人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞来源的实验研究

目的观察人舌癌裸鼠皮下移植瘤模型中肿瘤新生血管内皮细胞的来源。方法通过皮下移植人舌癌Tca8113-M1细胞建立人舌癌裸鼠移植肿瘤模型,并于肿瘤生长至直径1cm时切除肿瘤,对移植瘤进行病理组织学观察,利用免疫组织化学方法检测移植瘤内新生血管内皮细胞的来源,抗体为鼠抗人单克隆抗体CD34和大鼠抗小鼠单克隆抗体CD34;并进行微血管密度（microvessel density,MVD）计数及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达检测。结果右腋窝皮下接种人舌癌Tca8113-M1细胞2周后,6只裸鼠的肿瘤直径都达到1cm以上,切片HE染色可见肿瘤组织病理形态为鳞状上皮细胞癌,MVD平均值为10．72±2．12,其中肿瘤新生血管内皮细胞大鼠抗小鼠CD34免疫组化结果是阳性,而鼠抗人CD34阴性。VEGF在6例移植瘤标本中均阳性表达,平均阳性率为（67±5．6）％。结论人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞主要来源于宿主裸鼠,并且可能与肿瘤细胞分泌的VFGE诱导有关。     

干扰CD151基因表达对裸鼠肺腺癌A549细胞肺转移的实验

目的 探讨RNA干扰抑制CD151基因表达对肺腺癌A549细胞肺转移的影响.方法 将构建的RNA干扰抑制CD151基因表达的稳转细胞A549-sh RNA、A549-sh NC、A549-Blank 3组细胞通过尾静脉注射入裸鼠BALB/c-nu, 30 d后解剖, 通过肉眼和HE染色后观察肺转移情况.结果 A549-sh RNA、A549-sh NC、A549-Blank各组裸鼠肺转移率及肺组织上的转移病灶数依次为:62.5% (5/8) 与 (4.7±1.5) , 100% (7/7) 与 (9.3±0.8) , 75% (6/8) 与 (8.2±1.5) .转移病灶数, A549-sh RNA与A549-sh NC (P=0.000) , A549-sh RNA与A549-Blank (P=0.006) 比较, 差异有统计学意义.结论 RNA干扰抑制CD151基因表达能减少A549细胞裸鼠的肺转移.CD151可能成为抑制NSCLC侵袭和转移的潜在的治疗靶点之一.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠人肺癌细胞皮下移植瘤的抑制作用

目的 探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸(HPSE ASODN)对人肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的HPSE ASODN,以阳离子脂质体Lipofectamine包埋后转染人肺癌A549细胞进行培养.实验分ASODN组、脂质体组和对照组,采用Western-blotting检测各组A549细胞HPSE蛋白的表达;将反义寡核苷酸(ASODN)转染成功的人肺癌A549细胞注射于裸鼠皮下复制移植瘤模型(ASODN组),绘制移植瘤生长曲线,以免疫组织化学方法检测移植瘤肿瘤微血管密度(MVD),比较3组间肿瘤体积和MVD的差异.结果 与对照组和脂质体组比较,ASODN组A549细胞HPSE蛋白的表达受到明显抑制,差异有统计学意义(P ＜0.01);ASODN组裸鼠成瘤时间晚,移植瘤体积明显小于脂质体组和对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).ASODN组、脂质体组和对照组移植瘤的MVD计数分别为(13.5±1.8)、(24.3±2.5)和(24.7±2.6),与脂质体组、对照组比较,ASODN组MVD计数明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HPSE ASODN明显抑制棵鼠人肺癌移植瘤的生长和血管生成,有希望成为一种有效的肺癌基因治疗方法.     

