慢病毒介导HIF-1α沉默对缺氧肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:构建缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,观察慢病毒介导的HIF-1α基因沉默对体外模拟缺氧条件下的肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法:设计合成1条针对HIF-1α基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,转染293T细胞包装产生慢病毒,转染人肝癌细胞株HepG2细胞,嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。将HepG2细胞分为正常对照组、干扰对照组(转染NC-shRNA)、干扰组(转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl2)模拟肿瘤细胞缺氧微环境,应用Western Blot检测HepG2细胞中HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,CCK-8检测沉默HIF-1α基因对HepG2细胞增殖的影响,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测沉默HIF-1α基因对细胞凋亡的影响。Western Blot检测HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质细胞色素C(Cyt-C)表达的变化。结果:①成功构建HIF1α-shRNA慢病毒载体并转染HepG2细胞,缺氧培养细胞24h后,与正常对照组及干扰对照组相比,干扰组细胞内HIF-1α蛋白表达明显降低(P<0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默HIF-1α基因。②沉默HIF-1α基因后缺氧培养的HepG2细胞增殖率下降(P<0.05),而细胞凋亡比例升高(P<0.01)。③Western Blot结果显示,与正常对照组及干扰对照组相比,沉默HIF-1α基因后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和细胞质Cyt-C表达上调(P<0.05或P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高。结论:通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默缺氧HepG2肝癌细胞HIF-1α基因,HIF-1α沉默能显著抑制缺氧HepG2细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其凋亡途径可能与激活内源性线粒体凋亡通路有关。     

蛋白激酶CK2α对喉癌细胞凋亡和超微结构的影响

目的 探讨蛋白激酶CK2α对人喉癌细胞凋亡和超微结构的影响及其可能机制.方法 用脂质体转染法分别将蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2α及非特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-cont转染人喉癌Hep-2细胞.Western印迹法检测转染细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测转染细胞凋亡率的变化,透射电镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 转染psiRNA-hH1neo-CK2α质粒后,Hep-2细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达明显下降(P＜0.01).和未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞出现典型的凋亡征象,如核固缩、染色质凝集靠近核膜和凋亡小体形成.psiRNA-hH1neo-CK2α转染细胞凋亡率明显高于未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组(25.66%±0.83%比3.66%±0.43%、5.18%±0.22%,均P＜0.05);与其他2组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞bcl-2蛋白表达较低(相对吸光度比值为0.20±0.09 vs 0.72±0.16、0.56±0.11,均P＜0.01),Bax蛋白表达较高(相对吸光度比值为0.81±0.17 vs 0.26±0.12、0.33±0.17,均P＜0.01),bcl-2/Bax较低(0.25±0.05 vs 2.76±0.21、1.70±0.22,均P＜0.01).结论 蛋白激酶CK2α与喉癌细胞凋亡密切相关,该作用可能与bcl-2/Bax降低有关,蛋白激酶CK2α可能是一个有潜力的喉癌治疗靶点.     

Bc1-2重组干扰质粒促进多药耐药Acc-3／CDDP细胞凋亡实验研究

目的：探讨表达重组干扰质粒沉默Bc1-2基因后对多药耐药Acc-3／CDDP细胞凋亡的影响。方法：按siRNA设计原则构建针对Bc1-2基因表达重组RNA干扰质粒，脂质体转染多药耐药Acc-3／CDDP细胞后分别行MTT试验、电子显微镜检查、AO／EB荧光染色法检测，观察不同条件处理后各组细胞的凋亡情况有无差别。结果：MTT试验见随着时间的延长，基因干扰组的OD值进行性降低，降低幅度在转染48h时最大，至72h时曲线明显较前变缓。电子显微镜检查结果显示，基因干扰组从转染后24-72h出现进行性加重的细胞凋亡改变，各期凋亡细胞清晰典型。荧光染色法检测细胞凋亡结果显示，基因干扰组能明显促进ACC-3／CDDP细胞凋亡（P〈0.05）。结论：表达重组干扰质粒能有效地沉默多药耐药Acc-3／CDDP细胞中Bc1-2基因表达，促进细胞凋亡。     

