健脾理气方对功能性消化不良大鼠促肾上腺皮质激素释放因子相关通路的影响

目的研究健脾理气方对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠中枢神经系统和外周十二指肠促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin releasingfactor,CRF)及CRF受体1(CRF-R1)的分布与表达的影响,探讨健脾理气方对FD治疗作用的可能机制。方法 36只雄性大鼠随机分为3组,并接受幼年碘乙酰胺灌胃联合夹尾应激刺激方法建立FD动物模型,其中正常组及模型组予生理盐水灌胃,治疗组予健脾理气方中药汤剂灌胃。分别采用Western Blot(WB)或免疫组化染色(IHC)分析下丘脑、脊髓及十二指肠中CRF的分布及表达,定量PCR(q PCR)检测十二指肠中CRF-R1的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠下丘脑、脊髓及十二指肠中CRF表达水平均明显升高(P 0. 01),十二指肠组织中CRF-R1 mRNA表达水平明显增加(P 0. 01);健脾理气方治疗组以上各指标均较模型组显著降低(P 0. 01,P 0. 01,P 0. 05,P 0. 01)。结论健脾理气方可能通过调节中枢神经系统及外周十二指肠CRF及CRF-R1的表达,从而对FD起到治疗作用。     

蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路对四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的抑制作用。方法:选用健康Wistar大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和秋水仙碱组。除正常组大鼠外,其余大鼠均给予自制高脂饲料饲养,每周两次皮下注射40%CCl₄花生油混合溶液,隔日灌胃给予30%乙醇,各给药组每日灌胃给药的同时给予正常组和模型组以等容积的蒸馏水,直至造模时间（共6周）结束后,乌拉坦麻醉大鼠并收集肝组织标本,比色法检测肝组织中羟脯氨酸（Hyp）的含量,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的分布情况,Western blot法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平。结果:与正常组相比,模型组Hyp含量明显升高（P<0.05）;各给药组的Hyp含量显著低于模型组,且肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平显著升高（P<0.05）。结论:蒿鳖养阴软坚方可以通过激活Nrf2/NQO1通路,上调Nrf2和NQO1的表达,降低肝组织中Hyp的含量,从而发挥抑制由四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的作用。     

柴胡疏肝散精简方对抑郁大鼠中缝核内5-羟色胺及色氨酸羟化酶2的影响

目的 观察柴胡疏肝散精简方对抑郁大鼠中缝核内5-羟色胺及色氨酸羟化酶2的影响,探讨柴胡疏肝散精简方可能的抗抑郁机制。方法 将40只SD雄性大鼠采用随机区组法分为空白组（control）、模型组（model）、氟西汀组（fluoxetine）、柴胡疏肝散精简方（Simplified Chaihu Shugan Powder,SCSP）组,每组10只,腹腔注射利血平建立大鼠抑郁模型,同时各药物组灌胃相应药物,连续14 d。通过行为学实验（糖水偏好实验、强迫游泳实验）评价大鼠抑郁状态,以高效液相色谱-电化学法（high performance liquid chromatography-electrochemical detector,HPLC-ECD）测定中缝核内5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）的含量,以反转录聚合酶链式反应法（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR）测定中缝核内色氨酸羟化酶2（tryptophan hydroxylase 2,TPH2）的含量。结果 与空白组比较,模型组体质量、体质量增量、糖水偏好指数明显降低（P<0.01）,游泳不动时间明显增加（P<0.01）,中缝核内TPH2、5-HT含量明显减少（P<0.01）。与模型组比较,氟西汀组及SCSP组体质量、体质量增量明显增加（P<0.01）,糖水偏好指数增加（P<0.05）,游泳不动时间明显减少（P<0.01）,中缝核内TPH2、5-HT含量明显增加（P<0.01）。结论 柴胡疏肝散精简方对利血平致抑郁模型大鼠具有一定的抗抑郁作用,与氟西汀效果相当其作用机制可能与增加中缝核内TPH2的含量,促进5-HT的生成有关。     

