金盏花苷E通过ROS介导的JAK1-stat3信号途径抑制LPS诱发的炎症反应

目的探讨金盏花苷E对脂多糖（LPS）诱导炎症反应的抑制作用及可能的分子机制。方法CCK-8实验检测不同浓度（0、 2、4、6、8、10、20、25、30 μg/mL）的金盏花苷E对RAW264.7 细胞活力的影响;不同浓度的金盏花苷E（0、6、8、10 μg/mL）预处理 RAW264.7细胞2 h,然后用LPS（100 ng/mL）刺激细胞特定的时间,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β释放;Western blotting检 测iNOS、COX-2的表达水平及JAK-stats、MAPKs及NF-кB信号途径的磷酸化;ROS检测试剂盒检测RAW264.7 细胞内ROS含 量;激光共聚焦实验检测转录因子stat3的核转位。结果CCK-8结果显示,金盏花苷E浓度在低于20 μg/mL时对RAW264.7细 胞无明显毒性作用;金盏花苷E浓度依赖性地下调LPS诱导的iNOS和COX-2的表达（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的促炎 细胞因子TNF-α及IL-1β的释放,且1 0 μg/mL组抑制作用尤为显著（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的JAK1-stat3信号途径激 活及stat3的核转位;降低LPS诱发的ROS产生（P<0.01 vs LPS组）。结论金盏花苷E通过抑制ROS介导的JAK1-stat3信号途 径,抑制LPS诱导的炎症反应。     

脂氧素A4通过p38 MAPK及Nrf2通路调控气道炎症反应

目的：研究脂氧素A4（LXA4）对脂多糖（LPS）诱导的人正常支气管上皮细胞炎症反应的抑制作用及其机制。方法：将对数生长期的BEAS-2B细胞分为3组。对照组：不做任何处理;LPS组：100 ng/mL LPS刺激24 h;LPS+LXA4组：100 nmol/L LXA4预处理30 min,加入100 ng/mL LPS刺激24 h。qPCR法检测IL-6、IL-1β、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO-1）mRNA表达水平;流式细胞术测定胞内活性氧（ROS）水平;谷胱甘肽（GSH）试剂盒检测GSH水平。为进一步了解LXA4的作用机制,Western blot法检测各处理组p38的磷酸化水平以及Nrf2的核转位及磷酸化水平。结果：与对照组相比,LPS组IL-6、IL-1β mRNA以及胞内ROS表达水平升高（P＜0.05）,HO-1 mRNA水平下降（P＜0.01）,p38磷酸化水平上升（P＜0.01）,胞核中Nrf2相对表达量下降（P＜0.01）,总Nrf2磷酸化水平下降（P＜0.05）。经LXA4干预后,与LPS组相比,除上述改变逆转外（P＜0.05）,NQO-1和GSH水平显著上升（P＜0.05）。结论：LXA4可减轻LPS引起的BEAS-2B细胞炎症反应并促进炎症消退,其机制可能一方面与抑制p38 MAPK通路,减少促炎因子的分泌有关;另一方面与增强Nrf2的核转位以及磷酸化,减轻氧化应激损伤有关。     

LPS诱导RAW264.7细胞内HMGB1转位及释放实验研究

目的:观察LPS诱导RAW264.7细胞内HMGBl转位及其释放.方法:用不同浓度的LPS处理小鼠RAW264.7细胞20 h,用荧光显微镜观察LPS诱导RAW264.7细胞HMGB1的分布情况.用West-ern blot方法检测HMGB1在胞核及培养上清中的水平.结果:LPS处理小鼠RAW264.7细胞20 h后,培养上清中的HMGB1水平明显增加,胞核HMGBl含量减少,并存在剂量依赖关系.结论:LPS能诱导RAW264.7细胞释放HMGB1,存在剂量依赖关系.     

