猪中性粒细胞抑菌蛋白的分离及对细菌影响

目的 提取、分离、纯化、高效高活性杀烧伤创面病原菌的猪血中性粒细胞防御素。方法 用5％乙酸提取猪血中性粒细胞溶酶体可溶性成分，经制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化猪中性粒细胞防御素，用SDS-PAGE检测防御素的分子质量，以体外杀烧伤创面白色念珠菌试验、体外抑制烧伤创面金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的生长作用检测其活性。结果 可从提取物中纯化出7种多肽(ND1、ND2、ND3、ND4、ND5、ND6、ND7)，它们的分子质量在2800～6800之间。体外杀白色念珠菌试验和体外抑制金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌的生长作用证实，ND1、ND2有高效杀菌活性，ND3也有较强的杀菌活性。结论 通过猪血中性粒细胞的分离、纯化，可获得高效高活性杀烧伤创面病原菌的防御素。     

兔中性粒细胞抗菌肽的纯化和鉴定

作者用0.01 mol/L柠檬酸提取家兔中性粒细胞溶酶体可溶性成份,经制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳,从提取物中纯化出5种肽(NP_1、NP_2、NP_3、NP_4、NP_5),它们的分子量在2500～6000之间,体外杀白色念珠菌试验证实,NP_1、NP_2有高效杀菌活性,NP_3也有较强的杀菌活性。     

兔中性粒细胞抗菌肽提取物杀白色念珠菌活性观察

作者用柠檬酸抽提法,从家兔腹腔中性粒细胞溶酶体中提出低分子阳离子肽类物质。体外杀菌试验证明该提出物对白色念球菌有明显杀菌作用,其杀菌机理有待探讨。     

兔膀胱粘膜抗菌蛋白研究

作者以1％乙酸冲洗雌性新西兰白兔膀胱粘膜获得其酸溶性提取物。经AU-PAGE分析表明,膀胱粘膜酸溶性提取物有十余条主蛋白带,不含已知的内源性抗菌多肽溶菌酶和防御素。琼脂糖弥散法杀菌试验显示,膀胱粘膜酸溶性提取物对致病性大肠杆菌ML-35P耐药株具杀菌活性。电泳凝胶琼脂糖弥散法杀菌试验进一步分析表明,杀菌活性与两条主蛋白带相关,命名为Rab BP-1和Rab BP-2。它们分别占膀胱粘膜提取物蛋白质总量的2.5％和1.2％。本实验的研究结果首次提示,兔膀胱粘膜存在抗菌性蛋白,这可能是膀胱粘膜杀菌这一重要防御机理的分子基础。     

兔中性粒细胞防御素的抗出血热病毒研究

从新西兰白兔的中性粒细胞胞浆颗粒中提取兔防御素，测定其体外抑制流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）的活性实验，结果表明：兔防御素对ＥＨＦＶ感染Ｖｅｒｏ细胞无阻断作用，而对ＥＨＦＶ有直接杀灭作用，２０μｇ／ｍｌ时其抗病毒指数为１．９６。同时，兔防御素对ＥＨＦＶ在Ｖｅｒｏ中的增殖有抑制作用，４０μｇ／ｍｌ时其抗病毒指数为２．０８。     

多粘菌素B等对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抗菌活性研究

目的测定多粘菌素B等抗菌药物对铜绿假单胞菌的体外抗菌活性,为临床治疗药物选择提供实验室依据。方法对127株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌,采用琼脂对倍稀释法测定多粘菌素B、米诺环素等12种抗菌药物的MIC值。结果亚胺培南对多重耐药的铜绿假单胞菌有较强的抗菌活性,MIC50为2μg/ml,MIC90为16μg/ml,多粘菌素与米诺环素也有很好的抗菌活性,MIC50分别为0.5μg/ml与2μg/ml,MIC90分别为4μg/ml与8μg/ml。结论碳青霉烯类、多粘菌素B及米诺环素对临床常见多重耐药铜绿假单胞菌具有良好的抗菌活性。     

连续酸－尿素－聚丙烯酰胺凝胶电泳制备人和兔中性粒细胞防御素各组分

目的 :建立和应用连续酸 -尿素 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (CAU- PAGE)纯化人和兔中性粒细胞防御素组分(HNP- 1～ 3和 RNP- 1～ 5 )。　方法 :从人外周血或兔人工无菌性腹水中分离中性粒细胞 ,用 5 %冰醋酸直接提取 ,经 CAU- PA GE洗脱 ,获取纯化的 HNP- 1～ 3或 RNP- 1～ 5组分。以聚丙烯酰胺凝胶过滤作为参比方法。　结果 :1次洗脱电泳可从 5× 10 8个细胞中获得纯化的 HNP组分约 1.5 0 mg或 RNP组分 2 .5 0 mg,并保持天然的生物活性。　结论 :CAU- PAGE是一种较简便、快速、经济的分离纯化防御素组分的方法     