和胃理气方对功能性消化不良肝郁模型大鼠胃动素、P物质的影响

目的探讨功能性消化不良（FD）的发病机制以及和胃理气方对FD肝郁模型大鼠的作用。方法将48只Wistar大鼠随机分为生理盐水组、模型组、和胃理气方高、中、低剂量组和吗丁啉组,每组8只。除生理盐水组外,其余各组均采用＂夹尾激怒法＂制作肝郁型FD大鼠模型。造模后,生理盐水组与模型组灌服等体积生理盐水;和胃理气方高、中、低剂量组分别灌服不同剂量的和胃理气方药液,吗丁啉组灌服已配制的吗丁啉混悬液。观察各组大鼠血浆胃动素（MTL）、P物质（SP）的变化情况。结果经中药和胃理气方及西药吗丁啉治疗的模型大鼠血浆中MTL、SP的含量增高,且和胃理气方高剂量组血浆SP与吗丁啉组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论和胃理气方能增高模型大鼠血浆中MTL、SP的含量,可能是其治疗FD的作用机制之一。     

清毒汤对实验性重症肝损伤大鼠Bax蛋白及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 观察清毒汤对实验性重症肝损伤大鼠Bax、Bcl-2蛋白的表达以及肝细胞凋亡的影响,探讨该方对慢性重型肝炎（chronic severe hepatitis,CSH）大鼠肝细胞凋亡作用机制。方法 建立硫代乙酰胺（thioacetamide,TAA）致实验性大鼠重症肝损伤模型,给予清毒汤干预后,用原位细胞凋亡技术法检测大鼠肝细胞凋亡指数（apoptotic index,AI）、蛋白免疫印迹法检测大鼠肝组织中Bax、Bcl-2蛋白表达的水平。结果 与正常组比较,模型组AI显著增高（P<0.05）,清毒汤各组较模型组AI明显降低,（P<0.01或P<0.05）。清毒汤对实验性肝损伤大鼠模型Bax蛋白表达具有抑制作用（P<0.01）,对Bcl-2蛋白表达具有促进作用（P<0.01）,能够提高Bcl-2/Bax的比值（P<0.01）。结论 清毒汤可以调控Bax、Bcl-2蛋白表达量、降低AI,减轻肝细胞的凋亡和坏死。     

前列腺素E1对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜损伤的保护作用

目的 研究前列腺素E1对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜损伤的保护作用。方法 将45只Wistar雄性大鼠按随机数表法分为假手术组(Sham组)、梗阻性黄疸组 (OJ组)、前列腺E1组 (OJ+PGE1组),每组15只,采用胆总管双重结扎建立大鼠梗阻性黄疸模型, 术后第7天起,OJ+PGE1组应用前列腺素E1注射液0.1 μg·kg^-1·d^-1腹腔注射治疗14 d,其他两组腹腔注射相同剂量生理盐水。3组大鼠分别于术后第21天处死,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测和比较3组大鼠血清内毒素、D–乳酸、TNF-α、IL-6的水平,HE染色观察比较各组大鼠回肠绒毛高度、肠黏膜厚度,免疫组织化学染色和Western-blot检测回肠组织NF-κB蛋白的表达。结果 OJ+PGE1组及OJ组大鼠血浆内毒素、D–乳酸、TNF-α、IL-6的水平表达水平高于Sham组,但OJ+PGE1组增高的程度低于OJ组,差异有统计学意义（P<0.05）;与Sham组比较,OJ+PGE1组与OJ组大鼠回肠组织NF-κB蛋白表达明显升高,但OJ+PGE1组增高的程度低于OJ组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 前列腺素E1对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NF-κB的活化和降低炎性因子的表达有关。     

健脾清化方对5/6肾切除大鼠ATII/NADPH氧化应激通路的干预作用

目的: 研究中药复方健脾清化方对慢性肾衰竭肾纤维化大鼠ATII/NADPH氧化应激通路的影响,初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法: 用5/6肾切除(Platt法)建立慢性肾衰竭大鼠模型,分为假手术组、模型组、健脾清化方组和氯沙坦组。治疗60d后测定血清肌酐、尿素氮水平;测定各组肾组织中SOD和MDA水平;Western印迹检测各组肾组织AT1蛋白表达;RT-PCR检测各组肾组织p47phox mRNA表达。结果: 与假手术组比较,模型组大鼠血清肌酐和尿素氮均有明显上升,肾组织匀浆中SOD活性降低,MDA含量升高,肾组织中AT1蛋白表达显著上调,p47phox mRNA表达显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,健脾清化方组和氯沙坦组血清肌酐和尿素氮含量降低,肾组织匀浆中SOD活性上升,MDA含量下降,肾组织中AT1蛋白表达显著下调,p47phoxmRNA表达显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与氯沙坦组比较,健脾清化方组肾组织SOD活性明显升高,(P<0.05),肾组织中AT1蛋白及p47phox mRNA表达下降趋势明显,但差异无统计学意义(P>0.05),血清BUN,SCr水平和肾组织中MDA含量两组间比较差异也无统计学意义(P>0.05)。结论: 健脾清化方可通过降低ATII及NADPH氧化酶的表达,从而改善慢性肾衰竭大鼠的氧化应激反应,延缓肾纤维化进程。     

