microRN A-141在结肠癌中的表达分析研究

目的：分析microRNA141（miR‐141）在结肠癌组织中的表达及意义。方法采用荧光定量 PCR（SYBR Green）法检测48例结肠癌组织和对应癌旁正常组织中miR‐141的表达。结果 miR‐141在结肠癌组织中的相对表达量为5．19±0．52,与对应癌旁正常组织1．01±0．13比较差异有统计学意义（P＜0．05）;随着结肠癌分化程度的降低结肠癌组织中miR‐141的表达增高;miR‐141在淋巴结转移组的相对表达量为6．05±0．14,在淋巴结无转移组中为4．30±0．23,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论 miR‐141高表达可能与结肠癌的分化程度和淋巴结有无转移有关。miR‐141的出现为结肠癌的研究提供了新的切入点。     

DNA拓扑异构酶Ⅱ在结肠癌的表达及意义

目的：研究TopoⅡ与结肠癌的耐药和生物学行为的关系。方法：应用免疫组化S－P法检测96例结肠癌、32例正常结肠粘膜、20例结肠腺瘤、30例胎儿结肠粘膜组织中TopoⅡ的表达。结果：51例结肠癌TopoⅡ表达阳性，阳性率为53．13％。TopoⅡ在正常结肠粘、结肠腺瘤、结肠癌、胎儿结肠粘膜的表达无显差异（P＞0．05）。TopoⅡ的表达与结肠癌组织学类型、浸润程度、淋巴结转移无关（P＞0．05），在Dukes分期中B期阳性率显高于A、C期（P＜0．01）。结论：结肠癌由TopoⅡ介导的多药耐药是天然性耐药性，检测TopoⅡ的表达可作为指导结肠癌化疗用药的参考指标。     

P—gp、GST-π、Topo—Ⅱ在胃癌组织中的表达及对新辅助化疗疗效的影响

目的探讨P糖蛋白（P—gp）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST-π）及拓扑异构酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）蛋白在胃癌组织中的表达及其与新辅助化疗之间的关系。方法通过免疫组化方法检测43例患者胃癌组织中P—gp、GST-百及Topo—Ⅱ蛋白的表达水平,分析其与胃癌临床病例特征的关系。将P—gp表达阳性、GST-π表达阳性和Topo-Ⅱ表达阴性作为3个可能的危险因素,将人组患者分成高危耐药组（2—3个危险因素）和低危耐药组（0—1个危险因素）,比较两组患者新辅助化疗的有效率。结果P—gp阳性表达率为41．9％,与胃癌临床病理因素均无关（P〉0．05）;GST-订阳性表达率为44．2％,与胃癌分化程度有关（χ2=5．58,P〈0．05）;Topo—Ⅱ阳性表达率为72．1％,与胃癌的分化程度有关（χ2=9．07,P〈0．01）。3种蛋白各自表达的阳性组和阴性组比较,新辅助化疗的有效率比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。高危耐药组24例（55．8％）,低危耐药组19例（44．2％）。高危耐药组新辅助化疗有效率明显低于低危耐药组（P〈0．05）。结论胃癌组织中P．gP、GST-π和Topo-Ⅱ蛋白的表达与新辅助化疗的有效性有关,对于高危耐药的患者行新辅助化疗不能提高手术切除率。     

P—糖蛋白，GST—π，TOPOⅡ在胃癌组中的表达及其临床意义

目的；探讨P—gp、GST—π，TOPOⅡ在胃癌组织中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法研究了P—gp、GST—π，TOPOⅡ在胃癌组织中的表达情况。结果；P—gp,GST—π在胃癌组织中的表达升高，表达率分别为58．2％和72．84，P—gp的高表达与淋巴结转移、癌肿浸润深度有关(P＜0．05)。GST—π，的高表达与细胞分化程度有关(P＜0．05)。TOPOⅡ在周癌组织中的表达降低，表达率为61．73%,TOPOⅡ的表达降低与临床病理参数无关（P＞0．05)。结论：胃癌组织中存在着P—pg、GST—π，TOPOⅡ表达水平的变化，临床检测P—gp、GST—π，TOPOⅡ对胃癌化疗方案的制定、判断预后有重要的指导意义。     

