过氧化物酶1,6和GFAP在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及临床意义

目的确定星形胶质细胞瘤中过氧化物酶1(Prx1)、过氧化物酶6(Prx6)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,探讨其表达水平与星形胶质细胞瘤恶性程度的关系。方法采用Western blot、RT-PCR和免疫组化检测52例星形胶质细胞瘤(Ⅱ级23例、Ⅲ级15例、Ⅳ级14例)和12例正常脑组织标本中Prx1、Prx6和GFAP的表达情况。结果 Prx1、Prx6在正常脑组织、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平逐渐升高,具有统计学意义(P<0.05);GFAP在Ⅲ、Ⅳ级星形胶质细胞瘤中蛋白和mRNA的表达水平低于Ⅱ级星形胶质细胞瘤和正常脑组织(P<0.05)。结论 Prx1、Prx6和GFAP可能是临床评价星形胶质细胞瘤恶性程度和侵袭性的潜在生物标志物,可作为星形胶质细胞瘤生物治疗的潜在靶分子。     

LATS2对恶性周围神经鞘瘤细胞的调控作用及分子机制探讨

目的:探讨大肿瘤抑制激酶2（LATS2）对恶性周围神经鞘瘤（MPNST）细胞增殖和迁移的影响及机制。方法:LATS2过表达慢病毒感染ST88-14、STS26T细胞,实验分为阴性对照组及LATS2过表达组,利用CCK-8、细胞划痕实验检测过表达LATS2对细胞增殖、迁移的影响。实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹实验检测细胞中LATS2、多梳抑制复合物2（PRC2）核心组分、Yes相关蛋白（YAP）、含有PDZ结合位点的转录共激活因子（TAZ）的mRNA和蛋白表达,以及组蛋白H3第27位赖氨酸上的三甲基化（H3K27me3）水平。结果:与对照组相比,LATS2过表达抑制ST88-14、STS26T细胞增殖（t=4.219、14.66、11.5,均P<0.05;t=5.674、7.118、10.77,均P<0.01）、迁移（t=4.838、4.736,均P<0.01）。与对照组相比,LATS2过表达不影响ST88-14、STS26T细胞中YAP/TAZ的mRNA和总蛋白水平,但升高其蛋白磷酸化水平（t=6.233、3.759,均P<0.01;t=3.44、2.947,均P<0.05）。与对照组相比,LATS2过表达不影响ST88-14、STS26T细胞中PRC2核心组分SUZ12、EZH2、EED的mRNA和蛋白水平,但H3K27me3水平明显升高（t=6.569、16.68,均P<0.01）。结论:LATS2在MPNST细胞系中表达下降,过表达LATS2升高H3K27me3表达水平,同时促进YAP/TAZ的磷酸化,从而抑制MPNST细胞的增殖、迁移,在MPNST中发挥肿瘤抑制因子的作用。     

基于Hippo/TAZ信号通路探讨胃苏颗粒对幽门螺杆菌诱导的慢性萎缩性胃炎的作用惠桃1 柏江锋2 杭亮*3

目的：探讨胃苏颗粒(WSG)对幽门螺杆菌诱导的慢性萎缩性胃炎(CAG)动物模型的影响及其作用机制。方法：50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和WSG低、中、高剂量组。除对照组外,其余组建立幽门螺杆菌感染的CAG模型。从第8周开始,WSG每日灌胃WSG(8、16、32? mg/kg),连续4周。试验结束时,通过HE染色评估胃黏膜损伤的组织病理学改变。采用qPCR和Western blot分析胃组织中LATS2、TAZ 的mRNA和蛋白表达。此外,用幽门螺杆菌感染GES-1细胞,并用WSG对其进行干预。采用CCK-8试验分析细胞活力,并分析Hippo/TAZ信号通路表达情况。结果：干预4周后,WSG各剂量组胃粘膜损伤明显减轻,胃粘膜糜烂长度明显缩短,UI评分和炎症评分均呈剂量依赖性降低(P<0.01)。幽门螺杆菌可显著增加TAZ的表达,并降低 LATS2的表达。WSG治疗以剂量依赖的方式逆转了TAZ和 LATS2表达的变化,特别是与CAG组相比,WSG中、高剂量的TAZ和 LATS2蛋白和mRNA表达表现出显著差异(P<0.05)。与幽门螺杆菌感染组相比,40 μM(83.44±5.46)和20 μM WSG组(75.47±8.31)的GES-1细胞活力显著增加(P<0.05)。qPCR和免疫荧光染色的结果显示,WSG干预增加了GES-1细胞中LATS2、WWC2表达,但降低了TAZ表达。此外,WWC2 siRNA预处理削弱了WSG诱导的LATS2活化,并促进了TAZ的表达(P<0.05)。结论：幽门螺杆菌诱导CAG的形成与Hippo/TAZ信号通路有关,WSG通过抑制Hippo/TAZ信号传导发挥了其胃肠道保护作用。     