番茄红素通过上调Beclin1-Atg 5通路激活自噬发挥对脊髓损伤大鼠的神经保护作用

目的 探讨番茄红素对大鼠脊髓损伤后的神经保护机制。方法 27只（6~8周龄）雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组各9只。大鼠麻醉清醒后,实验组20 mg/kg番茄红素玉米油溶液灌胃,假手术组和模型组等体积玉米油灌胃,每天1次,共14 d。分别于术后1、3、7、14 d,采用斜板试验评估各组大鼠后肢运动功能变化;术后7 d,采用qRT-PCR和Western blot检测大鼠脊髓组织自噬相关因子Beclin1、Atg 5的表达水平。结果 斜板试验结果显示,术后1、3、7、14 d模型组和实验组大鼠后肢运动功能低于假手术组（P<0.05）;术后7、14 d,实验组较模型组大鼠后肢运动功能提高,差异有统计学意义（P<0.05）;实时荧光定量PCR（quantitative real-time,qRT-PCR）和蛋白质印迹法（western blot）结果显示,术后7 d模型组和实验组Beclin1、Atg 5的mRNA和蛋白质表达均较假手术组升高,实验组与模型组比较显著升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 番茄红素可能通过上调Beclin1-Atg 5通路激活自噬发挥对脊髓损伤大鼠的神经保护作用。     

枳术方对慢传输型便秘大鼠结肠5-HT4R及下游CaM-MLCK信号通路的影响

目的  通过观察枳术方对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织中5-羟色胺4受体(5-HT₄R)、钙调蛋白(CaM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响, 探讨其作用机制。方法  将大鼠随机分为正常组、模型组、枳术方组及阳性药(普芦卡必利)组。采用复方地芬诺酯片建立STC模型, 枳术方组随后灌胃枳术方, 阳性药组灌胃普芦卡必利。检测各组大鼠粪便含水量, 肠道炭末推进率, 结肠组织中5-HT₄R、CaM、MLCK的mRNA及蛋白相对表达水平。结果  与正常组相比, 模型组大鼠粪便含水量和炭末推进率明显降低(P < 0.05,P < 0.01), 结肠组织中5-HT₄R、CaM、MLCK的mRNA和蛋白相对表达水平也明显降低(P < 0.01)。与模型组相比, 枳术方组和阳性药组大鼠粪便含水量和炭末推进率明显升高(P < 0.05), 结肠组织中5-HT₄R、CaM、MLCK的mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P < 0.05,P < 0.01)。枳术方组与阳性药组比较, 各项数据差异无统计学意义(P>0.05)。结论  枳术方能改善STC大鼠的便秘症状, 可能与上调大鼠结肠组织中5-HT₄R表达并激活下游CaM-MLCK信号通路有关。      

远志汤对慢性脑低灌注大鼠认知功能及海马凋亡蛋白的影响

目的 观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力及海马凋亡蛋白的影响。方法 采用永久结扎大鼠双侧颈总动脉法造模。将42只SD大鼠采用数字表法随机分为正常对照组,模型组,假手术组,远志汤高、中、低剂量组[20、10、5 g/（kg·d）]及阳性药物对照组[盐酸多奈哌齐0.52 mg/（kg·d）],每组各6只,分别灌胃给药,1次/d,给药4周。通过Morris水迷宫定位航行实验及空间探索实验,观察远志汤对慢性脑低灌注大鼠空间学习记忆能力的影响;通过免疫荧光染色法检测远志汤对慢性脑低灌注大鼠海马凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白抗体（Bcl-2 associated X protein,Bax）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）表达的影响。结果 模型组大鼠较对照组和假手术组的逃避潜伏期和搜索距离明显延长（P<0.01）,在原平台所在象限的搜索时间明显缩短（P<0.01）。而远志汤各剂量干预均可明显缩短大鼠的逃避潜伏期和搜索距离（P<0.01）,并延长在原平台所在象限的搜索时间（P<0.01）。模型组大鼠海马Bax和Caspase-3的表达较对照组和假手术组增加,差异有统计学意义（P<0.05）,Bcl-2则显著下降,差异有统计学意义（P<0.01）。而远志汤高、中剂量组干预均可明显减少Bax和Caspase-3的表达（P<0.05）,增加Bcl-2的表达（P<0.05）。结论 远志汤可能通过调节海马凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达以改善慢性脑低灌注大鼠的认知功能。     

