半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系.方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化.结果:鱼藤酮(0.3 ～30 μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤.1～ 10 μnol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高.鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆.结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤.     

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系。方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化。结果:鱼藤酮(0.3～30μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。1～10μmol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3 h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高。鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆。结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。     

白三烯D4体外诱导小胶质细胞激活的作用

目的:观察白三烯D4(LTD4)激活小胶质细胞株BV2细胞的作用,探讨介导BV2细胞激活的半胱氨酰白三烯受体(CysLT受体)亚型。方法:以Western blotting和免疫组化鉴定BV2细胞上CysLT受体的表达;以LTD4及CysLT受体拮抗剂处理BV2细胞后,采用MTT还原法检测细胞活性,微珠示踪法(以流式细胞仪检测)观察细胞吞噬的变化,RT-PCR检测炎症因子IL-6 mRNA的表达变化。结果:LTD4不影响BV2细胞增殖,但随着LTD4浓度增高可增强细胞吞噬、增加IL-6mRNA的表达,100 nmol/L LTD4使细胞吞噬增高为对照的1.4倍(P<0.001),IL-6 mRNA的表达增高为对照的2倍(P<0.01);LTD4诱导BV2细胞上调表达IL-6 mRNA可被CysLT1受体选择性拮抗剂孟鲁司特和CysLT1/CysLT2非选择性拮抗剂BAY u9773抑制,而CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI 3379对此无明显影响;HAMI 3379和BAY u9773(100 nmol/L)能进一步增强LTD4诱导的BV2细胞吞噬。结论:体外LTD4可激活BV2细胞,LTD4诱导细胞IL-6 mRNA上调表达由CysLT1受体介导,LTD4诱导的细胞吞噬增强受CysLT2受体负性调节。     

半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠胶质瘤C6细胞分化的作用

目的:探讨半胱氨酰白三烯受体在大鼠胶质瘤C6细胞的分化中的作用。方法:以激动剂LTD4、CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特以及分化诱导剂forskolin处理C6细胞,观察细胞形态及GFAP蛋白表达变化。结果:Forskolin(10μmol/L)可诱导C6细胞形态变化及GFAP蛋白表达(细胞分化),而LTD4(0.1～100 nmol/L)不能诱导这些变化;单用孟鲁斯特(1μmol/L)无明显作用,但与LTD4(100 nmol/L)合用可诱导C6细胞分化。结论:CysLT2受体可能参与调节大鼠胶质瘤C6细胞的分化。     

半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代皮质神经元的作用

目的:观察受体激动剂LTD4对大鼠原代皮质神经元的作用,以及不同拮抗剂对LTD4及缺血性损伤的影响。方法:在大鼠原代培养皮质神经元,以细胞内钙检测、噻唑蓝(MTT)还原反应、碘化吡啶(PI)和Hoechst-33258染色观察神经元损伤;以缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)1.5h和再灌24h诱导神经元损伤。结果:LTD4(0.01~1μmol/L)不能诱导神经元内钙升高,对神经元活性也没有明显的影响。OGD1.5h,再灌24h,可显著降低神经元活性;CysLT1受体拮抗剂普鲁司特(0.2~10μmol/L)和孟鲁司特(0.2~10μmol/L)以及CysLT1/CysLT2受体非选择性拮抗剂BAY u9773(0.02~1μmol/L),对OGD损伤无明显保护作用。结论:半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠原代神经元及缺血性损伤无明显作用。     

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化

目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达。结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多。形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用。免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起。普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数。结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节。     

过表达5-脂氧合酶通路对氧糖剥夺/复氧小胶质细胞增殖、凋亡的影响

目的:探索5-脂氧合酶(5-LOX)通路在脑缺血炎性损伤中发挥神经保护作用机制。方法:通过慢病毒包装构建5-LOX过表达载体病毒,转染BV2细胞,建立5-LOX过表达的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)BV2细胞模型。OGD/R BV2细胞分别给予抑制剂齐留通(Zileuton)、半胱氨酰白三烯受体阻断剂孟鲁司特(Montelukast)和白三烯B4受体抑制剂U75302,分别阻断5-LOX、白三烯B4受体(BLTs)和半胱氨酰白三烯受体(CysLTRs)。实验分为空载体对照组、过表达组、模型组和给药组,显微镜观察细胞形态变化,采用MTT与流式细胞术分别检测空载体对照组与5-LOX过表达组细胞活力与凋亡。结果:显微镜观察显示出空载体对照组OGD后细胞数目减少,细胞形态逐渐形成“阿米巴状”,5-LOX过表达增加细胞损伤;与模型组相比,给予Zileuton、Montelukast、U75302后,细胞形态恢复,减缓细胞的“阿米巴状”。BV2细胞缺氧缺糖4 h复氧12 h后,与空载体对照组相比,过表达5-LOX细胞活力下降(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01);与模型组相比,过...     

