前列腺精子结合蛋白的二维凝胶电泳及质谱分析

【目的】应用精子膜蛋白亲和层析柱分离金黄地鼠前列腺精子结合蛋白，并用二维电泳和质谱对金黄地鼠前列腺精子膜结合蛋白进行初步分析。【方法】应用附睾精子膜亲和层析柱纯化前列腺精子结合蛋白，采用二维凝胶电泳对纯化的前列腺精子膜结合蛋白进行蛋白分离和图像分析，并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点；RT—PCR检测已鉴定蛋白在前列腺及未受精卵子中的mRNA的表达。【结果】附睾精子膜蛋白亲和层析柱可纯化出前列腺结合蛋白，前列腺附睾精子膜蛋白结合蛋白的二维凝胶电泳蛋白图谱。分离的蛋白质斑点为30个，质谱鉴定出2个蛋白点，一为热休克蛋白105，另一羰基还原酶（NADPH）-3。前列腺和未受精卵中均表达热休克蛋白105和羰基还原酶-3的mRNA。【结论】自前列腺分泌物中分离出精子膜结合蛋白，金黄地鼠前列腺中精子结合蛋白经双向电泳及飞行质谱分析鉴定出蛋白热休克蛋白和羰基还原酶。     

肺癌相关蛋白的筛选与鉴定

目的:应用蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白,为阐明肺癌发生的分子机制和预后研究提供理论依据. 方法: 收集8例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术切缘的癌旁组织,提取可溶性总蛋白. 应用等电聚焦(IEF)电泳和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰凝胶电泳(SDS-PAGE)技术将可溶性总蛋白分离,得到肺癌的蛋白质组分析型双向电泳图谱,经PDQuest凝胶图像分析软件分析后找出差异蛋白点. 胶内酶解差异表达的蛋白点,基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),搜寻蛋白质数据库,并运用生物信息学鉴定蛋白质,分析蛋白的生物学意义和生物学功能,作为肺癌标志物的候选蛋白. 结果: 分别将8例肺癌组织及配对的癌旁组织可溶性总蛋白经过重复3次双向电泳,建立了肺癌组织蛋白质表达谱. 经PDQuest凝胶图像分析软件进行分析后, 12个蛋白质斑点只在肺癌组织有表达;6个蛋白质斑点只在癌旁表达. 对高丰度的肺癌特异表达的蛋白点进行鉴定,结果表明这些特异蛋白分别为钙粒蛋白B,Calgizzarin,载脂蛋白A-I,载脂蛋白E,Ras相关蛋白Rab-14,亲环素. 结论: 建立了人肺癌组织和癌旁组织的双向电泳图谱,为建立相应的蛋白质数据库提供了基础数据;鉴定了钙粒蛋白B等肺癌相关蛋白质,为进一步寻找肺癌蛋白标志物奠定了基础,对阐明肺癌发生的分子机制和预后研究有重要理论意义.     

下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6例分别等量混合成2组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳(2-DE)进行分离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。     

前列腺精子结合蛋白的二维凝胶电泳及质谱分析

 【目的】应用精子膜蛋白亲和层析柱分离金黄地鼠前列腺精子结合蛋白，并用二维电泳和质谱对金黄地鼠前列腺精子膜结合蛋白进行初步分析。【方法】应用附睾精子膜亲和层析柱纯化前列腺精子结合蛋白，采用二维凝胶电泳对纯化的前列腺精子膜结合蛋白进行蛋白分离和图像分析，并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点；RT—PCR检测已鉴定蛋白在前列腺及未受精卵子中的mRNA的表达。【结果】附睾精子膜蛋白亲和层析柱可纯化出前列腺结合蛋白，前列腺附睾精子膜蛋白结合蛋白的二维凝胶电泳蛋白图谱。分离的蛋白质斑点为30个，质谱鉴定出2个蛋白点，一为热休克蛋白105，另一羰基还原酶（NADPH）-3。前列腺和未受精卵中均表达热休克蛋白105和羰基还原酶-3的mRNA。【结论】自前列腺分泌物中分离出精子膜结合蛋白，金黄地鼠前列腺中精子结合蛋白经双向电泳及飞行质谱分析鉴定出蛋白热休克蛋白和羰基还原酶。     