血红蛋白诱导的HO-1对离体星形胶质细胞损伤作用的研究

目的探讨血红蛋白(hemoglobin,Hb)诱导的血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对离体星形胶质细胞的损伤作用。方法体外培养纯化获得星形胶质细胞,采用荧光标记胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)鉴定细胞;实验分为正常组、Hb组及HO-1活性抑制剂锌原卟啉(ZnPPIX)+Hb组。Hoechst 33342及CCK-8法检测细胞损伤情况;Western blot检测HO-1、p-JNK、JNK、Bcl-2及Bax等蛋白的表达情况;RT-PCR检测HO-1的mRNA表达情况。结果 GFAP鉴定显示97%以上的细胞为星形胶质细胞;HO-1检测结果显示:40μmol/L的Hb可显著诱导HO-1 mRNA及蛋白的表达(P<0.001);Hoechst33342及CCK-8检测结果显示:40μmol/L的Hb对离体星形胶质细胞具有损伤作用,而ZnPPIX可明显减轻上述损伤;Western blot检测结果显示:HO-1被诱导高表达时p-JNK及Bax蛋白的表达水平也显著升高而Bcl-2蛋白的表达水平显著下降(P<0.01),ZnPPIX...     

八肽胆囊收缩素对谷氨酸诱导的海马星形胶质细胞GLT-1表达的影响

目的 探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对谷氨酸(Glu)诱导的海马星形胶质细胞谷氨酸转运体1(GLT-1)表达的影响。方法 分离小鼠海马星形胶质细胞,检测不同浓度CCK-8对小鼠海马星形胶质细胞的毒性。将细胞分为对照组、Glu组、Glu+0.1μmol/L CCK-8组、Glu+0.5μmol/L CCK-8组和Glu+1.0μmol/L CCK-8组。MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,生化试剂盒检测细胞培养上清液中Glu含量,qRT-PCR检测GLT-1和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)mRNA的表达,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、GLT-1和GLAST蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果 不同浓度的CCK-8对小鼠海马星形胶质细胞的增殖均无明显影响。与对照组相比,Glu组细胞增殖能力、细胞中Bcl-2蛋白、GLT-1、GLAST mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.01),细胞凋亡率、细胞外Glu含量、细胞中Caspase-3蛋白表达水平、细胞上清中TNF-α水平显著升高(均P<0.01);与...     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

阿魏酸钠抑制脂多糖引起的星形胶质细胞IL-1β的表达

目的 研究阿魏酸钠(SF)对脂多糖(LPS)引起的培养星形胶质细胞(AC)白细胞介素-1β (IL-1β)表达的抑制作用及机制.方法 将培养星形胶质细胞分为对照组、LPS组、SF(50,100,200μmol·L-1)组.细胞成熟后分组给药处理,ELISA法测定培养液中IL-1β表达,Western蛋白印迹法检测细胞IL-13、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达.结果 星形胶质细胞在LPS (10 mg·L“)刺激下IL-1β的释放量、IL-1β蛋白以及磷酸化JNK1、磷酸化C-Jun蛋白表达水平较对照组明显增高(P＜0.01).应用SF(50,100,200 μmol·L-1)预处理6h明显降低培养液中IL-1β含量,抑制星形胶质细胞IL-1β、磷酸化JNK1和磷酸化C-Jun蛋白表达水平.结论 SF可能通过下调JNK信号通路抑制星形胶质细胞IL-1β表达.     