胃癌组织中HIF-1α、Bax、Bcl-2的表达及意义

目的：探讨胃癌组织中缺氧诱导因子（HIF）-1α、Bax、Bcl-2蛋白的表达及其与肿瘤浸润、转移的关系。方法：应用免疫组织化学（PV9000）染色法检测100例胃癌组织中HIF—1α、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果：胃癌组织中HIF—1α、Bax、Bcl-2蛋白阳性表达率分别为56％（56／100）、40％（40／100）、68％（68／100）,与阴性对照组的5％（1／20）、90％（18／20）、20％（4／20）相比,P均〈0．05。Bax、Bcl-2蛋白在56例HIF-1α阳性表达的胃癌组织中的阳性表达率分别为17．9％（10／56）、89．3％（50／56）,与在44例HIF—1α阴性表达的胃癌组织的阳性表达率68．2％（30144）、40．9％（18144）相比,P均〈0．05。HIF—1α、Bax蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关（r=0．510,P〈0．05）,而HIF—1α、Bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关（r=0．515,P〈0．05）。HIF—1α蛋白表达与胃癌组织浸润范围及有无淋巴结转移有关（P均〈0．05）,与分化程度无关（P〉0．05）。结论：HIF—1α阳性表达胃癌组织中Bax低表达,Bcl-2高表达,提示HIF—1α可能通过减少促凋亡蛋白Bax的表达,增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,参与胃癌的发生发展过程。HIF—1α蛋白表达与胃癌浸润转移密切相关。     

靶向bcl-2基因的shRNA对肝星状细胞凋亡的影响

目的研究短发夹RNA(shRNA)重组载体介导抑制大鼠肝星状细胞(HSCs)bcl-2基因的表达,观察其对HSCs凋亡的影响。方法重组质粒载体pGPU6-GFP-shRNA由脂质体介导转染HSC-T6细胞株。荧光定量PCR和Western blotting鉴定bcl-2表达;CCK-8法观察质粒转染对HSCs生长和增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态学改变;流式细胞术及caspase-3和caspase-9酶活性检测分析转染后细胞凋亡情况。结果pGPU6-GFP-shRNA能抑制bcl-2 mRNA和蛋白表达;转染后HSC-T6体外生长明显受到抑制;转染后72 h时细胞凋亡率为33.34%,caspase-3和caspase-9酶活性显著增高。结论shRNA重组载体pGPU6-GFP-shRNA能有效地抑制HSC-T6中bcl-2的表达,抑制细胞生长并促进凋亡。实验为进一步探索肝纤维化基因治疗提供了实验依据。     

靶向bcl-2基因的shRNA对肝星状细胞凋亡的影响

目的 研究短发夹RNA(shRNA)重组载体介导抑制大鼠肝星状细胞(HSCs)bcl-2基因的表达,观察其对HSCs凋亡的影响.方法 重组质粒载体pGPU6-GFP-shRNA由脂质体介导转染HSC-T6细胞株.荧光定量PCR和Western blotting鉴定bcl-2表达;CCK-8法观察质粒转染对HSCa生长和增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态学改变;流式细胞术及caspase-3和caspase-9酶活性检测分析转染后细胞凋亡情况.结果 pGPU6-GFP-shRNA能抑制bcl-2 mRNA和蛋白表达;转染后HSC-T6体外生长明显受到抑制;转染后72 h时细胞凋亡率为33.34%,caspase-3和caspase-9酶活性显著增高.结论 shRNA重组载体pGPU6-GFP-shRNA能有效地抑制HSC-T6中bcl-2的表达,抑制细胞生长并促进凋亡.实验为进一步探索肝纤维化基因治疗提供了实验依据.     

特异性下调GRP78基因表达对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默葡萄糖调节蛋白78（GRP78）基因对人卵巢癌细胞耐药性的影响,阐明GRP78基因沉默逆转肿瘤细胞耐药性的生物学机制。方法：构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3/DDP细胞;RT-PCR和Western blotting法检测GRP78基因的蛋白的表达;Western blotting法检测caspase-4和caspase-3蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：转染GRP78 siRNA重组质粒的SKOV3/DDP细胞GRP78基因和蛋白表达较转染空质粒组明显降低(P<0.05);加用顺铂后,转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组较未转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组caspase-4和caspase-3表达明显增加(P<0.05),细胞凋亡率也明显增加(P<0.05)。结论：抑制GRP78基因表达能通过上调caspase-4和caspase-3表达及增加顺铂诱导的SKOV3/DDP细胞凋亡率,降低SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

单抗NJ001杀伤肺腺癌细胞机制的初步研究

目的:观察单克隆抗体NJ001杀伤肺腺癌细胞的活性,并探索其分子机制?方法:选择肺腺癌细胞株SPC-A1作为研究对象,流式细胞仪检测细胞凋亡率;相差显微镜观察凋亡细胞形态学改变;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白caspase-8?caspase-9?caspase-3?PARP和Bcl-2?Bax表达的变化?结果:单克隆抗体NJ001可以导致SPC-A1细胞发生凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性?显微镜下观察到SPC-A1细胞皱缩变圆,甚至脱落,呈现典型的凋亡改变;Western blot检测结果显示,在单抗NJ001作用下,PARP蛋白被剪切,caspase-3的表达量因被剪切而降低,caspase-8和caspase-9蛋白均表现活化,表现为cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白的表达上调?另外促凋亡蛋白Bax表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调?结论:单克隆抗体NJ001能通过诱导细胞凋亡发挥其杀伤肺腺癌细胞的活性,且其凋亡机制与caspase活化和Bcl-2家族蛋白的调节有关?     

