冷藏对血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端糖基脱落的影响

目的：测定冷藏（4℃）保存48 h后血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端糖基脱落情况。方法分别以一定浓度梯度的FITC-sWGA、FITC-RCA-1、FITC-ECA标记血小板,应用流式细胞仪检测,确定最佳工作浓度。检测冷藏保存48 h后血小板GPⅠbα末端唾液酸基及次末端半乳糖基脱落情况。结果 FITC-sWGA、FITC-RCA-1、FITC-ECA工作浓度分别为2μg/ml、2μg/ml、30μg/ml时标记效果好。冷藏保存48 h后GPⅠbα末端唾液酸基及次末端半乳糖基脱落较22℃常规保存明显增加,分别增至（156±18）%及（123±13）%,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论冷藏保存48 h可致血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端糖基脱落增加。     

单检及16份混样检测模式对献血者核酸检测效果的比较研究

目的 探讨单份及16份混合标本2种检测模式对献血者血液病毒核酸检测(nucleic acid test,NAT)效果的影响.方法 2009年2至6月顺序留取北京无偿献血者标本,用诺华Procleix ULTRIO Assay进行单份(ID)或16份混合标本(P16)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒-1( HIV-1)三项联合核酸检测.单份NAT反应性同时HBsAg、抗-HCV或抗-HIV血清学不合格的标本,血清学合格的单份NAT反应性经双孔NAT复检阳性的标本,以及混合NAT反应性/拆分NAT为阳性的标本,进一步用诺华Procleix HBV、HCV和HIV-1鉴别试剂进行鉴别试验.血清学合格、HBV NAT单独阳性标本进一步用Roche HBV定量实验加以验证和进行病毒含量测定、血清学分析、并进行稀释以模拟是否能被P16-NAT检出.阳性检出率进行四格表连续校正的x2检验.结果 (1)在7613份单份NAT (ID-NAT)标本中,检出NAT阳性26份,ID-NAT阳性率0.34％(26/7613)；(2)在16 064份共1004份P16混合标本NAT(P16-NAT)中,检出NAT阳性27份,P16-NAT阳性率为0.17％ (27/16 064)；(3)在血清学合格标本中,单份检测的NAT单独阳性检出率为0.12％ (9/7438),高于16份混样检测的NAT单独阳性检出率0.01％ (2/15 750)(x2=11.880,P＜0.05).9份ID-NAT及2份P16-NAT单独阳性标本经鉴别均为HBV NAT阳性,未检出 HCV NAT单独阳性或HIV NAT单独阳性；(4)9份ID-NAT HBV单独阳性血样模拟P16-NAT,仅有2份可被检出；(5)对8份ID-NAT及2份P16-NAT单独阳性标本进行Roche HBV定量测定,均可确证其核酸检测结果,但病毒含量很低.其中2份HBV病毒含量为472 IU/ml及15 IU/ml,6份含量＜12 IU/ml,另2份原倍不能定量经10倍浓缩处理后测得含量为＜ 12 IU/ml和14.3 IU/ml;(6)11份HBV NAT单独阳性标本中,3份(27.3％)为潜在的窗口期感染,其余8份(72.7％)抗-HBc阳性或抗-HBe阳性,但抗-HBc-IgM均为阴性,为隐匿性感染；(7) P16-NAT初检呈反应性需要进行拆分试验的混合样本比率为2.49％ (25/1004),其中由血清学合格标本所致初检反应性的混合样本比率为0.20％ (2/1004).结论 ID-NAT单独阳性检出率高于P16-NAT单独阳性检出率.为避免低病毒含量HBV的漏检,应选用灵敏度高的核酸检测试剂,并尽量采用小标本量混合检测,甚至采用单份检测方式.     

