小分子 NEK2 干扰 RNA 对肺癌细胞耐药的研 究简

目的 探讨小分子NEK2干扰RNA （siRNA-NEK2）逆转人肺癌耐药细胞（A549/DDP）耐药性的研究.方法 应用Real-time PCR法及Western blot法验证NEK2基因在人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）细胞系呈现高表达;并采用脂质体为转染介质,将NEK2小片段RNA导入A549/DDP细胞沉默NEK2基因;应用MTT法观察顺铂、阿霉素对沉默NEK2基因后的A549/DDP细胞的细胞毒活性变化.结果 NEK2-mRNA、NEK2蛋白在A549/DDP细胞系表达水平均显著高于A549细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）;顺铂、阿霉素对A549/DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）分别是（53.08±0.56）、（8.09±0.31） μg/mL,对siRNA-control A549/DDP细胞的IC50分别是（53.09±0.78）、（8.10±0.98） μg/mL,而对siRNA-NEK2 A549/DDP细胞的1C50有显著下降,其值分别是（18.59±0.10）、（2.30±0.14） μg/mL,两组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 小分子NEK2干扰RNA沉默NEK2可以提高耐药的肺癌细胞对化疗药物的敏感性.NEK2可能成为逆转肺癌耐药的一个新的靶点.     

基于生物信息学分析FAM83H-AS1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 通过生物信息学分析FAM83H-AS1在乳腺癌中的表达及其对临床治疗和预后评估的意义。方法 下载癌症基因组图谱（the Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中多种肿瘤表达资料,采用R语言分析FAM83H-AS1在多种癌症中的表达情况。单独分析FAM83H-AS1在乳腺癌中的表达情况,并通过基于基因表达水平值的交互式分析平台（Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA）在线数据库验证表达情况。利用TCGA数据库下载并分析生存资料,明确FAM83H-AS1表达水平与乳腺癌患者预后的关系,并利用GEPIA及Kaplan-Meier Plotter进行双重验证。同时利用TCGA临床信息分析FAM83H-AS1与临床病理分期的关系,运用R语言分析FAM83H-AS1与肿瘤微环境、免疫检测点相关基因及肿瘤突变负荷（tumor mutation burden,TMB）的相关性,并进行基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）。结果 FAM83H-AS1在多种癌症中表达异常,其中在乳腺癌中的表达显著升高,且高表达FAM83H-AS1的乳腺癌患者总生存率显著降低。此外,不同临床分期的乳腺癌患者FAM83H-AS1的表达水平不同。FAM83H-AS1与乳腺癌样本中的基质细胞评分及免疫细胞评分均呈负相关,与一些免疫检测点相关基因表达具有相关性,TMB雷达图结果提示FAM83H-AS1在乳腺癌中的表达与TMB存在正相关性,GSEA结果提示FAM83H-AS1的表达与错配修复功能呈正相关性。结论 FAM83H-AS1基因在乳腺癌中高表达,与患者的不良预后、临床病理分期、肿瘤微环境及TMB均有相关性。同时FAM83H-AS1与免疫检测点相关的一些基因及错配修复基因存在相关性,以上可能为临床乳腺癌的治疗、预测预后及基因靶向药物的研制提供理论依据。     

microRNA-149在顺铂耐药非小细胞肺癌细胞中的表达变化及相关机制研究

目的探讨microRNA-149(miR-149)在顺铂耐药A549细胞(A549/DDP)中的表达规律及作用机制。方法生物信息学方法分析顺铂耐药A549细胞中的microRNA表达变化。体外培养A549细胞并诱导对顺铂耐药的A549/DDP细胞系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-149在两种细胞系中的表达差异。CCK-8试验及流式细胞术检测单纯miR-149过表达以及miR-149和ABCC1同时过表达对细胞顺铂敏感性的影响。qRT-PCR及Western blot检测A549及A549/DDP细胞中ABCC1的表达差异,双荧光素酶报告试验检测miR-149以ABCC1之间的靶向关系,并利用qRT-PCR及Western blot加以证实。结果 A549/DDP细胞中的miR-149表达较低,与A549细胞相比,差异具有统计学意义(t=-4.65,P0.05)。miR-149过表达可以降低顺铂处理后A549/DDP细胞的活力但增加其凋亡率,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(P均0.05)。与A549细胞相比ABCC1在A549/DDP细胞中存在mRNA及蛋白水平的高表达,差异具有统计学意义(t=8.44、5.14,P均0.05)。过表达miR-149可以降低A549/DDP细胞中ABCC1的mRNA及蛋白水平,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(t=-3.14、-4.54,P0.05)。双荧光报告酶分析显示miR-149可直接与ABCC1 mRNA的3’UTR结合。miR-149与ABCC1同时过表达的A549/DDP细胞与单纯miR-149过表达的细胞相比,顺铂处理后细胞活力增加,凋亡减少,差异具有统计学意义(P均0.05)。结论 miR-149表达不足可能引起A549细胞对顺铂的耐药,该机制与miR-149对ABCC1的抑制作用有关。     