实验性颅脑损伤鼠垂体前叶HIF-1α、Bcl-2/Bax的表达和细胞凋亡的研究

目的：探讨颅脑损伤后垂体前叶细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、Bcl-2和Bax的表达及细胞凋亡情况。方法：采用Feeney自由落体方法制作大鼠颅脑损伤模型,分别于建模后24、72 h和7 d灌注固定取材,同时设立对照组,免疫组化染色法检测HIF-1α、Bcl-2和Bax蛋白的表达,TUNEL染色法检测细胞凋亡。结果：垂体前叶组织于伤后24 h HIF-1α、Bcl-2和Bax蛋白的表达即有升高,72 h达到高峰,一直持续到伤后7 d,与对照组相比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;TUNEL染色显示凋亡细胞明显增多,且凋亡指数与HIF-1α的表达和Bcl-2/Bax的比值成规律性变化。结论：颅脑损伤后垂体前叶组织HIF-1α、Bc1-2、Bax蛋白的表达增加而诱发细胞凋亡,是颅脑损伤后垂体前叶功能紊乱的重要原因。     

α- 突触核蛋白对内质网应激及细胞凋亡影响

目的：构建α- 突触核蛋白（α-synuclein,SNCA）和SNCA 突变基因（SNCAmu）过表达转染293T 细胞,观察内质网应激及细胞凋亡。方法：应用PCR 技术扩增目的基因并插入慢病毒载体质粒,重组质粒的构建及包装293T 细胞,转染24 h 后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的表达。MTT 法检测未转染的293T 细胞组（CON 组）、转染空质粒的293T 细胞组（NC 组）、转染SNCA 基因质粒的293T 细胞组（OE 组）和转染SNCAmu 基因质粒的293T 细胞组（OEm 组）,观察各组细胞病毒转染后不同时间（1、2、3、4、5 d）细胞增殖的情况。Western blotting 法测定SNCA 和SNCAmu 诱导caspase-12 的蛋白表达。结果：成功构建了pGC-FU-SNCA-GFP 和pGC-FU-SNCAmu-GFP 质粒及转染293T 细胞,CON 组、NC 组、OE 组和OEm 组不同时间的细胞增殖具有统计学意义,SNCA 和SNCAmu 可能诱导293T 细胞caspase-12 的蛋白表达。结论：SNCA诱导caspase-12 的内质网应激凋亡途径,可能是帕金森病致病机制之一。     

法舒地尔减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤机制

目的 探讨盐酸法舒地尔减轻大鼠急性心肌缺血再灌注损伤,抑制细胞凋亡,发挥药物后适应作用的可能机制.方法 将90只SD大鼠随机均分为五组：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血后适应组（IPost组）、盐酸法舒地尔组（FH组）、盐酸法舒地尔＋PI3K抑制剂（LY294002）组（FH ＋Ⅰ组）.测定各组大鼠心肌细胞Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Akt、P-Akt的表达.结果 与I/R组（ROCK1：2.94±0.13）相比,IPost组（ROCK1：2.79±0.11）、FH组（ROCK1：2.83 ±0.10）、FH ＋Ⅰ组（ROCK1：2.85 ±0.26）的ROCK1表达无明显变化;与I/R组（Bcl-2：1.11±0.12,P-Akt：1.09±0.06,Bax：1.74 ±0.06,Caspase-3：1.32±0.12）相比,FH组（Bcl-2：1.76±0.08,P-Akt：1.73±0.05,Bax：0.98±0.14,Caspase-3：0.97±0.06）与IPost组（Bcl-2：1.74±0.06,P-Akt：1.37±0.05,Bax：0.97±0.11,Caspase-3：1.07±0.08）的Bcl-2、P-Akt升高（P＜0.05）,Bax及Caspase-3降低（P＜0.05）;与FH组相比,FH＋Ⅰ组（Bcl-2：1.05±0.12,P-Akt：1.21±0.06,Bax：1.61 ±0.11,Caspase-3：1.42±0.11）的Bcl-2、P-Akt表达降低,Bax及Caspase-3表达升高（P＜0.05）.结论 盐酸法舒地尔后适应效应机制可能与抑制ROCK活性及激活PI3 K-Akt通路有关.     

