ErbB-3结合蛋白Ebp1基因过表达对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响

[目的]探讨ErbB-3结合蛋白Ebp1基因对肝癌细胞生长增殖的影响.[方法]利用脂质体法将pEGFPC1-Ebp1融合质粒转染到人肝癌细胞HepG2中,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白融合基因的表达并建立稳定表达Ebp1基因细胞系,应用Western blot检测转染后目的蛋白的表达,利用平板克隆集落形成观察细胞生长增殖能力的改变.[结果]在荧光显微镜下可见绿色荧光,Ebp1融合蛋白主要表达于胞质,转染pEGFPC1-Ebp1质粒后HepG2细胞中蛋白明显呈高表达;克隆集落形成实验结果表明,pEGFPC1空载体转染组和未转染细胞组相比较,Ebp1过表达细胞克隆集落形成显著增多.[结论]Ebp1过表达可增强人肝癌HepG2细胞增殖.     

βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的差异表达及其意义

目的：测定转化生长因子β（TGF-β）诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况。方法：培养人肝癌细胞T7721（转染并稳定高表达HAb18G／CD147）、7721（未转染HAb18G／CD147）、人肝细胞癌细胞系（HHCC）和正常人张氏肝细胞QZG，提取总RNA，设计合成特异性引物，以β-肌动蛋白（β-actin）作为内参照，检测βig-h3 mRNA的差异表达情况。结果：逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）结果显示，TGF-β诱导分子βjg-h3的mRNA在人肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞（P〈0．01），其在人肝癌细胞系中的表达水平依次为HHCC〉T7721〉7721，在正常肝细胞QZG中表达水平最低。结论：证明了βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中高表达，为进一步探讨βjg-h3在肝癌细胞黏附和转移过程中的作用机制奠定了基础。     

高表达的eEF-2K基因沉默对肝细胞癌增殖、侵袭和凋亡的影响

目的：检测eEF-2K基因在肝细胞癌（HCC）组织内的表达并分析其表达水平对HCC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：用RT-qPCR及Western blot方法检测了64例肝癌组织及癌旁肝组织、五种HCC细胞系LM3, Hep3B, Huh7, 97H, HepG2及人正常肝细胞系 LO2中eEF-2K基因在mRNA及蛋白水平的表达。用eEF-2K 特异性siRNA沉默LM3及Hep3B细胞性中eEF-2K基因后，经qPCR检测确认。随后用CCK-8，Transwell方法与流式细胞技术检测eEF-2K基因沉默对增殖、侵袭与凋亡的影响。结果：相较癌旁组织，HCC组织内eEF-2K mRNA与蛋白表达显著上调（P＜0.05）；与正常人肝细胞系LO2相比，肝癌细胞系LM3, Hep3B, 97H, HepG2, Huh7中的eEF-2K mRNA和蛋白表达分别升高（Ｐ＜0.05）。在LM3及Hep3B细胞系中用特异性siRNA沉默eEF-2K后，与非特异性siRNA对照组相比，细胞增殖活性和侵袭能力显著降低（P＜0.05），凋亡率显著升高（P＜0.05）。TCGA数据库分析结果表明eEF-2K高表达与肝癌预后不良相关（P＜0.05）。结论：eEF-2K蛋白在肝癌组织和细胞中高表达且与预后不良相关；沉默eEF-2K后肝癌细胞增殖和侵袭能力降低并诱发凋亡，提示eEF-2K可用作HCC潜在的预后标志物和治疗靶点。     

UbcH10在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的研究UbcH10在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的联系,初步探讨UbcH10在人肝细胞癌中的生物学意义。方法利用RT-PCR法检测正常肝脏细胞系及肝癌细胞系,和肝癌组织及对应的癌旁组织中UbcH10 mRNA的表达水平。分析UbcH10 mRNA的表达水平与肝癌临床病理特征之间的关系。利用免疫组化方法检测UbcH10蛋白在肝癌组织及其癌旁组织和正常肝脏组织中的表达。结果正常肝脏细胞系L02中UbcH10 mRNA表达水平显著低于肝癌细胞细胞系BEL-7402、Hep3B、HepG2、SMMC-7721中UbcH10 mRNA的表达水平(P<0.05)。肝癌组织中UbcH10 mRNA的表达水平显著高于其癌旁组织(P<0.05)。UbcH10 mRNA表达水平与肿瘤直径、组织病理分化程度、TNM分期、门静脉侵犯特临床病理特征显著相关(P<0.05)。肝癌组织中广泛表达UbcH10蛋白,总体阳性率为68.6%(48/70),癌旁组织和正常肝组织中较少见UbcH10蛋白阳性表达,其染色阳性率分别28.6%(20/70)和26.7%(8/30)。结论 UbcH10在肝癌细胞系及肝癌组织中高表达。UbcH10的高表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,UbcH10可能成为潜在的分子标志物或治疗靶点。     

