自噬体在紫绀型先天性心脏病患儿心肌中的表达

目的 检测紫绀型先天性心脏病患儿心肌细胞中自噬体的表达,探讨细胞自噬作用在心肌慢性缺氧适应中的意义.方法 人选行手术矫治的先天性心脏病患儿18例,其中紫绀型先天性心脏病患儿10例,非紫绀型先天性心脏病患儿8例.取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,采用透射电镜技术观察心肌细胞超微结构的改变,应用western blot检测自噬体特异性标志物LC3一Ⅱ的表达情况.结果 紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P<0.01):紫绀组患儿心肌细线粒体数量增多、排列紊乱,内质网肿胀,可见典型自噬体形成;与非紫绀组相比,紫绀组患儿LC3-Ⅱ蛋白表达显著增高(P<0.01).结论 紫绀型先天性心脏病患儿心肌细胞自噬作用增强,可能参与慢性缺氧条件下心肌细胞的适应性调节.     

一种兔紫绀型心脏病动物模型的建立

目的　探讨建立兔紫绀型心脏病动物模型的方法。方法　将新西兰大白兔主肺动脉与左心耳侧侧吻合 ,形成右向左分流的紫绀型心脏病动物模型 ,紫绀组、对照组均于术后第 1周、第 4周抽取外周动脉血进行血气分析和血常规检查。结果　紫绀组与对照组比较 ,术后第 1周pH值、二氧化碳分压 (PCO2 )、血红蛋白 (Hb)、血细胞比容 (Hct)无显著差异 (P >0 .0 5) ,而氧分压 (PO2 )及氧饱合度 (SaO2 )明显低于对照组 (P <0 .0 1) ;术后第 4周紫绀组Hb、Hct、PO2 及SaO2 与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1) ,pH值与PCO2 2组比较无显著差异 (P >0 .0 5)。结论　将新西兰大白兔的主肺动脉与左心耳吻合 ,能产生持久而稳定的低氧状态 ,与临床上紫绀型心脏病的病理生理相接近 ,是一种稳定、可靠且经济的动物模型     

β2-AR过表达对大鼠心肌细胞存活率的影响及机制

目的观察β2肾上腺素能受体（β2-AR）过表达对成年大鼠心肌细胞在不同浓度的异丙肾上腺素（isoproter-enol,ISO）刺激下的保护作用及机制。方法分离培养成年大鼠心肌细胞,随机分为3组：正常组、转染EGFP基因的腺病毒组和转染人β2-AR．EGFP基因的腺病毒组。心肌细胞培养48h后,用异丙肾上腺素在不同剂量（10～mol／L,10^-5mol／L,10^-4mol／L）下刺激2h,观察细胞在刺激前后的存活率的变化。采用Westernblot检测心肌细胞β2-AR的表达。结果Westernblot结果显示转染β2-AR-EGFP基因的腺病毒组β2-AR蛋白的表达量明显高于其余两组（P〈0．05）,在10^-6mol／L,10^-5mol／L浓度的ISO刺激下3组细胞的存活率校正值无显著性差异,在高浓度（10^-4mol／L）ISO刺激下β2-AR过表达组细胞存活率校正值明显高于其余两组（P〈0．05）。结论β2-AR过表达对高浓度（1014mol／L）ISO刺激的成年大鼠心肌细胞的死亡有保护作用,其可能的机制是通过β2-AR与Gi蛋白的耦联作用。     

绿原酸通过PI3K/Akt信号通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的 探讨绿原酸（CGA）通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路抑制异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌肥大的作用机制。方法 采用ISO诱导H9c2心肌细胞,建立心肌肥大模型。将细胞随机分为5组： 空白对照组（Control组）、异丙肾上腺素组（ISO组）、绿原酸处理组（ISO+CGA组）、抑制剂LY294002组（ISO+LY组）、绿原酸处理＋LY294002(ISO+CGA+LY组)。检测各实验组H9c2心肌细胞的心肌表面积及存活率;各组心肌细胞凋亡率和活性氧类（ROS）水平;各组细胞中Caspase、Akt、p-Akt、Gsk-3β、p-Gsk-3β蛋白的表达水平。结果 与Control组相比,ISO组心肌细胞严重受损,细胞存活率明显降低（P<0.05);比较ISO+CGA组和ISO组,ISO刺激显著增加心肌细胞表面积（50%）,而CGA预处理可防止ISO诱导的细胞肥大。与ISO组相比,ISO+CGA组p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,H9c2心肌细胞存活率明显提高（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达降低（P<0.05）。与ISO+CGA组相比,ISO+LY组细胞存活率明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）;ISO+CGA+LY组的心肌细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）。结论 CGA可能是通过PI3K/Akt信号通路调控细胞凋亡,进而抑制ISO诱导的心肌细胞肥大。     

