CIK对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP杀伤效应及耐药逆转作用

目的探讨CIK细胞对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP体外杀伤效应及逆转作用。方法用MTT法分别检测顺铂、CIK细胞、CIK联合顺铂对人肺腺癌细胞A549及人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的杀伤活性,计算耐药倍数,逆转倍数。结果①顺铂对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP的50%杀伤浓度(IC50)分别为1.823g/mL、6.392 g/mL,差异有统计学意义(P<0.05),人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂的耐药倍数(IR)为3.506。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,其IC50分别7.657×105个细胞/mL、7.955×105个细胞/mL,差异无统计学意义(P>0.05)。③不同浓度的CIK细胞(1×105,2×105and3×105个/mL)与人肺腺癌细胞共培养后,再加顺铂,其IC50值分别降至1.743g/mL、1.336g/mL、0.883g/mL,差异有统计学意义(P<0.05);计算逆转倍数(FR)分别为(2.369、3.091、4.677)。结论①人肺腺癌细胞A549/DDP较A549对顺铂有明显的耐药性。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,杀伤效果在两种细胞中无明显差异。③无毒剂量CIK联合顺铂作用于人肺腺癌细胞A549/DDP,可以增加顺铂对耐药细胞的杀伤活性。逆转倍数随着CIK密度的增加而增大,说明CIK细胞能部分逆转耐药细胞A549/DDP对顺铂的耐药性。     

川芎嗪对人非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的相关ATP结合盒转运体表达水平的影响

目的：观察川芎嗪（四甲基吡嗪）对耐药相关ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、C1(ABCC1)和G2(ABCG2)表达水平的影响，揭示其逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药的机制。方法：采用细胞增殖（CCK8）实验，分析人肺腺癌细胞株A549及顺铂耐药株A549/DDP对顺铂的耐受性，计算耐药指数。分析A549/DDP对川芎嗪的耐受性，遴选逆转耐药所需的工作浓度并检测逆转效果。设置空白组接种A549细胞，模型组、实验组和阳性对照组均接种A549/DDP细胞；空白组和模型组均用1640完全培养基孵育，实验组用含工作浓度川芎嗪的1640完全培养基孵育，阳性对照组用含Tariquidar的1640完全培养基孵育。提取各组全部蛋白及mRNA，用免疫印迹法（Western Blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析川芎嗪对ABCB1、ABCC1和ABCG2及其m RNA表达水平的影响。结果：A549细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（28.33±3.19）μM,A549/DDP对顺铂的IC50为（983.43±101.67）μM,A549/DDP的耐药指数为34....     

异钩藤碱脂质体逆转人肺腺癌细胞A549／DDP对顺铂耐药的研究

目的研究异钩藤碱脂质体(Isorhynchophylline Liposomes,IR-L)在体外对人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的逆转作用。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度。结果IR-L无细胞毒浓度组(2.0μg/mL)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg/L降至3.36 mg/L;低细胞毒浓度组(7.0μg/mL)的IC50降至2.34 mg/L;两组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度,从0.92μg/L分别提高到4.62μg/L和6.89μg/L。结论IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,其作用机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