microRNA-616在肝细胞癌侵袭转移中的作用机制研究

目的探讨microRNA-616（miR-616）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC侵袭转移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测miR-616在60例HCC及癌旁组织中的表达,同时检测miR-616在不同肝癌细胞系中的表达情况;免疫组织化学染色检测miR-616在HCC及癌旁组织中波形蛋白（vimentin）、上皮型钙黏素（E-cadherin）及同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）的表达情况;qRT-PCR检测miR-616在人正常永生化肝细胞（LO2）及5种不同肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Hu7）中的表达水平;使用miR-616抑制物作用Hep3B细胞,TranswellTM实验检测miR-616抑制后Hep3B细胞侵袭能力变化;应用miR-616抑制物及PTENsiRNA转染Hep3B细胞,qRT-PCR检测Hep3B中miR-616、vimentin、PTEN、E-cadherin的mRNA水平,Westernblot法检测癌细胞中vimentin、PTEN、E-cadherin的蛋白水平。结果miR-616在HCC组织中表达水平高于对应癌旁组织;miR-616在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-616高表达与低表达在血管侵犯、Edmonson-Steiner分级、TNM分期比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);miR-616高表达肝癌组PTEN及E-cadherin水平低于miR-616低表达肝癌组,而vimentin水平高于miR-616低表达肝癌组,相关性分析结果显示HCC组织中miR-616与E-cadherin、PTEN水平呈负相关,与vimentin水平呈正相关;在肝癌细胞中抑制miR-616后PTEN及E-cadherin表达水平上调,而vimentin表达降低,Hep3B细胞的侵袭能力明显降低。结论miR-616在HCC组织中表达上调,其表达与HCC恶性临床病理特征有关,miR-616促进肝癌细胞侵袭转移的作用可能与其抑制PTEN表达及诱导上皮间质转化有关。     

miR-196a在肝癌细胞中的表达及其促增殖作用

目的: 探讨miR-196a在肝癌组织的表达水平和对肝癌Hep3B细胞增殖的影响,阐明其促进肝癌细胞增殖的可能机制。方法: 收集20例肝癌组织及对应癌旁组织,培养人正常肝细胞株L02及肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2和Hep3B,采用qRT-PCR法检测miR-196a mRNA在肝癌组织和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达水平。取处于对数生长期人肝癌Hep3B细胞随机分为对照组、miR-196a mimics转染组和miR-196a inhibitors转染组,MTT法检测各组Hep3B细胞增殖活力,qRT-PCR法检测各组Hep3B细胞miR-196a的表达,流式细胞术检测各组Hep3B细胞周期变化,qRT-PCR和Western blotting法检测各组Hep3B细胞miR-196a潜在靶点叉头转录因子(FOXO1)的表达水平。结果: 肝癌组织中miR-196a mRNA表达水平明显高于相应癌旁组织(P<0.05);miR-196a mRNA在人肝癌SMMC-7721、HepG2和Hep3B细胞中的表达水平明显高于人正常肝L02细胞(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞增殖率明显升高(P<0.05), miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞增殖率明显降低(P<0.05),且呈时间依赖性。与对照组比较,转染24 h时,miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高(P<0.05),S期细胞百分率明显降低(P<0.05)。与对照组比较, miR-196a mimics转染组FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论: miR-196a可能通过FOXO1促进肝癌细胞的增殖,提示miR-196a可能成为肝癌诊断和治疗的新靶点。     

肝癌细胞系中DNMTs表达的检测及意义

目的:检测HBV相关肝癌细胞系(Hep3B)与非HBV相关肝癌细胞系(HepG2)中甲基化转移酶(DNAmethyltransferase,DNMT)的表达,分析HBV感染与DNMT表达之间的关系。方法:应用荧光定量PCR(Flurescencequantitative-PCR,FQ-PCR)检测两种肝癌细胞系中DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B、GAPDH基因mRNA表达水平,并将DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B表达水平与参比基因进行比较。结果:DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B在HBV相关细胞系Hep3B中表达分别为:1.26±0.15、0.76±0.15、1.26±0.20、0.66±0.13;在非HBV相关肝癌细胞系HepG2中的表达分别为:0.64±0.11、0.62±0.12、0.48±0.12、0.36±0.10。Hep3B细胞系中DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达均高于HepG2(P均<0.01)。结论:⑴HBV相关肝癌细胞系Hep3B中存在DNMT过表达;⑵HBV感染可能刺激DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达,进而促进抑癌基因甲基化。     