叶酰聚谷氨酸合成酶基因在甲氨蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株中的表达差异

目的 研究不同甲氨蝶呤(MTX)对映体耐药与叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)基因水平表达的关系.方法 用大剂量冲击递增结合低剂量持续诱导法诱导获得两组含不同构型15～55μmol/L浓度的MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药的细胞系,细胞为人源非小细胞性肺癌A549细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各细胞系的耐药指数;用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)方法检测这两组各细胞系中胞质型FPGS(cFPGS)和线粒体型FPGS(mFPGS)基因的相对含量.结果 D-(-)-MTX耐药细胞组耐药指数高于L-(+)-MTX耐药细胞组(32.7±9.3比11.5±2.9,P＜0.05),L-(+)-MTX/A549细胞系耐药指数均在5～15之间,为中度耐药,而D-(-)-MTX/A549细胞系耐药指数均＞15,为高度耐药.在D-(-)-MTX和L-(+)-MTX两组耐药细胞系中,mFPGS表达水平仪在MTX为15 μmol/L时差异无统计学意义,在MTX其他各浓度点两组间差异均有统计学意义(25 μmol/L:2.3±0.9比1.3±0.7,35 μnol/L:2.6±0.3比1.1±0.9,45 μmol/L:1.4±0.8比1.0±1.0,55 μmol/L;1.0±0.2比0.2±0.1均P＜0.05);cFPGS表达水平在MTX为15μmol/L时两组间差异也同样无统计学意义,在25～55 μmol/L浓度区间内D-(-)-MTX/A549细胞系的cFPGS表达与耐药指数呈现高度负相关(r=-0.95,P＜0.05).结论 在A549细胞中MTX对映体初次剂量15 μmol/L冲击法诱导获得的对映体耐药与再次接受更大剂量(≥25 μmol/L)MTX诱导获得耐药的机制不同,D-(-)-MTX/A549耐药细胞系表现为更高的耐药性,提示临床使用MTX时应考虑该药物存在手性对映体问题.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between the resistance of methotrexate (MTX) enantiomer and the gene expression levels of folylpolyglutamate synthetase (FPGS).Methods The cell lines of MTX enantiomer resistance from 15 -55 μmol/L were obtained when the A549 cell lines were exposed intermittently and progressively to an incremental dose of each MTX enantiomer.The resistant index of MTX resistance cell lines were detected by MTT.The gene expressions of FPGS in cytoplasm and mitochondria were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR).Results The resistance indice of D-( - )-MTX resistant cell lines were higher than those of L-( + )-MTX resistant cells (32.7±9.3 vs 11.5 ±2.9,P ＜0.05).The resistant indice of L-( + )-MTX /A549 were from 5 to 15,which mean the middle resistance.The resistant indice of D-( - )-MTX/A549 were more than 15,which mean the severe resistance.The expression of mFPGS had difference between resistant cell lines of L-( + )and D-( - )-MTX except at 15 μmol/L MTX (at 25 μmol/L,1.3 ±0.7 vs.2.3 ±0.9;at 35 μmol/L,1.1 ±0.9 vs.2.6±0.3;at 45 μmol/L,1.0±1.0 vs.1.4±0.8;at 55 μmol/L,0.2±0.1 vs.1.0±0.2;all P＜0.05).The expressions of cFPGS had no difference between resistant cell lines of L-( + ) and D-( - )-MTX at 15 μmol/L MTX,while at 25 -55 μmol/L,the cFPGS levels and resistance indice of D-( - )-MTX/A549 resistant cell lines showed a highly negative correlation ( r = - 0.95,P＜0.05 ).Conclusion There may be a different mechanism between the first time treatment with 15 μmol/L dosage and the continual treatment with more than 25 μmol/L dosage in A549 cell lines.There had higher resistant index in D-( - )-MTX/A549 cell line than in L-( + )-MTX/A549 cell line.The results indicated that the difference in chirality should be considered in clinical treatment with MTX.     