99mTc-MIBI检测肺癌耐药性的作用研究

目的拟探讨99mTc-MIBI能否检测肺腺癌A549DDP细胞的耐药性及人参单体Rh2作用后A549DDP细胞对顺铂耐药性的变化.方法用MTT法检测顺铂对敏感A549细胞和耐药A549DDP细胞的IC50、对A549DDP细胞的低效浓度(≤IC20),Rh2对A549DDP细胞的无毒浓度(≤IC5).以无毒浓度Rh2和低效浓度的顺铂联合作用于A549DDP细胞,检测Rh2对顺铂抑制A549DDP细胞的影响.以无毒浓度的Rh2单独作用于A549DDP细胞作为Rh2组,以低效浓度的顺铂单独作用于A549DDP细胞作为DDP组,以无毒浓度的Rh2和低效浓度的顺铂联合作用于A549DDP细胞作为Rh2+DDP组,以不加药物干预作为对照组,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡峰.γ计数器检测以上4组细胞及A549细胞的放射性活性.将以上细胞注入裸鼠皮下建模后,用99mTc-MIBI进行SPECT显像.结果順铂对A549细胞、A549DDP细胞的IC50分别为24、325 μmol/L,耐药指数为13.54.Rh2≤10 μmol/L时,对A549DDP细胞无明显毒性作用;100 μmol/L顺铂对A549DDP细胞的抑制率为12%.10 μmol/L Rh2与100 μmol/L顺铂联合作用,顺铂对A549DDP细胞的IC50降为94 μmol/L,与100 μmol/L顺铂单独作用于A549DDP细胞的IC50比,逆转3.5倍.荧光显微镜下,Rh2组和DDP组的大部分细胞核和对照组的一样,荧光分布均匀;Rh2+DDP组的荧光成团块分布,有凋亡小体形成.对照组、Rh2组和DDP组的细胞无明显凋亡峰,而Rh2+DDP组则出现了显著的凋亡峰.各组A549DDP细胞和A549细胞均能摄取99mTc-MIBI,Rh2组和DDP组与对照组之间细胞的放射性活性差异无统计学意义,而Rh2+DDP组则较对照组细胞的放射性活性显著性降低,P<0.05.A549细胞的放射性活性显著性高于A549DDP细胞的对照组,P<0.01.99mTc-MIBI 显像,A549组裸鼠可见瘤块的放射性浓聚影.A549DDP对照组和DDP组裸鼠亦可见瘤块的放射性浓聚影,其放射性浓度较A549组淡,这两组间的R或R′差异无统计学意义,但与A549组比较,P<0.05.DDP+Rh2组裸鼠无肿瘤生长,局部未见明显放射性浓聚影.结论 99mTc-MIBI能检测肺腺癌耐药的A549DDP细胞的耐药性;无毒浓度的Rh2能有效逆转A549DDP细胞对顺铂的耐药性,这种耐药性的变化亦能被99mTc-MIBI有效检测.     

HB-PDT对经顺铂诱导耐药及非耐药肺癌细胞系杀伤效应的比较

目的:对比研究耐药及非耐药肺癌细胞株对竹红菌乙素-光动力疗法(HB-PDT)的反应性,以及耐药肿瘤对HB-PDT及化疗药物顺铂的反应性之间是否存在差别.方法:以不同浓度的竹红菌乙素(HB)分别孵育人肺腺癌细胞系A549及经顺铂(DDP)诱导耐药的多药耐药细胞系A549/DDP,然后分别在铜蒸汽激光混合光饱和光剂量条件下进行照光处理,照光后继续孵育24 h,MTT法分别测定不同HB浓度下2种细胞的存活率,分别绘制HB对2种细胞存活率曲线并拟合曲线方程,根据方程求出HB对2种细胞的半数杀伤浓度(IC50).结果:HB-PDT对经顺铂诱导耐药及非耐药细胞系均具有很强的杀伤效应,HB-PDT对A549及A549/DDP的IC50分别为33.82 ng/ml和34.19 ng/ml,两者之间差异不显著(P>0.05);顺铂对A549及A549/DDP的IC50分别为1.06 μg/ml和8.06 μg/ml,两者之间差异显著(P<0.01);HB-PDT和化疗药物顺铂对耐药肿瘤细胞杀伤效应间差异显著(P<0.01).结论: HB-PDT对于耐药及非耐药细胞的光毒效应无显著差别.HB-PDT对耐药肿瘤细胞具有明显的光毒效应,其杀伤经顺铂耐药肿瘤细胞的效果明显优于已产生耐药的化疗药物.HB-PDT有可能发展为对顺铂耐药肿瘤的有效治疗手段.     