多药耐药基因蛋白TopoⅡ在胃肠癌中的表达及其临床意义

目的：探讨TopoⅡ蛋白的表达特点及其与胃肠癌临床病理因素的关系。方法：采用免疫组化S—P法对98例胃肠癌（33例胃癌,65例结肠癌）进行TopoⅡ蛋白表达的检测。结果：TopoⅡ蛋白在胃癌、肠癌中表达的阳性率分别为48．5％（16／33）、40．0％（26／65）,两者无显著差异（P〉0．05）。TopoⅡ蛋白的的表达与淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论：TopoⅡ蛋白在胃肠癌中的表达可能与胃肠癌的耐药有关。     

大鼠肢体缺血再灌注急性肺损伤细胞自噬及其相关蛋白的表达

目的：研究大鼠双下肢缺血再灌注所致急性肺损伤（LIR‐ALI）肺组织细胞早期自噬及其相关蛋白的表达。方法采用LIR‐ALI模型,12只雄性SD大鼠,以随机数字表法分为假手术（Sham）组,肢体缺血再灌注（I/R）组,每组6只。采用ELISA检测血清白乳酸脱氢酶（LDH）和免疫荧光法检测肺组织病理变化,利用RT‐PCR检测各组肺组织Beclin1和Atg5mRNA表达及Westernblot检测LC3蛋白的表达。结果与Sham组比较,I/R组LDH值升高,显示大鼠LIR‐ALI模型造模成功且肺组织免疫荧光特异性标记抗体高表达（P＜0．01）。采用2－△△CT法分析肺组织Beclin1和Atg5mRNA相对表达量,在I/R组较Sham组升高（P＜0．01）;Westernblot法检测显示,I/R组较Sham组LC3‐Ⅰ、LC3‐Ⅱ高表达、LC3‐Ⅱ/GAPDH亦明显升高（P＜0．01）。结论大鼠LIR‐ALI后激活肺组织细胞自噬及其相关蛋白高表达。     

多耐药基因在乳腺癌组织中的表达及价值

目的：观察多药耐药基因（MDR1）及其编码的糖蛋白（P－gp）在乳腺癌组织中的表达及临床价值。方法：选取病历资料完整的乳腺癌根治术乳腺组织标本84份,使用S－P 法免疫组化法染色检测P－gp、谷光甘肽S转移酶（ GST－π）及热休克蛋白（ HSP70）、p53的表达情况,采用Kendall＇s taub相关性分析P－gp、p53、GST－π、及HSP70、p53之间协同表达关系。结果：P－gp 表达阳性率为50％（42／84）,HSP70表达阳性率为61．9％（52／84）,p53表达阳性率为52．4％（44／84）,GST－π表达阳性率为40．5％（34／84）;相关性分析显示,GST－π与P－gp无协同表达（r＝0．146,P＞0．05）,HSP70与p53有协同表达（r＝0．626,P＜0．05）,p53与P－gp有协同表达（r＝0．763,P＜0．05）;P－gp表达对对乳腺癌10年生存率有明显影响。 COX模型乳腺癌预后多因素分析表明,年龄因素、GST－π表达均不具有独立的预后意义;临床分期、组织学分级、P－gp 表达、p53表达、HSP70表达均具有独立的预后意义。结论：同时检测MDR1、HSP 7、p53和GST－π的表达,可为乳腺癌临床耐药性的判断提供更为全面的信息。     