重组腺病毒转染心衰大鼠心肌细胞cAMP水平变化

目的测定重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染体外培养心衰大鼠心肌细胞48h后环磷酸腺苷（cAMP）的水平变化。方法重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染心衰大鼠心肌细胞,培养48h后,检测心肌细胞β2-AR蛋白表达和cAMP的水平。结果①心肌细胞β2-AR蛋白表达测定：心衰组与对照组（假手术组）相比没有明显差异（P〉0．05）,心衰＋β2组与心衰组、对照组相比均明显升高（P〈0．05）。②心肌细胞cAMP水平：心衰组与对照组（假手术组）相比明显减少（P〈0．01）,心衰＋β2组与心衰组相比明显升高（P〈0．01）,心衰＋ISO组与心衰组相比明显升高（P〈0．01）,心衰＋ISO＋β2组与心衰组相比明显升高（P〈0．01）,心衰＋ISO＋β2组与心衰＋β2组、心衰＋ISO组相比没有明显差异（P〉0．05）。结论重组腺病毒Ad5-ADRbeta2-EGFP转染体外培养心衰大鼠心肌细胞后,β2-AR蛋白表达上调,同时伴有基础cAMP逆转恢复正常水平,其可能与β2-AR活性的内在活化有关。     

益心解毒方抑制H9C2心肌细胞凋亡的作用机制

目的研究益心解毒方对H9C2心肌细胞凋亡的抑制作用及可能机制。方法实验分为正常组、模型组、益心解毒方组和槲皮素组,采用缺氧缺糖/复氧复糖诱导H9C2心肌细胞凋亡,研究益心解毒方的保护作用。运用CCK-8法检测细胞存活率,镜下观察细胞的形态改变,Fluo-3AM荧光染色法检测细胞内钙超载,Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡的情况,实时荧光定量PCR检测Fas和Fas L的基因表达,Western Blot测定p-Akt和caspase-8蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组细胞存活率显著下降,细胞皱缩变形,细胞发生钙超载,凋亡细胞增多,Fas和Fas L的mRNA表达增加,caspase-8蛋白表达升高,p-Akt表达降低,均有统计学差异(P0.05)。与模型组比较,益心解毒方组细胞存活率增加,细胞形态有改善,细胞钙超载减轻,凋亡细胞的数量减少,pAkt蛋白的表达上调,Fas L mRNA和caspase-8蛋白的表达下调,均有统计学差异(P0.05)。结论益心解毒方能抑制H9C2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与减轻钙超载和调控外源性凋亡途径相关。     

TRPV1对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的影响及机制

目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的保护作用及可能机制。 方法 将H9c2心肌细胞随机分为对照组、模型组(缺氧/复氧组)、辣椒素(TRPV1激活剂)组(缺氧/复氧+辣椒素组)、辣椒素+LY组[缺氧/复氧+辣椒素+LY294002(PI3k抑制剂)组]。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率，采用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率，采用Western blot法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)水平。 结果 与对照组比较，模型组、辣椒素组、辣椒素+LY组心肌细胞存活率和Bcl-2水平降低(均P<0.05)，细胞凋亡率和caspase-3、Bax、p-Akt水平升高(均P<0.05)；与模型组比较，辣椒素组心肌细胞存活率和Bcl-2、p-Akt水平升高(均P<0.05)，细胞凋亡率和caspase-3、Bax水平降低(均P<0.05)；模型组与辣椒素+LY组各指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。 结论 TRPV1可抑制缺氧复氧后H9c2心肌细胞凋亡，其机制可能与TRPV1激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)/Akt信号通路有关。      