芹菜素逆转肺癌A549/DDP细胞耐药及机制

目的：研究芹菜素对肺癌A549/DDP细胞的作用,探讨芹菜素逆转肺癌耐药的作用及机制。方法：体外培养肿瘤细胞,以不同浓度芹菜素作用为实验组,用MTT法检测A549/DDP细胞增殖和分析药物敏感性,用Rhodamine-123潴留实验检测A549/DDP细胞内药物外排情况,用Western blot法检测肿瘤细胞内P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp)和肺耐药蛋白(lung resistance-related protein,LRP)表达情况,用RT-PCR法检测肿瘤细胞内多药耐药基因（multidrug resistance gene l,MDR1）mRNA和LRP mRNA的转录情况。结果：与DDP组相比,20、40、80 μmol/L的芹菜素明显抑制了A549/DDP细胞生长增殖（P＜0.05）。DDP对A549/DDP细胞的IC50为(14.33±0.41) μg/mL,在芹菜素作用下其IC50降为(5.76±0.36) μg/mL,逆转倍数为2.48,两者相比有统计学差异（P＜0.05）。芹菜素作用下,A549/DDP细胞内的Rhodamine-123蓄积增加,细胞内P-gp表达减弱,MDR1 mRNA转录水平下降,对LRP表达及LRP mRNA转录无明显改变。结论：芹菜素对A549/DDP细胞生长有抑制作用;芹菜素还具有逆转A549/DDP细胞肿瘤耐药的功能,其机制与降低MDR1 mRNA转录和下调P-gp介导的药物外转功能有关。     

去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549／DDP细胞逆转的分子机制

目的探讨去甲斑蝥酸钠（SNCTD）对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549／DDP的逆转作用及可能分子机制。方法（1）采用CCK法筛选出SNCTD对A549／DDP的无毒浓度（即对细胞抑制率〈10％的药物浓度）,并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的半数抑制浓度（IC50）;（2）采用流式细胞仪分别检测1、2倍无毒浓度SNCTD对细胞内罗丹明123的蓄积情况;（3）采用逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h后耐药相关基因mdr1mRNA、MRP1mRNA、GST—PimRNA表达,并检测药物处理72h后GST—PimRNA的表达。结果（1）SNCTD对A549／DDP的无毒浓度为5μg／ml,无毒浓度SNCTD与顺铂联合应用可使A549／DDP细胞对顺铂的IC50值下降为4．32μg／ml,逆转倍数为1．97倍;（2）无毒浓度SNCTD处理耐药细胞48h后细胞内罗丹明123荧光强度明显增强（P〈0．05）;（3）5、10μg／ml SNCTD处理耐药细胞株48h后mdr1 mRNA、MRP1 mRNA表达均明显减弱（P〈0．05）,而且10μg／ml SNCTD处理组减弱强度亦明显大干5μg／mlSNCTD处理组（P〈0.05）,呈现浓度依赖性;而GST—PimRNA表达并无明显变化（P〉0．05）,72h后GST—PimRNA表达也未出现下降（P〉0．05）。结论SNCTD可以逆转A549／DDP细胞的耐药作用。其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1、MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关。     

靶向Ku70基因siRNA对人肺腺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用

目的：研究Ku70与人肺腺癌耐药的相关性,观察调控Ku70表达能否逆转人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）的耐药性。方法：采用RT-PCR、Western Blotting方法比较Ku70在人肺腺癌亲代细胞（A549）与耐药细胞系（A549/DDP）的表达水平。转染靶向Ku70基因siRNA（si-Ku70）的A549/DDP细胞作为实验组,转染非特异性siRNA（si-Scramble）的A549/DDP细胞作为阴性对照组,同时设空白组(A549/DDP细胞)。加药组在转染后48 h给予顺铂。应用MTT法检测各组细胞在顺铂作用下的生存率,并计算半数抑制浓度（IC₅₀）,采用流式细胞仪定量检测细胞凋亡率;采用分光光度法检测Caspase-3活化程度。结果：Ku70 mRNA和蛋白在A549/DDP细胞表达水平显著高于其亲代A549细胞（P<0.01）;靶向Ku70的siRNA（si-Ku70)明显下调A549/DDP细胞的Ku70 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）;在不同浓度顺铂作用24 h后,实验组细胞的生存率明显低于阴性对照组和空白组（P<0.01）。6 mg/L顺铂作用24 h后,实验组细胞凋亡率及Caspase-3活化程度高于阴性对照组和空白组（P<0.05）。结论：Ku70在人耐药肺腺癌细胞呈现高表达,提示Ku70参与肺腺癌耐药的形成;靶向Ku70siRNA导入人肺腺癌耐药细胞可特异性下调Ku70的表达,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,逆转其耐药性,Ku70可能成为逆转肺癌耐药的一个新的分子靶点。     