替加环素、多粘菌素和头孢哌酮舒巴坦对多重耐药鲍曼不动杆菌体外抗菌活性的研究

目的:研究替加环素、多粘菌素B和头孢哌酮舒巴坦对多重耐药鲍曼不动杆菌体外的抗菌活性,为临床合理用药提供依据。方法:收集2013年1月-2014年6月广东省第二中医院检验科微生物室临床致病菌培养加药敏试验的标本,结果经鉴定为多重耐药鲍曼不动杆菌50株,用药敏纸片扩散法分别对替加环素、多粘菌素和头孢哌酮舒巴坦进行体外药敏试验。结果:替加环素对多重耐药鲍曼不动杆菌保持敏感性100%,对多粘菌素B中介敏感性为67%,对头孢哌酮舒巴坦的耐药率为73%。结论:替加环素、多粘菌素对多重耐药鲍曼不动杆菌有较高的抗菌活性,是临床治疗多重耐药鲍曼不动杆菌感染的最佳药物之一。     

桑椹、桑叶水煎液体外抗菌作用的实验研究

[目的]研究桑椹、桑叶水煎液的体外抗菌作用。[方法]采用连续稀释法对桑椹、桑叶水煎液的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）进行实验研究。[结果]桑椹、桑叶水煎液在体外对金黄色葡萄球菌（ATCC26001）、金黄色葡萄球菌耐药株、大肠杆菌（ATCC25922）、绿脓杆菌（ATCC10104）、甲型溶血性链球菌（ATCC32205）、乙型溶血性链球菌（ATCC32210）有一定的抗菌作用。[结论]桑椹、桑叶水煎液具有明显的抗菌作用,其中桑叶水提液抗菌作用强于桑椹。     

广西藤茶提取物APS抗菌作用研究

目的 观察广西藤茶提取单体化合物(APS)含药血清抗菌作用及是否易诱导细菌耐药性产生.方法 采用血清药理学实验方法,利用不同时间段的含APS兔血清对金黄色葡萄球菌标准株、MRSA、绿脓杆菌进行杀菌曲线测定;采用多步诱导法,对金黄色葡萄球菌标准株进行APS诱导耐药性试验.结果 含APS的兔血清对金萄菌、耐药金葡菌和绿脓杆菌均有不同程度的抑制作用.细菌抗药性诱导试验表明,APS不易引起金黄色葡萄球菌标准株的耐药性产生.结论 APS具有良好的抗菌作用,且不易引起金黄色葡萄球菌标准株耐药性产生.     

中性粒细胞防御素体外杀钩端螺旋体活性观察

Defensins play an important role in oxygen-independent microbicidal mechanisms of neutrophils. They are effective against many bacteria, fungi and enveloped viruses. However, the effect of defensins upon leptospires has not been studied. In the present report, human defensins (i.e. HNP, a mixture of HNP1, HNP2 and HNP3 were prepared from human polymorphonuclear neutrophils by chromatography on Sephadex G-100 and then on Biogel P-10. Rabbit defensin NP1 was purified from rabbit peritoneal granulocytes by preparative acid urea polyacrylamide gel electrophoresis. By using the most-probable-number procedure, HNP and NP1 were tested in vitro for the killing of leptospira interrogans serogroup icteroheamorrhagiae serovar lai strain 017. NP1 was highly effective. When leptospires of strain 017 were incubated with 1 microgram/ml of NP1 at 30 degrees C for 4 hours, > 99% of these organisms were killed. HNP was less potent than NP1, and at 50 micrograms/ml, it killed > 90% of leptospires. As is also the case for the killing of bacteria, NP1 was active against leptospires in nutrient-free buffer, whereas HNP required the addition of glucose. The data suggest that defensins could play a major role in the killing of leptospires by neutrophils.     

