红细胞裂解液对CD34+细胞相对计数的影响及其原因初步探讨

目的：研究红细胞（red blood cell,RBC）裂解液对CD34+细胞相对计数的影响。方法：收集101份外周血干细胞采集物,CD34-PE及CD45-FITC双色免疫荧光染色后,分别用FACS裂解液（FACSTM lysing solution,FACS）、Optilyse C裂解液（optilyse C lysing solution,Optilyse C）及自配裂解液溶解红细胞,采用洗涤程序和运用ISHAGE设门策略,检测CD34+细胞、淋巴、粒、单核细胞相对数,CD45+ 细胞占全部收集信号百分比及各类细胞前向散射光（forward scatter,FSC）及侧向散射光（side scatter,SSC）信号。结果：比较3种裂解液处理后样本的CD34+ 细胞百分比,FACS裂解液处理的样本CD34+ 细胞百分比最低,自配裂解液最高（FACS vs. Optilyse C vs. 自配=0.49±0.43 vs. 0.67±0.50 vs. 0.73±0.66,P=0.000）。FACS裂解后样本CD45+细胞百分比远高于Optilyse C及自配裂解液（t=142.500,P=0.000）。3种裂解液对淋巴细胞百分比结果（F=35.340,P=0.000）具有统计学差异;而粒细胞百分比（F=0.610,P=0.540）、单核细胞百分比（F=1.590,P=0.210）差异无统计学意义。FACS裂解液处理后,CD34+ 细胞、淋巴细胞的FSC和SSC信号强度均弱于Optilyse C裂解液及自配的裂解液;而粒、单核细胞的SSC信号,FACS裂解液处理后最强,Optilyse C裂解液处理后最弱。另外,动员后的白细胞数多少与CD34+ 细胞百分比不存在相关性（r=0.108,P=0.312）。结论：红细胞裂解液导致CD34+细胞相对计数差异的原因可能与CD45+细胞比例有关,即获取的有效细胞数;裂解液对细胞形态的影响与造成淋巴细胞比例有显著性差异有关。鉴于不同红细胞裂解液对CD34等抗原阳性细胞的相对计数确实有不良影响,因此在应用流式细胞术检测或计数时应慎重选择。     

冠心病患者白细胞表面粘附蛋白的表达研究

目的　观察冠心病患者三种白细胞表面粘附相关蛋白的表达及其与冠心病严重性和冠状动脉狭窄程度的关系。方法　采用流式细胞仪免疫荧光法测定中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞表面粘附相关蛋白 CD1 1 a和CD1 1 b含量。结果　冠心病组淋巴细胞及中性粒细胞表面粘附蛋白 CD1 1 b的表达明显高于正常人 ,尤以不稳定型组增高显著 (P<0 .0 1～ 0 .0 5 )。尽管在冠脉病变狭窄 >80 %组 ,其三种白细胞的 CD1 1 b水平高于狭窄程度轻的组 ,但尚未见统计学差异。结论　冠心病存在炎症反应 ,外周血中性粒细胞、淋巴细胞 CD1 1 b表达增高 ,是冠心病疾病加重的反映     

北京地区实验恒河猴外周血T淋巴细胞亚群分析

目的 测定正常实验恒河猴外周血T淋巴细胞亚群,获取基础数值.方法 使用BD FACS Calibur流式细胞仪,Cell QuestTM3.3分析软件,应用CD3-Percp、CD4-FITC、CD8-PE荧光标记的抗体,对北京地区84只实验恒河猴的外周血T淋巴细胞亚群进行统计分析.结果 北京地区实验恒河猴外周血CD3+, CD4+ T淋巴细胞占淋巴细胞(LYM)的百分比为32.82%±5.93%;CD3+CD8+ T淋巴细胞占淋巴细胞百分比为(23.99±6.34)%;CD4+/CD8+的比值为1.45±0.41;LYM百分比为白细胞的(49.70±14.00)%;LYMF为(4.634±2.181)×106/mL.结论 实验用恒河猴T淋巴细胞亚群的基础数值测定为相关比较医学研究奠定基础.     