半胱氨酰白三烯受体2拮抗剂筛选方法的建立及化合物初筛

目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(CysLT_2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物.方法:选用高表达CysLT_2受体的大鼠C6胶质瘤细胞,激动剂LTD_4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为CysLT_2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂活性的化合物.采用CysLT1/CysLT_2受体非选择性拮抗剂Bay u9773和CysLT_2受体选择性拮抗剂AP-100984作为参照.结果:RT-PCR鉴定表明C6细胞高表达CysLT_2受体.LTD_4 1 μmol/L能显著升高C6细胞内钙,其作用约为阳性对照ATP的37 5%.CysLT_2受体拮抗剂抑制LTD_4诱导的C6细胞内钙升高,CysLT_1受体选择性拮抗剂无抑制作用.化合物中DXW-1、2、13、23、29、30能抑制LTD_4诱导的细胞内钙升高.结论:LTD_4诱导的C6细胞的钙信号变化可作为CysLT_2受体拮抗剂的筛选方法;化合物DXW-1、2、13、23、29、30具有CysLT_2受体拮抗活性.     

半胱氨酰白三烯受体的研究进展

半胱氨酰白三烯(CysLTs)是一类重要的缩气管物质和炎性介质,包括白三烯C4、D4和E4.细胞膜上一种特异性G蛋白偶联受体介导CysLTs信号的转导,这种受体依据其是否能被抑制剂拮抗而分为两类:CysLT 1类受体(CysLT1)和CysLT 2类受体(CysLT2).CysLT1和CysLT2的基因克隆已经完成,这有利于我们致力于CysLT受体表达调节方面的研究以及探寻CysLTs在病理和生理情况下的新功能.     

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对缺血性损伤后神经元形态的作用

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对原代神经元缺血性损伤后形态变化的作用。方法:在不同浓度孟鲁司特存在条件下,以缺氧缺糖(OGD)2 h和再灌(R)24 h(OGD/R)诱导大鼠原代神经元及皮层混合培养细胞的神经元损伤;以免疫染色法检测神经元数量、胞体大小、胞体总神经突起数量、一级神经突起数量、长度及其分支数量等指标,观察神经元形态的变化。结果:OGD/R可明显减少神经元的数量,显著改变神经元的形态。而孟鲁司特(0.0001～1μmol/L)能减轻单独神经元培养中OGD/R诱导的神经元数量减少,抑制一级神经突起分支数量增加;在混合培养中,孟鲁司特(0.0001～0.1μmol/L)增加OGD/R后一级神经突的长度,减少神经突起数量以及一级神经突起分支数量。结论:半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对大鼠原代神经元缺血性损伤有保护作用。     

白三烯D4在体外对A549肺泡上皮细胞增殖及迁移的影响

目的：观察炎症介质白三烯D4（LTD4）对人肺泡上皮细胞株A549细胞增殖及迁移的影响。方法：以免疫荧光染色鉴定A549细胞上半胱氨酰白三烯（CysLT）受体的表达;以不同浓度（001～100 nmol/L）的CysLT受体激动剂LTD4处理A549细胞不同时间后,以MTT还原法检测细胞活性反映细胞增殖,以改良的划痕法观察细胞迁移的变化。结果：A549细胞表达CysLT1受体及CysLT2受体。001～100 nmol/L LTD4处理A549细胞24～72 h,细胞增殖无明显变化（均P>005）;100 nmol/L LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞活性分别为不加LTD4处理的A549细胞的（103.00±446）%、（107.00±945）%、（105.00±902）%,差异均无统计学意义（均P>005）。虽然001～100 nmol/L LTD4处理的第1个24 h内A549细胞的修复速率远高于第2个及第3个24 h内的细胞修复速率,但同一时间段组间差异无统计学意义（均P>005）。100 nmol/L 的LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞迁移率分别为不加LTD4处理的A549细胞的115、121、106倍（均P>005）,说明LTD4处理后细胞迁移亦无明显变化。结论：在体外给予001～100 nmol/L LTD4处理72 h,不影响A549细胞的增殖及迁移。     