下调Tim-3对肝癌干细胞自我更新能力及 Wnt信号通路的影响

目的 探讨Tim-3对肝癌干细胞(liver cancer stem cells, LCSCs) 自我更新能力及Wnt信号通路的影响。方法培养人肝癌细胞系HepG2、SMMC7721及正常干细胞系L02,流式细胞仪分选Nanog阳性(+)的肝癌干细胞;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Tim-3在3个细胞系中的mRNA表达水平及在肝癌干细胞中的mRNA表达水平;HepG2肝癌干细胞转染Tim-3 siRNA,荧光显微镜和光学显微镜检测转染率,Western blot法检测转染后Tim-3蛋白水平;qRT-PCR检测转染前后Tim-3、Wnt3、β-catenin的mRNA表达水平;细胞克隆形成试验和细胞成球试验检测转染前后HepG2肝癌干细胞的自我更新能力的变化。结果 qRT-PCR检测Tim-3在肝癌细胞系HepG2、SMMC7721中的 mRNA表达显著高于正常肝细胞L02(P＜0.05);Tim-3在HepG2肝癌干细胞的表达明显高于肝癌细胞(P＜0.05);在SMMC7721肝癌干细胞与肝癌细胞比较Tim-3 mRNA表达有低趋势;经荧光镜和光学显微镜观察,Tim-3 siRNA转染细胞良好;Western blot法结果表明,Tim-3蛋白水平在siRNA-451组细胞中的表达显著低于siRNA-750、siRNA-NC、未转染细胞(P＜0.05);转染后HepG2干细胞Tim-3、Wnt3、β-catenin 的mRNA表达水平均显著下降;克隆形成实验和细胞球形成实验显示转染Tim-3 siRNA后,细胞的克隆形成能力和细胞球生长能力均显著降低(P＜0.05)。结论 下调Tim-3表达水平后,可通过抑制Wnt信号通路,最终减弱肝癌干细胞的自我更新能力。     

Cytohesin-2在肝癌细胞株中的表达及调控Hep3B细胞增殖作用的研究

目的探讨Cytohesin-2在肝癌细胞株中的表达情况以及对肝癌细胞增殖的影响.方法应用western blot法检测6种细胞株中Cytohesin-2的表达情况,筛选出高表达细胞株后,给予Cytohesin-2的特异性抑制剂SecinH3了解Cytohesin-2对Hep3B细胞增殖的影响.结果Cytohesin-2蛋白在Hep3B、HepG2、SMCC-7721、BEL-7402、Huh-7中的表达均高于人正常肝细胞系HL-7702中的表达.应用Cytohesin-2抑制剂SecinH3后,Hep3B细胞的增殖能力受到显著抑制,并且Hep3B细胞的凋亡数量明显增加.结论 Cytohesin-2在多种肝癌细胞系中均具有显著地高表达,并可以通过抑制Hep3B细胞凋亡的方式促进Hep3B细胞的增殖.Cytohesin-2可能作为肝细胞肝癌生物治疗的新的靶点.     

DACH1在肝癌中的生物学作用及机制

目的探讨DACH1在肝癌中的生物学作用及其作用机制,为肝癌的早期诊断、治疗和预后评估提供帮助。方法采用免疫组化方法检测30例肝癌组织和配对的正常组织样本中DACH1的表达水平。运用Western Blot方法检测DACH1,筛选出低表达DACH1的肝癌细胞株。构建过表达DACH1的慢病毒转染HepG2细胞株,并通过Western Blot方法验证DACH1表达改变的情况。采用CCK8检测高表达DACH1的HepG2细胞株在24、48、72、96 h增殖情况。采用流式细胞技术检测高表达DACH1的HepG2细胞株周期变化情况,并运用Western Blot方法检测周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、Cyclin E1、CDK2表达变化情况。高表达DACH1的HepG2细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察体内增殖情况并用采用免疫组化验证肿瘤中DACH1的表达。结果DACH1在肝癌组织中的表达低于正常组织(P <0.001);DACH1在肝癌细胞中的表达低于正常肝细胞株,HepG2、Hep3B、Huh7细胞系中HepG2的DACH1表达最低(P <0.05)。高表达DACH1的... 更多     

肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

目的：基于肝癌细胞（肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞）对PGE2的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法：体外培养肝细胞癌细胞株（Hep3B，HuH7）和胆管上皮癌细胞株（SG231，HuCCT1）。分别给予不同浓度的外源性PGE2处理，以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率：以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体（EP1、EP2、EP3和EP4）的mRNA表达情况；采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验．于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果：WST-1细胞增殖实验结果显示PGE1可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长，但对胆管上皮癌细胞（SG231、HuCCT1细胞）则表现为生长抑制作用；RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达；激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆，胞膜定位。而且部分在胞核也有表达。其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论：Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1，4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体。且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。     

三氧化二砷影响肝癌细胞系Hep201凋亡的研究

目的　研究三氧化二砷对肝癌细胞生长的抑制作用。方法　采用三氧化二砷处理人肝癌细胞系Hep2 0 1,通过生长曲线的绘制观察三氧化二砷对肝癌细胞生长的影响 ,并应用原位缺口末端DNA标记技术检测肝癌细胞的凋亡情况 ,同时用免疫组织化学和NorthernBlot方法检测凋亡相关基因bc1- 2和bax蛋白与mRNA的表达强度 ,探讨三氧化二砷影响肝癌细胞凋亡的机制。结果　经三氧化二砷连续作用 72h后 ,肝癌细胞生长受到抑制 ,发现试验组凋亡的细胞明显多于对照组 ,bc1- 2在试验组中表达强度低于对照组 ,而bax的表达高于对照组。结论　在三氧化二砷的作用下 ,肝癌细胞的生长受到抑制 ,凋亡细胞增加 ,肝癌细胞凋亡增加的机制可能是凋亡的主要调节因子bc1- 2和bax两种基因表达比例发生变化。     

Differential expression of βig-h3 in human hepatoma cell lines

Objective：To observe the differential expression of TGF-β-induced gene human clone 3 （βig- h3） in human hepatoma cell lines. Methods：Human hepatoma cells HHCC, 7721, T7721 constructed by stably transfectiug HAb18G/CD147 cDNA into 7721 and normal human liver cell QZG were cultured as previously. RT-PCR and western blot were used to investigate the differential expression of βig-h3 in human hepatoma cell lines and normal liver cell. Results ：The results of RT-PCR suggested that the expression of βig-h3 mRNA in human hepatoma cells was higher than that in normal human liver cell QZG（P〈0.01）, and its expression level in human hepatoma cells in turn was HHCC〉T7721〉7721. Moreover, the similar results of βig-h3 protein expression were testified by western blot. Conclusion：This study demonstrates that the expression of βig-h3 in hepatoma cell lines is higher than that in normal liver cell QZG, which provides a sound basis for exploring the function of βig-h3 in processes of adhesion and metastasis of human hepatoma cells.     

人XPD基因转染对人肝癌细胞的生物学影响

目的：XPD基因作为TFIIH因子中一员,在基因修复中发挥重大作用。本实验构建带有绿色荧光蛋白表达人野生型XPD基因重组质粒pEGFP-N2-XPD,并将其稳定转染至人肝癌细胞株Hep3B细胞,探讨XPD基因与HBx,Cdk7的相互作用,以及细胞周期和凋亡机制。方法：从人宫颈鳞癌上皮细胞株HeLa细胞克隆出人全长XPDcDNA,构建了pEGFP-N2-XPD重组体质粒,并将其稳定转染入Hep3B并筛选单克隆稳定转染重组质粒Hep3B细胞（Hep3B-pEGFP-N2/XPD）和稳定转染空载质粒Hep3B细胞（Hep3B-pEGFP-N2）。利用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白表达,检测转染XPD基因后细胞内XPD,HBx,cdk7的表达量变化,并检测细胞的增殖凋亡以及细胞周期变化。结果：（1）利用酶切和基因测序,成功构建了带有绿色荧光蛋白表达人野生型XPD基因重组质粒pEGFP-N2-XPD。（2）免疫荧光显微镜下,Hep3B-pEGFP-N2和Hep3B-pEGFP-N2-XPD细胞中可观察到绿色荧光蛋白表达。（3）RT-PCR检测：Hep3B-pEGFP-N2/XPD细胞与Hep3B和Hep3B-pEGFP-N2,两对照组相比,HBxmRNA表达明显降低（P〈0．001）XPDmRNA表达明显增高（P〈0．01）Cdk7mRNA表达明显降低（P〈0．001）。（4）MTT检测示Hep3B-pEGFP-N2/XPD与两对照相比,细胞增殖率减弱（P〈0．05）。TUNEL检测示Hep3B-pEGFP-N2/XPD与两对照组比较,细胞凋亡明显增加（P〈0．01）。流式细胞仪检测示Hep3B-pEGFP-N2/XPD进入S期出现障碍,停滞在Go＋G1期的细胞增多,细胞凋亡率逐渐增加。（5）Westernblot检测Hep3B-pEGFP-N2/XPD细胞中XPD蛋白相对表达量均比两对照组高,Cdk7蛋白相对表达量均比两对照组低,差异有统计学意义（P〈0．001）．结论：野生型XPD基因片段成功插入pEGFP-N2空载质粒中,将其稳定转染进人肝癌细胞株Hep3B细胞中,可以在转录和蛋白水平提高细胞XPD表达、降低细胞内HBxCdk7表达。野生型XPD基因过渡表达可能抑制HBxCdk7表达来改变细胞周期、抑制细胞生长、促使细胞凋亡。     