无血清培养联合多柔比星诱导A549细胞耐药

目的： 探索快速建立肺癌耐药细胞模型的新方法,并探讨肺癌耐药和干细胞的相关性。方法： 应用无血清培养联合药物筛选法建立肺腺癌细胞耐药株A549/ADM;MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、ABCB1和ABCG2的表达水平及细胞内多柔比星的浓度;细胞免疫荧光及流式细胞仪通过特异性表面抗原标记法（CD133）检测肿瘤干细胞含量。裸鼠皮下种植瘤试验评估A549/ADM的致瘤性。结果： A549细胞经无血清培养可见细胞球形成;A549/ADM细胞对多柔比星、长春新碱、紫杉醇均产生了耐药,其耐药指数分别为A549的13.167,12.86,3.4倍;与亲代A549相比, 耐药株A549/ADM S期细胞比例由(45.76±1.41)% 降低至(23.33±1.32)%,细胞凋亡百分率由(58.23±0.82)% 减少至(16.49±0.77)%;耐药株A549/ADM中ABCB1和ABCG2的表达水平明显增高(P<0.05),且细胞内多柔比星浓度明显低于A549细胞; CD133细胞在A549/ADM和A549中的比例分别为(6.2±0.7)％和(1.9±0.2)％(P<0.05),免疫荧光检测A549/ADM细胞CD133表达水平较A549细胞高;A549/ADM具有高致瘤性。结论： 无血清培养联合多柔比星诱导能高效富集肺癌干细胞,成功建立了人肺腺癌A549/ADM多药耐药细胞模型。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 建立人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,测定荷人肺癌裸鼠移植瘤的大小和重量,应用免疫组化SP法检测移植瘤组织中PCNA、VEGF、CD31的表达.结果 ADFMChR对肺癌移植瘤生长有显著抑制作用(P<0.01),5.0、10.0、20.0 mg/(kg·bw)的ADFMChR对移植瘤的瘤重抑制率分别为42.98%,82.31%和89.91%.免疫组化检测结果表明:ADFMChR具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤细胞PCNA、VEGF及CD31蛋白表达作用.结论 ADFMChR抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长作用与其抑制移植瘤细胞PCNA、VEGF以及CD31的蛋白表达相关.     

氨甲喋呤对映体药物对A549人肺腺癌细胞株增殖抑制作用及诱导凋亡作用

目的 探讨氨甲喋呤对映体[(+)MTX,(-)MTX]对A549细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 采用培养的A549细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期;DNA梯度电泳检测凋亡。结果 在0.1~150 μmol·L^-1范围内,(+)MTX和(-)MTX作用于A549细胞24,48,72 h,均抑制细胞A549增值,但抑制强度为(+)MTX>(-)MTX,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度(+)MTX和(-)MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变;用10 μmol·L^-1的(+)MTX和(-)MTX作用A549细胞48 h后,PI单染流式细胞术检测A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体干扰A549细胞DNA合成;DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中(+)MTX最为明显。结论 (+)MTX和(-)MTX对A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗A549细胞增殖作用明显强于(-)MTX。     

CA916798基因通过PI3K/AKT通路参与肺癌顺铂耐药

目的在前期体外研究的基础上,建立裸鼠移植瘤模型,观察阻断PI3K/AKT通路对肺腺癌细胞A549及多药耐药肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798基因mRNA表达的影响。方法建立A549、A549/CDDP裸鼠移植瘤模型,以LY294002作用A549组和A549/CDDP组后,比较各组移植瘤生长情况,HE染色观察组织结构变化,实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中CA916798基因mRNA的表达水平。结果成功建立裸鼠移植瘤模型,以LY294002分别阻断A549、A549/CDDP组裸鼠移植瘤细胞的PI3K/AKT通路后,移植瘤体积明显缩小,CA916798基因的表达明显下调(P<0.05)。结论抑制PI3K/AKT通路能够明显抑制肺腺癌细胞A549及A549/CDDP的恶性增殖。     

氨甲蝶呤获得性耐药和DNA甲基化的相关性研究

目的 研究氨甲蝶呤(MTX)获得性耐药与DNA甲基化的相关性.方法 采用浓度递增结合低剂量持续诱导的方法 诱导细胞发生MTX耐药.通过高效毛细管法检测非小细胞肺癌A549细胞和非小细胞肺癌A549/MTX细胞内整体DNA甲基化水平.结果 MTT法分析显示A549细胞对MTX发生耐药.A549细胞发生MTX耐药时,其甲基化水平明显降低,且随着MTX耐药浓度增加,耐药细胞株DNA甲基化程度依次降低.A549/MTX细胞和A549细胞整体DNA甲基化水平差异有统计学意义.结论 MTX获得性耐药引起细胞内整体DNA甲基化水平降低,MTX获得性耐药机制可能与DNA甲基化相关.     