晚期鼻咽癌患者基因治疗前后TS和GST-π及TopoⅡ的表达变化及其与预后的关系

目的初步探讨重组人p53腺病毒（rAd-p53）鼻咽部瘤内注射前后的鼻咽癌原发灶中胸苷酸合成酶（Ts）、谷胱甘肽S-转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）的表达变化及其临床意义。方法采用免疫组化法检测80例晚期鼻咽癌患者治疗前后肿瘤组织中TS、GST-π和TopoⅡ的表达情况。结果常规放化疗组在治疗后其TS、GST-π和TopoⅡ的表达明显升高（P分别为0．01、0．01、0．00）,基因治疗组和单纯放疗组其治疗后TS、GST-π和TopoⅡ的表达未见明显改变（P〉0．05）。三组间的复发率和转移率差异无统计学意义（P=0．95）。疗前GST-π阴性患者其复发率和转移率明显低于阳性患者（8．93％vs54．17％,P=0．00）。结论GST-π蛋白的异常表达与晚期鼻咽癌治疗后复发转移有关。基因治疗晚期鼻咽癌可能通过抑制TS、GST-π、TopoⅡ蛋白表达进而逆转鼻咽癌化疗耐药。     

转录因子S p3在肝细胞癌中的表达意义

目的：研究转录因子Sp3（Sp3）在肝细胞癌（HCC）发生、发展及预后中的作用。方法采用Western blot法和RT‐PCR法检测该院49例HCC组织及其癌旁肝组织中Sp3和β‐Catenin的表达情况,分析二者在 HCC和癌旁肝组织中的表达差异、二者的表达与 HCC临床病理特征的关系,以及Sp3与预后的关系。结果 Western blot和RT‐PCR法的结果均显示：（1）Sp3在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（2）β‐Catenin在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）Sp3和β‐Catenin在HCC中的表达与肿瘤直径和分级相关;（4）Sp3和β‐Catenin在 HCC中的表达呈正相关（Western blot ：r＝0．681、P＝0．000;RT‐PCR：r＝0．641,P＝0．000）,均与肿瘤大小和分化程度有关;（5）Sp3高表达的病例预后较低表达的病例差（P＜0．05）。结论 Sp3在 HCC发生中起促进作用且与肿瘤恶性程度相关;Wnt通路可能是其参与 HCC发生、发展的途径。     

m iR-335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用

目的：探讨miR‐335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用。方法（1）选取乳腺癌组织及癌旁正常组织,分别采用RT‐PCR、Western blot检测组织中 miR‐335及生存素蛋白表达。（2）选取乳腺癌细胞系 MCF‐7,分别转染 miR‐335 mimic及mimic对照组,采用RT‐PCR、Western blot检测组织中miR‐335及生存素蛋白表达。（3）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别将野生型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐wt）和突变型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐Mut）与miR‐335 mimic或模拟物阴性对照（NC）共转染至乳腺癌细胞系MCF‐7,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。（4）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别转染mimic对照组、miR‐335 mimic及miR‐335 mimic＋survivin ,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性。结果（1）与癌旁组织相比较,乳腺癌组织中miR‐335表达显著降低（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达显著增高（P＜0．05）。（2）与转染mimic对照组相比较,转染miR‐335 mimic可使乳腺癌细胞MCF‐7中miR‐335表达上调（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达表达下调（P＜0．05）。（3）与转染NC相比较,共转染miR‐335 mimic与survivin‐wt可使MCF‐7荧光素酶活性降低（P＜0．05）,而共转染miR‐335 mimic与survivin‐Mut则MCF‐7荧光素酶活性无显著性变化（P＞0．05）。（4）转染miR‐335mimic后,MCF‐7增殖活性较转染mimic对照组显著降低（P＜0．05）;而转染miR‐335 mimic＋survivin后,MCF‐7增殖活性较单纯转染miR‐335 mimic显著提高（P＜0．05）,但仍显著低于转染mimic对照组（P＜0．05）。结论在乳腺癌组织中miR‐335呈现低表达,生存素呈现高表达;而miR‐335可通过靶向生存素抑制乳腺癌细胞系MCF‐7增殖。     