缺氧诱导因子-1α在紫绀型先心病患儿心肌中的表达

目的 探讨紫绀型先心病患儿心肌细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白和mRNA的表达和意义.方法 入选进行手术矫治的先心病患儿28例,其中紫绀型先心病患儿16例,非紫绀型先心病患儿12例.取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,采用Western blot和RT-PCR分别检测HIF-1α蛋白及mRNA在心肌组织中的表达情况,并用免疫组化染色检测HIF-1α在心肌细胞中的分布.结果 紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P＜0.01);与非紫绀组相比,紫绀组患儿HIF-1α蛋白表达明显增高(P＜0.001),而mRNA表达无统计学意义(P＞0.05).免疫组化结果表明,HIF-1α主要分布在心肌细胞细胞质中,在细胞核内也有分布.结论 在紫绀型先心病患儿心肌细胞中,HIF-1α表达增加,HIF-1α可能参与慢性缺氧状态下心肌代谢的适应性调节.     

紫绀型先天性心脏病心肌线粒体DNA拷贝数的变化

目的比较紫绀型和非紫绀型先天性心脏病心肌线粒体DNA（mtDNA）拷贝数,探讨慢性缺氧状态下心肌线粒体的适应性改变。方法选取紫绀型和非紫绀型先天性心脏病各10例,取手术中切除的右室流出道心肌组织,运用实时荧光PCR技术检测心肌组织中mtDNA相对拷贝数,运用实时荧光RT-PCR技术检测心肌组织中线粒体转录因子A（Tfam）的mRNA表达水平。结果紫绀型先心病患者右室流出道心肌组织中mtDNA相对拷贝数明显高于非紫绀组（P〈0.01）,Tfam的mRNA表达水平明显高于非紫绀组（P〈0.01）。结论紫绀型先天性心脏病患者右室流出道心肌mtDNA复制增多,可能为心肌在慢性缺氧状态下的代偿性改变。     

GSK3β激活参与缺氧诱导心肌细胞凋亡

目的 研究缺氧对心肌细胞糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)及其偶联的信号转导分子激活的影响.方法 将培养的心肌细胞暴露于含1%氧的混合气体中,造成缺氧0、3、6、12、24 h后,用Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡;MTT法检测细胞存活率;RT-PCR、Western blot方法分别检测心肌细胞GSK-3β mRNA及蛋白磷酸化的变化;RT-PCR法检测caspase-9、-3 mRNA表达的改变,分光法检测caspase-9酶活性.结果 缺氧24 h心肌细胞出现典型的凋亡,细胞存活率显著降低;缺氧3～24 h GSK-3β mRNA表达高于对照组,而Ser9位点磷酸化水平在缺氧6～24 h明显低于对照组;caspase-9 mRNA表达在缺氧3 h即开始增高,在随后观察的时相点内持续处于高表达状态,caspase-9酶活性变化趋势与其mRNA表达一致,在缺氧3 h开始增高,并在缺氧6～24 h逐渐升高;caspase-3 mRNA表达在缺氧12 h、24 h明显高于对照组.结论 缺氧可以激活GSK3β,并进一步激活GSK3β下游介导的与细胞凋亡相关的蛋白激酶家族成员caspase-9、-3,从而导致心肌细胞凋亡.     

2类多巴胺受体通过促进 PKC-ε转位参与心肌缺血后适应抑制细胞凋亡

目的：以蛋白激酶C-ε（PKC-ε）转位为切入点,探讨2类多巴胺受体（DR2）在心肌缺血后适应抑制细胞凋亡中的作用及可能机制。方法复制原代培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧和缺血后适应模型。 MTT检测心肌细胞的存活率;Hoechst 33342染色观察细胞凋亡;Western blotting检测Bcl-2、caspase-3、caspase-9、PKC-ε蛋白的表达和细胞色素C（ Cyt c）的释放;免疫共沉淀检测PKC-ε和DR2的相互作用。结果与正常组比较,缺氧/复氧组细胞存活率降低,细胞凋亡增加,促凋亡因子（ Cyt c、caspase-3、caspase-9）表达增加,抑凋亡因子（Bcl-2）表达亦增加,PKC-ε没有转位到细胞膜,PKC-ε和DR2不存在相互作用。与缺氧/复氧组比较,缺血后适应明显升高细胞存活率,降低细胞凋亡,抑制促凋亡因子（Cyt c、caspase-3、caspase-9）表达,促进抑凋亡因子（Bcl-2）表达,PKC-ε转位到细胞膜,PKC-ε和DR2存在相互作用。与缺血后适应组比较,DR2激动剂进一步增加缺血后适应的保护作用,而DR2抑制剂则取消了DR2激动剂的作用。结论 DR2参与心肌缺血后适应抑制细胞凋亡,其机制与DR2促进PKC-ε转位及DR2和PKC-ε存在相互作用有关。     