依达拉奉对氧剥夺引起的大鼠肠隐窝上皮细胞损伤的保护效应研究

[目的]研究依达拉奉对氧剥夺导致的IEC -6细胞株损伤的保护效应.[方法]将预先培养好的细胞分为3组:正常组(N组),氧剥夺组(OGD,IR组)和依达拉奉治疗组(OGD+依达拉奉,E组).本研究中所用氧剥夺模型是将细胞株换无糖无血清的培养基后放入含5％ CO2和95％N2的密闭培养箱中2h,后重新复氧复糖.在复氧复糖的同时,将依达拉奉盐溶液( 10 mg/mL)加入细胞培养基中.在复氧复糖2h,收集细胞用DHE荧光探针进行氧自由基(ROS)测定;伤后12 h,富集细胞用于超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的测定;伤后24h收集细胞,用流式细胞仪测定细胞凋亡和Alamar Blue测定细胞活力.[结果]DHE荧光探针结果显示OGD导致的ROS,E组比IR组减少:OGD刺激后,IEC -6细胞内的MDA浓度上升为(1.52±0.21) mmol/mg,而E组的含量为(1.21±0.16) mmol/mg,P＜0.05.OGD后,IEC -6细胞内的SOD活力下降至(7.35±0.84) U/mg,而E组的SOD活力为(8.25±1.12) U/mg,P＜0.05.OGD后细胞活力下降为0.48±0.081,而E组的细胞活力为0.56±0.049,P＜0.01.同时,流式细胞仪的结果显示,依这拉奉抑制了OGD导致的细胞过度凋亡.[结论]依这拉奉可以减轻OGD造成的IEC -6细胞的损伤.     

LTD4及MK571对人结肠癌细胞SW480、Caco-2凋亡和增殖作用的体外研究

目的 观察半胱氨酰白三烯D4（LTD4）及半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂MK571对人结肠癌细胞株SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测细胞生长活性;FITC Annexin V/碘化丙啶（PI）双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;PI染色细胞,用流式细胞仪检测细胞周期.结果 12.5 ～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌SW480细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6～12.5μg/L的LTD4处理24、48 h,对SW480细胞的增殖抑制作用无明显影响,作用时间延长至72 h,可促进SW480细胞的增殖.50～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6-50 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.6.25～200 μmol/L的MK571对结肠癌SW480细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8 ～ 6.25 μmol/L的MK571对SW480细胞的影响与对照组相比无明显差异.25～ 200 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8～ 25 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4对2种结肠癌SW480细胞和Caco-2细胞有促凋亡作用,且存在时效和量效依赖性;而100、200 μmol/L的MK571对2种结肠癌的凋亡无明显作用.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4可以降低2种结肠癌细胞株G0/G1期比例,增加G2/M及S期比例;而100、200 μmol/L的MK571增加2种结肠癌细胞G0/G1期的比例,降低G2/M及S期比例.结论 LTD4具有促进人结肠癌SW480、Caco-2细胞株增殖的作用,该作用可能的作用机制是抑制凋亡、增加G2/M及S期细胞比例.MK571可抑制2种结肠癌细胞株的增殖,但对凋亡无明显影响,其抑制增殖作用的可能机制是阻滞细胞于G0/G1期.     

何首乌提取物二苯乙烯苷对缺氧缺血大鼠星形胶质细胞的影响及其机制的初步探讨

目的探讨2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)对大鼠大脑皮层星形胶质细胞(AS)缺氧、缺糖损伤的影响,并对其可能的机制进行初步探讨。方法原代培养Sprague-Dawley大鼠大脑皮层AS,建立缺氧、缺糖损伤模型,以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原实验检测细胞活力;以乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标;以流式细胞术检测细胞凋亡率,研究氧糖剥夺(OGD)对不同组AS的影响。在此基础上,用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒测定细胞的氧化应激变化。结果与正常对照组相比,细胞经OGD诱导处理后,细胞存活率降低,脂质过氧化产物MDA含量增加。不同浓度的TSG预处理后能减轻OGD所致的细胞损伤。结论 TSG可抑制OGD诱导的AS损伤,其机制可能与提高SOD活性、降低其消耗率和降低脂质过氧化反应有关。     

半胱氨酰白三烯受体与脑损伤关系的研究进展

近年来发现,半胱氨酰白三烯CysLT1和CysLT2受体参与整体水平脑缺血和脑外伤后神经损伤.CysLT1受体调节脑缺血后血脑屏障通透性增高、血管性脑水肿,介导星形胶质细胞增殖及炎症反应;CysLT2受体调节脑缺血后AQP4表达增加、细胞性脑水肿,介导星形胶质细胞损伤;新发现的GPR17也与脑缺血损伤有密切关系.加深CysLT受体在脑损伤及神经保护中作用的认识,将为CysLT受体作为药物靶点筛选和开发防治脑损伤的药物提供新的途径.     

5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

目的：通过绿荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）／5-脂氧酶（5-lipoxygenase，5-LOX）稳定转染PC12细胞，以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法：将带有5-LOX基因的pEGFP—C2质粒及pEGFP—C2质粒（对照），稳定转染至PC12细胞；在缺糖缺氧（oxygen—glucose deprivation，OGD）、H2O2和NMDA处理后，荧光显微镜下观察GFP／5-LOX在细胞内的定位；同时，以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果：转染GFP／5-LOX的细胞内，GFP／5-LOX主要均匀表达于细胞核内；仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后，分别有50．6％和57．7％细胞的GFP／5-LOX移位到核膜；NMDA处理或仅转染GFP的细胞，未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内，3种损伤处理均诱导核膜移位。结论：稳定转染GFP／5-LOX的PC12细胞，GFP／5-LOX主要分布在细胞核；不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位，有不同的特点。