白杨素通过JAK-STATs 信号通路抑制内毒素诱导的巨噬细胞炎症反应

目的探讨白杨素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的调控机制。方法分别用不同浓度（0、5、10、20、40、60、80、100、150、 200 μg/mL）白杨素作用RAW264.7 细胞24 h 后,采用CCK-8 检测细胞活力值;分别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理 RAW264.7细胞2 h后,用LPS刺激RAW264.7细胞18 h后,采用ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放水平;分 别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理RAW264.7 细胞2 h 后,用LPS刺激RAW264.7 细胞4 h 后,运用Western blotting 法检测 JAK-1、JAK-2、STAT-1、STAT-3 的磷酸化水平;分别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理RAW264.7 细胞2 h 后,用LPS 刺激 RAW264.7 细胞15 min 后,运用CM-H2DCFDA荧光探针检测RAW264.7 细胞内活性氧簇水平;运用ROS清除剂NAC处理 RAW264.7细胞,检测ROS对LPS诱导RAW264.7细胞JAK-STATs信号和炎症反应的影响;运用激光共聚焦显微镜观察转录因 子STAT-1和STAT-3核转位情况。结果在白杨素浓度低于60 μg/mL时,对RAW264.7细胞活力没有显著影响,因此我们选择 10、30、60 μg/mL白杨素作为抑制炎症作用的低、中、高剂量组;白杨素剂量依赖性地抑制LPS诱导的炎症蛋白iNOS的表达;白 杨素剂量依赖性的下调LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放（P<0.01）;白杨素抑制RAW264.7 细胞中JAK-STATs信号活化并抑制STAT-1和STAT-3核转位;白杨素抑制RAW264.7细胞内ROS的产生;ROS作为上游信号介 导JAK-STATs信号通路的活化。结论白杨素能有效阻断ROS介导的JAK-STATs信号活化,从而抑制LPS诱导的RAW264.7 细胞炎症反应。     

番茄红素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应的作用及其分子机制

 【目的】 探讨番茄红素对脂多糖(LPS)所诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子生成的影响及其作用的分子机制。【方法】 分别用1、5、10 μmol/L 的番茄红素孵育细胞1 h,再用1 μg/mL LPS 处理细胞不同时间,分别用Griess法和ELISA法检测RAW264.7巨噬细胞培养基中NO及IL-6的含量,用Western-blot检测核因子-κB(NF-κB) p65、磷酸化和非磷酸化I-κBα、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的蛋白表达量。【结果】 番茄红素能有效地降低炎性因子NO和IL-6分泌,进一步研究显示番茄红素能够抑制LPS诱导I-κBα磷酸化和降解、NF-κB核转移,阻断ERK1/2和p38 MAPK激活,而对JNK活化没有影响。【结论】 番茄红素能够通过抑制ERK1/2 和p38 MAPK信号通路的激活而抑制巨噬细胞NF-κB依赖的炎症因子NO和IL-6生成,这可能是番茄红素防治一些炎症相关性疾病的作用机制之一。     

Dexamethasone impairs the differentiation and maturation of murine dendritic cells by Toll-like receptor 4-nuclear factor-κB pathway

Background Recent studies have demonstrated that dexamethasone （DEX） interferes with immune responses by targeting key functions of dendritic cells （DCs） at the earliest stage. However, the cellular and molecular mechanisms are still incompletely understood. This study aimed to explore the possible mechanisms by investigating the roles of DEX on differentiation, maturation ＆ function of murine DCs and the effects of DEX on DCs via Toll-like receptor 4 （TLR4）-nuclear factor （NF）-KB mediated signal pathway. Methods Immature DCs （imDCs） were cultured from murine bone marrow （BM） cells. We added DEX into culture medium at different time. The expression of CD11c, CD86 and I-Ab （mouse MHC class II molecule） was determined by flow cytometry. We determined the expression of NF-κB and its inhibitory protein I-κBα by electrophoretic mobility shift assay （EMSA） and Western blotting, respectively. The productions of interleukin （IL）-12p70 and IL-10 in cell culture supernatants were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Results DEX impaired differentiation of DCs from murine bone marrow progenitors, and inhibited lipopolysaccharide （LPS） induced maturation of DCs. DEX significantly inhibited NF-κB expression of normal DCs, the higher the DEX concentration or the longer the DEX treatment time, the more obvious the effect. However, DEX had little effect on LPS-induced NF-KB activation, and partially impaired LPS-induced I-κBα degradation. DEX significantly decreased LPS induced IL-12p70 production by DCs. Interestingly, our results showed a synergistic effect between DEX and LPS on the production of IL-10 by DCs. Conclusions DEX inhibits the differentiation and maturation of murine DCs involved in TLR4-I-κB-NF-κB pathway, and also indirectly impairs Thl development and interferes with the Thl-Th2 balance through IL-12 and/or IL-10 secretion by DCs.     