同型半胱氨酸增高血白细胞表面粘附分子的表达

目的　观察同型半胱氨酸是否改变体外健康人血单核细胞、中性粒细胞及淋巴细胞表面粘附分子CD11b ,CD18,CD14和L 选择素 (L selectin)的表达。方法　细胞表面粘附分子CD11b ,CD18,CD14和L selectin的测定采用直接免疫荧光染色 ,2 4小时内用流式细胞仪测定。结果　同型半胱氨酸在低浓度 (2 0 μmol/L)时明显增加CD11b和CD18在各种白细胞表面的表达 ,同时也增加了CD14在单核及中性粒细胞的表达。这种作用随同型半胱氨酸浓度升高而增强 ,但当浓度升至≥ 1mmol/L时 ,各种粘附分子的表达反而降低。同型半胱氨酸使各种细胞类型表面L selectin降低。结论　同型半胱氨酸可改变白细胞表面粘附分子的表达 ,可能在体内通过此途经导致白细胞粘附并游出于血管内皮。     

传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞免疫表型研究

目的研究传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞的免疫表型.方法用流式细胞术对21例传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞的免疫表型进行分析,并以30名健康体检幼儿作为对照.结果传染性单核细胞增多症异型淋巴细胞在流式细胞仪FS和SS散点图上形成淋巴细胞群向上拖尾的特殊形状,其免疫表型的表达分别是CD3 /CD8 占(78 2±5.4)%,CD3 /CD4 占(13.1±3 4)%,CD3-/CD16 56 占(4.0±1.2)%和CD8 /CD28 占(33.5±6.1)%,与对照组比较差别均有显著性意义(均P＜0.01).结论流式细胞术的淋巴细胞群向上拖尾的特征,以及CD3 /CD8 高表达,可作为传染性单核细胞增多症的诊断指标之一.     

流式细胞仪全血红细胞裂解液研究

目的 研制流式细胞仪全血红细胞裂解液,并与进口试剂比对效果,以期大大降低试剂的成本,使其在中国广泛应用。方法 采用流式细胞术,分别用进口试剂和自制试剂制备全血样品,比较两种试剂对30例健康体检者白细胞分群的影响、淋巴细胞亚群比例的影响、淋巴细胞亚群的平均荧光强度的影响。结果 自制试剂制备的样品中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的分布与进口试剂一致;自制试剂制备的样品,T淋巴细胞（CD3^＋）、B淋巴细胞（CD19^＋／CD3^-）、辅助／诱导T淋巴细胞（CD3^＋CIM^＋CD8^-）、抑制／细胞毒T淋巴细胞（CD3^＋CD4^-1CD8^＋）、NK细胞（CD16^＋56^＋／CD3^-1）的百分率与进口试剂无明显差异（P〉0．05）;自制试剂制备的样品,T淋巴细胞、B淋巴细胞、辅助／诱导T淋巴细胞和抑制／细胞毒T淋巴细胞的平均荧光强度与进口试剂无明显差异（P〉0．05）,但NK细胞的平均荧光强度弱于进口制剂（P〈0．05）。结论　与进口试剂比对的结果表明,自制试剂对白细胞的分群、淋巴细胞亚群的百分率、淋巴细胞表面分子CD3、CD4、CD8、CDl9的表达量,均达到了进口试剂的效果,而成本大大降低。     

HIV/AIDS患者外周血白细胞TLR-1、-2、-4和-6表达的初步研究

目的了解HIV/AIDS患者外周血白细胞Toll样受体(TLRs)的表达及其在HIV/AIDS疾病过程中的意义。方法应用流式细胞仪检测20例HIV/AIDS患者和15例健康人外周血多型核粒细胞、淋巴细胞和单核细胞表面TLR-1、TLR-2、TLR-4和TLR-6的表达水平。结果 TLR-1、TLR-2、TLR-4和TLR-6在外周血白细胞表面均有表达,与健康对照组比较,HIV/AIDS患者多型核粒细胞TLR-1[(967.44±215.01)%vs(1 159.51±210.17)%,P=0.014]、TLR-2[(1 614.91±346.66)%vs(2 101.87±236.28)%,P<0.001]、TLR-4[(1 735.31±443.28)%vs(2 539.08±842.96)%,P<0.001]和TLR-6[(1 102.96±259.32)%vs(1 357.36±155.49)%,P<0.001]的表达水平显著降低;淋巴细胞TLR-1[(922.09±271.04)%vs(728.19±184.31)%,P=0.024]、TLR-2[(961.81±419.21)%vs(617.72±2...     