电针不同穴组对功能性便秘大鼠结肠黏膜超微结构及AQP3、AQP8表达的影响

目的 探讨电针不同穴组治疗功能性便秘（FC）大鼠的作用机理。方法 FC动物模型采用0 ℃ 0.9%氯化钠溶液对SD大鼠灌胃复制,随机分为模型组、电针1组（EAⅠ组）、电针2组（EAⅡ组）和电针3组（EAⅢ组）,正常组采用SD大鼠。EAⅠ组取天枢、大肠俞（双侧）、EAⅡ组取曲池、上巨虚（双侧）、EAⅢ组取天枢、大肠俞、曲池、上巨虚（单侧）进行电针治疗。观测粪便性状和肠道炭末推进率评定大鼠肠动力,透射电镜检测大鼠结肠黏膜超微结构,Western blot检测大鼠结肠AQP3、AQP8蛋白表达,qPCR检测大鼠结肠AQP3、AQP8 mRNA表达。结果 EAⅡ组大鼠24 h粪便粒数、24 h粪便含水量和肠道炭末推进率均显著增加,首次黑便时间显著减少（P<0.05）,结肠黏膜超微结构经EAⅡ干预后显著改善,模型组大鼠结肠黏膜AQP3、AQP8蛋白和AQP3、AQP8 mRNA表达显著高于正常组（P<0.05）,经EAⅡ干预后表达显著降低,具有统计学意义（P<0.05）。结论 电针刺激曲池、上巨虚可能通过降低FC大鼠结肠黏膜AQP3、AQP8蛋白和AQP3、AQP8 mRNA表达,减少结肠水分重吸收,增加结肠粪便含水量,调节水分转运,改善结肠黏膜超微结构,增强肠动力,起到改善便秘症状的作用。      

结肠癌组织中PKCβ1、COX-2及nm23-H1的表达及其意义

目的:研究结肠癌、结肠腺瘤和癌旁正常结肠粘膜组织中蛋白激酶C(PKCβ1)、环氧化酶-2(COX-2)及转移抑制基因nm23-H1的表达及其临床意义。方法:65例结肠癌、16例结肠腺瘤和8例癌旁结肠粘膜组织采用免疫组织化学法检测PKCβ1、COX-2及nm23-H1的表达。结果:PKCβ1表达在结肠癌与腺瘤和正常黏膜差异显著(P<0.01),表达率和表达强度依次递减。COX-2在结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠粘膜组织中的表达差异显著,结肠癌组织中C0X-2的表达与结肠癌分化程度、淋巴结和远处转移以及Dukes分期有关,与年龄和性别无关。nm23-H1的表达在结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织中差异有显著性(P<0.01),结肠癌组织中nm23-H1的表达与分化程度、远处转移及Dukes分期有关,但与其它临床病理资料无关。结论:PKCβ1可能与结肠黏膜上皮增生有关,可能参与了结肠的癌变过程,并可能在癌变早期发生改变。COX-2异常表达可能是结肠癌发生的早期事件,且在结肠癌的发生、发展中起一定作用。nm23-H1的表达下调,可促使结肠癌细胞获得进一步恶性分化及远处转移的潜能。     