耐药胃癌裸鼠移植瘤中血管生成与耐药机制的关系

目的探讨氟尿嘧啶耐药的人胃癌细胞裸鼠移植瘤血管生成与肿瘤耐药产生机制的关系.方法建立裸鼠移植瘤模型;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA 的表达;免疫组织化学方法检测裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达;免疫组织化学方法进行血管内皮细胞染色,计算肿瘤组织内微血管密度.结果成功建立耐药和亲本两组裸鼠移植瘤.与其亲本细胞裸鼠移植瘤比较,耐药细胞裸鼠移植瘤组织VEGFmRNA和蛋白质表达以及微血管密度都显著减少(P<0.05).结论胃癌的耐药机制可能与血管生成减少有关.     

CD133~+A549肺癌细胞的分选及其肿瘤干细胞和间质化相关基因的表达

目的 分离CD133+A549细胞并对其肿瘤干细胞和上皮间质转变(EMT)特性进行初步研究.方法 采用免疫磁珠法分离并鉴定A549细胞,Real-Time PCR法和Western blotting法鉴定分离的细胞.Real-Time PCR法测定CD133+ A549和CD133-A549细胞中肿瘤干细胞标志物(CXCR4、Oct4、CD44、Bmi1、EpCam)和EMT标志物(E-Cadherin和Zeb1)mRNA的表达.分选后的CD133+A549和CD133-A549细胞经不同浓度(0、0.25、0.5、1.0μg/mL)阿霉素处理72 h,采用细胞增殖实验检测细胞的相对存活率.结果 经CD133微小磁珠分离后、成功获得CD133+ A549和CD133-A549细胞,CD133+ A549细胞的CD133表达明显高于CD133-A549细胞.Real-Time PCR检测结果显示,CD133+ A549细胞中Oct4、CD44、Bmi1、EpCam mRNA的相对表达量均显著高于CD133 - A549细胞[(1±0.16)vs(0.66±0.12)、(1±0.07)vs(0.48±0.04)、(1±0.03)vs(0.49±0.06)以及(1±0.14)vs(0.38 ±0.12)(P＜0.05)],但CXCR4 mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义[(1±0.13)vs(0.73±0.14),P＞0.05]; CD133+A549细胞中Zeb1 mRNA的相对表达量显著高于CD133- A549细胞[(1 ±0.09)vs(0.39±0.05),P＜0.05],但E-Cadherin mRNA的相对表达量显著低于CD133-A549细胞[(1±0.02)vs(4.98±0.04),P＜0.05].细胞增殖实验结果显示,采用0.5和1.0μg/mL阿霉素处理后,CD133+ A549细胞的相对存活率均显著高于CD133-A549细胞,差异有统计学意义[(85±9.4)％vs(67±13.1)％,P＜0.05;(80±14.9)％vs(56±6.3)％,P＜0.01].结论 采用免疫磁珠分离法可成功分离CD133+A549和CD133-A549细胞;CD133+ A549细胞中有其他肿瘤干细胞标志物的表达,并表现出EMT特性.CD133可能是肺癌肿瘤于细胞和EMT特征的标志物.     

小分子 NEK2 干扰 RNA 对肺癌细胞耐药的研 究简

目的 探讨小分子NEK2干扰RNA （siRNA-NEK2）逆转人肺癌耐药细胞（A549/DDP）耐药性的研究.方法 应用Real-time PCR法及Western blot法验证NEK2基因在人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）细胞系呈现高表达;并采用脂质体为转染介质,将NEK2小片段RNA导入A549/DDP细胞沉默NEK2基因;应用MTT法观察顺铂、阿霉素对沉默NEK2基因后的A549/DDP细胞的细胞毒活性变化.结果 NEK2-mRNA、NEK2蛋白在A549/DDP细胞系表达水平均显著高于A549细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）;顺铂、阿霉素对A549/DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）分别是（53.08±0.56）、（8.09±0.31） μg/mL,对siRNA-control A549/DDP细胞的IC50分别是（53.09±0.78）、（8.10±0.98） μg/mL,而对siRNA-NEK2 A549/DDP细胞的1C50有显著下降,其值分别是（18.59±0.10）、（2.30±0.14） μg/mL,两组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 小分子NEK2干扰RNA沉默NEK2可以提高耐药的肺癌细胞对化疗药物的敏感性.NEK2可能成为逆转肺癌耐药的一个新的靶点.     

吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的实验研究

目的：研究吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的影响。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和培养肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株,待24 h、48 h、72 h后采用不同浓度的吉非替尼、奥曲肽、顺铂、5-FU进行单用和联用处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析药物的增效效果。结果联合用药对肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株可起到协同抑制作用,与单独用药组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。联合用药组的肺癌敏感 A549、耐药A549/GR 细胞株培育48 h 后的IC50=（5.3±0.5）、（5.4±0.8） mg/L,单药组IC50=（20.1±1.2）、（20.3±1.4） mg/L,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组、单药组、联合用药组诱导肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株后凋亡率差异明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论吉非替尼联合用药对细胞的增生具有协同抑制作用,对其他肺癌的治疗也具有一定的效果。     

急性白血病多药耐药相关蛋白及P糖蛋白表达与临床耐药的关系

OBJECTIVE: To investigate the relevance between the expression of P-170 and MRP and clinical drug resistance in acute leukemia. METHODS: The expression of P-170 and MRP in mononuclear cells of bone marrows was analyzed by the immunohistochemical technique in 72 acute leukemia patients. RESULTS: The expression of P-170 was positive in 46 and negative in 26 of the 72 post-chemotherapy acute leukemia patients. The therapeutic effect of the P-170 positive expression patients was significantly poorer than that of the negative expression patients (P < 0.01). The expression of MRP was positive in 39 and negative in 33 of the 72 post-chemotherapy acute leukemia patients. The therapeutic effect of the MRP positive expression patients was significantly poorer than that in the negative expression patients (P < 0.01). The expression of P-170 and MRP had a significant concordance (Kappa = 0.427, P < 0.01). The sensitivity of P-170 and MRP which were analyzed simultaneously was 97.5%, which was higher than that of P-170 (90%) or MRP (77.5%) analyzed respectively in drug resistance patients. CONCLUSION: The expression of P-170 and/or MRP was significantly related with drug resistance in clinical chemotherapy. The therapeutic effect was significantly poorer in P-170 and/or MRP positive expression patients than that in negative expression patients. These data suggest that P-170 and MRP analyzed simultaneously can improve the value of diagnosis and prognosis in patients with drug resistance leukemia.     

微血管密度与宫颈鳞癌组织微淋巴管生成、癌细胞增殖、浸润转移及预后的关系

目的探讨宫颈鳞癌(SCC)局部肿瘤血管生成及其临床意义。方法应用免疫组化技术检测28例正常宫颈上皮(NCE),36例宫颈上皮内瘤变(CIN)和68例宫颈鳞癌组织局部微血管密度MVD(CD34标记)、细胞增殖指数PI(MIB-1标记)和微淋巴管密度LMVD(VEGFR-3标记)。结果 CD34标记的MVD在NCE、CIN及SCC组分别为(6.3±2.9)、(18.0±4.7)及(58.2±19.6)条。从NCE到CIN再到SCC,MVD显著升高(P<0.01)。在CIN中,MVD表达与PI显著正相关(r=0.373,P=0.025),而与LMVD无显著相关性(r=0.138,P=0.421)。在SCC中,MVD表达分别与PI及LMVD均无显著相关性(PI:r=-0.033,P=0.790;LMVD:r=0.114,P=0.354)。MVD在SCC组表达与间质浸润深度密切相关(P<0.01),而与患者年龄、FIGO分期、组织学分级、盆腔淋巴结转移、脉管浸润及生存率无关(P>0.05)。宫颈鳞癌突破深肌层间质浸润者MVD显著高于未突破深肌层间质浸润者(P<0.01)。结论 MVD表达上调可能促进宫颈异型上皮细胞增殖及宫颈鳞癌细胞浸润转移。     

外泌体对A549细胞增殖、凋亡及迁移功能的影响

目的 观察肺癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用多步超速离心法从肺癌A549细胞的培养液上清中分离出肺癌细胞来源的外泌体,并通过透射电子显微镜观察外泌体形态,利用Western blot 检测其表面跨膜蛋白的表达.采用 MTT 法、ELISA法分别检测外泌体对A549细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell法了解外泌体对A549细胞迁移能力的影响.结果 观察所提取的外泌体大小均匀,形态规则,多为圆形及椭圆形膜性囊泡盘状结构,直径30~100 nm,其外周包被被膜,表面具有丰富的四次跨膜蛋白CD9、CD63等.MTT法提示外泌体对A549细胞具有促增殖作用,且其影响具有时间和剂量依赖特征(P<0.05),ELISA法检测用外泌体共培育后的A549细胞的凋亡情况,结果显示外泌体在一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡(F=365.496,P=0.000).Transwell法观察显示,外泌体具有促进A549细胞迁移运动的作用(F=252.005,P=0.000).结论 肺癌细胞来源的外泌体能促进A549细胞增殖、减少其凋亡、增强其迁移运动的能力.     

