肌球蛋白轻链激酶与炎症性疾病关系的研究进展

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)可以调控肌球蛋白轻链的磷酸化,进而调控基于肌动蛋白与肌球蛋白之间相互作用的细胞骨架活动.近几年研究报道,长链MLCK与短链MLCK的异常表达在不同的炎症性疾病中多有发生,炎症相关因子能诱导MLCK表达升高.本文对MLCK在肺炎、血管损伤以及炎性肠病中的作用,及MLCK参与炎症性疾病的可能信号通路进行了综述.     

褪黑素通过p38/MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞MLCK的表达

目的 探讨褪黑素(MLT)通过p38/MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),分空白对照组、DMSO对照组、DMSO oxLDL组、DM-SO oxLDL SB203580组、DMSO oxLDL MLT组、DMSO oxLDL MLT SB203580组.RT-PCR、Western blot、γ-32>P-ATP掺入法分别检测各组HUVEC MLCK转录、表达和活性及MLT对p38磷酸化的影响.结果 RT-PCR显示oxLDL组MLCK转录增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的转录;Western blot结果 表明oxLDL组MLCK表达、p38磷酸化增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的表达及p38磷酸化;γ-32P-ATP掺入法检测MLCK活性提示oxLDL组MLCK活性增强,MLT与SB203580降低MLCK活性.结论 MLT可能通过p38/MAPK通路调控MLCK的转录、表达和活性.     

肌球蛋白轻链的调节及其对肿瘤细胞增殖、转移的影响

肌球蛋白作为一种超家族蛋白质,是细胞骨架的重要组成部分,通过各种调节因子对其轻链磷酸化和去磷酸化的调节,参与了几乎所有的细胞生理、病理过程,尤其在肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移中发挥重要作用。到目前为止,肿瘤的发生、发展机制还不是十分清晰,对肌球蛋白轻链的调节及其与肿瘤相关性的研究,将有助于阐明肿瘤的发生、发展机制,为肿瘤的靶向治疗提供依据。     

Cd~(2+)和Hg~(2+)对肌球蛋白轻链激酶活性的调节

应用平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)体系,观察了重金属离子Cd~(2+)和Hg~(2+)对MLCK活性的影响,得到以下结果:1.Cd~(2+)和Hg~(2+)对MLCK具有双相作用,低浓度下激活MLCK,高浓度下抑制MLCK;2.Cd~(2+)对MLCK的激活作用,被钙调素拮抗剂氯丙嗪所抑制;3.疏基化合物能逆转Cd~(2+)和Hg~(2+)对MLCK的抑制。结果提示,Cd~(2+)和Hg~(2+)能通过活化caM使MLCK激活,高浓度时直接作用于MLCK抑制其活性。     

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞曹受过氧化损伤，同时使用硒、维生素等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。     

细菌脂多糖诱导人肺动脉内皮细胞表达P-MLCK

目的 探讨细菌脂多糖(LPS)对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)表达磷酸化肌球蛋白轻链激酶(phosphorylated myosin light chain kinase, P MLCK)的诱导作用.方法 体外培养HPAEC,分别给予生理盐水和2 μg/mL LPS孵育1 h,经免疫荧光显微镜和Western blotting检测P MLCK.结果 与生理盐水组比较,LPS刺激HPAEC后较生理盐水组细胞数量减少,细胞形态无明显改变.HPAEC在LPS刺激30、60 min后,P MLCK表达由0.41±0.05分别增加至0.82±0.43和1.56±0.07(P<0.05,P<0.01),同时LPS 30 min组和60 min组比较有显著性差异(P<0.05);LPS刺激60 min后P MLCK免疫反应细胞由1.25±2.1增加至16.4±4.8(P<0.01).结论 P MLCK可能与LPS诱导的急性肺损伤所致的内皮细胞屏障功能障碍有关.     

