139例O型孕妇外周血DNA检测胎儿血型准确度分析

目的探讨利用PCR-RFLP技术建立从O型孕妇外周血中提取DNA检测胎儿血型的实验方法的准确性。方法胎儿出生前提取139例丈夫为非O型的O型孕妇外周血DNA,根据ABO基因特点设计PCR引物,扩增目的片段,用KpnⅠ、AluⅠ限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析,以确定胎儿的ABO血型。胎儿出生后用脐带血进行血清学血型检测,对比新生儿出生前后血型检测的符合率。结果 139例新生儿出生前后血型检测符合率为94.24%(131/139)。孕中期血型检测符合率为91.95%(80/87),孕晚期的血型检测符合率为98.08%(51/52)。结论利用O型孕妇外周血DNA对胎儿的ABO血型进行产前诊断是一条可行的无创性检测途径,检测结果准确度高,对于母胎血型不合引起的新生儿溶血病的预防可提供有价值的诊断依据。     

PCR技术在母婴ABO血型不合早期诊断中的临床应用探讨

目的 建立一种利用孕妇血浆中游离DNA直接检测胎儿ABO血型,用于母婴ABO血型不合的无创性产前诊断方法.方法 首先检测孕妇血浆中的抗A (B) IgG抗体,然后利用硅胶膜柱提取的方法从60例13～37 w(IgG≥1∶64)可疑母婴ABO血型不合的孕妇血浆中提取胎儿DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测胎儿ABO血型,最后取婴儿脐血进行血清学证实.结果 60例标本中,检出51例,检出率85.0％,出生后血清学证实47例诊断正确,诊断正确率92.16％.结论 PCR技术利用孕妇血浆中游离DNA检测胎儿ABO血型可行,结果可靠,对诊断和预防母婴ABO血型不合所致溶血病的发生具有重要意义.     

利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿的ABO血型研究

目的：探讨一种胎儿ABO血型的无创性产前诊断方法。方法：从28例健康孕妇血浆中提取胎儿DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法检测胎儿ABO血型,通过出生后全血血清学检测证实。结果：28例样本中,产前检查能正确显示胎儿血型的有22例,总准确率为78．6％。结论：利用孕妇血浆中胎儿DNA诊断胎儿ABO血型,是一种简便可行的无创性方法,值得推广应用。     

复合PCR技术在ABO血型基因分型中的应用

目的 探讨复合PCR技术在ABO血型基因分型方法中的应用.方法 通过实验研究摸索复合PCR的条件和规律,采用单管同时扩增出ABO基因的第6、7外显子后,使用限制性内切酶对复合PCR产物进行酶切消化.结果 通过最佳实验反应条件的获得,可建立ABO血型基因分型方法.结论 复合PCR技术在建立ABO血型基因分型方法的应用中,具有其特殊性.     

血液病致ABO抗原减弱的血型基因定型研究

目的：探讨血清学定型出现ABO血型抗原减弱的血液病患者的基因分型,为临床输血提供血型依据。方法2012年7月至2013年6月对320例血液病患者,采用血型血清学方法进行ABO血型鉴定,并对ABO血型抗原减弱的标本采用聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR-SSP）进行基因分型。结果53例试管法正反定型相符,可确定ABO血型;210例反定型抗体减弱或异常;57例抗原减弱。57例抗原减弱患者中,急性髓细胞白血病（AML）35例,骨髓增生异常综合征（MDS）12例,再生障碍性贫血（AA）3例,慢性粒细胞白血病（CML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）各2例,慢性淋巴细胞白血病（CLL）、淋巴瘤、特发性血小板减少性紫癜（ITP）各1例。经基因分型,57例患者中A抗原减弱23例,确定A型血,B抗原减弱26例,确定B型血,A、B抗原均减弱8例,确定AB型血。结论 ABO血型抗原减弱最多见于AML和MDS患者,进行血型基因检测可明确ABO血型。ABO抗原减弱时经基因分型确定血型后,输血时可同型输血。     

ABO疑难血型基因分型研究

目的:研究ABO血型基因分型的意义。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因定型方法对ABO疑难血型进行检测。结果:本研究建立了稳定的PCR-SSP基因分型方法,对10例疑难标本准确进行了基因分型。结论:ABO型基因分型技术可以应用于ABO血型疑难样本检测。     