脂氧素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症相关因子的影响及机制

目的：研究脂氧素（1ipoxin A4）对脂多糖（1ipopo-lysaccharide,LPS）诱导的小鼠巨噬细胞株RAW264.7中相关炎症因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）、环加氧酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、血红素氧化酶-1（HO-1）和白介素-10（IL-10）的影响,并进一步探讨其内在分子机制。方法：以1mg／L LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型,分别用脂氧素A4或脂氧素A4和ZnPPIX干预LPS刺激的RAW264.7细胞24h后,收集培养上清并提取细胞总蛋白,酶联免疫法测定上清中TNF-α,IL-10和PGE2浓度,免疫印迹法检测细胞COX-2和HO-1的蛋白表达量,分光光度计分析HO-1的活性。结果：1mg／L LPS明显诱导TNF-α,COX-2和PGE,的生成,也适度增加IL-10及HO-1的产生;脂氧素A4可抑制LPS诱导的TNF-α（P〈0.01雠LPS组）,COX-2和PGE2（P〈0.01伽LPS组）的生成,却进一步增加IL-10（P〈0.01 vs LPS组）和HO-1表达量和活性（P〈0.01 vs LPS组）;ZnPPIX可减弱脂氧素A。对LPS诱导TNF-α（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）,COX-2和PGE2（P〈0.05 vs LPS＋脂氧素A4组）的生成抑制作用,同时也下调IL-10的生成量。结论：脂氧素A4可抑制LPS诱导的巨噬细胞中致炎介质TNF-α,COX-2及PGE2的生成,同时也促进IL-10的产生,这种效应在一定程度上是通过上调HO-1表达和活性实现。     

不同相对分子质量一年生膜荚黄芪多糖对RAW264.7细胞炎症相关因子表达的影响

目的：观察不同相对分子质量的一年生膜荚黄芪多糖（APSⅠ）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症模型分泌促炎因子和抗炎因子的影响,探讨APSⅠ的抗炎作用。方法：体外培养RAW264.7细胞,APSⅠ作用于未经刺激的RAW264.7细胞及LPS（1 mg/L）刺激后RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、APSⅠ组及LPS+ APSⅠ不同相对分子质量组(APSⅠ-A,APSⅠ-B,APSⅠ-C),采用CCK-8法检测不同相对分子质量、不同浓度的APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）的分泌量。结果：与空白对照组比较,APSⅠ单独处理组RAW264.7细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）,NO及IL-10表达水平明显增加（P<0.05）,TNF-α的分泌量降低（P<0.05）;与LPS模型组比较, LPS+APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力显著升高（P<0.05或P<0.01）,NO、TNF-α的表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10的分泌增加（P<0.05或P<0.01）;3种不同相对分子质量APSⅠ之间比较,APSⅠ-C对NO、TNF-α的抑制更为明显,且APSⅠ-C促进IL-10分泌的作用强于APSⅠ-A及APSⅠ-B。结论：APSⅠ　可以拮抗LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应;不同相对分子质量APSⅠ的抗炎作用有差异,APSⅠ的生物活性与其相对分子质量存在一定的关联性。     

NLRP3、IL-33在LPS诱导的巨噬细胞中的表达及格列本脲对其表达的影响

目的研究NLRP3、IL．33在脂多糖（LPS）诱导的RAW264．7巨噬细胞炎症模型中的表达及格列本脲对其表达的影响。方法培养RAW264．7巨噬细胞,将其分为空白对照（A）组、NLRP3抑制剂格列本脲预处理＋LPS（B）组,LPS模型（C）组;B、C组采用LPS刺激RAW264．7巨噬细胞建立炎症模型,B组在LPS刺激前30rain给予格列本脲处理．空白对照组只给予培养基培养。采用蛋白免疫印迹法（Western．Mot）检测细胞中NLRP3蛋白的表达;酶联免疫吸附试验（EUSA）检测细胞培养上清中1L．33的含量;四氮唑盐（MYr）法测定各组细胞的增殖能力。结果C组中NLRP3蛋白表达均高于A组、B组（均P〈0．05）,B组NLRP3蛋白表达高于A组（P〈O．05）。C组IL-33含量比A、B组高（P〈0．05）,A组和B组之间差异无统计学意义。M1T试验中C组细胞增殖率高于A组、B组（P〈0．05）,而A、B组差异无统计学意义。结论NLRP3、IL．33在LPS诱导RAW264．7的巨噬细胞中表达升高,而格列本脲干预后可抑制NLRP3的表达及IL-33的分泌。     