SIRT1-cAMP在白藜芦醇改善小鼠卵巢储备中的作用

 目的 探索组蛋白去乙酰化酶（Sirtuin1,SIRT1）激动剂对氧化应激损伤卵巢功能低下小鼠卵巢储备影响及SIRT1-cAMP通路的可能作用。方法 通过SIRT1激动剂白藜芦醇（resveratrol,Res）及H₂O₂干预人卵巢黄素化颗粒细胞,流式细胞学检测颗粒细胞凋亡及线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）,ELISA测定颗粒细胞雌激素分泌能力,Western blot及RT-PCR检测颗粒细胞功能性受体及雌激素合成相关基因表达;最后通过Res预处理3-硝基丙酸（3-nitropropionic acid,3-NPA）诱导建立的氧化应激损伤早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency,POI）模型小鼠,从动情周期、卵巢指数、激素水平、卵泡计数等方面评估Res对卵巢功能的保护作用,PCR检测小鼠卵巢组织环腺甘酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）信号通路关键基因表达。结果 Res可以通过SIRT1改善氧化应激损伤人颗粒细胞雌激素合成能力、功能性受体表达及雌激素合成相关基因表达,改善氧化应激损伤POI小鼠卵巢功能。卵巢组织内cAMP信号通路关键基因EPAC、RAP1b、RAP1a、PLCb3、CREB1、CAMK2α及SIRT1表达升高。结论 Res可以改善氧化应激损伤小鼠卵巢储备功能,SIRT1-cAMP信号通路可能是其潜在作用机制,两者之间可能存在正反馈作用。     

肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

目的：基于肝癌细胞（肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞）对PGE2的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法：体外培养肝细胞癌细胞株（Hep3B，HuH7）和胆管上皮癌细胞株（SG231，HuCCT1）。分别给予不同浓度的外源性PGE2处理，以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率：以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体（EP1、EP2、EP3和EP4）的mRNA表达情况；采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验．于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果：WST-1细胞增殖实验结果显示PGE1可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长，但对胆管上皮癌细胞（SG231、HuCCT1细胞）则表现为生长抑制作用；RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达；激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆，胞膜定位。而且部分在胞核也有表达。其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论：Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1，4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体。且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性反应中前列腺素E2/前列腺素E受体4调控高迁移率族蛋白1的机制

目的：探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠腹腔巨 噬细胞高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)表达的影响及其可能的机制。 方法：运用常规 方法提取、培养小鼠腹腔巨噬细胞;采用LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞构建炎症模型;使用PGE2和前列腺素E受体 (prostaglandin E receptor,EP)激动剂 、RNAi技术下调巨噬细胞EP4受体表达、抑制性表达DN.CREB质粒处理LPS诱导的 小鼠腹腔巨噬细胞,并通过Western印迹测定HMGB1表达水平。结果：与单纯应用LPS处理巨噬细胞比较,PGE2联合 LPS共孵育小鼠腹腔巨噬细胞24 h后,HMGB1蛋白的表达水平明显上升,且EP4受体激动剂联合LPS处理小鼠腹腔巨 噬细胞24 h后HMGB1蛋白的表达亦增加(均P<0.05);与PGE2+LPS联合处理比较,应用RNAi技术可下调小鼠腹腔巨噬 细胞EP4受体表达,再给予外源性PGE2加LPS处理,HMGB1水平下降(P<0.05);使用DN.CREB质粒抑制cAMP结合元 件结合蛋白(cAMP respondse element bound protein,CREB)后再加上EP4受体激动剂联合LPS处理,与EP4受体激动剂+ LPS处理比较,HMGB1水平差异无统计学意义(P>0.05);与单纯应用LPS 比较,EP4受体激动剂联合LPS处理小鼠腹 腔巨噬细胞可上调表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,亦 称Akt)thr308磷酸化水平(均P<0.05);使用EGFR抑制剂预处理细胞后,Akt thr308磷酸化水平及HMGB1表达均降低(均 P<0.05);采用Akt特异性抑制剂预处理细胞后,HMGB1表达降低(P<0.05)。结论：PGE2可以通过EP4受体上调LPS诱 导的小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1的表达,且这一作用与激活EGFR/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路有关。     