E-cadherin表达下调致GSK-3β磷酸化失活的分子机制研究

目的:探讨E-cadherin表达下调在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中诱导GSK-3β磷酸化失活信号通路的调控机制?方法:运用RNA干扰技术建立E-cadherin表达缺失的稳定细胞株?Western blot实验检测稳定株细胞(HepG2-E-cadherin-shRNA)E-cadherin的表达水平以及GSK-3β与Akt的磷酸化水平;用10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HepG2-E-cadherin-shRNA细胞,Western blot检测细胞GSK-3β磷酸化水平,RT-PCR检测HepG2-E-cadherin-shRNA细胞PTEN和Egr-1的mRNA水平,Western blot检测细胞PTEN的蛋白表达水平?结果:Western blot实验结果表明,HepG2-E-cadherin-shRNA稳定株细胞E-cadherin表达水平较空白对照组下调约82.54%,GSK-3β磷酸化水平较空白对照组上升约298.93%,Akt磷酸化水平较空白对照组上升约218.98%;LY294002作用4 h后,GSK-3β磷酸化水平与空白对照组相比下降至48.13%;RT-PCR结果显示,下调HepG2细胞E-cadherin表达水平后,细胞PTEN的mRNA水平下降至76.14%,Egr-1的mRNA水平下降至66.89%,PTEN的蛋白表达水平下降至53.77%?结论:人HCC细胞中E-cadherin抑制性表达导致细胞内GSK-3β磷酸化失活很可能是通过PI3K/Akt的信号通路实现的?     

星形细胞肿瘤中RCAS1的mRNA及蛋白表达的临床意义

目的:探讨RCAS1在人星形细胞肿瘤中的基因及蛋白表达,及其与肿瘤发生、发展的关系.方法:RT-PCR法检测59例新鲜星形细胞肿瘤组织及6例正常脑组织中RCAS1的mRNA表达.免疫组织化学法检测71例星形细胞肿瘤及6例正常脑组织病理切片中RCAS1的蛋白表达.结果:弥漫型星形细胞瘤(GradeⅡ)和间变型星形细胞瘤之间(Grade Ⅲ)、间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤(Grade Ⅳ)之间RCAS1 mRNA的表达有统计学差异(P＜0.05),而RCAS1蛋白表达仅在间变型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤之间存在统计学差异(P＜0.01),RCAS1蛋白表达与肿瘤级别呈正相关(r=0.573,P＜0.001).在正常脑组织中未检测到RCAS1蛋白.结论:RCAS1的表达与星形细胞肿瘤的病理分级有关.星形细胞肿瘤中RCAS1的表达在转录和转录后水平受到调节.     

HBx及其突变体X17-3对Hippo信号途径表达的影响

目的初步探寻HBx及其不同突变体表达与Hippo信号途径的关系,以及对细胞凋亡的影响。方法 HBx及其突变体载体转染人正常肝细胞系L02,转染48 h后,提取总蛋白,Western blot检测细胞中Hippo信号途径MST1、YAP(yes-associated protein)的表达,磷酸化和去磷酸化的情况。采用Annexin V/PI标记流式细胞术检测细胞凋亡。结果HBx及其突变体载体转染L02细胞48 h后,Western blot结果显示细胞MST1表达下调,p-MST1/2表达上升(P<0.05);YAP表达上升,p-YAP表达下调(P<0.05)。Annexin V/PI标记法流式细胞术结果显示HBx及其突变体能促进L02细胞发生凋亡(P<0.05),其介导的细胞早期凋亡尤为明显。结论 HBx通过Hippo信号通路途径调控下游致癌基因YAP的表达。结合HBx介导的L02细胞凋亡这一结果说明HBx可能通过多种途径调节细胞周期。     