4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移的影响及其可能机制

目的研究维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基维甲酸酯(ATFMPE)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞迁移的影响及可能机制。方法不同浓度维甲酸(ATRA)和ATFMPE处理乳腺癌细胞株MDA-MB-231 48 h后,用MTT法检测ATFMPE对细胞增殖的影响,划痕法检测对细胞迁移的影响,Western blot法检测相关迁移蛋白的表达。结果 AT-FMPE对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,ATFMPE和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-7对细胞的迁移具有明显的抑制作用,Western blot结果显示ATFMPE显著降低MLCK的表达和肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化。结论 ATFMPE对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞的迁移具有抑制作用,可能与MLCK表达和MLC磷酸化水平下调相关。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯（ＣＨＰＯ）作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞遭受过氧化损伤，同时使用硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。结果表明，ＣＨＰＯ引发的自由基以及脂质过氧化反应，造成肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和ＡＴＰ酶活性显著下降，Ｓｅ、ＶＥ以及二者联合应用，可使心肌细胞抗自由基损伤的能力极大增强，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性都有不同程度的提高。提示：ＣＨＰＯ引发的自由基已造成了对心肌细胞肌球蛋白磷酸化系统的损害，Ｓｅ和ＶＥ的应用，对保护肌球蛋白分子的完整结构和其生化功能起着重要作用。     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞迁移能力的影响及其可能机制

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺,NTFMP]对人肺腺癌A549细胞株迁移能力的影响及其可能机制.方法 应用细胞迁移实验分析NTFMP对A549细胞迁移能力的影响,Western blot检测NTFMP对肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达和肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的影响.结...     

肌球蛋白轻链激酶抑制剂的临床应用前景

目的：探索肌球蛋白轻链激酶（ ＭＬＣＫ） 抑制剂的作用机制及其与临床某些疾病的关系。方法：综述了国内外近年来对ＭＬＣＫ及其抑制剂的研究情况。结果：ＭＬＣＫ的活性与某些临床疾病的发生密切相关，而广泛存在多种植物中的ＭＬＣＫ抑制剂抑制ＭＬＣＫ的活性，具有抗癌，抗病等多种生理功能。结论：ＭＬＣＫ抑制剂的研究从一个方面揭示了某些药物的作用机理，将对体外筛选此类化合物提供一种有用的研究途径。     

急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响

为探讨急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响，选择对于心肌有特异性损害作用的异丙基肾上腺素（ＩＳＰ），造成大鼠实验性心肌损害的动物模型，动态观察心肌损害时肌球蛋白磷酸化系统的变化规律。研究结果表明，低剂量ＩＳＰ导致心肌匀浆中肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性下降，但心肌组织病理切片基本正常；高剂量注射ＩＳＰ，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性显著下降，与正常对照组和低剂量组相比，差异十分显著（Ｐ＜０．０１）。在病理形态学上大鼠心肌组织有多处较大的坏死灶。提示，在未发生明显的病理性变化前，心肌细胞内就已发生了一系列的代谢紊乱，如酶活性下降，心肌细胞的收缩功能发生改变；当心肌组织出现病理形态学改变时，细胞内酶活性显著下降，表明已由可逆性损害发展到不可逆的心肌坏死。     

复合膳食纤维对急性重症胰腺炎大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白和肌球蛋白轻链激酶的影响

目的探讨含复合膳食纤维（DFC）肠内营养（EN）对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肠黏膜屏障功能的影响。方法采用5%的牛黄胆酸钠（0.1 mL/100 mg）逆行注射入胰胆管法制备大鼠重症急性胰腺炎（SAP）模型。60只随机分为三组：SAP＋肠内营养乳剂（瑞素）组（A组）,SAP＋瑞素加复合膳食纤维（20 g/L）1组[可溶性膳食纤维（SDF）∶不可溶性膳食纤维（IDF）=2∶1,B组],SAP＋瑞素加膳食纤维（20 g/L）2组（SDF∶IDF=1∶2,C组）,于术后48 h处死动物,比较各组肠黏膜病理改变,紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的变化。结果 B组与C组大鼠肠黏膜损伤相对于A组较轻（P〈0.05）,C组大鼠肠黏膜损伤相对于B组较轻（P〈0.05）。B组与C组大鼠肠黏膜紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的分布表达相对于A组增高（P〈0.05）,且C组oc-cludin及ZO-1的分布和表达高于B组（P〈0.05）。而C组MLCK的分布和表达高于B组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论添加DFC的肠内营养在SAP大鼠肠黏膜屏障功能中起重要的保护作用,且适当加大不可溶性膳食纤维（IDF）的比例更有助于肠道黏膜屏障的保护,改善受损的肠屏障功能。这一作用可能是通过调控紧密连接蛋白occludin、ZO-1以及肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的分布和表达来实现的。     