柯萨奇-腺病毒受体在外周血不同类型白细胞的表达

目的 探讨柯萨奇-腺病毒受体(coxsackie-adenovirus receptor，CAR)在外周血不同类型白细胞的表达情况及性别对CAR表达的影响。方法 用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞、粒细胞及单核细胞CAR的平均荧光强度。结果 流式细胞分析表明，男性白细胞CAR的平均荧光强度明显高于女性，差异具有高度统计学意义；淋巴细胞、粒细胞及单核细胞CAR的平均荧光强度变化无统计学意义。结论 外周血白细胞CAR表达具有性别差异，但无类别差异，流式细胞术是检测白细胞CAR表达的一种有效的方法。     

血脂代谢紊乱与外周血白细胞C5a受体表达的关系

探讨血脂代谢紊乱与外周血白细胞C5a受体表达的关系.方法 高脂血症患者60人,同期正常对照30人,测定血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、脂蛋白(a)、氧化低密度脂蛋(oxLDL)等脂代谢指标以及补体C3、C4,使用流式细胞仪检测外周血白细胞C5a受体,分析脂代谢异常以及补体C3、C45平与C5a受体表达的关系.结果 高脂血症组总胆固醇、甘油三脂、LDL-C、oxLDL、脂蛋白(a)、补体C3、C4等较对照组明显升高;高脂血症组CD88阳性淋巴细胞、单核细胞、粒细胞平均荧光强度有升高趋势(3.05±0.91比2.96±0.76、4.90±1.33比4.58±1.13、13.87±4.77比13.60±3.54),但差异无统计学意义(P>0.05);直线相关分析,CD88阳性单核细胞及粒细胞平均荧光强度与脂蛋白(a)正相关,CD88阳性单核细胞及粒细胞平均荧光强度与oxLDL亦呈正相关,与总胆固醇、甘油三脂、LDL-C、HDL-C、补体C3和C4不相关;偏相关分析及多元回归显示oxLDL是CD88阳性单核细胞及粒细胞平均荧光强度的独立预测因素.结论 oxLDL可能影响外周血白细胞C5a受体的表达.     

肺癌患者淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关分析

目的观察非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达水平,分析其表达水平与肺癌肿瘤免疫逃逸的相关性。方法采集34例肺癌患者外周血,按照TNM分期分为早期组(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期组(Ⅲ期、Ⅳ期),用流式细胞仪检测外周血,分析淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关性。结果晚期组CD3+CD4+的表达水平较早期组降低,而CD3+CD8+的表达水平升高(P<0.05);晚期组肺癌患者CD3+CD4+NKG2D表达率(6.69±3.58%)高于早期组的表达率(2.38±1.13%),CD3+CD4+NKG2A表达率(2.28±0.88%)低于早期组的表达率(5.46±2.09%)(P<0.01);晚期组肺癌患者CD3+CD8+NKG2D表达率(90.57±2.49%)低于早期组的表达率(93.51±3.19%),CD3+CD8+NKG2A表达率(12.32±4.24%)高于早期组的表达率(7.15±3.30%)(P<0.01)。结论非小细胞肺癌病理分期间淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+表达水平的改变,NKG2D、NKG2A在CD3+CD4+和CD3+CD8+表面的表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

人外周血内皮前体细胞的分离、培养及流式细胞仪动态检测

目的:建立人外周血内皮前体细胞（EPCs）分离、诱导的方法,并利用流式细胞仪鉴定人内皮前体细胞的培养效果,为血管生成的细胞治疗研究奠定基础。方法：Ficoll密度梯度离心提取单个核细胞（MNCs）,接种在人纤连蛋白包被的培养板上,培养于EGM 2MV中,4?d后,粘附细胞用Dil AC LDL和FITC UEA 1染色,采用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察。第4天到第7天,应用流式细胞仪动态检测粘附细胞表面标志CD34、CD31、KDR。结果：MNCs培养4?d后,荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜下可观察到Dil AC LDL和FITC UEA 1双阳性的粘附细胞,流式细胞仪检测结果显示,CD34、CD31、KDR阳性细胞表达率分别为（2.50±1.47）%、（5.72±1.66）%、（36.24±3.24）%。第5、6和7天,CD34和CD31阳性细胞阳性率分别为（8.45±3.97）%、（22.52±3.86）%,（14.13±2.79）%、（42.76±3.67）%,（21.14±2.91）%、（54.67±3.44）%。结论：外周血中确实存在EPCs,并且在体外能被诱导分化为成熟的内皮细胞。     