叉头蛋白3对肺腺癌细胞增殖和化疗药物顺铂敏感性的影响

目的：观察叉头蛋白3（FOXP3）在人肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和顺铂敏感性的影响，阐明肺腺癌细胞对顺铂耐药的相关机制。方法：收集肺腺癌患者术后石蜡标本50例和正常肺组织10例。免疫组织化学染色方法检测肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3和Ki-67的表达，分析肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3阳性表达率的差异，Pearson相关分析法分析FOXP3和Ki-67表达的相关性。选取对数生长期的人肺腺癌A549细胞进行siRNA转染，将A549细胞分为Mock组（转染脂质体）、Control-siRNA组（转染Control-siRNA）和FOXP3-siRNA组（转染FOXP3-siRNA）。RT-qPCR法检测各组A549细胞中FOXP3 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平，CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性及不同浓度（0、0.63、1.25、2.50和5.00mg·L^-1）顺铂作用后各组A549细胞生长抑制率，RT-qPCR和Western blotting法检测顺铂作用后各组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平。结果：FOXP3在肺腺癌和正常肺组织的阳性表达率分别为62.0%和13.3%，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）；FOXP3和Ki-67在肺腺癌组织中表达呈正相关关系（r=0.370，P<0.01）；FOXP3-siRNA组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.01）；顺铂作用48和72 h后，FOXP3-siRNA组A549细胞增殖活性明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25、2.50和5.00 mg·L^-1顺铂作用后，FOXP3-siRNA组A549细胞生长抑制率均高于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25和2.50 mg·L^-1顺铂组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显高于0 mg·L^-1顺铂组（P<0.05）。结论：沉默FOXP3可抑制肺腺癌细胞的增殖，增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性。     

姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用的体外研究

目的研究姜黄素和顺铂联合应用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察姜黄素和顺铂对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。结果姜黄素及顺铂能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖，并呈浓度及时间依赖性，两者作用人肺腺癌A549细胞48h的半数抑制浓度（IC50）分别为18．4μmol／L、0．966μg／ml。姜黄素10μmol／L、15μmol／L、20μmol／L与顺铂1μg／ml、2μg／ml联合24h、48h、72h的抑制率显著高于单用顺铂、姜黄素组（P〈0．05），两者呈现出相加的抗瘤效果。结论姜黄素在体外对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显的抑制作用，能提高顺铂对人肺腺癌A549细胞的敏感性。     

培美曲塞联合奥沙利铂治疗肺癌的疗效与机制研究

目的 研究培美曲塞联合奥沙利铂调控NOD1/NF-κB/R1P2信号治疗肺癌的机制。方法 选取2014年1月—2017年1月天津市第五中心医院收治的晚期肺腺癌患者80例。随机分为两组：观察组接受培美曲塞联合奥沙利铂化疗；对照组接受培美曲塞联合顺铂化疗。化疗2个疗程后评价疗效和不良反应，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测患者血清NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3蛋白含量；采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测肺腺癌组织NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 mRNA表达。结果 观察组培美曲塞联合奥沙利铂化疗的效果优于对照组（P?<0.05）；观察组培美曲塞联合奥沙利铂化疗的不良反应与对照组比较，差异有统计学意义（P?<0.05），观察组低于对照组；与化疗前比较，化疗后观察组和对照组患者血清NOD1、NF-κB、R1P2和Caspase-3蛋白含量升高，癌组织NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 mRNA表达升高（P?<0.05）；与对照组比较，观察组患者血清NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3蛋白含量升高，癌组织NOD1、NF-κB、R1P2及Caspase-3 mRNA表达升高（P?<0.05）。结论 培美曲塞联合奥沙利铂治疗肺腺癌与联合顺铂比较，其疗效更高、不良反应更小，其机制可能与调控NOD1/NF-κB/R1P2信号有关。     