ABO血型基因突变导致正反定型不符分析

目的对临床检测中1例ABO血型正反定型不符病人进行血清学及分子生物学研究,明确病人ABO血型,阐述其正反定型不符原因及分子生物学机制。方法采用血清学及分子生物学技术,鉴定正反定型不符病人血型及血清中意外抗体,并对病人样本进行ABO血型基因直接测序,PCR扩增编码ABO基因第6、第7外显子编码区序列,以公认的A101（ABO*A1.01）等位基因序列做为参考序列比对,分析待测样本DNA序列,明确样本ABO表型及基因型。结果病人样本血清学结果正定型为A型,样本红细胞与单克隆抗-A反应弱阳性,但其红细胞与抗-A1抗体反应阴性;样本反定型为O型,血清与A1试剂红细胞反应弱阳性、与A2试剂细胞反应阴性,其血清不规则抗体筛查阴性,证实样本血清存在抗-A1意外抗体;样本测序结果显示病人在ABO基因第6外显子出现c.297A>G（ACA>ACG）、第7外显子出现c.771C > T（CCC > CCT）及c.646T > A（AGT > AGA）的等位基因突变。结论血清学试验检测病人ABO血型为A亚型,血清中产生抗-A1意外抗体,导致病人正反定型不符。病人ABO基因6号外显子的c.297A>G及7号外显子的c.771C>T突变,氨基酸编码并无改变,属于无义突变。而通过比对血型抗原基因突变资料库注册的ABO表型,分析病人为Ax/Aweak表型,该表型基因ABO*AW.30.01第7外显子的c.646T>A突变（导致氨基酸Phe216Ile改变）正是其表型形成的分子基础。     

应用实时荧光定量PCR检测母血浆胎儿DNA进行RhD基因型产前诊断

目的建立实时荧光定量PCR(real time PCR)技术检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿RhD基因型的方法。方法通过微量DNA抽提技术提取母血浆中胎儿游离DNA,利用Real time PCR检测22例妊娠15～40周的单胎RhD阴性孕妇血浆中胎儿游离DNA,进行男性性别决定基因(SRY)和RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,基因型结果与血清学RhD定型结果对比,评价该技术方法的准确性。结果孕妇血浆中存在游离胎儿DNA。19例RhD真阴性孕妇血浆中,14例均检测到胎儿游离DNA的RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,判断为RhD阳性,基因定型结果与血清学表型相符。3例未检测到胎儿游离DNA的RhD基因特异性扩增,结果与胎儿血清学表型相符。因此检测胎儿游离DNA的RhD基因型准确率达到89.5%。另外2例只检测到RhD基因外显子10扩增,通过新生儿脐血血清学吸收放散试验确定为RhDel型。3例RhDel型孕妇血浆中检测到RhD基因扩增,不适于胎儿RhD基因型的分型。结论实时荧光定量PCR方法检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性诊断胎儿RhD基因型...     

孕妇血浆中游离胎儿DNA对检测胎儿ABO血型40例分析

1997年Lo等研究证实,在母体外周血中存在着相对较为丰富的游离胎儿DNA,这一发现为无创性产前诊断开辟了崭新途径[1].孕妇血浆中的游离胎儿DNA可用来检测胎儿ABO血型,对于预防新生儿溶血病、预测与ABO血型基因连锁的遗传性疾病,治疗血型不合妊娠引起的胎儿溶血性贫血等疾病,具有重要的意义．笔者提取血型为0型、丈夫血型为非0型的孕妇血浆中的胎儿DNA,采用复合PCR—RFLP方法检测胎儿ABO血型．     

呼和浩特地区献血者ABO血型正反定型不符原因分析

目的 通过对献血者ABO血型正反定型不符标本的进一步检测，总结分析正反定型不符的原因，以保证临床输血的安全有效。方法 对87例无偿献血者ABO血型正反定型不符标本采用ABO血型正反定型、抗体筛选试验、吸收放散试验等血型血清学方法、并采用PCR-SSP和ABO基因测序方法辅助检测。结果 87例正反定型不符标本中抗体筛选阳性者36例（41.38%）；血清抗体减弱21例（24.14%）；ABO亚型13例（14.94%）；冷凝集素17例（19.54%）。结论 综合分析各项实验结果，当血型血清学方法无法确定时，应进行基因检测，确保每一位献血者血型鉴定的准确性，并根据不同的原因，采用合理的用血建议。     

PCR-SSP对潜在输血需要住院患者ABO基因分型的检测效果与意义

【目的】 调查潜在输血需要住院患者的ABO血型基因,分析ABO表型相同输血中ABO基因型的错配输血几率。【方法】 对502例潜在输血需要的住院患者,采用血清学方法和聚合酶链反应-序列特异性扩增技术(PCR-SSP)检测ABO血型的表型及基因型。比较两种方法学对ABO血型表型的一致率;统计各ABO等位基因及各ABO基因型的频率;并分析潜在输血需要的住院患者在接受ABO血型表型相同的输血时,ABO基因错配输血几率。 【结果】 血清学与PCR-SSP对502例潜在输血需要的住院患者的ABO表型识别的一致率为100%。PCR-SSP技术检测出患者中常见ABO基因5个(O1、O2、A1、B1及A2)以及ABO基因型16个(O1O2、O1O1、B1O1、A1O1、A1O2、B1O2、O2O2、A1B1、A1A1、B1B1、A2O1、A2O2、A2B1和A1A2),而血清学仅能识别ABO表型。潜在输血需要住院的患者在接受ABO血型表型相同的随机输血中,与供者之间ABO基因型的错配率分别为:A型65.98%,B型57.39%,O型56.95%,AB型22.55%。 【结论】 PCR-SSP能识别ABO基因型,不仅可以作为血清学的有力补充,而且可能揭示输血治疗中不明原因的输血不良反应的临床原因,具有重要临床意义。     