急性脑梗死患者白细胞粘附分子CD_(11a)、CD_(11b)的表达

目的:探讨缺血性脑血管病白细胞与内皮细胞粘附增强的机理。方法:采用流式细胞术,用单克隆抗体(McAb)定量测定了42例急性脑梗死患者周围血中白细胞CD11a、CD11b的阳性表达率并与40例健康人作对照。结果:急性脑梗死组血液CD11a在单核细胞、粒细胞、淋巴细胞的阳性表达率均明显高于对照组P<0.05CD11b在粒细胞和单核细胞的阳性表达率也明显高于对照组(P<0.05)但它在淋巴细胞上的表达两组间则无显著性差异。结论:急性脑梗死发生时白细胞CD11a、CD11b表达上调,白细胞与内皮细胞的粘附明显增强可能会加重缺血后迟发性神经元死亡的病理过程。     

脑血栓形成患者白细胞CD_(11a)、CD_(11b)的表达变化研究

采用流式细胞术，用单克隆抗体定量测定了２０例急性脑血栓形成患者周围血中白细胞ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ的阳性表达率，并以２０例健康人作对照。结果：脑血栓形成组血液ＣＤ１１ａ在单核细胞、粒细胞、淋巴细胞的阳性表达率均明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）；ＣＤ１１ｂ在粒细胞和单核细胞的阳性表达率也明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），但它在淋巴细胞上的表达两组间则无显著性差异。由此提示脑血栓形成时白细胞ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ表达上调，白细胞与内皮细胞的粘附明显增强，可能会加重缺血后迟发性神经元死亡的病理过程。     

两种白细胞滤器获取单个核细胞作为实验研究的生物学功能的比较*

目的：分析单采血小板去白细胞滤器(apheresis platelet leukoreduction system chambers, LRSCs)和全血去白细胞滤器(whole blood leukoreduction filters, LRFs)所收集的白细胞替代常规人全血白细胞进行实验的相关生物学功能和表型。方法：分别采用直接法和反冲洗获得LRSCs和LRFs白细胞，经人的淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，分离出外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。用CD3激发型抗体和细胞因子白细胞介素2(interleukin, IL-2)体外扩增培养10 d，观察细胞形态、细胞增殖、细胞凋亡，并用流式细胞术(flow cytometry, FCM)进行表型分析，对比两种滤器分离出的白细胞生物学差异。结果：(1)PBMCs镜下观察：LRSCs中细胞较纯，个体大小较均一；LRFs包含部分形态较小的血小板和形态较大的粒细胞。两者细胞活力无差异。(2)LRSCs所分离的PBMCs细胞亚群以淋巴细胞为主，单核细胞次之，含极少量的粒细胞；而LRFs淋巴细胞与粒细胞比例接近，单核细胞较少。初始状态淋巴细胞群体中各细胞亚群表型相似。(3)LRSCs-PBMCs细胞，经CD3与IL-2体外刺激后，细胞活化集落大且较均一，而LRFs-PBMCs细胞集落多但分布较散。(4)体外培养第6天、第10天两组滤器间淋巴细胞各亚群表型差异无统计学意义。(5)两种滤器血PBMCs细胞凋亡率类似，且均为早期凋亡细胞比例高于晚期凋亡细胞。(6)经体外扩增培养10 d，发现两种滤器血PBMCs细胞增殖速率相当，细胞活力等同。结论：两种滤器所得的白细胞均可用于相关的基础实验研究，且LRFs含有较多的粒细胞，这也为粒细胞的研究工作提供了便利，解决了临床用血与实验用血的需求。     

罗格列酮对2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36表达的影响

目的:观察2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36的表达及罗格列酮对其表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采用流式细胞仪测定2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36的表达,并观察罗格列酮治疗后的变化;分析CD36与2型糖尿病各临床指标间的关系。结果:2型糖尿病组患者单核细胞CD36表达明显高于正常对照组(745.9±281.3 vs 406.3±80.2,P<0.01);动脉粥样硬化组CD36表达明显高于无动脉粥样硬化组(878.2±296.1 vs 584.2±148.3,P<0.01)。罗格列酮治疗后,患者单核细胞CD36表达、空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、HbA1c、空腹胰岛素(FIN)、餐后胰岛素(PIN)、胰岛素抵抗程度(HOMA-IR)均降低,与治疗前、安慰剂组均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。糖尿病患者单核细胞CD36表达与FBG(r=0.55,P<0.05)、HbA1c(r=0.62,P<0.01)、HOMA-IR(r=0.64,P<0.01)正相关,与PBG、FIN、PIN无明显相关。结论:罗格列酮可能通过有效控制血糖、降低胰岛素抵抗等途径来降低2型糖尿病患者外周血单核细胞CD36的表达。     