健脾补肾方联合培美曲塞和顺铂治疗晚期肺腺癌临床观察

目的:评价健脾补肾方联合培美曲塞和顺铂治疗晚期肺腺癌患者的临床疗效。方法:将64例晚期肺腺癌患者随机分为对照组和治疗组各32例。对照组采用培美曲塞联合顺铂方案化疗,治疗组在化疗的同时加用健脾补肾方,连用2个周期评价疗效。结果:治疗组在有效率的提高、中医临床症候的改善、生活质量改善、毒副反应减轻方面均优于对照组,具有统计学意义(P0.05)。结论:健脾补肾方联合培美曲塞和顺铂治疗晚期肺腺癌具有增效减毒、改善症状的作用,效果显著,值得临床推广应用。     

培美曲塞联合奈达铂治疗晚期肺腺癌的临床观察

目的：评价培美曲塞联合奈达铂治疗晚期肺腺癌的疗效及不良反应。方法：入组32例经病理确诊的晚期肺腺癌患者,给予培美曲塞500mg/m^2静滴,第1天;奈达铂80mg/m2静滴,第1天,3周为1个周期,2个周期后评价疗效及不良反应。结果：32例患者中完全缓解（CR）0例,部分缓解（PR）9例,稳定（SD）15例,进展（PD）8例。有效率 RR （CR＋ PR）28．1％。中位生存期11．8个月,1年存活率46．9％。结论：培美曲塞联合奈达铂治疗晚期肺腺癌具有较好的疗效及安全性。     

TS 蛋白表达在培美曲塞治疗晚期肺腺癌患者疗效的意义

目的：探讨胸苷酸合成酶（ TS）表达水平在培美曲塞治疗晚期肺腺癌患者疗效的意义。方法：回顾性分析30例接受培美曲塞联合顺铂化疗的ⅢB/Ⅳ期肺腺癌患者,运用免疫组织化学方法检测患者癌组织中 TS 蛋白表达,并随访1年,对化疗疗效进行分析。结果：30例患者中,TS 阳性表达率为23.33％,TS 表达与患者的性别、年龄及临床分期无关（P﹥0.05）。TS 表达阴性患者客观缓解率（RR）为43.48％,而 TS 表达阳性患者 RR 为14.29％,差异无统计学意义（P=0.215﹥0.05）;TS 蛋白表达阴性患者疾病控制率（DCR）为91.30％,TS 蛋白表达阳性患者 DCR 为42.86％,差异有统计学意义（P =0.016﹤0.05）。Kaplan-Meier 生存曲线显示：TS 蛋白阴性表达者1年 DFS 高于阳性表达者,差异有统计学意义（P =0.047﹤0.05）。结论：TS 可作为预测肺腺癌患者对培美曲塞的敏感性的指标,TS 表达阴性肺腺癌患者可以从含培美曲塞的化疗方案中获益。     

耐培美曲塞人肺癌细胞系的建立

目的培美曲塞是新一代的抗肿瘤药物,但其在肺癌治疗中的耐药现象日益明显,建立耐培美曲塞人肺腺癌细胞株A549/Pemetrexed有利于对培美曲塞耐药的深入研究。方法以人肺腺癌细胞株A549为亲代细胞,采用"血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导"法,用培美曲塞进行诱导,建立耐培美曲塞细胞株A549/Pemetrexed,测定其生长曲线、倍增时间和克隆增长率,并与A549相比较。结果 A549/Pemetrexed对培美曲塞的耐药指数为(14.81±1.47),并对吉西他滨、5氟脲嘧啶、顺铂、卡铂耐药,耐药指数分别为(9.20±2.65)、(12.2±1.79)、(5.79±0.68)、(7.98±1.02);对紫杉醇、多西他赛敏感,耐药指数分别为(1.44±0.34)、(1.04±0.21);增殖速度与A549接近,分别为(63.03±0.98)h和(62.63±1.23)h。结论本研究建立的A549/Pemetrexed细胞株生长稳定,可用于下游的实验研究。     