γ-射线辐照对淋巴细胞杀伤效果的研究

目的　确定抑制淋巴细胞增殖所需的最低辐照剂量。方法　分别用 5、15、2 5、35、5 0Gy 5种剂量对血液进行辐照处理 ,然后进行混合淋巴细胞培养 (MLC)及有丝分裂原刺激试验 ,测定3 H掺入量以测定淋巴细胞的残存增殖活性。结果　与未辐照血相比 ,15Gy剂量辐照时 ,对MLC培养的抑制率已达 (96 .4± 2 .0 ) % ,但对PHA刺激和ConA刺激反应的抑制率分别为 (85 .0± 1.7) %和 (86 .5± 5 .1) % ,均低于 95 % ;2 5Gy剂量辐照时 ,对PHA刺激和ConA刺激反应的抑制率分别达 (96 .3± 2 .8) %和 (96 .6± 4 .3) %。结果　 15Gy剂量不足以预防TA GVHD ,最低辐照剂量应为 2 5Gy。     

运用甘油磷酸氧化酶法测定冰冻红细胞解冻后残留甘油的含量

目的 建立测定冰冻红细胞解冻洗涤后残留甘油含量的酶学方法测定工艺.方法 进行甘油磷酸氧化酶法的线性范围测定、重复性、准确性(回收试验)、游离血红蛋白干扰试验,并比较不同样本处理方法(钨酸钠裂解法、三氯醋酸裂解法及制备后2h直接取上清液法)对酶法检测甘油的影响;进行系列浓度甘油红细胞酶法测定结果与传统过碘酸钠滴定法测定结果比对.结果 用GPO-PAP法检测甘油浓度在0.05～2.0 g/L时有较好的线性关系,,=0.9994,Y=0.942 X+0.0239;甘油含量为0.2 g/L、1.0 g/L的样本,批内CV值分别为2.68％、0.81％(n=20),日间CV值分别为4.59％、4.37％(n=20);甘油浓度从0.29～2.09 g/L间其回收率97.1％～100.8％,样本的平均回收率为99.0％;10g/L游离血红蛋白对GPO-PAP法检测结果无干扰;3种样本处理方法所测得的系列浓度甘油红细胞样品及解冻去甘油红细胞制品(n=18)酶法测定结果一致(P＞0.05);系列浓度甘油红细胞测定结果显示酶法测定比滴定法更准确,滴定法测定值偏高.结论 甘油磷酸氧化酶法可用于冰冻解冻去甘油红细胞制品中残留甘油含量的测定,方法简便、快速、准确、重复性好.3种样本处理方法对GPO-PAP法检测甘油含量无影响.     

复合PCR技术在ABO血型基因分型中的应用

目的 探讨复合PCR技术在ABO血型基因分型方法中的应用.方法 通过实验研究摸索复合PCR的条件和规律,采用单管同时扩增出ABO基因的第6、7外显子后,使用限制性内切酶对复合PCR产物进行酶切消化.结果 通过最佳实验反应条件的获得,可建立ABO血型基因分型方法.结论 复合PCR技术在建立ABO血型基因分型方法的应用中,具有其特殊性.     

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒的诊断性能评价

目的 通过与Ortho3．0丙型肝炎病毒（HCV）抗体诊断试剂盒比较，分析评价EIAgenHCV抗体诊断试剂盒（EIAgen）的诊断性能。方法应用考核试剂EIAgen和参比试剂Ortho3．0HCV抗体诊断试剂盒对2881份样本进行检测，检测结果不一致时，应用重组免疫印迹试验（RIBA）确证试剂RIBAHCV3．0或核酸试验（NAT）确证试剂进行确证，以对结果进行综合分析。结果2881份样本中，考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性，且参比试剂的测量值／临界值（S／CO）≥3．8，或检测结果符合确证试验阳性结果的阳性标本为274份，考核试剂及参比试剂检测结果均为阳性且参比试剂的S／CO〈3．8为59份，阴性标本2539份，不确定的9份被剔除。考核试剂检测真阳性274份，无假阴性结果；真阴性2527份，假阳性12份。考核试剂敏感度为100％，高于参比试剂的98，91％；特异度为99．53％，略低于参比试剂的99．88％。考核试剂对部分国内常见HCV基因型（1a型、1b型、2a型、3型和6型）样本27份，均为真阳性，敏感度为100％，对于非HCV感染的病毒性肝炎、自身免疫性疾病及妊娠样本具有良好的特异度，特异度均为100％。溶血、脂血样本对考核试剂检测结果无影响。考核试剂阳性预测值为95．80％，阴性预测值为100％，准确性为99．57％。考核试剂S／CO≥5．9的样本301份，其中用参比试剂检测S／CO≥3，8占88．70％；考核试剂S／CO〈5．9的29份，其中用参比试剂检测S／CO〈3．8占86．21％。结论EIAgen敏感度100％，特异度较好，是一种优秀的检测抗-HCVEIAgen试剂，尤其适用于阳性样本的筛选。采用EIAgen试剂检测样本，当S／CO≥5．9时，样本的阳性预测值较高。     

