从而抑制了肿瘤细胞的增殖,同时通过促进Fas表达,诱导HepG2.2.15细胞凋亡。其诱导Fas表达的效果还优于顺铂。[结论]Desacetyluvaricin可能通过延缓细胞G1期及诱导细胞凋亡等机制,对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用。     

咖啡酸锗抗肝癌作用及其机制的实验研究

目的:探讨咖啡酸锗对H22肝癌小鼠的体内抗肿瘤作用及其诱导细胞凋亡的机制。方法:采用H22肝癌小鼠模型观察咖啡酸锗的体内抗肿瘤作用,透射电镜观察肿瘤细胞超微结构改变,免疫组化方法检测肿瘤组织中bax、bcl-2蛋白表达。结果:咖啡酸锗对小鼠H22移植瘤的生长具有明显抑制作用,高、中浓度组抑瘤率分别为57.0%、40.4%(P<0.01),电镜下可见典型的细胞凋亡形态特征。咖啡酸锗处理后肿瘤组织中bax蛋白表达明显增强,bcl-2表达降低(P<0.05)。结论:咖啡酸锗对H22肝癌小鼠具有明显的体内抗肿瘤作用,同时能够促进肿瘤组织中bax蛋白表达,抑制bcl-2蛋白表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

ErbB-3结合蛋白Ebp1 mRNA在肝癌细胞系中的差异表达及其意义

[目的]观察ErBb-3结合蛋白Ebp1mRNA在人肝癌细胞系中的表达.[方法]培养人肝癌细胞系Hep 3B,Hep G2,Huh7和正常人张氏肝细胞,提取总RNA,以P32标记的Ebp1为探针,18S为内参照,采用Northern Blot法检测Ebp1mRNA的表达水平.[结果]Northern Blot法检测结果示,Ebp1mRNA在人肝癌细胞系中的表达水平明显高于正常肝细胞（P〈0.01）.[结论]人肝癌细胞系中Ebp1mRNA呈高表达.     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.