川芎嗪对人非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的相关ATP结合盒转运体表达水平的影响

目的：观察川芎嗪（四甲基吡嗪）对耐药相关ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、C1(ABCC1)和G2(ABCG2)表达水平的影响，揭示其逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药的机制。方法：采用细胞增殖（CCK8）实验，分析人肺腺癌细胞株A549及顺铂耐药株A549/DDP对顺铂的耐受性，计算耐药指数。分析A549/DDP对川芎嗪的耐受性，遴选逆转耐药所需的工作浓度并检测逆转效果。设置空白组接种A549细胞，模型组、实验组和阳性对照组均接种A549/DDP细胞；空白组和模型组均用1640完全培养基孵育，实验组用含工作浓度川芎嗪的1640完全培养基孵育，阳性对照组用含Tariquidar的1640完全培养基孵育。提取各组全部蛋白及mRNA，用免疫印迹法（Western Blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析川芎嗪对ABCB1、ABCC1和ABCG2及其m RNA表达水平的影响。结果：A549细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（28.33±3.19）μM,A549/DDP对顺铂的IC50为（983.43±101.67）μM,A549/DDP的耐药指数为34....     

ROS1基因与晚期肺腺癌患者培美曲塞联合铂类化疗效果及预后的关系

目的分析ROS1基因与晚期肺腺癌患者培美曲塞联合铂类化疗效果及预后的关系。方法选取2016年1月至2018年4月郑州大学第一附属医院收治的304例晚期肺腺癌患者,所有患者均行ROS1基因检测,并给予培美曲塞联合铂类化疗,分析ROS1基因状态与化疗有效率及无疾病进展生存期之间的关系。结果 ROS1阳性患者有效率为39.3%,高于阴性患者的22.1%,差异有统计学意义(P=0.042),ROS1阳性患者PFS较ROS1阴性患者长(P=0.013)。结论 ROS1阳性晚期肺腺癌患者应用培美曲塞联合铂类化疗效果更好,预后更佳。     

胰岛素对人肺腺癌细胞A549化疗增敏作用机制的研究

目的探讨胰岛素对化疗药物顺铂（DDP）敏感性的影响和机制。方法选用人肺腺癌细胞A549为靶细胞,采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30％时的药物浓度（IC30）,检测胰岛素不同浓度或作用不同时间后,对A549细胞化疗敏感性的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。Western Blot印迹方法检测不同加药处理组的细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果顺铂的IC30约为36．87μg／mL;胰岛素（2．0～160mU／mL;8h～16h）可增强顺铂（36．87μg／mL）的细胞毒作用（P〈0.01）。流式分析显示DDP能引起A549的S期细胞阻滞,胰岛素可增加DDP对A549的S期细胞阻滞。Western Blot印迹方法检测显示单用顺铂组较对照组比较,CyclinA的表达明显增强,CyclinD1的表达变化不明显。胰岛素联合顺铂组较单用顺铂组比较,CyclinA、CyclinD1的表述变化均不明显。结论胰岛素具有化疗增效作用,胰岛素用药的时机选择是实现增效的关键。其机制可能为：胰岛素能够使A549的S期细胞比例增加,与DDP有协同作用。顺铂对人肺腺癌细胞株A549细胞周期的影响表现为S期的阻滞,CyclinA的表达增强在其作用机制上起着重要的作用。     

FAM83H-AS1表达与结肠癌患者临床特征及预后的关系

目的探讨长链非编码RNA FAM83H-AS1的表达与结肠癌患者临床特征及预后的关系。方法 RT-qPCR和原位杂交法检测90例结肠癌(结肠癌组)及对应癌旁组织(癌旁组)中FAM83H-AS1的表达。COX多因素回归分析FAM83H-AS1表达与结肠癌患者临床特征及总体生存率的关系。Kaplan-Meier法绘制生存曲线,log-rank检验分析生存率。结果结肠癌组FAM83H-AS1 mRNA的相对表达量明显高于癌旁组[(4.48±1.38)比(1.18±0.24),P<0.001];结肠癌组FAM83H-AS1阳性表达率明显高于癌旁组织[91.11%比57.78%,P<0.001];而且,FAM83H-AS1的表达与结肠癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(r=0.342、0.376、0.410、0.612,均P<0.05),且这些参数是结肠癌中FAM83H-AS1表达的独立影响因素;FAM83H-AS1高表达的结肠癌患者5年生存率明显低于低表达者(26.85%比80.36%,P<0.01);年龄、FAM83H-AS1表达水平、浸润深度和淋巴结转移与结肠癌患者的总体生存率有关,是其独立影响因素(P<0.05)。结论 FAM83H-AS1在结肠癌组织中呈高表达,其表达水平与癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和生存预后有关,可能在结肠癌发生发展中起着重要作用。     