滋养细胞分泌14-3-3 τ蛋白对子宫内膜基质细胞表达整合素αvβ3蛋白的影响

 目的 探讨滋养细胞分泌14-3-3 τ蛋白对子宫内膜基质细胞容受性分子整合素 α_vβ₃表达的影响。方法 RNA干扰技术下调人绒癌滋养细胞株BeWo细胞14-3-3 τ蛋白的表达。Western blot法检测BeWo细胞及培养液中14-3-3 τ蛋白的表达。建立14-3-3 τ蛋白表达下调的BeWo细胞与人子宫内膜基质细胞（endometrial stromal cells,ESC）的共培养体系,Western blot法检测共培养体系培养液中14-3-3 τ蛋白的表达,以及ESC容受性分子整合素α_vβ₃的表达变化。结果 与siRNA阴性对照组相比,特异性siRNA显著下调BeWo细胞和培养液中14-3-3 τ蛋白的表达（P<0.05）。共培养体系中,与siRNA阴性对照组相比,与14-3-3 τ蛋白表达下调的BeWo细胞共培养的ESC整合素α_vβ₃的表达显著上调（P<0.05）,提示ESC容受性增加。与单独培养的ESC相比,培养液中添加14-3-3 τ重组蛋白的ESC培养24 h后整合素α_vβ₃的表达显著下调（P<0.05）,提示ESC容受性降低。 结论 14-3-3 τ蛋白可以被滋养细胞分泌至细胞外,并可能发挥调控ESC容受性的作用,但其作用机制仍需进一步研究。     

二甲双胍可能通过Hippo-YAP通路抑制HER-2阳性乳腺癌细胞的增殖和促进凋亡

目的 观察二甲双胍对HER-2阳性乳腺癌细胞株SKBR3增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 分别用0、20、40、60、80、100、120 μmol/L二甲双胍处理乳腺癌细胞株SKBR3,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;结晶紫染色观察其对细胞集落形成的影响;计算IC50值。以该浓度二甲双胍处理细胞,与空白对照相比,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的改变;实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测 YAP、TAZ、EGFR、CTGF、CYR61、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 及 Fibronectin 等关键基因的mRNA水平表达;Western blotting 实验检测YAP、TAZ蛋白水平的表达;免疫荧光观察二甲双胍对SKBR3细胞中YAP/TAZ核易位的改变。结果 CCK-8和细胞克隆实验显示二甲双胍对SKBR3细胞增殖活力具有明显的抑制作用（P<0.05）,呈浓度和时间依赖性。与对照组相比,二甲双胍处理后的SKBR3细胞凋亡明显增加;G1期细胞比例增多,而G2/M期细胞比例减少。N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达降低,而E-cadherin的表达上调（P<0.05）。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,二甲双胍处理后YAP、TAZ、EGFR、CTGF和CYR61的表达明显下调（P<0.05）。免疫荧光实验显示：实验组较对照组的YAP或TAZ,其荧光的定位更多地聚集于胞浆,而细胞核中荧光的量明显的减少。结论 二甲双胍能抑制HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR3的增殖,促进其凋亡和上皮－间质转化,其机制可能与抑制YAP/TAZ的表达和核定位有关。     

miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达

目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平,通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA,RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现,SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加,miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3,上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。     