Lin28与肝癌细胞紫杉醇耐药关系的研究

[目的]Lin28是一种重编程因子和保守的RNA结合蛋白,存在Lin28A和Lin28B两种同源基因,两者结构和功能类似。本研究旨在探讨Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药的关系。[方法]MTT法检测紫杉醇对HepG2、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞的IC50;用荧光定量PCR法（简称RTPCR）在RNA水平检测Lin28A和Lin28B在Hep3B、HepG2、SMMC-7721中的表达,蛋白质印迹法分析Lin28A和Lin28B蛋白在Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞中的表达情况。[结果]Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株对紫杉醇的IC50分别为：Hep3B为0.194μM、HepG2为19.54μM、SMMC-7721为0.444μM。HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28A基因表达量分别是Hep3B的5.06、3.10倍;HepG2、SMMC-7721细胞株中的Lin28B基因表达量分别是Hep3B的7.16、3.16倍。Hep3B、HepG2、SMMC-7721细胞株中Lin28A和Lin28B蛋白的表达量与从荧光定量数据显示的趋势一致。[结论]Lin28与肝癌细胞对紫杉醇耐药密切相关,肝癌细胞中Lin28表达与肝癌细胞对紫杉醇的耐药性成正比,暗示Lin28表达可能是肝癌细胞紫杉醇耐药的潜在机制并有望成为逆转肝癌紫杉醇耐药的靶点。     

COX-2 siRNA诱导人肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究

目的:观察COX-2在人肝癌细胞Hep3B中的表达及小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默COX-2基因对COX-2 mRNA和蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法:将siRNA-COX-2质粒载体转染Hep3B细胞,WST-8法检测细胞增殖抑制情况,透射电镜观察凋亡小体出现情况;筛选单克隆细胞株Hep3B-sh,采用RT-PCR和Western blotting检测COX-2 mRNA和蛋白情况。结果:siRNA-COX-2能抑制Hep3B细胞的增殖,稳定转染pshRNA-COX-2可使Hep3B细胞中COX-2 mRNA及蛋白的表达明显减弱(P<0.01);透射电镜下可见凋亡小体出现,发生凋亡细胞数增加。结论:COX-2siRNA能有效抑制肝癌Hep3B细胞中COX-2的表达和细胞的增殖,促进凋亡发生,为肝细胞癌基因治疗提供实验依据和治疗靶点。     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。     

５ 氮杂 ２′ 脱氧胞苷诱导肝癌细胞株ＳＬＩＴ２基因去甲基化的实验研究

目的：观察肝细胞癌（HCC）细胞株SUN449、BEL-7402、SMMC-7721、Hep3B及epG2中SLIT2基因在5-Aza-CdR作用后,其启动子区甲基化状态及表达的变化,探讨HCC细胞株中SLIT2基因调控规律及甲基化调节抑制剂5-Aza-CdR对SLIT2基因转录的影响。方法对上述 HCC 细胞株体外培养,MSP法检测 HCC 细胞株中 SLIT2启动子相关区域的甲基化状况。应用10 mmol／L浓度的5-Aza-CdR处理体外培养的5种HCC细胞后,MSP法检测用药前后细胞中SLIT2基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞中SLIT2 mRNA的变化。结果 SLIT2基因在各细胞株中启动子区呈异常高甲基化状态,mRNA低表达。经过5-Aza-CdR处理后,SLIT2基因启动子区呈显著去甲基化状态,其mRNA表达增强。结论启动子区异常甲基化是HCC细胞SLIT2基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能逆转SLIT2基因甲基化状态,从而调控SLIT2基因表达。