β-Catenin信号转导通路在肺癌A549细胞顺铂耐药中的作用

目的建立肺癌A549顺铂多药耐药细胞株,研究肺癌耐药的机制。方法使用顺铂逐步增加剂量和间歇大剂量冲击相结合的方法诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;绘制A549和A549/DDP细胞生长曲线,观察二者的增殖速度变化;Western blotting实验显示A549和A549/DDP细胞之间Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β和β-Catenin蛋白的表达改变。结果经过30周的诱导我们建立了肺癌A549细胞的顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为(1.37±0.09)和(11.63±0.74)μmol/L,与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂耐药8.47倍,生长曲线结果显示A549/DDP细胞的增殖速度与A549细胞没有显著性差异;Western blotting的结果显示A549/DDP细胞的Akt磷酸化水平升高,抑制了下游GSK-3β的活性,导致了细胞内β-Catenin蛋白的上调。结论建立了肺癌A549顺铂多药耐药细胞系A549/DDP,A549/DDP细胞中β-Catenin通路的激活与其耐药性的形成有一定的相关性。     

siRNA沉默FANCD2基因增加肺癌A549/DDP细胞对顺铂化疗的敏感性

目的: 研究siRNA沉默FANCD2基因后人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株对顺铂(DDP)耐药性的变化。方法:合成针对FANCD2基因的siRNA(FANCD2 siRNA),采用脂质体将其分别转染肺癌A549细胞株和A549/DDP耐药细胞株。CCK-8法测定经DDP处理的A549和A549/DDP细胞株转染siRNA前后的细胞增殖率变化;免疫印迹法测定2种细胞株转染siRNA前后FANCD2蛋白单泛素化水平;免疫荧光测定胞核中FANCD2蛋白核聚小体的形成。结果：经DDP处理的A549/DDP细胞增殖率,FANCD2蛋白单泛素化水平及核聚小体形成程度明显高于A549细胞。转染FANCD2-siRNA后,A549和A549/DDP细胞的FANCD2蛋白单泛素化水平和核聚小体形成明显降低,细胞增殖率显著下降。结论： 应用siRNA转染技术沉默FANCD2基因可抑制FA/BRCA途径的DNA修复功能,从而增加肺癌细胞对DDP的敏感性,部分逆转耐药肺癌细胞株对DDP的耐药性。     

靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响

目的通过miRNA介导RNAi沉默OPN表达探讨其对人肺腺癌细胞株A549顺铂(DDP)敏感性的影响。方法利用体外构建的靶向OPN的miRNA表达质粒瞬时转染A549,酶联免疫吸咐法(ELISA)检测转染后48h细胞OPN蛋白表达;转染后24、48、72、96h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测转染细胞和转染联合5μg/mL顺铂作用后细胞的增殖;于转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果(1)转染后48h,OPN蛋白表达水平下调了47.34%(P0.01)。(2)转染后24h细胞增殖开始受抑制(P0.05),48、72、96h细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性差异均有统计学意义(P0.01)。(3)转染联合顺铂作用24h细胞增殖开始受抑(P0.05),48、72、96h细胞增殖明显受抑,细胞增殖活性转染组与未转染组及非特异性转染组差异均有统计学意义(P0.01)。转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/mL时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.01)。结论靶向OPN的miR-NA抑制人肺腺癌细胞A549增殖,增强细胞对DDP的敏感性。     