NEDD4调控AMPK活性参与心肌细胞慢性缺氧适应的研究

目的 探讨NEDD4在心肌细胞慢性缺氧适应过程中的作用及其可能的机制.方法 ①收集手术矫正的先心病患儿32例,其中紫绀型先心病18例,非紫绀型先心病14例.取术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,用免疫组化染色检测NEDD4在心肌细胞中表达的分布,Western blot检测NEDD4在心肌组织中的表达情况;②将H9c2心肌细胞分为常氧组、慢性缺氧组和阳性对照组,其中慢性缺氧组又分为对照组、空白转染组和干扰转染组,设计合成以心肌细胞NEDD4基因为靶标的siRNA,通过阳离子脂质体将合成的siRNA转染至H9c2心肌细胞中,常氧培养(74％ N2,5％ CO2,21％O2)48 h后开始对慢性缺氧组心肌细胞进行缺氧刺激(94％ N2,5％ CO2,1％ O2),缺氧刺激72 h后Western blot检测NEDD4、p-AMPK表达水平变化,流式细胞术检测缺氧刺激所致心肌细胞损伤情况.结果 ①紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P＜0.05);免疫组化染色结果显示NEDD4主要分布于心肌细胞质中;与非紫绀组相比,紫绀组患儿心肌组织中NEDD4表达水平显著下降[NEDD4/β3-actin条带灰度比值:非紫绀组(0.72±0.07);紫绀组(0.42±0.06),P＜0.05];②与常氧组相比,对照组心肌细胞死亡比例显著增加(P＜0.05);但干扰NEDD4表达后,缺氧所致心肌细胞损伤比例降低(P＜0.05).Western blot检测结果显示,与空白转染组相比,干扰转染组AMPK磷酸化水平显著增加[p-AMPK/AMPK条带灰度比值:空白转染组(0.21±0.01),干扰转染组(0.88±0.04),P＜0.05].结论 NEDD4可能通过调控AMPK活性参与慢性缺氧情况下心肌细胞代谢的适应调节.     

当归超滤物抗阿霉素致心肌细胞损伤的作用研究

目的探讨当归超滤物抗阿霉素致乳鼠心肌细胞损伤的作用及其可能机制。方法用阿霉素诱导Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞建立损伤模型,用不同浓度的当归超滤物进行干预,实验分为正常对照组、阿霉素损伤模型组、当归超滤物不同浓度（3．75、7．5、15g／L）干预组。四氮唑蓝（MTT）法检测各组心肌细胞的存活率,2,4二硝基苯肼显色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量,Ca2＋-ATP酶试剂盒测定Ca2＋-ATP酶活性,蛋白印迹半定量测定各组细胞内caspase-3、caspase-12蛋白的表达。结果与阿霉素损伤模型组比较,当归超滤物各干预组心肌细胞存活率明显升高,LDH含量显著降低（P〈0．05）,Ca2＋-ATP酶活性显著提高（P〈0．05）,caspase-3、caspase-12表达显著降低（P〈0．05）。结论当归超滤物具有拮抗阿霉素致心肌细胞损伤的作用,其机制与其增强细胞ATP酶活性、降低细胞内LDH释放、抑制凋亡因子释放有关。     