应用PCR-RFLP技术进行ABO基因分型研究

目的建立PCR-RFLP技术鉴定ABO血型基因型的方法。方法应用PCR技术扩增ABO基因第六外显子上分别包含258位核苷酸和700位核苷酸的两个DNA片段，分别用KpnI和AluI酶解PCR扩增产物，电泳分离鉴定ABO血型基因型，同时对上述两种PCR扩增的DNA片段进行序列测定。结果用PCR-RFLP技术鉴定的ABO基因分型结果与PCR扩增产物的序列测定结果完全符合，可鉴定出AA、AB、AO、BB、BO、OO等6种ABO血型基因型。结论PCR-RFLP技术操作简便，重复性和稳定性好，可作为鉴定ABO血型基因型的可行方法。     

ABO血型基因分型诊断方法的建立

目的 在北京地区建立一套稳定的ABO血型系统基因分型的诊断方法,为临床疑难血型定型工作提供技术保证和输血安全保障.方法 通过Multiplex-PCR-RFLP技术和PCR-SSP技术建立起ABO血型基因分型方法.结果 所建立的分型方法具有良好的重复性和稳定性,在各种分型检测中均取得了理想的试验结果.结论 建立一套较为完善和实用的基因分型方法,为进一步研究中国人ABO亚型的分子基础提供参考依据.     

基因分型技术首次应用于类孟买型家系ABO基因的研究

目的 探计将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。方法 报告首次在国内用基因分型技术用于一个类孟买型家系5口人ABO基因多态性的研究。在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，采用快速盐析法提取外周血中的DNA，用PCR—SSP法扩增ABO血型等位基因。结果 一家5人中，兄弟3人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、Al20O1，而其父母血型基因与血清学血型相符合。结论 ABO PCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显优势。     

孕妇产前IgG抗A(B)检测预测新生儿溶血病

目的探讨产妇IgG抗A（B）效价与ABO新生儿溶血病的关系，了解产妇IgG抗A（B）效价〉64来预测新生儿ABO溶血病的情况。方法96例产妇为O型血型、丈夫为非O型，孕妇分娩时测定IgG抗A（B）效价，分娩后采集脐血进行ABO新生儿溶血病的检测。结果新生儿ABO溶血的发生率与母亲IgG抗A（B）效价呈正相关，效价越高，新生儿ABO溶血发生率越高（P〈0．05）。结论产妇IgG抗A（B）效价的检测是一个有用的血清学检测指标，可以用来预测新生儿ABO溶血病发生率。     

改良微柱凝胶法检测ABO变异型血型

目的：建立用于检测ABO变异型血型的改良微柱凝胶法。方法：选取2016年11月至2018年5月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院、温州市人民医院和瑞安市人民医院ABO血型凝集强度改变或正反定型不一致的患者12例。采用血型血清学检查和血型基因检测结合临床表现确认标本ABO血型;对已知血型标本用微柱凝胶法复核;用1% O型、A3亚型和A抗原减弱红细胞调整微柱凝胶法离心方式建立改良微柱凝胶法,并对全部标本进行检测。结果：12例标本中A3亚型1例,B（A）型3例,类孟买型3例,ABO抗原减弱5例;微柱凝胶法和盐水试管法检测敏感度相似,12例标本中只检出2例,检出比例为2/12;选定改良微柱凝胶法的离心方式为900 r/min离心2 min、4 ℃孵育30 min、1 800 r/min离心3 min;用改良微柱凝胶法检测12例标本,1例不能检出,检出比例为11/12。结论：本研究建立的改良微柱凝胶法通过改变微柱凝胶血型卡的离心方式、增加孵育时间和孵育温度,提高了检测敏感度,适合ABO变异型血型的筛检。     

序列测定方法在ABO血型定型中的建立

目的 通过序列测定方法对ABO血型进行深入研究.方法 采用ABO基因的克隆序列测定方法对临床疑难标本进行分析研究.结果 建立了稳定的ABO基因克隆测序方法并应用于疑难标本鉴定.结论 该诊断方法不仅成为ABO血型确诊的可靠保障,而且为ABO变异型分子基础的深入研究提供了重要依据和技术支持.     

微柱凝集技术对O型血孕妇IgG抗体效价的检测及意义

目的 检测夫妇血型不合的O型血孕妇血清IgG抗体效价,分析其临床意义.方法 用微柱凝胶法抗人球蛋白试验测定224例O型血孕妇IgG抗体效价.结果 (1)224例O 型血孕妇中,共检出抗体效价异常者85例(37.9%).其中妇-夫血型为O-A的94例标本中,异常结果34例(36.2%);妇-夫血型为O-B的91例标本中,...