光甘草定通过p38/MAPK通路调控动脉粥样硬化模型兔动脉MLCK表达

目的 研究光甘草定能否通过p38/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路影响动脉粥样硬化(AS)兔模型主动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达.方法 建立AS兔模型,将新西兰大耳白兔随机分为3组:正常对照组、高脂模型组、光甘草定组.正常对照组用正常饲料喂养;高脂模型组、光甘草定组用高脂饲料喂养,12周后分析血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)成分的变化,通过苏木精-伊红(HE) 染色分析兔动脉壁形态结构变化;免疫组织化学方法观察兔模型主动脉内膜MLCK的分布和表达;Western blot 分析兔动脉内膜MLCK水平及p38蛋白磷酸化变化.结果 成功建立AS兔模型,在给予高脂饮食12周以后,与正常对照组相比,血清中TC增高(P<0.05),TG有所增加,但差异无统计学意义;大体标本观察到大量兔动脉粥样斑块形成,HE染色显示高脂模型组兔主动脉血管内皮细胞间隙明显增大并伴有大量泡沫细胞,内膜增厚明显;免疫组化显示主动脉内膜MLCK表达量增多;Western blot显示动脉p38磷酸化水平增强(P<0.05).而加喂光甘草定后,血管内膜病变程度有所下降,MLCK表达有所下降,动脉p38磷酸化水平有所下降(P<0.05). 结论 光甘草定可能通过p38/MAPK通路影响AS兔模型主动脉内皮细胞MLCK的表达.     

抗肌球蛋白重链和轻链抗体在扩张型心肌病与冠心病鉴别诊断中的价值

目的：旨在探讨抗肌球蛋白重链和轻链抗体，在扩张型心肌病（ＤＣＭ）和冠心病中鉴别诊断的价值。方法；对２１例ＤＣＭ患者，１４例冠心病患者及正常健康组１８例，进行临床免疫学检测，应用ＥＬＩＳＡ法、免疫转印法对检测数值进行分析。结果显示：ＥＬＩＳＡ法ＤＣＭ患者阳性率４３．９％，冠心病组２８．６％，正常对照组均为阴性。免疫转印法２１例的ＤＣＭ患者阳性率４３．９％，冠心组２８．６％，正常对照组均为阴性。免疫转印法２１例的ＤＣＭ患者抗肌球蛋白重链抗体（２００ＫＤ）１０例阳性，阳性率４７．６％，冠心组抗肌球蛋白轻链抗体（２７．５ＫＤ）阳性４例，阳性率２８．６％，ＰＢＳ替代试验均为阴性。结论：抗心肌肌球蛋白重链和轻链的抗体检测有助于ＤＣＭ和冠心病的鉴别诊断     

健脾理气方对功能性消化不良大鼠十二指肠MLCK和PGE2-cAMP通路的影响

目的 观察健脾理气方对功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）模型大鼠十二指肠肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase,MLCK）和前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）-环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）通路的影响。方法 18只SD雄性大鼠采用数字表法随机分为正常组、模型组及中药治疗组（每组6只）,以夹尾应激法建立功能性消化不良动物模型,正常组及模型组大鼠均给予0.9%（质量分数）氯化钠注射液灌胃,中药治疗组给予健脾理气方水煎剂灌胃。取大鼠十二指肠组织进行HE染色,观察组织形态,同时应用定量聚合酶链式反应（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测MLCK和PGE2受体EP1、EP4 mRNA含量,酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法测定PGE2和cAMP的表达。结果 模型组大鼠十二指肠MLCK表达升高,PGE2、EP4、cAMP表达下降,EP1未见明显异常,健脾理气方治疗后可明显抑制MLCK表达,升高PGE2、EP4和cAMP表达。结论 健脾理气方可以抑制MLCK mRNA表达,同时上调PGE2-EP4-cAMP信号通路表达,这可能是健脾理气方治疗FD的机制之一。