正常人外周血自然杀伤T细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例

目的：探讨正常人外周血中自然杀伤T（NKT）细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的95%参考值范围。方法：取141名正常成年人和30例肺癌患者外周血,直接双色荧光抗体染色,溶血洗涤后用流式细胞仪检测NKT细胞和T细胞各亚群的数量。分析获取的结果以百分位数计算95%的正常值范围。结果：141名正常人外周血NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）的百分率平均数为4.16%,标准差为4.13%,以百分位数法获得95%参考值范围为（0.78～11.71）%;18～30岁组、31～50岁组和51～70岁组的NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的平均数分别为4.64%,3.91%和3.57%,差异无统计学意义（P〉0.05）;30例肺癌患者组与正常组该项指标的差异亦无统计学意义（P〉0.05）。同时检测到正常人CD3^＋细胞、CD3^＋CD4＋细胞、CD3^＋CD8＋细胞、CD3^＋CD4＋/CD3^＋CD8＋比值以及NK细胞（CD3-CD16^＋CD56^＋）的比例均与大多数报道的正常值相似。结论：正常人外周血中NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的95%参考值范围是（0.78～11.71）%,平均数为4.16%,中位数为2.97%,虽然NKT细胞比例随年龄增加而减少,但两者之间无直线相关关系。未发现肺癌组患者NKT细胞比例与正常人有显著性差异。     

Expression of CD40 and CD40L on Peripheral Blood Mononuclear Cells in Patients with Condyloma Acuminatum

The initiation,development and transforma-tion of condyloma acuminatum(CA)bear a closerelation to the cellular i mmune function ofhost[1-3].The CD40and CD40ligands,a couple ofi mportant costi mulatory molecules of the specifici mmune systemin vivo,play an i mportant role inthe activation of Tlymphocytes and the secretionof effective cytokines.To obtaintheinformation a-bout the expression level and explore the clinicalsignificance of CD40and CD40L on peripheralblood mononuclear cells(PMBC…     

耐多药结核患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的变化

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+T细胞在耐多药结核(multidrug-resistant TB,MDR-TB)发病机制中的作用。方法:随机选择MDR-TB患者31例,药物敏感性结核(drug-susceptible TB,S-TB)33例,健康对照(healthy control,HC)30例,流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞。结果:S-TB患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞约占CD4+T细胞的(2.43±0.69)%,显著高于健康人的(1.61±0.46)%,两组之间差异具有显著统计学意义;MDR-TB患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞约占CD4+T细胞的(3.14±0.59)%,显著高于S-TB患者的细胞比例,两组之间差异具有显著统计学意义。结论:MDR-TB患者外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞明显增加,揭示其在MDR-TB发病中发挥了重要作用。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞在肺癌患者外周血的表达及临床意义

目的：探讨晚期肺癌患者外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的表达及其临床意义。方法：采用流式细胞仪检测30例肺癌患者化疗前、后外周血中Treg的水平,并与30例健康人（对照组）进行比较。结果：（1）肺癌患者外周血中Treg比例为（15.0±2.3）%明显高于对照组（7.1±2.0）%（P〈0.001）;（2）化疗前肺癌患者外周血中Treg为（15.0±2.3）%明显高于化疗后的（6.8±1.8）%（P〈0.001）;（3）Treg水平与病理类型无关（P〉0.05）,与临床分期有关（P〈0.01）。结论：晚期肺癌患者外周血中Treg升高,其水平变化可能可以作为评估肺癌患者疗效的指标。     

肺癌和乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞及foxp3 mRNA的变化特点及临床意义

目的：探讨肺癌、乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平的变化及临床意义。方法：应用流式细胞术检测9例肺癌、9例乳腺癌患者及10例非肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例,应用RT-PCR技术检测人外周血PBMC foxp3基因的表达。结果：流式细胞术检测显示,肺癌及乳腺癌患者外周血PBMC中CD4+CD25+T细胞占CD4⁺T细胞的比例［（21.30±11.26）%］高于非肿瘤患者［(14.19±8.56）%］（P<0.05）,肺癌及乳腺癌患者外周血PBMC中foxp3 mRNA的表达水平高于非肿瘤患者表达水平（P<0.05）,肺癌和乳腺癌患者外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞比例增加。结论：CD4+CD25+调节性T细胞在维持自身免疫稳定的同时对肿瘤免 疫具有抑制作用,该细胞群比例的增加可能参与肿瘤的发生。