熊果酸抑制AngⅡ诱导大鼠心肌细胞肥大实验研究

目的 探讨熊果酸（ursolic acid,UA）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）诱导大鼠心肌细胞肥大的抑制作用及其可能机制。方法 按常规方法分离并培养新生大鼠心肌细胞。CCK-8法确定UA（2、4、8、16μmol/L）对心肌细胞的最佳作用浓度,利用AngⅡ诱导建立新生大鼠心肌细胞肥大模型。实验分对照组（control组）、AngⅡ组、UA干预组、LY294002（PI₃K/Akt通路抑制剂）干预组共4组。UA和LY294002均预处理心肌细胞30min。以心肌细胞表面积、β-肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA和脑钠肽（BNP）mRNA表达作为心肌细胞肥大标志,同时使用蛋白免疫印迹法检测T-Akt（total Akt）和p-Akt（phospho-Akt）蛋白表达。结果 显微镜下观察各组心肌细胞生长良好。与control组相比,AngⅡ组和UA干预组大鼠心肌细胞表面积增加（P<0.05）,LY294002干预组心肌细胞表面积差异无统计学意义（P>0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组大鼠心肌细胞表面积减小（P<0.05）。与control组相比,AngⅡ组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达显著增加（P<0.05）;与AngⅡ组相比,UA干预组和LY294002干预组的p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均降低（P<0.05）;UA干预组和LY294002干预组之间p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达均差异无统计学意义（P>0.05）;4个实验组间T-Akt蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 （1）AngⅡ诱导的新生大鼠心肌细胞肥大模型中,心肌细胞表面积增加,BNP mRNA和β-MHC mRNA表达升高,同时伴有p-Akt蛋白表达增加,提示PI₃K/Akt通路在AngⅡ致心肌细胞肥大中起重要作用。（2）UA能减轻AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积减小,p-Akt蛋白、BNP mRNA和β-MHC mRNA表达减少,这与LY294002作用一致,提示UA可能是通过抑制PI₃K/Akt通路而发挥抗心肌肥大作用。     

心力衰竭大鼠肺脏α_(1A)及β_1、β_2肾上腺素受体表达的改变

目的研究慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)时肺脏α1A-肾上腺素受体(α1A-AR)和β1、β2肾上腺素受体(β-AR)表达水平的变化。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支制作心肌梗死后心力衰竭模型,模型成功后采用数字表法随机分为正常对照组、假手术组和心力衰竭模型组。取大鼠肺组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分别测定3组的α1A-AR和β1、β2-AR蛋白表达水平。结果心力衰竭模型组与假手术组相比,α1A-AR、β1-AR的蛋白表达水平显著下调(P<0.01或P<0.05),β2-AR的蛋白表达水平显著上调(P<0.05),正常对照组α1A-AR、β1-AR和β2-AR的蛋白表达水平与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CHF大鼠肺循环淤血,α1A-AR下调,有利于肺血管舒张,抑制平滑肌增生以代偿这种病理改变。肺脏β2-AR表达水平上调可能与β2-AR激动可以舒张血管和支气管平滑肌作用,开放钠离子通道等机制促进肺水肿液的清除、并能改善心力衰竭条件下肺脏微血管的通透性有关。心力衰竭时肺脏β1-AR的下调一方面与CHF时交感肾上腺素系统激活产生的负反馈调节有关,另一面可能与代偿性拮抗β2-AR的上调,维持相对稳定的肺泡液体清除率有关。     

Caspase-3、-9表达上调参与缺氧诱导心肌细胞凋亡

目的研究缺氧对心肌细胞天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶(caspase)的激活效应.方法培养的心肌细胞分别缺氧0、3、6、12、24 h后,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞存活率,Western blot、RT-PCR方法分别检测细胞线粒体与胞浆中细胞色素c(Cyt c)蛋白的变化以及caspase-9,-3 mRNA表达的改变.结果缺氧24 h心肌细胞出现典型的凋亡,细胞存活率显著降低;缺氧3 h线粒体Cyt c未见显著变化,而胞浆中Cyt c开始增多,缺氧24 h 线粒体中已不能检测到Cyt c,胞浆中维持在峰值水平.缺氧可上调心肌细胞caspase-9,-3基因表达,两者表达变化趋势一致,缺氧3 h即开始明显增高,在观察的24 h内持续处于高表达状态.结论缺氧可致心肌细胞线粒体Cyt c大量释放至胞浆中,caspase-9基因表达增高,并进一步导致caspase-3激活,从而证明缺氧可诱导心肌细胞中线粒体依赖的caspases途径激活,从而导致细胞凋亡.     