Survivin反义寡核苷酸逆转顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡耐受作用

目的 探讨survivin反义寡核苷酸逆转人肺腺癌细胞对顺铂诱导的细胞凋亡耐受的效应.方法 常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的survivin反义寡核苷酸(ASODN)体外转染细胞.采用二苯胺反应法(DPA)测定DNA片段化、激酶法检测Caspase-3酶活性及流式细胞术检测细胞凋亡率(AI),评价细胞凋亡程度.采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率,计算半效抑制浓度(IC50)及耐药倍数(RI).结果 单用ASODN转梁组DNA片段化比率、细胞凋亡率和Caspase3相对活性分别增高至(43.55±6.07)%、(34.03±2.25)%和(1.1298±0.2502),和各对照组相比较,均有显著性变化(P＜0.05);而ASODN和CDDP联用组上述凋亡指标增高更为明显,分别达(76.73±2.04)%、(65.85±5.47)%和(1.6805±0.2758)(P＜0.05).转染组A549/CDDP细胞生长抑制显著,单用转染组和联合CDDP组生长抑制率分别增高达59.3%和83.7%(P＜0.05).3.ASODN转染后CDDP对细胞IC50由(225.03±10.59)μmol/L减低至(158.84±4.256)μmol/L,其RI由11.9减为8.39.结论 Survivin反义寡核苷酸体外转染可降低耐顺铂人肺腺癌细胞的凋亡阈值,从而较大程度上逆转其对顺铂诱导的细胞凋亡耐受.     

偶联 CD133 核酸适体的载紫杉醇 PLGA-PEG 纳米载体靶向清除CD133阳性肺癌干细胞

目的 构建偶联CD133核酸适体载紫杉醇的聚乳酸-乙醇酸-聚乙二醇（PLGA-PEG）纳米载体（N-Pac-CD133）拟清除肺癌干细胞。方法 采用乳液/溶剂蒸发的方法制备 N-Pac-CD133,同时对 N-Pac-CD133 进行表征,利用磁珠分离法分离出CD133+ 肺癌干细胞后并对该群体的肺癌干细胞特异性进行检测,同时对肺癌细胞的靶向性和杀伤活性进行检测。小鼠体内接种A549肿瘤后,肿瘤治疗分组：生理盐水,空纳米载体链接CD133核酸适体（N-CD133）,紫杉醇,负载紫杉醇的纳米载体（N-Pac）和N-Pac-CD133,8只/组,5 mg/kg紫杉醇,分别于第10、15和20天进行注射。在第40天时,处死小鼠后,对肿瘤进行摘除并称重,同时测量小鼠的体质量。结果 N-Pac-CD133的粒径为100 nm左右,包封率>80%,载药量>8%,在48 h内都显示出持续的药物释放。肺癌细胞的CD133+细胞群体表现出肺癌干细胞的特征：更快的肺癌生长速度（30 d,P=0.001）和更高的肿瘤干细胞基因表达：OV6（P<0.001）、CD133（P=0.001）、OCT3/4（P=0.002）、EpCAM（P=0.04）、NANOG（P=0.005）和 CD44（P=0.02）。与非靶向 N-Pac 和紫杉醇相比,N-Pac-CD133 对肺癌干细胞的靶向性（P<0.001）和细胞毒性作用显著增强。另外,N-Pac-CD133可显著减少肿瘤球的形成（P<0.001）。在治疗终点时,取小鼠肿瘤并对肿瘤进行称量,N-Pac-CD133治疗组和其他治疗组相比,肿瘤体质量显著减小（P<0.001）。结论 CD133核酸适体可以促进紫杉醇纳米载体靶向递送至CD133+肺癌干细胞并杀伤肺癌干细胞。N-Pac-CD133可能是一种有效的靶向肺癌干细胞的治疗手段。