5-杂氮-2＇-脱氧胞苷对肺癌细胞小分子RNA let-7a-2表达的影响

目的：观察去甲基化药物对人肺癌A549和H1299细胞增殖、凋亡以及小分子RNA let-7a-2表达的影响.方法：以不同浓度的5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（DAC）对肺癌细胞进行处理后,CCK-8检测对细胞增殖的影响,AnnexinV-PI双染法检测对细胞凋亡的影响,qRT-PCR对let-7a-2的表达进行检测.结果：A549和H1299细胞经不同浓度DAC处理后细胞增殖受到明显抑制,以60μM浓度DAC处理后d5抑制率分别为（40.80±6.50）％和（47.24±4.95）％（均P＜0.05）,同时细胞呈现显著性早期凋亡,凋亡百分比分别达（64.58±4.21）和（59.61±5.69）（均P＜0.05）.20μM、40μM、60μM DAC处理后let-7a-2的表达量在A549中分别为（10.86±0.30）、（5.02±2.83）、（17.79±1.95）,比对照组（1.12±0.24）显著上调;在H1299中分别为（55.13±5.69）、（35.67±4.13）、（14.94±2.46）,比对照组（1.31±0.56）显著上调.结论：DAC处理可抑制肺癌A549和H1299细胞增殖、促进细胞凋亡,上调let-7a-2的表达,let-7a-2基因调控区域超甲基化可能是其在肺癌细胞中表达异常的机制之一.     

高聚金葡素对非小细胞肺癌细胞株A549的生长抑制及其治疗恶性胸腔积液的效果观察

目的：观察生物调节剂高聚金葡素（high agglomerative staphylococoin,HAS）对非小细胞肺癌细胞株A549的体外生长抑制,并观察HAS治疗肺癌恶性胸腔积液的临床疗效。方法：培养非小细胞肺癌细胞株A549,根据处理方法不同,分为对照组、顺铂（cisplatin,DDP）组、HAS、HAS联合DPP 4组,应用CCK8法测定药物的半数抑制浓度（50%concentration of inhibition,IC50）值及细胞存活率,倒置显微镜下观察各组细胞形态改变。收集非小细胞肺癌胸腔积液患者的胸膜腔积液,并应用HAS、DDP或两者联合进行治疗,观察其临床疗效和不良反应。结果：HAS能抑制肺癌细胞株的生长,并且呈时间剂量依赖性,HAS联合DDP治疗较DDP单独治疗IC50值明显降低。在对临床恶性胸腔积液患者的治疗观察中,HAS治疗有效率为72.2%,DDP组治疗有效率为50.0%,HAS联合DDP治疗有效率为86.1%,且HAS组发生胃肠道反应和骨髓抑制的比例要小于DDP组。结论：HAS对非小细胞肺癌具有生长抑制作用,局部应用HAS不良反应小,能有效促进恶性胸腔积液的吸收。     

PI3K/Akt抑制剂联合西妥昔单抗对人肺癌细胞的体外抑制作用

目的探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002单独或联合西妥昔单抗对人肺癌细胞株A549的作用,以期为肺癌临床治疗方案的选择、用药顺序提供新的理论依据。方法选用西妥昔单抗和LY294002,分析单药及不同浓度和联合作用方式对A549细胞增殖的影响;计算IC50值和CI值,分析药物联合作用的效应是协同、相加抑或拮抗。结果单独作用时,西妥昔单抗与LY294002最大抑制率分别为(57.3±6.2)%、(56.2±6.0)%;联合作用时,LY294002→西妥昔单抗序贯给药(CI=0.41)比同步应用(CI=0.73)可增强疗效,其最大抑制率分别为(84.9±7.5)%和(79.0±7.3)%。结论两药对A549细胞增殖均具有抑制作用,LY294002→西妥昔单抗序贯联合应用对A549细胞的增殖抑制率最高。     