结肠癌组织中PKCβ1、COX-2及nm23-H1的表达及其意义

目的：研究结肠癌、结肠腺瘤和癌旁正常结肠粘膜组织中蛋白激酶C（PKCβ1）、环氧化酶-2（COX-2）及转移抑制基因nm23-H1的表达及其临床意义。方法：65例结肠癌、16例结肠腺瘤和8例癌旁结肠粘膜组织采用免疫组织化学法检测PKCβ1、COX-2及nm23-H1的表达。结果：PKCβ1表达在结肠癌与腺瘤和正常黏膜差异显著（P〈0．01）,表达率和表达强度依次递减。COX-2在结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠粘膜组织中的表达差异显著,结肠癌组织中COX-2的表达与结肠癌分化程度、淋巴结和远处转移以及Dukes分期有关,与年龄和性别无关。nm23-H1的表达在结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织中差异有显著性（P〈0．01）,结肠癌组织中nm23-H1的表达与分化程度、远处转移及Dukes分期有关,但与其它临床病理资料无关。结论：PKCβ1可能与结肠黏膜上皮增生有关,可能参与了结肠的癌变过程,并可能在癌变早期发生改变。COX-2异常表达可能是结肠癌发生的早期事件,且在结肠癌的发生、发展中起一定作用。nm23-H1的表达下调,可促使结肠癌细胞获得进一步恶性分化及远处转移的潜能。     

粘着斑激酶(FAK)在大肠上皮不同病变中的表达及意义

目的探讨FAK在大肠上皮不同病变中的表达及临床病理参数的相关性.方法应用免疫组织化学SABC法,分析49例结直肠癌、23例腺癌、10例非肿瘤型息肉.结果49例大肠癌中FAK表达分别是34例(84.4%),FAK的高表达与大肠癌的Duke's分期、浆膜浸润、淋巴结转移、均呈正相关.23例腺癌标本中,FAK表达水平相一致.结论大肠癌的侵袭转移与相关基因协同作用密切相关,在大肠癌的侵袭转移中,FAK的表达具有正负调节的协同作用可能,FAK可为预测大肠癌侵袭转移潜能新的生物学指标.     

四种耐药基因蛋白及Ki-67在浸润性乳腺癌组织中表达的临床意义

目的:探讨Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ和Ki-67在浸润性乳腺癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学Envision法检测267例乳腺癌患者Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ和Ki-67的表达,分析它们与患者的临床病理特征的相关性。结果:乳腺癌患者Ki-67增殖指数为:27.73%±21.85%,Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ的阳性率分别为69.29%、64.04%、23.60%、29.21%;Ki-67与肿块直径、ER、PR具有相关性;Pgp与肿块大小具有相关性;GST-π、TopoⅡ与ER、PR具有相关性;Pgp与TS、GST-π呈正相关性,TopoⅡ与TS呈负相关性,与Ki-67呈正相关性。结论:Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ及Ki-67在乳腺癌的表达中存在一定的相关性,联合上述指标检测对乳腺癌患者的临床诊疗及预后具有重要意义。     

丙酮酸脱氢酶激酶4在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的 检测丙酮酸脱氢酶激酶4(pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)在结肠癌组织及癌旁黏膜组织中的表达情况,初步探讨其临床意义.方法 应用组织芯片技术结合免疫组织化学染色方法,检测本院收治的172例结肠癌患者术后组织标本及86例癌旁肠黏膜组织中PDK4蛋白的表达,对结果及临床病理学参数进行统计学分析.结果 PDK4在172例结肠癌组织中高表达率显著高于86例癌旁肠黏膜组织(57.0% vs 26.7%,P<0.01),PDK4蛋白表达高低与结肠癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移、预后等密切相关(P<0.05),且PDK4高表达组患者的生存时间显著低于低表达组患者(P<0.01).在临床分期低的结肠癌患者中,PDK高表达者预后较差(P<0.01);而在临床分期高的结肠癌患者中,PDK表达高低预后差异无统计学意义.结论 PDK4蛋白在结肠癌组织中表达高于癌旁肠黏膜组织,其可能参与结肠癌的发生、发展.     