PGE2通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号通路上调SnoN的表达而促进CCLP1细胞的增殖

目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力影响的作用机制。方法:用PGE2、EP1～4 4种受体激动剂、AC激动剂Forskolin、PKA抑制剂H89、cAMP拟似物db-cAMP处理CCLP1细胞,通过RT-PCR、Western blot、WST等实验检测SnoN mRNA、SnoN蛋白等表达水平、CREB蛋白磷酸化水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化。结果:10μmol/L PGE2处理CCLP1细胞24 h后,SnoN mRNA的表达水平与对照组相比上升了22.5%(P<0.01),SnoN蛋白的表达水平上升了35.6%(P<0.05);10μmol/L EP受体激动剂处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中以EP2受体激动剂的作用最明显,上升了64.9%(P<0.05),细胞增殖能力上升了26.5%;10μmol/L AC激动剂Forskolin处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平及CREB蛋白的磷酸化水平较对照组分别上升了25.1%、71.3%(P<0.05),细胞增殖能力也上升了...     

前列腺素受体4 与肾脏疾病相关性研究进展

前列腺素受体4（prostaglandin receptor 4,EP4）是内源性脂质介质前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）的作用受体,属G-蛋白偶联受体（G protein coupled receptor,GPCR）的一种。EP4 在体内分布广泛,几乎在所有组织、脏器表达。在肾脏,肾小球旁颗粒细胞、肾小球上皮细胞、远曲小管和皮质集合管上皮细胞均有EP4 的高度表达。因EP4 可同时与Gs、Gi 蛋白途径偶联,与血管张力、氧化应激、炎症、细胞增殖等生理功能和病理生理过程密切相关。目前通过对全身性及肾组织特异性EP4 敲除小鼠模型的研究和选择性EP4 激动剂/拮抗剂的作用研究,证明EP4 在肾脏发挥重要作用,其PGE2-EP4 信号通路同时能产生保护和不良的影响。该 文将EP4 与肾脏疾病,包括肾性高血压、肾缺血/ 再灌注损伤、肾源性尿崩症、肾小球肾炎、肾小球硬化、慢性肾脏病及常染色体显性遗传性多囊肾病发生发展的相关性进行分析和总结。     

Sdccag3通过Wnt通路对高脂血症大鼠种植体骨结合的影响

目的 探讨Sdccag3在高脂环境中通过Wnt信号通路影响骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂成骨分化以及高脂血症大鼠种植体周围骨结合的能力。 方法 构建高脂血症大鼠模型以及高脂环境培养BMSCs并进行成骨诱导,慢病毒载体过表达/沉默结肠癌抗原3(Sdccag3)的表达,采用RT-PCR、Western blotting、Micro-CT以及硬组织切片HE染色、油红O染色、免疫荧光染色等方法检测高脂环境中Sdccag3对大鼠骨代谢以及BMSCs分化平衡的影响。 结果 高脂成骨诱导BMSCs后过表达Sdccag3,下调成脂分化指标脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPAR-γ),并上调Wnt信号通路标志基因低密度脂蛋白受体相关蛋白 5(LRP5)、LRP6、β-catenin及Wnt5a、Wnt5b,上调成骨分化指标碱性磷酸酶(ALP)、 Runt相关的转录因子2(Runx2);在高脂血症大鼠种植体周围骨组织中,过表达Sdccag3可上调Wnt信号通路标志基因并抑制周围脂形成,沉默LRP5会下调Sdccag3、成骨分化指标,上调成脂分化指标,与沉默Sdccag3表达一致。 结论 高脂血症促进种植体周围脂肪形成并抑制Sdccag3表达;过表达Sdccag3抑制BMSCs成脂分化并降低高脂血症大鼠种植体周围的成脂,促进成骨,促进Wnt信号通路标志基因表达。     