胰岛素对人肺腺癌细胞A549化疗增敏作用机制的研究

目的探讨胰岛素对化疗药物顺铂（DDP）敏感性的影响和机制。方法选用人肺腺癌细胞A549为靶细胞,采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30％时的药物浓度（IC30）,检测胰岛素不同浓度或作用不同时间后,对A549细胞化疗敏感性的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。Western Blot印迹方法检测不同加药处理组的细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果顺铂的IC30约为36．87μg／mL;胰岛素（2．0～160mU／mL;8h～16h）可增强顺铂（36．87μg／mL）的细胞毒作用（P〈0.01）。流式分析显示DDP能引起A549的S期细胞阻滞,胰岛素可增加DDP对A549的S期细胞阻滞。Western Blot印迹方法检测显示单用顺铂组较对照组比较,CyclinA的表达明显增强,CyclinD1的表达变化不明显。胰岛素联合顺铂组较单用顺铂组比较,CyclinA、CyclinD1的表述变化均不明显。结论胰岛素具有化疗增效作用,胰岛素用药的时机选择是实现增效的关键。其机制可能为：胰岛素能够使A549的S期细胞比例增加,与DDP有协同作用。顺铂对人肺腺癌细胞株A549细胞周期的影响表现为S期的阻滞,CyclinA的表达增强在其作用机制上起着重要的作用。     

三氧化二砷对人肺腺癌细胞A549/DDP裸鼠体内的多药耐药逆转作用

目的研究三氧化二砷（As_2O_3）对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/顺铂（DDP）裸鼠移植瘤的耐药逆转作用。方法建立人肺腺癌裸鼠移植瘤模型,观察As_2O_3、DDP及联合用药对体内移植瘤生长状况的影响;采用流式细胞术（FCM）测定不同用药对肿瘤细胞凋亡率变化和耐药细胞A549/DDP P-糖蛋白（P-gp）表达;采用RT-PCR检测不同用药对A549/DDP移植瘤组织MRP1-mRNA和LRP-mRNA表达的变化。结果体内裸鼠抑瘤实验显示As_2O_3有一定抑瘤作用,联合应用DDP可显著抑制肿瘤生长。FCM结果显示应用As_2O_3后肿瘤细胞平均凋亡率,明显高于对照组（P〈0.05）[（17.204±3.091）%vs（3.436±0.537）%],低浓度As_2O_3联合DDP后肿瘤细胞的凋亡率,明显高于DDP组（P〈0.05）[（14.472±3.891）%vs（5.612±1.167）%]。FCM对P-gp表达检测提示As_2O_3对移植瘤Pgp水平无影响。RT-PCR检测结果示含As_2O_3组MRP1表达明显低于不含As_2O_3组（P〈0.05）,肺癌耐药相关蛋白（LRP）在转录水平呈现相对低表达,含As_2O_3组同不含As_2O_3组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 As_2O_3能在体内逆转A549/DDP细胞的耐药性,其机制可能是As_2O_3可通过下调MRP1基因表达,提高A549/DDP细胞对DDP敏感性逆转其耐药,并可能通过诱导肿瘤细胞凋亡来起作用。     

Bcl2-siRNA提高人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂敏感性的研究

目的 探讨Bcl2-siRNA 对人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 对顺铂敏感性的影响.方法 在人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA,48h 后加入不同浓度(0、3、6、9、12、15μg/ml) 新鲜配置的顺铂溶液,药物作用48h后,用CCK-8 法检测细胞生长抑制率.荧光实时定量PCR(Real time RT-PCR) 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2mRNA 的变化,Western Blot 检测A549/DDP 细胞转染bcl2-siRNA 后Bcl-2 蛋白的变化.结果 在A549/DDP 细胞中转染bcl2-siRNA 后,细胞Bcl-2 mRNA 降低92.6%(P<0.05),Bcl-2 蛋白表达也明显降低,同时细胞对顺铂的敏感性增加57.8%(P<0.05).结论 Bcl2-siRNA 能降低A549/DDP 中Bcl-2 mRNA 及蛋白的表达,增加A549/DDP 对顺铂的敏感性.     