对卵巢恶性肿瘤组织蛋白质双向电泳图谱的初步分析

目的构建卵巢恶性肿瘤组织的蛋白质表达谱,为进行卵巢良、恶性肿瘤组织蛋白质表达的差异分析及临床早期诊断奠定基础。方法取人卵巢恶性肿瘤组织,提取蛋白质,进行双向电泳分离,银染获得其蛋白质电泳分离图谱,利用PDQuest 2D分析软件进行图像分析,结合Swiss-Prot蛋白质数据库对蛋白质斑点进行初步鉴定。结果双向电泳图谱显示2-DE图谱上有212个蛋白质斑点,主要集中在pH 4.75~9.21之间,其中高丰度蛋白有36个点,低丰度的蛋白质斑点有176个,对其中3个高丰度蛋白质斑点初步鉴定可知这些蛋白质为:E2F6I、I2A、EZH1。结论本实验构建了人卵巢恶性肿瘤组织蛋白质的双向电泳图谱,其分离、染色效果好,能满足2-DE专业软件分析的要求,为后续卵巢良、恶性肿瘤组织的蛋白质组研究奠定了基础。     

脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱的建立及分析

目的:建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白质双向电泳图谱,观察脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质差异表达情况。方法:采用反复冻融法抽提血清蛋白质,以优化的双向电泳技术分离血清蛋白质,建立脾肾虚型重症肌无力患者与正常人血清蛋白质双向电泳图谱,并采用二维电泳图谱专用软件对所得结果进行图谱分析。采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法对两组间比较所得目标蛋白质点进行质谱鉴定。结果:通过双向电泳,建立血清蛋白质双向电泳图谱,选取具有明显差异的蛋白点21个进行质谱鉴定,共鉴定出8种蛋白质。结论:通过蛋白质组技术快速建立脾肾虚型重症肌无力患者血清蛋白表达图谱及质谱分析,可为进一步研究其发病机制及治疗手段提供实验基础。     

卵巢恶性肿瘤组织蛋白质的双向电泳及初步分析

目的:初步构建卵巢恶性肿瘤组织细胞的蛋白质表达谱,为进行卵巢良、恶性肿瘤组织细胞蛋白质表达的差异分析及临床早期诊断奠定基础.方法:取人卵巢恶性肿瘤组织,提取蛋白质,双向电泳分离,银染获得全细胞蛋白质的电泳分离图谱,利用PDQuest 2D分析软件进行图像分析,结合Swiss-Prot蛋白质数据库对蛋白质斑点进行初步鉴定.结果:双向电泳图谱显示2-DE图谱上有212个蛋白质斑点,主要集中在pH 4.95～6.81之间,其中高丰度蛋白有36个点,低丰度的蛋白质有176个,对其中3个高丰度蛋白质斑点初步鉴定可知这些蛋白质分别为:PSE1,IRX5,RN5A.结论:本实验构建了人卵巢恶性肿瘤组织细胞蛋白质的双向电泳图谱,其分离、染色效果好,能满足2-DE专业软件分析的要求,为后续卵巢良、恶性肿瘤组织细胞的蛋白质组研究奠定了基础.     

海洛因成瘾和正常大鼠前额叶皮质差异蛋白的分离与鉴定

目的 建立和比较海洛因成瘾与正常大鼠前额叶皮质(PFC)蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定海洛因成瘾大鼠PFC中的差异蛋白表达谱.方法 以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和海洛因成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-D图谱经ImageMaster 2D 5.0软件分析,选取7个差异蛋白点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱/串联质谱进行鉴定.结果 经肽指纹图谱和串联质谱分析,并在NCBInr数据库检索,选取的7个蛋白点被成功鉴定为5种蛋白:成瘾组特有的是葡萄糖调节蛋白58和26 s蛋白酶复合体亚基p40.5;成瘾组含量下调的蛋白是ATP合酶D链;Ndufa10和α-烯醇化酶在两组中发生相对分子质量和(或)等电点迁移.结论 双向电泳结合质谱分析初步鉴定了大鼠前额叶皮质中与海洛因成瘾和神经毒性相关的差异蛋白,为进一步深入研究其病理机制奠定了基础.     