二甲双胍对糖基化终末产物诱导的成纤维细胞凋亡及相关蛋白caspase-3、Bax及Bcl-2表达的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物（AGEs）对原代人皮肤成纤维细胞凋亡的影响,以及二甲双胍（Metformin）对原代皮肤成
纤维细胞凋亡是否存在保护作用。方法取对数生长期的皮肤成纤维细胞,分为空白组,BSA对照组（300 μg/mL）,AGEs刺激组
（100、200、300 μg/mL）,药物组（AGEs 300 μg/mL+Metformin 1 mmol/L）,采用CCK-8检测24、48、72 h细胞凋亡情况;Western
Blot检测细胞培养72 h后凋亡相关蛋白caspase-3、Bax、Bcl-2表达情况。结果CCK-8结果显示AGEs诱导皮肤成纤维细胞凋
亡呈浓度及时间依赖性,AGEs 300 μg/mL诱导72 h后可见细胞凋亡明显增多（0.72±0.02 vs 1±0.04,P<0.05）,加入二甲双胍后可
对成纤维细胞起一定保护作用（0.98±0.02 vs 0.72±0.02,P<0.05）。Western Blot显示AGEs 300 μg/mL刺激成纤维细胞72 h后,
caspase-3、Bax 蛋白表达增加（P<0.05）,而Bcl-2 蛋白表达下降（P<0.05）,Bcl-2/Bax 比值下降（P<0.05）,二甲双胍作用后
caspase-3、Bax蛋白表达水平较刺激组明显下降（P<0.05）,而Bcl-2及Bcl-2/Bax比值则明显上升（P<0.05）。结论AGEs可诱导
人皮肤成纤维细胞凋亡增加,二甲双胍可以通过调控caspase-3、Bax及Bcl-2表达,从而起到抗凋亡作用。
     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路诱导人晶状体上皮细胞的凋亡和细胞周期阻滞

目的 探讨姜黄素对人晶状体上皮细胞株SRA01/04（HLEC-SRA01/04）细胞周期和凋亡的影响及其相关分子机制,为姜黄素治疗和预防后发性白内障提供理论依据。方法 体外培养HLEC-SRA01/04细胞,加入终浓度分别为0 μmol/L（对照组）以 及20、40和60 μmol/L的姜黄素处理孵育24 h或48 h后,MTT法检测各组细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测HLEC-SRA01/04细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western blot法检测姜黄素对HLEC-SRA01/04细胞中caspase-9、caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin B1、CDK1、β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果 MTT显示：随着姜黄素的浓度逐渐增加,HLEC-SRA01/04细胞较对照组抑制率逐渐增高（P<0.001）;随着作用时间的延长,各实验组HLEC-SRA01/04细胞增殖抑制率均逐渐增高（P<0.001）;流式细胞仪结果显示：各组中HLEC-SRA01/04细胞凋亡率和细胞G2/M期比例随姜黄素浓度增加逐渐增高,而线粒体膜电位随着姜黄素浓度增加逐渐下降（P<0.001）。Western blot 实验显示：随着姜黄素浓度的增加,HLEC- SRA01/04细胞中caspase-3、caspase-9和Bax的表达量逐渐增高,Bcl-2、Cyclin B1、CDK1和β-catenin的表达量逐渐降低,同时Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白Cyclin D1和c-myc表达量也逐渐降低。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HLEC-SRA01/04细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G2/M期,从而诱导其凋亡。     

内毒素脂多糖诱导人牙髓细胞凋亡的机制

目的观察内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对体外培养的人牙髓细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)、B细胞淋巴瘤 2（Bcl 2）、B细胞淋巴瘤相关蛋白X（Bax）活性的影响。方法用不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00、100.00?mg/L)的LPS作用于细胞,采用MTT染色法检测LPS对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡;采用免疫组织化学染色技术检测细胞的caspase 3、Bcl 2、Bax表达变化。结果不同浓度LPS组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P＜0.05),细胞增殖抑制率呈剂量依赖关系;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的LPS作用细胞72?h,细胞的凋亡率分别为3.1%、3.5%、12.1%、14.4%、24.3%、59.7%;免疫组织化学染色显示Bax表达增强,Bcl 2、caspase 3表达减弱。结论LPS可显著地抑制人牙髓细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl 2、caspase 3活性,升高Bax活性,并呈明显的量效关系。     