血红蛋白人工血液研究进展

本世纪初以来，人们对多种可能的人工血液进行了研制，其中最有吸引力，目前仍在研制的产品有血红蛋白和全氟碳乳剂。本文就血红蛋白溶液的种类来源，各公司正在研制的产品，临床试验情况以及有待解决的安全性问题等作一综述。     

我国5城市献血者HIV及HCV核酸检测研究

血液安全性问题是全球关注的焦点问题.由于存在检测窗口期、免疫隐匿性感染、病毒变异等原因,使血液无法保证零风险.为评估现有检测体系、献血模式、和管理体系下我国血液的残余风险度,并探讨我国血液核酸检测(NAT)的必要性和可行性,开展了历时2年多的NAT检测多中心国际合作研究.现将部结果报告如下.     

不同处理和保存条件下体外HCV RNA稳定性研究

对献血者或病人进行HCV核酸检测时，如果标本的采集、处理、保存不当，会造成病毒核酸降解，从而影响检测结果的真实性。本研究的目的是对不同抗凝剂、不同温度、不同保存时间下的HCV RNA病毒稳定性进行研究，以考察常规采供血过程中，标本采集及保存方式对NAT检测的影响。采集7例HCV RNA阳性献血者的血样，采用不同的抗凝剂、经不同的温度和不同的时间保存后，采用荧光定量PCR方法测定HCV RNA病毒含量，考察HCV RNA的稳定性。结果表明：①不同抗凝剂抗凝的全血于4℃保存48小时过程中，病毒含量下降至原滴度的42．7％；EDTA抗凝组各时间点的滴度均低于其它3组（分别相当于其它3组的67．6％-25．1％）。②ACD抗凝的全血在4、25和37℃保存48小时．病毒含量分剐下降到原滴度的53．8％、72．5％、29．8％。③ACD抗凝的全血离心分离出血浆，4℃或25℃继续保存7天，病毒含量分别下降至原滴度的70．9％和25．1％。④ACD抗凝的全血分离的血浆，反复冻融4次，病毒含量下降到原滴度的38．9％。结论：①用于核酸检测的标本应该用无菌采血管采样；②在无菌采血管采样的前提下，核酸检测标本用未抗凝血、EDTA、ACD、CPDA抗凝血均可；③采集的全血应避免放置37℃以上，ACD抗凝全血在4℃、25℃保存48小时内、37℃保存14小时内，HCV RNA病毒仍较为稳定；④分离后的血浆应避免放置25℃以上，ACD抗凝全血分离后的血浆在4℃保存7天，25℃保存3天，HCV RNA病毒仍比较稳定；⑤血浆标本应避免多次冻融，但冻融3次的血浆HCV RNA病毒含量仍然较为稳定；⑥无菌采样对维持病毒的稳定性非常重要；单纯的机械性溶血并不会明显导致病毒的降解；只要注意无菌的问题和有合适的核酸提取方法去除血红素，HCV RNA病毒实际上比以前认为的要稳定得多。     

超速离心浓缩技术富集HBV和HCV颗粒的效果研究

目的 分析超速离心浓缩(简称超浓缩)技术对HBV和HCV病毒颗粒的富集效果.方法 将8份不同浓度的HBV阳性标本(10、102、103 IU/ml各2个、104和105 IU/ml各1个)和9份不同浓度HCV阳性标本(102 IU/ml 1个、103 IU/ml 3个、104 IU/ml 3个,105、106 IU/ml各1个),4℃ 24 600 g超速离心1h,9.6倍浓缩富集病毒;使用Roche COBAS AmpliPrep/COBAS Taq-Man HBV及HCV定量试剂盒对原标本及浓缩标本做HBV及HCV定量测定,计算病毒回收率.结果 经9.6倍超浓缩处理后,8份HBV阳性标本的病毒含量均明显上升,平均是原标本的(5.92±1.98)倍,浓缩处理的病毒回收率为(61.65±20.67)％;9份HCV阳性标本的病毒含量亦均明显上升,平均是原标本的(4.70±1.43)倍,浓缩处理的病毒回收率为(48.95±14.84)％.结论 超速离心处理可有效富集HBV及HCV颗粒,病毒浓缩效果显著.