miR-132在上皮性卵巢癌中的表达及作用机制研究

目的分析微小RNA-132(miR-132)在上皮性卵巢癌组织和细胞中的表达及其对上皮性卵巢癌细胞迁移与侵袭的作用机制。方法收集2018年10月—2020年2月蚌埠医学院第一附属医院妇瘤科手术切除的卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本36份,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、癌旁组织中miR-132相对表达水平;体外培养人正常卵巢上皮细胞(IOSE80,正常对照组)和卵巢癌SKOV3细胞,对卵巢癌SKOV3细胞进行转染并分为空白对照组、LV-NC(阴性对照)组和LV-miR-132 mimic(模拟物)组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-132、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA相对表达水平,Transwell法检测各组细胞侵袭率,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,双荧光素酶报告基因检测miR-132与MAPK1靶向关系,蛋白免疫印迹法检测各组细胞MAPK1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白相对表达水平。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-132相对表达水平显著降低(t/P=19.166/0.000)。与正常对照组比较,卵巢癌SKOV3细胞中miR-132相对表达水平显著降低(P<0.05),MAPK1 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞miR-132相对表达水平显著升高(P<0.05);与空白对照组、LV-NC组比较,LV-miR-132 mimic组细胞侵袭率、各时间点迁移率、MAPK1 mRNA和蛋白、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达水平均显著降低(F/P=19.166/0.000,42.795/0.000,64.543/0.000,40.513/0.000,41.805/0.000,32.021/0.000,81.672/0.000,88.132/0.000)。miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-132 NC+MAPK1-Wt 3′-UTR组,miR-132 mimic+MAPK1-Mut 3′-UTR组的荧光素酶相对活性高于miR-132 mimic+MAPK1-Wt 3′-UTR组(F/P=17.369/0.000)。结论miR-132在上皮性卵巢癌组织及细胞中均低表达,上调miR-132可能通过靶向下调MAPK1来抑制卵巢癌细胞迁移、侵袭。     

miR-143-5p对镉致肾细胞凋亡的调控作用及其机制

目的:探讨miR-143-5p对镉诱导LLC-PK1细胞凋亡的调控作用及其机制?方法:通过基因芯片技术筛选出由镉引起的差异表达miRNAs,并用实时定量PCR方法验证基因芯片结果的可靠性;应用Lipofectamine 2000瞬时转染miR-143-5p的模拟物和抑制剂建立miR-143-5p高表达和低表达的模型,并结合qRT-PCR技术验证转染效果;Hoechst 33258染色和Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡;生物信息学分析结合实时定量PCR和Western blot验证miR-143-5p靶基因的表达;Western blot分析miR-143-5p对细胞凋亡相关通路的调控作用?结果:镉可增强LLC-PK1细胞的miR-143-5p表达水平(P < 0.01);转染miR-143-5p模拟物或抑制剂后,与对照组(miR-NC)比较,miR-143-5p表达明显上调或下调(P < 0.01);miR-143-5p的过表达可促进 LLC-PK1细胞凋亡 (P < 0.01);miR-143-5p在AKT3的mRNA和蛋白水平上发挥靶向调控作用;miR-143-5p过表达能抑制p-Akt和p-Bad蛋白表达,促进caspase-9和caspase-3蛋白上调?结论:miR-143-5p可能通过作用于靶基因AKT3,并抑制Akt/Bad信号通路,促进镉诱导LLC-PK1细胞的凋亡?     

miR-222下调高糖下小鼠系膜细胞TIMP3表达

目的探讨miR-222是否通过靶向调控TIMP3表达参与糖尿病肾病的发生过程,从而进一步揭示糖尿病肾病的发病机制。方法运用qRT—PCR检测经25mmol／L葡萄糖处理的小鼠系膜细胞（HG组）和对照小鼠系膜细胞（5mmol／L葡萄糖,NG组）中miR-222和TIMP3的表达;将miR-222mimics转染小鼠系膜细胞,以TIMP3siRNA为阳性对照,采用Westernblot检测其对TIMP3蛋白表达水平的影响。结果qRT—PCR检测结果显示,miR-222在经高糖处理的小鼠系膜细胞中的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显上调,而TIMP3在经高糖处理的小鼠系膜细胞中mRNA的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显下调;Westernblot结果显示,过表达miR-222或干扰TIMP3可抑制TIMP3蛋白的表达（P〈0．05）。结论miR-222可能通过调控TIMP3的表达参与糖尿病肾病的发生发展。     