环氧合酶在结肠腺瘤性息肉及结肠癌组织中的表达

目的:研究环氧合酶(COX-2)在结肠黏膜、结肠腺瘤性息肉以及结肠癌中的表达,并探讨COX-2与结肠癌和结肠腺瘤性息肉之间的关系。方法:随机续贯选择结肠腺瘤性息肉患者30例,结肠癌患者30例,以正常结肠黏膜30例作为对照组。用免疫组化方法检测COX-2的表达。结果:结肠癌组COX-2的阳性表达率显著高于正常结肠黏膜组(P<0.005)和结肠息肉组(P<0.05),结肠癌组COX-2的表达强度显著高于正常结肠黏膜组(P<0.01)和结肠腺瘤性息肉组(P<0.05),结肠腺瘤性息肉组的阳性表达率和表达强度高于正常结肠黏膜组(P<0.05)。结论:COX-2表达增高可能与结肠腺瘤性息肉和结肠癌的发生、发展有密切联系。     

耐药基因与肺癌药敏的相关性研究

目的 研究耐药基因P-糖蛋白（p-g）、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）表达与肺癌药物敏感试验的相关性及临床应用价值.方法 50例肺癌组织（纤支镜＋手术）纳入研究,耐药基因选用免疫组织化学进行检测,药敏方法采用MTT比色法.结果 （1）P-gp、TopoⅡ在肺癌中阳性表达率分别为：67.5％、50.0％.其两者在鳞癌和腺癌中表达差异无统计学意义（P＞0.05）,但在非小细胞肺癌和小细胞肺癌中,P-gp表达有显著性差异（P＜0.05）.（2）P-gp的表达与化疗药物（顺铂、吉西他滨、长春瑞滨、紫杉醇）的耐药性均呈显著的正相关（P＜0.05）,与异环磷酰胺的耐药性无显著性差异（P＞0.05）;TopoⅡ的表达与顺铂、吉西他滨、紫杉醇、异环磷酰胺的耐药性均呈显著的正相关（P＜0.05）,与长春瑞滨的耐药性无显著性差异（P＞0.05）.结论 P-gp高表达及TopoⅡ的低表达共同介导并可能参与了肺癌耐药机制,且与检测的化疗药物有不同程度的相关性.耐药基因检测可能对指导临床化疗药物的选择具有一定的参考性.     

UGT1A基因亚族在结肠粘膜及肝组织中的表达

目的:从mRNA水平及蛋白质水平分析葡萄糖醛酸转移酶UGT1A基因位点在结肠粘膜及肝组织中的表达。方法:结肠癌病例组25例,正常人肠道粘膜20例、正常肝组织12例。用逆转录聚合酶链反应分析结肠癌组、正常人肠道粘膜、肝组织中UGT1AmRNA的表达;用免疫印迹检测各组UGT1A蛋白的表达;用间接免疫荧光技术分析UGT1A蛋白的荧光定位及表达强度。结果:结肠癌组织中UGT1AmRNA表达低于其周围正常粘膜,而后者低于正常人肠粘膜的表达量,正常人群结肠粘膜中,UGT1AmRNA表达总体低于肝组织,P<0.01。结肠癌组、正常人结肠粘膜组织呈现个体差异性表达,而肝脏组织的表达较均质;结肠癌组织、癌周正常粘膜及正常人肠道粘膜中,UGT1A各同工型的表达例数均不相同。UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9mRNA表达水平在癌组织低于周围正常粘膜,P<0.01,而UGT1A8、1A10在癌组织中mRNA表达量高于周围正常粘膜,P<0.01。肝组织中12例全部均质表达UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9;UGT1A蛋白灰度比值在结肠癌组织显著低于其周围正常组织,后者又低于正常人肠粘膜,P<0.01。各组内蛋白表达的深浅度亦各不相同,而肝组织的蛋白表达较均质;UGT1A蛋白在结肠定位于粘膜层的上皮细胞,在肝小叶中可见整个肝小叶均质的荧光定位。两种组织的单个细胞内荧光强度等同可比,但单个癌细胞的荧光强度低于正常粘膜上皮细胞。结论:UGT1A基因位点的多态表达不仅存在于结肠癌组织及周围的正常组织,亦存在于正常人群肠粘膜,而肝脏呈均质性表达;结肠粘膜上皮UGT1A基因位点在转录水平及蛋白水平均存在着差异性,不同个体对致癌物的易感性不同可能是这种差异表达的结果。