多发性肌炎并肺间质病变血清蛋白质组学研究

目的寻找可预测多发性肌炎(PM)及合并肺间质病变(ILD)发生、发展的血清蛋白质。方法收集PM、PM+ILD患者及正常人(对照组)各3例,用双向电泳分离血清蛋白质点。凝胶经考马斯亮兰染色后,采用Analysis 2D7.0软件进行分析,光密度差异(ratio)>2且差别具有统计学意义(P<0.05)的蛋白质点为差异表达蛋白。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定;ELISA方法进行验证。结果通过2-DE图谱分析发现,15个差异表达蛋白质点,质谱鉴定出9种蛋白质。与对照组比较,PM组表达上调的蛋白为血清淀粉样蛋白A、载脂蛋白A1、凝集素、血清白蛋白;PM组表达下调的蛋白为转铁蛋白(TRF);PM+ILD组表达下调的蛋白为锌-a2-糖蛋白、TRF、a2-H2-糖蛋白、a1-β-糖蛋白。与PM组比较,PM+ILD组表达下调的蛋白为TRF、β2-糖蛋白1。ELISA进一步验证显示,TRF在各组间表达差别无统计学意义(P>0.05)。结论 PM组、PM+ILD组及对照组3组间存在8种差异表达的蛋白,这些蛋白可能是PM及ILD发病的相关蛋白,参与了疾病的进程。     

微小病变型肾病综合征激素耐药和敏感的比较尿蛋白质组学研究

目的 研究儿童微小病变型激素耐药与激素敏感型肾病综合征的尿中差异蛋白质表达,鉴定出肾病综合征激素耐药相关蛋白.方法 应用双向电泳相关技术结合基质辅助激光/电离飞行时间质谱仪技术,比较激素敏感和激素耐药微小病变型肾病综合征尿蛋白表达图谱寻找差异蛋白,对差异蛋白质斑点酶切,质谱分析,获得肽质量指纹图,通过蛋白质数据库进行蛋白检索分析.结果 成功地得到儿童微小病变型肾病综合征激素耐药尿蛋白双向电泳图谱.肾病综合征耐药型与激素敏感型蛋白表达比较,发现有30个蛋白质斑点显著差异改变.对14个差异蛋白质斑点酶切,质谱分析结合蛋白数据库检索获得12个蛋白,分别为驱动蛋白家族成员27、磷脂酰丝氨酸转移蛋白、大疱性类天疱疮抗原1异构体、α1蛋白酶抑制剂、Zn-α2糖蛋白、α1B糖蛋白、血清白蛋白前体、结合珠蛋白前体、类驱动蛋白样动力蛋白、白介素1受体相关激酶4、胞质动力蛋白、细胞角蛋白9.与激素敏感蛋白图谱比较,在激素耐药蛋白图谱上蛋白酶抑制剂、α1B糖蛋白、IRAK4表达下调,其余9种蛋白表达上调.结论 上述蛋白的鉴定将对激素耐药治疗靶位和耐药型肾病综合征诊断的分子标志物发现可能有所裨益.     

APPLICATION OF LORNOXICAM TO PATIENT-CONTROLLED ANALGESIA IN PATIENTS UNDERGOING ABDOMINAL SURGERIES

FOR anesthesiologis s ,treatingpostoperativepainhas alwaysbeen a problem.Althoughopioidshave been provedtobe effective,theirsideeffectscouldnotbeignored.With thedevelopmentofscienceand pharmacology,many drugs with aspectsof satisfactoryanalgesicefficacyand couldbe welltoleratedby patientshave been developed.And lornoxicamisone of them, which isa non-steroidalanti-inflammatorydrug (NSAID ), with analgesic, anti-infl-ammatory,andantipyreticproperties.Itseliminationhalf-time(3 to 5 hours) isle…     

Dr.Zhang Ren''''s Experience in the Acupuncture Treatment of Different Diseases with the Same Therapeutic Principle

Dr.Zhang Ren,the chief physician,is the chairman of Shanghai Acupuncture and Moxibustion Association.Having been engaged in medicine for about 40 years,he is experienced in treating various intractable diseases.In his long years of clinical practice,he advocates taking the TCM differentiation as the basis to seek for the acupuncture method for treatment of modern intractable diseases.The author of this essay had the fortune to follow Dr.Zhang in study.The following is a summary of Dr.Zhang's experience in the acupuncture treatment for different intractable diseases with the same therapeutic principle.     

Luo Lingjie''''s Experience in Treating Chronic Nephropathy

In treating chronic nephropathy,Luo Lingjie,a chief physician,pays attention to regulating the balance between yin and yang,treating infection if present,and removing pathogenic factors.He prescribes gentle drugs and uses carefully strongly warming-tonifying ones,emphasizes the importance of persuading the patient to persist in treatment with medication and nurse one's health for recuperation,and is good at combined use of TCM and western medicine therapy and brings the merits of various therapies into full play,with obvious theraoeutic effects.     