培美曲塞二钠与吉非替尼对肺腺癌细胞的放射增敏作用

目的：研究培美曲塞二钠与吉非替尼单独及联合运用对肺腺癌细胞放射增敏作用及机制。方法：单独或联合使用培美曲塞二钠和吉非替尼处理人肺腺癌细胞株A549,使用噻唑蓝比色法（MTT）检测药物对细胞增殖的影响;采用克隆形成试验检测药物联合放射线对细胞的生长抑制作用;使用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blot检测细胞内Akt和p-Akt的表达变化。结果：培美曲塞二钠和吉非替尼对人肺腺癌细胞A549增殖具有抑制作用,体外培养克隆形成实验分析显示,放疗+两药联用组的准阈剂量（Dq）、平均致死剂量（D0）及2 Gy照射时的存活分数（SF2）均明显低于单纯放疗组、放疗+培美曲塞二钠组及放疗+吉非替尼组;培美曲塞二钠和吉非替尼放射增敏比（sensitivity enhanced ratio,SER）分别为1.17和1.48,两药联合 SER为2.62。培美曲塞二钠和吉非替尼使细胞阻滞在G1/G0期,与放射线联合作用后,S期细胞比例进一步降低。培美曲塞二钠和吉非替尼均可以提高放射线诱导的凋亡,两药联用后细胞的凋亡率最高。药物作用前后、照射前后及药物增敏照射后Akt水平没有明显改变;培美曲塞二钠和吉非替尼均能抑制p-Akt表达;与单纯照射组相比,培美曲塞二钠和吉非替尼联合照射组p-Akt水平显著减低,p-Akt/Akt的比值最低。结论：培美曲塞二钠和吉非替尼各自均有放射增敏作用,两药联合使用可以明显提高放疗效果,其机制可能与减少S期细胞、增强放射线诱导凋亡和抑制PI3K/Akt信号转导通路有关。     

晚期非鳞非小细胞肺癌胸苷酸合成酶和核糖核苷酸还原酶M1的表达及其与化疗疗效的关系

目的：探讨胸苷酸合成酶（TS）和核糖核苷酸还原酶M1（RRM1）的表达与培美曲塞或吉西他滨联合卡铂治疗晚期非鳞非小细胞肺癌疗效的关系。方法晚期非鳞非小细胞肺癌患者70例,分为培美曲塞＋卡铂化疗组35例及吉西他滨＋卡铂治疗组35例,检测培美曲塞＋卡铂化疗组患者肺癌组织 TS 的水平和吉西他滨＋卡铂化疗组患者肺癌组织RRM1的水平,分析客观缓解率（ ORR）、无进展生存时间（ PFS）与TS、RRM1水平的关系。结果培美曲塞＋卡铂化疗组中TS高表达患者ORR为15．8％（3／19）,低于TS低表达患者的75．0％（12／16）（P＜0．05）;TS高表达患者PFS为（2．1±0．6）个月,短于TS低表达患者的（6．6±2．1）个月（P＜0．05）。吉西他滨＋卡铂化疗组RRM1高表达患者ORR为17．6％（3／17）,低于RRM1低表达患者ORR的72．2％（13／18）（P＜0．05）;RRM1高表达患者PFS为（2．2±0．6）个月,短于RRM1低表达患者的PFS（7．1±3．4）个月（P＜0．05）。结论晚期非鳞非小细胞肺癌患者采用培美曲塞联合卡铂化疗时,TS低表达者的临床疗效较好,而采用吉西他滨联合卡铂化疗时,RRM1低表达者的临床疗效较好。     