PGE2对LPS诱导小鼠骨髓源性树突细胞成熟及EP4受体表达影响

目的：观察不同浓度前列腺素E2(PGE2)刺激对脂多糖( LPS)诱导小鼠骨髓源性树突细胞( DCs)成熟及EP4受体表达的影响。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子( rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4( rmIL-4)刺激小鼠骨髓源细胞,诱导生成DCs;经LPS(100 ng/ml)诱导成熟后,用不同浓度 PGE2(0．625、1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)刺激 DCs 24 h,流式细胞术检测 DCs 表型 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达和抗原摄取功能,荧光间标法检测小鼠骨髓源DCs细胞膜上EP4的表达,以平均荧光强度表示表达的高低;MTT法检测经PGE2及LPS诱导成熟的DCs对T细胞增殖的作用。结果流式细胞术结果显示 PGE2(2．5、5、10 nmol/L)能明显上调 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达;PGE2(1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)能明显抑制DCs的抗原摄取功能;MTT法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)刺激DCs能促进T细胞增殖的作用;荧光间标法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)明显升高DCs细胞膜上EP4表达。结论 PGE2可以调节DCs功能,该作用可能与其调节EP4受体表达相关。     

前列腺素E2促骨髓来源内皮前体细胞分化的机制

目的：探讨前列腺素E2在调节小鼠骨髓来源内皮前体细胞分化、增强血管新生潜能中的作用及其相关分子机制。方法：贴壁法获得C57BL/6J小鼠后肢股骨和胫骨骨髓来源的内皮前体细胞（bone marrow derived progenitor cells, BMPCs）, 免疫荧光染色法鉴定BMPCs。用前列腺素E2（prostaglandin E2, PGE2）处理该群细胞,通过定量PCR、Western blot等分子生物学方法检测BMPCs中内皮前体细胞标志物以及内皮细胞标志物的表达情况,体外成血管实验检验BMPCs血管新生调节能力。利用PGE2及其受体亚型2、4（EP2、EP4）阻断剂处理BMPCs,定量PCR和Western blot方法分析Krüppel样转录因子2（Krüppel like factor 2,KLF2）的表达情况。结果：BMPCs表面表达内皮前体细胞标志物c kit以及内皮细胞（endothelial cells,ECs）标志物血管性血友病因子（von Willebrand factor,vWF）、血管内皮钙黏素（vascular endothelial cadherin, VE-cadherin）。1 μmol/L PGE2显著促进BMPCs中与成熟ECs相关的分子标记物血小板内皮细胞黏附分子（platelet endothelial cell adhesion molecule-1 ,PECAM-1/CD31）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的表达,上调倍数2倍,且BMPCs形成新血管的能力也明显增强。在此过程中转录因子KLF2的表达升高至原有水平的2倍以上,利用PGE2受体阻断剂处理BMPCs,发现EP4受体阻断剂处理BMPCs后,KLF2表达下降。结论：PGE2通过EP4受体作用于BMPCs,上调KLF2表达,促进BMPCs向ECs方向分化,从而增强其血管新生潜能。     

前列腺素E2对大鼠巨噬细胞株NR8383 合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移 的影响

目的探究前列腺素E2（PGE2）对大鼠巨噬细胞株NR8383细胞合成血管内皮生长因子（VEGF）的调控作用以及对人脐静 脉内皮细胞（HUVEC）趋化成管的影响。方法分别采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2+10 nmol/L EP2受体抑 制剂AH6809+10 nmol/L EP4受体抑制剂AH23848 处理的NR8383 细胞作为各实验组,选择未经PGE2以及其特异性受体抑制 剂处理的NR8383 细胞作为对照组,采用Western blot 和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及mRNA的表达水 平;收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激HUVECs,运用TRANSWELL 小室、Matrigel 胶细胞成管实验等实验方法, 观察PGE2调控巨噬细胞对HUVEC 迁移效应和成管能力的影响。结果随着NR8383 细胞培养液中加入PGE2浓度增高,其 VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高（P<0.05）;0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2处理过的NR8383细胞培养上清液 可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积,形成小管面积随着PGE2处理浓度的增加而增加（P<0.05）;HUVECs的迁移运动也 随着PGE2处理浓度的升高不同程度的增强,HUVECs趋化的数量显著升高（P<0.05）;研究发现PGE2特异性的EP2/EP4 受体拮 抗剂AH6809/AH23848,可以显著抑制PGE2 增强NR8383 细胞内VEGF mRNAs 表达的作用并且也显著抑制PGE2 增强 NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应（P<0.05）。结论PGE2可以通过作用NR8383细胞表面对应的EP2/EP4受体 调控VEGF的合成,促进HUVEC趋化和成管效应。