LPS刺激对RAW264.7细胞p38蛋白激酶的细胞内定位的影响

目的 探讨p38蛋白激酶信号传导的过程及其在细胞中的特异性作用机制。方法 应用间接荧光标记免疫探针技术及共聚焦激光扫描技术观察单核细胞中p38蛋白激酶的分布及LPS对其分布的影响。结果p38在未受刺激的静息单核细胞及内皮生长因子（EGF）刺激的单核细胞胞浆和胞核中荧光强度均呈弥散性分布;脂多糖（LPS）刺激使细胞核区的荧光强度明显增强,而胞浆区域的荧光强度降低。激酶动力学的研究显示,p38激活先于p38移位。LPS刺激后30 min,p38激酶活性即达到高峰,随后2 h内逐步下降,p38激酶活性呈一过性增高;LPS刺激45 min后,核区荧光强度达到峰值,且在2 h内维持在高水平。结论 单核细胞由LPS激活后,其p38蛋白激酶由胞浆转位到胞核,反应具有一定的特异性;p38移位入核依赖于p38磷酸化活化及由细胞浆移位到细胞核是一系列连续发生的事件。     

原花青素B1对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用及其机制

目的：观察原花青素B1（PB1）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。方法：体外培养的处于对数生长期的小鼠巨噬细胞RAW264.7分为对照组（细胞不进行处理）、LPS组（细胞给予2 mg·L^-1LPS）、PB1组（细胞给予10 μmol·L^-1 PB1）和PB1+LPS组（细胞给予2 mg·L^-1LPS+10 μmol·L^-1 PB1）。显微镜下观察各组细胞形态表现，流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平、细胞凋亡率和细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86及Toll样受体4（TLR4）表达水平。结果：与对照组比较，LPS组细胞皱缩变圆，但PB1组和PB1+LPS组细胞形态表现变化不明显。与对照组比较，LPS组细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞中ROS水平降低（P<0.05）。与对照组比较，LPS组细胞凋亡率升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与对照组比较，LPS组细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达水平升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达水平降低（P<0.05）。结论：LPS通过诱导细胞中ROS水平升高引起细胞损伤，PB1通过降低ROS水平，下调细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达对细胞发挥保护作用。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10表达的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及抗炎性细胞因子IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK.-8)对其表达的影响.方法 LPS诱导RAW 264.7细胞不同时间(0、...     

乌司他丁对脂多糖诱导的巨噬细胞NO释放和iNOSmRNA表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOS mRNA)表达的影响。方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10000U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOS mRNA的表达。结果 高浓度的乌司他丁(1000～10000U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P<0.05),下调iNOS mRNA含量(P<0.05);低浓度乌司他丁(100U/ml)对LPS诱导的RAW 264.7细胞NO、iNOS mRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOS mRNA表达,这种抑制与浓度相关。     

Effect of Jianpi Huoxue decoction (健脾活血方)-containing serum on tumor necrosis factor-α secretion and gene Expression of endotoxin receptors in RAW264.7 cells induced by lipopolysaccharide

Objective:To evaluate the effect of Jianpi Huoxue decoction(健脾活血方,JHD)-containing serum on tumor necrosis factor-α(TNF-α) secretion and endotoxin receptor gene expression in RAW264.7 cells induced by lipopolysaccharide(LPS).Methods:The cytotoxicity of blank-control serum and JHD-containing serum at different concentrations were evaluated through the lactate dehydrogenase(LDH) assay in RAW264.7 cells.RAW264.7 cells were divided into six groups:5%blank-control serum group(C1,n=3),5%blank-control serum plus...     

苯并噁唑类化合物K310对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用

目的 探索K310对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用及机制.方法 在LPS诱导RAW264.7巨噬细胞的模型基础上,采用CCK-8方法检测不同浓度K310对RAW264.7巨噬细胞活性的影响;Griess试剂检测K310对一氧化氮(NO)的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测K310对IL-6炎性因子的影响;荧光定量PCR方法检测K310对诱导型一氧化氮(iNOS)和IL-6基因表达的影响;荧光免疫印迹法(Western bolt)检测K310对磷酸化的NF-kB和ERK1/2蛋白的影响.结果 K310(5、10和20 μM)不影响LPS刺激RAW264.7巨噬细胞的活性;与LPS刺激组比较,K310不仅能显著抑制NO和IL-6的炎性因子及炎性基因;还能抑制磷酸化的NF-kB和ERK1/2蛋白的表达.结论 K310对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞的炎症具有抗炎作用,其作用机制可能是K310通过抑制NF-kB和MAPK信号通路,从而抑制NO和IL-6炎性因子的产生.     