Acupuncture Combined with Spinal Tui Na for Treatment of Primary Dysmenorrhea in 30 Cases

Objective: To observe the therapeutic effects in acupunture treatment of primary dysmenorrhea combined with spinal Tui Na, and study its mechanism. Methods: Thirty cases of the treatment group were treated by acupuncture combined with spinal Tui Na, and thirty cases in the control group were treated by routine acupuncture. Results: The total effective rate was 93.3% in the treatment group, and 73.3% in the control group, with a significant difference between the two groups (P<0.05). Conclusions: Acupuncture combined with spinal Tui Na has good prospects for treatment of primary dysmenorrhea.     

猪肺磷脂注射液联合经鼻持续气道正压通气对呼吸衰竭早产儿的临床疗效及肌酸激酶同工酶活性的影响

目的 探讨猪肺磷脂注射液联合经鼻持续气道正压通气(NCPAP)对呼吸衰竭早产儿的临床疗效及肌酸激酶同工酶活性(CK-MB)的影响.方法 选取呼吸衰竭早产儿80例,分为观察组和对照组各40例.对照组采用NCPAP给氧治疗,观察组给予NCPAP给氧联合猪肺磷脂气管内给药.观察两组患儿治疗前及治疗12h、24 h后PaO2、PaCO2、血氧饱和度(SaO2)、pH的变化情况,检测治疗前及治疗5d后血清CK-MB水平;评估两组患儿的临床治疗效果.结果 两组患儿PaO2、PaCO2、SaO2、pH比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),其中观察组治疗后的PaO2、SaO2、pH均高于对照组,PaCO2则低于对照组.两组的PaO2、SaO2、pH均随观察时间延长而升高(P＜0.05),PaCO2均随观察时间的延长而降低(P＜0.05).观察组治疗有效率为87.5％,显著高于对照组的70.0％ (P ＜0.05).治疗5d后两组患儿血清CK-MB水平均较前降低(P＜0.05),且观察组明显低于对照组(P＜0.05).结论 猪肺磷脂注射液气管内给药联合NCPAP可以显著降低呼吸衰竭早产儿CK-MB的含量,提高治疗有效率,起到很好的呼吸循环支持作用.     

Survey and practice of reporting quality of randomized controlled clinical trials on traditional Chinese medicine

Evidence obtained from randomized controlled trials （RCTs） has been generally accepted as the gold standard in the evaluation of clinical effectiveness. Readers need to understand the trial design, implementation, results, analysis and interpretation, so as to fully Jnderstand the results of RCTs. Thus, the investigators of RCTs have to report these items in a complete, accurate and clear manner. Since 1998, we have conducted several evaluations on the reporting quality of RCTs published in Chinese journals on traditional Chinese medicine （TCM） and results have shown that there is an urgent need for higher quality RCTs on TCM.     

TCM Treatment of Ankylosing Spondylitis by Tonifying the Kidney and Strengthening the Governor Vessel

Ankylosing spondylitis is a chronic and progressive disorder with inflammation mainly involving the central axis joints. It mainly affects the cervical spine and the lumbosacral area, with the pathogenesis closely related to the kidney and the Governor Vessel (GV). TCM holds that the syndrome is deficiency in origin and excess in superficiality, which is due to insufficiency of the kidney, deficiency of GV, and blocking of the channels with the invasion of exogenous evil, leading to poor circulation of qi and blood and malnutrition of the bones, muscles and joints. The TCM method of tonifying the kidney and strengthening GV to regulate circulation of qi and blood and check the arthralgia pain should be adopted, with the Kidney-Tonifying and GV Strengthening Decoction (益肾强督汤) prescribed.     

IMPROVING P-gp EXPRESSION IN HUMAN MONONUCLEAR CELLS IN VITRO TRANSFECTED BY MULTIDRUG RESISTANCE-1 mRNA

CHEMOTHERAPY playsa greatrolein the treat- ment of malignanttumors,especiallyingynecolo- gicalones.But inanticancerchemotherapy,leuko-cytopeniaisfrequentlytheprimarydose-limitingsideeffect factor.Moreover,cancersarefrequentlychemoresistantbe-causeof overexpressionof P-glycoprotein(P-gp), which isencodedby multidrugresistancegene (MDR1 ) and detectableinup to50% ofhuman cancersand renderscellsresistancetoanticancerdrugs.The safetyand potentialtherapeuticbenefitof mdr1 gene transferredto h…