铜绿假单胞菌普通菌毛与耐药性R质粒的关系

目的：检测铜绿假单胞菌耐药株PA36的耐药性R质粒与菌毛及粘附性的关系。 方法：应用琼脂糖凝胶电泳试验、电镜照片制备及观察、粘附试验及质粒消除试验。 结果：PA36含有一条相对分子质量是3.3×10⁶的R质粒;电镜下观察PA36具有周毛型菌毛;粘附试验于光镜下可见该菌大量粘附到脱落的尿道上皮细胞上;该R质粒消除后该菌株的耐药性与菌毛一起消失,粘附性明显减弱。 结论：铜绿假单胞菌菌株PA36编码普通菌毛、决定粘附性的基因主要是在相对分子质量为3.3×10⁶的一个R质粒上。     

兔中性粒细胞抗菌肽的纯化和鉴定

Five antimicrobial peptides were extracted from the cytoplasmic granules of rabbit neutrophils with 0.01 mol/L citric acid. SDS-PAGE gel densitometric analysis of the citric acid extract showed that they accounted for 34%-42% of the total extract proteins. When subjected to acid urea polyacrylamide gel electrophoresis, five peptides migrated much further to the cathode than lysozyme. Beginning with the most cathodal component, they were in turn referred to as NP1, NP2, NP3, NP4, and NP5. They were purified from the citric acid extract by virtue of preparative polyacrylamide gel electrophoresis. Each of them was of low molecular weight (2,500-6,000) as determined by SDS-PAGE. Three of the peptides were tested in vitro for fungicidal activity. When Candida albicans (10(7)/ml) were incubated with 12.5 micrograms/ml of NP1 or NP2 at 37 degrees C for 2 h, the death rates of the organisms were 96.6% and 93.3% respectively. NP3 was shown to be active against Candida albicans although less potent than NP1 and NP2.     

结核分枝杆菌诱导小鼠树突状细胞凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响

目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)诱导小鼠树突状细胞株(DC2.4)凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响.方法:建立小鼠树突状细胞DC 2.4的人结核分枝杆菌H37Rv细胞混合培养模型.采用DAPI荧光染色法和透射电镜分析凋亡DC 2.4细胞的形态特征;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测DC 2.4细胞凋亡情况;分光光度法检测H37 Rv诱导DC 2.4细胞凋亡过程中caspase-3、-8活性变化.结果:H37 Rv与DC 2.4细胞混合培养2h后,即有细菌侵入,培养4、6、8、10、12h后,细菌侵入现象更明显,侵入率分别为(16.1±4.3)%、(35.8±5.1)%、(50.2±5.7)%、(58.3±6.2)%和(65.9±6.9)%.H37Rv与DC 2.4细胞混合培养6h后,DAPI染色荧光显微镜、透射电镜观察均发现DC 2.4细胞发生凋亡并出现典型的凋亡特征——染色质浓缩及边缘现象;DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性的凋亡条带.H37R与DC 2.4细胞混合培养6h、12 h和24 h后,细胞凋亡率分别为(6.4±2.5)%,(11.8±5.3)%和(31.1±8.7)%.caspase-3、-8活性增高,caspase-3活性于10 h 达高峰(2.01 +0.09) U/μg,而caspase-8活性则在6h达高峰(2.40±0.07) U/μg,两者与对照组相比均具有统计学意义(P＜0.05),且caspase-8激活先于caspase-3.结论:结核分枝杆菌可诱导树突状细胞发生凋亡,其诱导凋亡的机制可能与caspase-3、-8活化有关.     

Purification and antimicrobial activity of human neutrophil defensins]

Neutrophils are one of the weapons of host defenses against microbial infection. Their ability to kill the invading microorganisms depends on two principle mechanisms. One depends on production of reactive oxygen intermediates (ROI) by stimulated neutrophils, and the other depends on the delivery of antimicrobial contents of the neutrophils' cytoplasmic granules, oxygen-independent. The defensins have the highest concentration in the neutrophils, and the broadest antimicrobial spectrum, being capable of killing gram-positive and gram-negative bacteria, fungi and some envelope viruses. We purified human defensins from the neutrophils' granules by gel permeation chromatography and SDS-preparative acrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of human defensins is between 3,000-4,000 daltons. After testing, C. neoformans was susceptible to these defensins. Under condition of 37 degrees C, pH 7.4 and low ionic strength, antifungal activity by human defensins was related to its concentration and incubating time. All of these illustrate that nonoxidative killing mechanism of neutrophils, especially the function of defensins is very important in host defenses.     