连翘对LPS作用的巨噬细胞TLR4蛋白表达的影响

目的观察连翘对LPS诱导巨噬细胞（RAW264．7）16h后TLR4蛋白表达的影响,探讨连翘对抗内毒素作用及其可能机制。方法体外实验共分6组,分别为control组,LPS组,连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组;连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组分别加入连翘水煎液50mg／ml、25mg／ml、12．5mg／ml及多黏菌素B10ug／ml培养0．5h后,再加入10ng／ml LPS,培养16h;Western blot法测各组细胞TLR4蛋白表达变化。结果control组RAW264．7细胞只表达少量TLR4,给予LPS刺激16h,TLR4表达明显升高（P〈0．01）,连翘高、中、低剂量组预处理均可明显降低TLR4的表达（P〈0．01）,并呈剂量依赖关系;连翘高剂量组与多黏菌素B组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论连翘预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4的表达可能是其抗内毒素作用的重要机制。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

CaM抑制剂对LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响

目的观察钙调蛋白(Calmodulin,CaM)抑制剂对脂多糖/干扰素γ(LPS/IFN-γ)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其可能的作用机制。方法采用LPS/IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,钙调蛋白抑制剂(W-7,TFP)预处理细胞后,采用Griess试剂法测定NO释放量;采用Western blot法测定目的蛋白的表达;采用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达的变化。结果 CaM抑制剂可抑制LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO的释放(P<0.01);可抑制iNOS蛋白和mRNA的表达,早期可抑制IκBα的降解、磷酸化IKK(PIKK)和STAT1的蛋白(PSTAT1)表达。结论 CaM抑制剂可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO、iNOS蛋白和mRNA表达;可以通过抑制IκBα降解和磷酸化IKK蛋白表达而发挥抗炎作用。     

神经生长因子在诱导树突状细胞分化中的作用

目的：在体外探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中的作用。方法：首先取C57BL/6小鼠股骨、胫骨骨髓细胞,按培养过程中干预因素不同分为 磷酸盐缓冲液(phosphate buff ered saline,PBS)刺激组(PBS组,n=6)、NGF刺激组(NGF组,n=6)、粒巨噬细胞集落刺激 因子(granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4共刺激组(GM-CSF+IL-4组,n=6)、NGF加GM-CSF和 IL-4共刺激组(NGF+GM-CSF+IL-4组,n=6),培养第7天采用流式细胞仪比较各组间CD11c+细胞阳性率和CD8a−亚型比 例;然后用GM-CSF+IL-4刺激培养未成熟的DCs,经CD11c免疫磁珠阳性分选得到纯化的未成熟DCs,将其分为PBS组 (n=6)、NGF组(n=6)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(LPS组,n=6)、NGF+LPS组(n=6),分别用PBS,NGF,LPS, NGF+LPS诱导细胞成熟,24 h后酶联免疫吸附分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中IL-6, IL-10和IL-12的水平。结果：1) NGF组CD11c+DCs百分比高于PBS组,低于GM-CSF+IL-4组(均P<0.05);GM-CSF+IL-4 组与NGF+GM-CS F+IL-4组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),且在4组中均以CD8a−DCs为主;2)NGF可以增强 LPS诱导的DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12(均P<0.05),而单独NGF刺激对DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12无影响(均P>0.05)。 结论：NGF可以诱导小鼠骨髓细胞向CD11c+DCs的定向分化,并且以CD8a−亚型为主;NGF能增强LPS诱导的DC分泌 IL-6,IL-10和IL-12。     

青藤碱通过调节血红素氧合酶-1表达和自噬抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

目的：探讨青藤碱对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症的影响和机制。方法：以小鼠RAW264.7巨噬 细胞为研究对象,在有或无血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)抑制剂Znpp处理下,采用青藤碱和/或脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7巨噬细胞。应用Real-time PCR检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6 mRNA表达, ELISA检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6水平,免疫荧光试验分析细胞自噬情况,Western印迹检测细胞HO-1蛋白表达。 结果：与对照组相比,LPS作用后RAW264.7细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达和释放增多,自噬相关蛋白LC3绿色荧光 聚集,HO-1表达水平升高(P<0.05);与LPS组相比,加用青藤碱处理能减少TNF-α和IL-6表达和释放,进一步促进LC3 绿色荧光聚集,增加HO-1水平(P<0.05);用HO-1抑制剂Znpp预处理后,青藤碱对LPS诱导TNF-α和IL-6表达和释放的 抑制作用减弱,LC3绿色荧光聚集减少(P<0.05)。结论：青藤碱能减轻LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症,其机制可 能与HO-1介导的自噬激活有关,这为青藤碱应用于炎症反应的防治提供了实验基础和理论依据。