原花青素对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的:研究原花青素(PC)对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞Bc1-2、Bax表达的影响。方法:采用大鼠佐剂性关节炎(AA)模型,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠滑膜细胞Bcl-2、BaxmRNA的水平,免疫印迹法(Westernblotting)检测各组大鼠滑膜细胞Bcl-2、Bax蛋白表达,分析滑膜细胞caspase-3酶原的裂解,比色法测定大鼠滑膜细胞caspase-3的相对活性。结果:正常大鼠滑膜细胞Bcl-2和Bax均有表达,模型组大鼠Bcl-2、Bax表达均高于正常组。PC(6,30mg/kg)治疗组可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达,上调BaxmRNA和蛋白表达;而caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少,药物组大鼠caspase-3与对照组相比活性升高。结论:PC可通过下调滑膜组织中Bcl-2表达、上调Bax表达,诱导caspase-3活化,从而诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗佐剂性关节抗炎的机制之一。     

银杏叶提取物对1型糖尿病心肌病大鼠心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响

目的 探讨银杏叶提取物（extract of Ginkgo biloba,EGB）对1型糖尿病心肌病大鼠心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响.方法 将30只SD雄性大鼠随机分成3组：正常对照组（Con组,n=10）、糖尿病模型组（DM组,n=10）和银杏叶提取物治疗组（EGB组,n=10）.用链脲佐菌素（strepozotocin,STZ）进行腹腔注射,建立1型糖尿病动物模型后用银杏叶提取物注射液腹腔注射建立EGB组,其余两组给予相同体积的生理盐水.于12周末用超声心动图仪测定左心室舒张末期容积（LVIDV）、左心室收缩末期容积（LVISV）、左心室射血分数（LVEF）和每搏射血量（SV）;测定左心室重量指数、血糖和血胰岛素水平;用TUNEL法测定心肌细胞的凋亡指数（AI）;用RT-PCR和Western blot法分别检测其Bcl-2、Bax和caspase-3的表达.结果 与Con组相比,DM组大鼠LVIDV（P ＜0.01）、SV（P ＜0.01）、胰岛素含量（P＜0.01）和心肌组织Bcl-2（P ＜0.05）的表达都显著降低;而左心室重量指数和血糖浓度（P＜0.01）、心肌组织中Bax （P ＜0.05）、caspase-3（P＜0.05）的表达以及Bax/Bcl-2比例均明显升高.当EGB干预治疗后,与DM组相比,大鼠LVIDV（P＜0.05）、SV（P ＜0.05）、胰岛素含量（P＜0.05）和心肌组织Bcl-2（P ＜0.05）的表达均显著升高;而左心室重量指数（P＜0.05）、血糖浓度（P＜0.01）、心肌组织中Bax （P ＜0.05）、caspase-3（P＜0.05）的表达以及Bax/Bcl-2比例（P＜0.05）均明显降低.但是TUNEL染色显示各组大鼠的心肌细胞凋亡率（cardiomyocyte apoptosis index,CAI）没有明显的差异（P＞0.05）.结论 银杏叶提取物可以通过增加Bcl-2的表达,降低Bax、caspase-3表达及Bax/Bcl-2比例,减少心肌细胞的凋亡,从而提高了糖尿病心肌病的心肌功能.这也提示EGB通过调节心肌凋亡相关基因的表达,减少细胞的凋亡是其治疗糖尿病心肌病的重要机制之一.     

线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用

目的探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用。方法应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组。Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase3和Caspase9的酶活性变化。结果与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase9和Caspase3的酶活性显著增高。结论HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡。     

土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响

目的:观察土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响.方法:Annexin V-FITC/PI双标法检测100、200、400 μmol/L土大黄苷对SK-BR-3细胞凋亡的影响,Western blot法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达情况,试剂盒检测caspase-3的活性变化.结果:土大黄苷可诱导SK-BR-3细胞出现明显的早期凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05～P<0.01).土大黄苷在100、200、400 μmol/L浓度时均可抑制Bcl-2蛋白的表达,且随着其浓度的增加,蛋白表达逐渐降低,并促进Bax蛋白的表达(P<0.01).土大黄苷对caspase-3具有激活作用,且随着土大黄苷浓度的增加,caspase-3的活化程度逐渐增强.结论:土大黄苷具有诱导乳腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及激活caspase-3有关(P<0.01).     

蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡中对相关蛋白的影响

目的 探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其机制.方法 MTI检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞凋亡;Western-Blot检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达.结果 蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖,呈时间、剂量依赖关系;蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡,形态学观察到典型的凋亡小体;流式细胞仪检测到明显亚二倍体凋亡峰;蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中下调livin、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,并活化Caspase-3蛋白.结论 蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡可能与下调livin、Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达并活化Caspase-3有关.