腰椎间盘超微结构研究

应用扫描和透射电镜观察了正常和退变腰椎间盘的超微结构。扫描电镜下,正常椎间盘的纤维环胶原呈整齐紧密的分层状平行排列,髓核纤维呈无序状排列;退变椎间盘纤维环仍可见平行排列的规律,但结构较松散,髓核纤维粗细不均。透射电镜下,正常椎间盘可见典型的存活软骨细胞、纤维软骨样细胞和轻度退变细胞;退变椎间盘组织所见细胞大多呈不同程度的退变甚至坏死,活细胞少见。     

外科重症监护室多重耐药铜绿假单胞菌的对比基因组学研究

目的 对比分析外科重症监护室多重耐药铜绿假单胞菌的基因组差异,探索其与多重耐药性的关系.方法 琼脂稀释法检测49株铜绿假单胞菌对临床常用9种抗菌药物的敏感性,应用4种稀有位点核酸内切酶结合的脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对临床分离的株铜绿假单胞菌进行基因组分型.结果 多重耐药铜绿假单胞菌菌株占外科重症监护室铜绿假单胞菌临床分离株的85.7%;PFGE基因组型A菌株占全部铜绿假单胞菌分离株的61.2%,为主导基因组型,该基因组型全部对阿米卡星和头孢吡肟敏感,对左旋氧氟沙星和美洛培南耐药;PFGE基因组型H、P菌株对6种以上抗生素耐药;PFGE基因组型I和J菌株对所测9种抗生素均敏感.结论 4种稀有位点核酸内切酶结合的PFGE基因组分型可以作为临床多重耐药铜绿假单胞菌监控和鉴定的有效手段.     

人子宫颈黏液抗菌多肽的分离和鉴定

目的　从人的子宫颈黏液分离和鉴定新抗菌多肽,探讨子宫颈黏液抗菌机制。方法　用5%乙酸提取人子宫颈黏液可溶物,应用电泳凝胶抗菌蛋白分析法分析其抗菌蛋白,制备酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳及反相高效液相色谱分离纯化抗菌多肽。凝胶琼脂糖弥散法抗菌检测抗菌活性。纯化的抗菌多肽进行氮端氨基酸序列测定,根据其序列设计简并引物,利用简并聚合酶链反应(PCR)技术扩增其全长cDNA。通过BLAST硷基比对程序分析比较与已知蛋白的同源性。进一步应用常规基因重组技术构建其原核表达质和制备重组多肽。采用最小抑菌浓度和最小杀菌浓度检测重组多肽的抗菌效能。结果　从子宫颈黏液中分离纯化到一个具抗菌活性的多肽,通过蛋白测序、简并PCR及BLAST等方法鉴定该蛋白为HMGN2高游动性蛋白。制备获得重组HMGN2多肽,重组HMGN2抗大肠杆菌和铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度分别为10 .42μg/ml±3. 13μg/ml和27. 78μg/ml±8 .33μg/ml,与人中性粒细胞防御素相当;最小杀菌浓度分别为20 .83μg/ml±6 .25μg/ml和55 .56μg/ml±16 .67μg/ml。结论　除已知的抗菌肽外,HMGN2亦可能是宫颈黏液含有的抗感染效应分子之一。     

克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制及对环丙沙星的增效作用

目的　观察克拉霉素 (clarithromycin ,CAM )对铜绿假单胞菌生物被膜 (biofilm ,BF)的抑制以及对环丙沙星 (ciprofloxacin ,CIP)的增效作用。方法　扫描电镜观察不同CAM浓度下铜绿假单胞菌BF的形态学变化 ;高氯酸 蒽酮反应物法定量测定BF的己糖成分 ;噻唑蓝法测定活菌数。结果　 1/ 16最低抑菌浓度 (MIC)、1/ 4MIC的CAM对铜绿假单胞菌的BF主要成分己糖的合成有显著的抑制作用 ;加入CAM后CIP组的铜绿假单胞菌活菌数较对照组明显减少。结论　CAM具有抑制铜绿假单胞菌BF形成的作用 ,并可增强CIP对菌膜中铜绿假单胞菌的体外抗菌活性     

人膀胱粘膜抗菌蛋白研究

作者以１％乙酸冲洗正常成年男性膀胱，获得其粘膜酸溶性提取物。ＡＵ－ＰＡＧＥ电泳分析表明，该酸溶性提取物有十余条主蛋白带，但未出现常见的内源性抗菌多肽溶菌酶及防御素条带。以敏感的溶菌酶定量法例得溶菌酶仅占酸溶性提取物蛋白质总量的０．２２％。采用琼脂糖弥散法杀菌试验发现该酸溶性提取物对致病性大肠杆菌ＭＬ－３５Ｐ耐药株具杀菌活性；进一步以电泳凝胶琼脂糖弥散法杀菌试验分析，结果显示该酸溶性提取物中有一条主蛋白带有较强的杀菌活性，称之为人膀胱抗菌蛋白（ＨＢＰ），它约占酸溶性提取物蛋白质总量的４％。本文结果提示，人膀胱粘膜存在有抗菌性蛋白，这可能是正常泌尿道抗细菌感染的分子基础。