Logistic 回归和 ROC 曲线评价癌胚抗原、鳞状细胞癌抗原和铁蛋白对肺癌的诊断价值

目的探讨Logistic回归和ROC曲线综合分析血清癌胚抗原（CEA）、鳞状细胞癌抗原（SCC）和铁蛋白（SF）对肺癌的诊断价值。方法采用电化学发光法检测CEA,酶联免疫吸附测定法检测SCC,免疫比浊法检测SF,检测100例肺癌患者（肺癌组）和30例健康者（健康组）血清中的CEA、SCC、SF水平,通过Logistic回归建立回归模型,用ROC曲线分析三种肿瘤标志物对肺癌的诊断的意义。结果肺癌组CEA、SCC、SF水平显著高于健康组[（13．82±21．42）μg／L比（2．79±1．39）μg／L;（3．93±7．58）μg／L比（0．76±0．28）μg／L;（455．31±271．38）μg／L比（148．50±97．30）μg／L,均P〈0．01],腺癌患者CEA水平[（26．42±28．97）μg／L]最高,鳞癌患者SCC水平[（8．01±11．32）μg,L]最高,肺癌患者三种肿瘤标志物水平与TNM分期密切相关,（Ⅲ＋Ⅳ）期明显高于（Ⅰ＋Ⅱ）期[（15．17±23．20）μg／L比（8．72±11．70）μg／L;（4．57±8．42）μg／L比（1．53±0．86）μg／L;（479．08±280．72）μg/L比（365．90±215．86）μg／L,P〈0．05或P〈0．01],分期越晚,三种肿瘤标志物水平越高。建立回归模型Y=1／[1＋EXP（2．261X1＋3．459X2＋4．267X3—1．082）1,新变量Y的AUC高于三种单一肿瘤标志物的AUC。结论血清CEA、SCC和SF对肺癌的诊断具有较高的价值,联检可提高对肺癌的诊断率,综合运用Logistic回归和ROC曲线分析可提高肺癌诊断的准确性。     

热疗联合三代铂类药物对卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的 探讨热疗分别联合三代铂类药物即顺铂（DDP）、卡铂（CBP）、奥沙利铂（OXA）对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其可能机制。方法 SKOV3细胞采用热疗（42 ℃）或常温（37 ℃）联合不同浓度的DDP（终浓度分别为0、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL）、CBP及OXA（终浓度均为0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/mL）处理, MTT法检测对SKOV3细胞增殖的影响,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测SKOV3细胞经相应处理后核苷酸切除修复交叉互补组基因(excision repair cross-complementing group 1, ERCC1)、凋亡抑制基因（Survivin）的表达变化。结果 DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株SKOV3的增殖呈抑制作用,并呈剂量依赖性（P<0.05）,42 ℃热疗能增强铂类药物对SKOV3细胞株的增殖抑制作用; DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株增殖的半数抑制浓度（IC50）分别为（7.271±0.096） μg/mL、（37.609±0.779）μg/mL、（28.328±0.698） μg/mL,42 ℃热疗联合上述铂类药物后IC50分别为（2.075±0.244） μg/mL、（19.591±0.453） μg/mL、（19.089±0.424） μg/mL,增敏倍数分别为2.075±0.244、1.92±0.044、1.484±0.039（P<0.05）,其中对DDP的增敏效果最显著;在三代铂类药物中,热疗均能下调ERCC1 mRNA的表达（P<0.05）,且CBP下调最显著;热疗联合CBP、OXA作用于SKOV3时均能下调Survivin mRNA的表达（P<0.05）,其中OXA组更显著,但DDP联合热疗对Survivin mRNA表达的影响差异无统计学意义（P>0.05）。结论 热疗联合三代铂类药物能增强铂类药物对SKOV3细胞的增殖抑制作用,增加肿瘤细胞对铂类药物的敏感性,其增敏机制可能与下调ERCC1 mRNA和Survivin mRNA表达有关。