促红细胞生成素对乳鼠缺氧心肌细胞的保护作用及机制

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）发挥心肌细胞保护作用的可能分子机制。方法：采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的存活率、凋亡率和坏死率。将心肌细胞分为正常对照组、缺氧组、缺氧＋EPO组。采用North-ern-blot方法检测各组心肌细胞中的Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达,采用Western-blot方法检测各组心肌细胞中的CytC、STAT-3、Caspase-3蛋白的表达。结果：3组心肌细胞的存活率,凋亡率和坏死率差异显著（92．1％w70．9％vs89．0％,2．3％vs18．73％Fs6．0％,3．5％US8．0％傩3．5％,P〈0．01）。IU／mL EPO开始发挥对缺氧心肌细胞的保护作用,5U／mL、25U／mL和125U／mL的保护作用相似。与缺氧组相比：EPO组Bcl-2mRNA和STAT-3蛋白表达增加（P〈0．01）,Bax、Caspase-3mRNA和Caspase-3蛋白表达减少（P〈0．01）。结论：5U／mL的EPO是其发挥心肌细胞保护作用的最佳浓度。缺氧心肌细胞中,EPO可能通过JAK-STAT途径发挥抗凋亡的作用。     

肺灌注显像在紫绀型先心病血液分流中的应用

目的 利用放射性肺灌注显像对紫绀型先天性心脏病进行分流定量分析,探讨其与缺氧的关系。方法22例右向左分流的复杂型先天性心脏病行肺灌注显像;以脑、肾放射性指数（NPI）对分流定量;将肺放射性指数（PI）与血红蛋白（Hb）、红细胞（RBC）及血氧饱和度（SaO2）进行相关分析。结果 NPI和PI呈显著负相关（r=-0.95,P<0.01）;PI与Hb及RBC均呈显著负相关（r分别为-0.55和-0.58,P均<0.01）;PI与SaO2呈显著相关（r=0.83,P<0.01）。轻一中度及轻一重度PI组间的Hb有显著差异（t分别为2.8和3.8,P均<0.05）,而中一重度PI组别间的Hb无显著差异（t=0.5,P<0.05）结论　NPI可直接反映紫绀型先天性心脏病的右向左分流量。分流量越大,缺氧越严重;SaO2越低,Hb及RBC越高。但缺氧达一定程度后,两者的升高不能准确反映机体的缺氧状态。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠caspase-3及caspase-9表达的影响

目的：通过检测caspase-3,caspase-9的表达情况,探讨高压氧（HBO）对缺氧缺血新生大鼠脑细胞凋亡的影响及分子机制．方法：建立缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠模型,将其分为HIBD组（24只）及HBO干预组（24只）,同时设立假手术（Sham）组（24只）．分别于造模后18,24,48和96h4个时间点断头取脑观察其病理改变（海马及皮层区）,并用免疫组化的方法检测caspase-3及caspase-9的蛋白表达．结果：HIBD组18,24,48和96h时间点海马及皮层区caspase-3,caspase-9蛋白的表达均明显高于Sham组（P〈0．05）,HBO干预组则显著缓解,caspase-3,caspase-9表达的升高程度均低于HIBD组（P〈0．05）．结论：HBO能减轻新生大鼠HIBD模型海马及皮层区脑细胞的凋亡,其作用可能是通过下调caspase-9进而影响caspase-3的活性表达来完成的．     

PI3K／Akt／GSK-3β介导心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨心肌营养-1(CT-1)对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及信号通路。方法用改良法培养出生1-3 d的乳鼠心肌细胞,分为5组:对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧组 CT-1 LY294002组(PIK3／Akt阻断剂)、缺氧复氧组 CT-1组、缺氧复氧组 CT-1 助溶剂DMSO组。CT-1的浓度为10 ng／ml,缺氧3 h,复氧3 h。MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)以流式细胞仪和免疫荧光检测心肌细胞线粒体膜电位(△(?)m),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),心肌细胞凋亡率用流式细胞仪检测。蛋白免疫印迹(Western blot)检测PI3-K磷酸化蛋白水平和磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)。缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,分别是(19．72％±1．45％比2．2％±0．14％,14．28％±1．42比3．54±0．46, P<0．05),而心肌细胞存活率显著降低,心肌细胞△(?)m下降,磷酸化GSK-3β蛋白表达明显下调。而CT-1处理的心肌细胞,心肌细胞存活率(87％±3．4％)明显高于缺氧复氧组,而心肌细胞凋亡率及细胞内ROS显著减少,mPTP水平更高,PI3-K磷酸化蛋白和磷酸化GSK-3β蛋白水平增加,eNOS表达上调。CT-1的这些作用能被PIK3／Akt阻断剂LY294002抑制。结论心肌营养素-1能减轻缺氧复氧引起的心肌细胞损伤,其作用依赖PIK3／Akt／eNOS信号通路的激活。