转录因子AP-2α对HeLa细胞内14-3-3σ表达的影响

目的探讨转录因子AP-2α对HeLa细胞内14-3-3σ表达的影响。方法在HeLa细胞内过表达AP-2α或干扰AP-2α的表达,用荧光定量RT-PCR和Western blot检测Hela细胞AP-2α和14-3-3σ的表达量;采用计算机软件预测14-3-3σ的启动子区域的转录因子结合位点;采用双荧光素酶报告基因分析试验验证AP-2α对14-3-3σ启动子转录活性的影响。结果在HeLa细胞内过表达AP-2α后,14-3-3σ的mRNA和蛋白表达水平增高,而用siRNA干扰AP-2α后,14-3-3σ的mRNA和蛋白表达水平降低;软件分析结果显示在14-3-3σ启动子区域存在多个潜在的AP-2α结合位点;双荧光素酶报告基因分析试验证明在HeLa细胞内,AP-2α增强14-3-3σ启动子的转录活性。结论 AP-2α正调控HeLa细胞内14-3-3σ的表达,这种调控作用可能是通过AP-2α增强14-3-3σ启动子的转录活性来完成的。     

microRNA-149在顺铂耐药非小细胞肺癌细胞中的表达变化及相关机制研究

目的探讨microRNA-149(miR-149)在顺铂耐药A549细胞(A549/DDP)中的表达规律及作用机制。方法生物信息学方法分析顺铂耐药A549细胞中的microRNA表达变化。体外培养A549细胞并诱导对顺铂耐药的A549/DDP细胞系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-149在两种细胞系中的表达差异。CCK-8试验及流式细胞术检测单纯miR-149过表达以及miR-149和ABCC1同时过表达对细胞顺铂敏感性的影响。qRT-PCR及Western blot检测A549及A549/DDP细胞中ABCC1的表达差异,双荧光素酶报告试验检测miR-149以ABCC1之间的靶向关系,并利用qRT-PCR及Western blot加以证实。结果 A549/DDP细胞中的miR-149表达较低,与A549细胞相比,差异具有统计学意义(t=-4.65,P0.05)。miR-149过表达可以降低顺铂处理后A549/DDP细胞的活力但增加其凋亡率,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(P均0.05)。与A549细胞相比ABCC1在A549/DDP细胞中存在mRNA及蛋白水平的高表达,差异具有统计学意义(t=8.44、5.14,P均0.05)。过表达miR-149可以降低A549/DDP细胞中ABCC1的mRNA及蛋白水平,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(t=-3.14、-4.54,P0.05)。双荧光报告酶分析显示miR-149可直接与ABCC1 mRNA的3’UTR结合。miR-149与ABCC1同时过表达的A549/DDP细胞与单纯miR-149过表达的细胞相比,顺铂处理后细胞活力增加,凋亡减少,差异具有统计学意义(P均0.05)。结论 miR-149表达不足可能引起A549细胞对顺铂的耐药,该机制与miR-149对ABCC1的抑制作用有关。     

linc00152通过调控DNMT3A和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭

探讨linc00152在宫颈癌中的生物学功能及其调控机制。运用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞中linc00152的表达;转染sh-linc00152、si-DNMT3A和si-DNMT3B于HeLa细胞以敲低细胞中linc00152、DNMT3A和DNMT3B的表达水平,采用qRT-PCR与Western blot法检测转染效率;采用Western blot法检测sh-linc00152对甲基化转移酶(DNMT)3A和3B蛋白表达水平的影响;采用MTT、Transwell侵袭实验检测sh-linc00152、si-DNMT3A以及si-DNMT3B对人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭的影响。结果显示,linc00152在宫颈癌细胞中的表达水平明显高于正常宫颈上皮细胞(P<0.01);在HeLa细胞中,sh-linc00152组DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平明显低于sh-control组;sh-linc00152组、si-DNMT3A以及si-DNMT3B组HeLa细胞的存活率及穿过基质胶的HeLa细胞数量均明显低于各自对照组。linc00152可能通过调控DNMT3A和DNMT3B信号通路促进人宫颈癌细胞生长与侵袭。