靶向Ku70基因siRNA对人肺腺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用

目的：研究Ku70与人肺腺癌耐药的相关性,观察调控Ku70表达能否逆转人肺腺癌耐药细胞系（A549/DDP）的耐药性。方法：采用RT-PCR、Western Blotting方法比较Ku70在人肺腺癌亲代细胞（A549）与耐药细胞系（A549/DDP）的表达水平。转染靶向Ku70基因siRNA（si-Ku70）的A549/DDP细胞作为实验组,转染非特异性siRNA（si-Scramble）的A549/DDP细胞作为阴性对照组,同时设空白组(A549/DDP细胞)。加药组在转染后48 h给予顺铂。应用MTT法检测各组细胞在顺铂作用下的生存率,并计算半数抑制浓度（IC₅₀）,采用流式细胞仪定量检测细胞凋亡率;采用分光光度法检测Caspase-3活化程度。结果：Ku70 mRNA和蛋白在A549/DDP细胞表达水平显著高于其亲代A549细胞（P<0.01）;靶向Ku70的siRNA（si-Ku70)明显下调A549/DDP细胞的Ku70 mRNA和蛋白表达水平（P<0.01）;在不同浓度顺铂作用24 h后,实验组细胞的生存率明显低于阴性对照组和空白组（P<0.01）。6 mg/L顺铂作用24 h后,实验组细胞凋亡率及Caspase-3活化程度高于阴性对照组和空白组（P<0.05）。结论：Ku70在人耐药肺腺癌细胞呈现高表达,提示Ku70参与肺腺癌耐药的形成;靶向Ku70siRNA导入人肺腺癌耐药细胞可特异性下调Ku70的表达,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,逆转其耐药性,Ku70可能成为逆转肺癌耐药的一个新的分子靶点。     

长链非编码RNA PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用

目的: 研究长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）PAPPA-AS1在人肺腺癌细胞铂类耐药中的作用,并初步探讨其可能的调控机制。方法: 采用RNA测序（RNA-seq）技术检测人肺腺癌细胞A549及其铂类耐药细胞中lncRNA和mRNA的差异表达谱;qRT-PCR检测lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平;利用siRNA技术下调铂类耐药人肺癌细胞中PAPPA-AS1的表达,CCK-8实验检测肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性;克隆形成实验检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡分布;蛋白质印迹法检测Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白在A549/DDP和A549/NDP细胞中的表达水平。 结果： 与亲代敏感细胞A549相比,lncRNA PAPPA-AS1在A549/DDP和A549/NDP细胞中呈高表达;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的肺腺癌细胞对铂类药物的敏感性增强,细胞增殖活力下降,细胞凋亡率增加（P均<0.05）;与对照组比较,si-PAPPA-AS1组的细胞中Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达明显升高,磷酸化PI3K、Akt和mTOR蛋白表达明显降低。结论： 下调PAPPA-AS1可以通过抑制PI3K/Akt信号通路逆转肺腺癌细胞对铂类药物的抵抗性。     

培美曲塞联合奥沙利铂一线治疗老年或功能状态评分差的晚期肺腺癌临床观察

目的：评价培美曲塞联合奥沙利铂治疗老年或功能状态评分差的晚期肺腺癌的有效性和安全性。方法研究对象为未接受过一线化疗的老年或功能状态评分差的ⅢB/Ⅳ期肺腺癌患者,采用培美曲塞联合奥沙利铂方案,每3周为1个周期重复。连用2-6个周期评价疗效和不良反应,并进行随访。结果39例患者中CR 2例（5.1%）,PR6例（15.4%）,SD15例（38.5%）, PD16例（41.0%）,RR20.5%,DCR59.0%,MST 9个月。主要毒副反应为I～II度骨髓抑制、神经毒性和胃肠道反应,经对症处理后不影响化疗进行。结论培美曲塞联合奥沙利铂方案治疗老年或功能状态评分差的晚期肺腺癌患者疗效肯定,不良反应轻。     

GPC5基因在肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究GPC5基因在肺腺癌细胞系中的表达情况及其对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 采用逆转录PCR (RT-PCR)、实时定量PCR (qRT-PCR)以及Western blot分析肺腺癌细胞系中GPC5基因mRNA及蛋白表达情况;构建GPC5过表达载体及干扰载体,通过转染构建GPC5过表达细胞系及GPC5沉默细胞系;利用CCK-8法分析肺腺癌细胞系生长情况;通过流式细胞术检测肺腺癌细胞系的周期及凋亡变化.结果 检测了GPC5基因在4株肺腺癌细胞系(A549、H1299、H358和H1975)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的mRNA表达情况,发现与HBE细胞系相比,GPC5基因在A549细胞系中呈低表达,在H1299细胞系中高表达,同时蛋白检测结果与mRNA水平一致;A549细胞中过表达GPC5基因可抑制细胞生长,引起细胞周期阻滞;在H1299细胞中干扰GPC5基因表达促进细胞生长,促进细胞周期;在过表达和干扰细胞模型中均未发现GPC5基因对细胞凋亡的显著影响.结论 GPC5基因可以对肺腺癌细胞系的生物学行为产生影响,可能是肺腺癌的抑癌基因.