CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法:采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率差异。结果:慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分别为(5.14±1.03)%、(9.86±1.72)%、(7.93±1.67)%及(7.06±1.61)%,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组(P<0.01)。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。     

乙型肝炎患者CD4＋CD25＋调节性T细胞检测及意义

目的探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在乙型肝炎患者发病机制中的作用。方法利用免疫荧光法检测20例携带者、10例慢性乙型肝炎、5例慢性重症乙型肝炎患者的CD4＋CD25＋调节性T细胞水平,分析与HBV基因型的关系。结果（1）重型乙型肝炎组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率为（2．52±0．94）％,较慢性乙型肝炎组的（5．25±2．17）％差异有统计学意义（P〈0．05）,比乙肝病毒携带者组及健康对照组则差异有统计学意义（P均〈0．01）;（2）慢性乙型肝炎组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率与无症状乙肝病毒携带者组及健康对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0．05）;（3）乙肝病毒携带者组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率为（8．51±2．82）％,与健康对照组的（8．51±2．82）％比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）HBV基因型C型组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率为（6．42±2．36）％,较HBV基因型B型组的（7．64±2．87）％稍为下降,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD4＋CD25＋调节性T细胞能抑制T细胞对乙肝病毒的免疫反应,从而抑制乙型肝炎的发生;CD4＋CD25＋调节性T细胞的水平与病情轻重有一定的关系。     

HBV转基因小鼠CD4+CD25+调节性T细胞免疫抑制功能的研究

目的 通过对HBV转基因小鼠CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量和免疫抑制功能的研究,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在乙肝免疫耐受中的作用.方法 用流式细胞术对12只HBV转基因小鼠和12只正常小鼠外周血CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞的频率进行检测;磁珠分选小鼠脾CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞,分为HBsAg刺激组和ConA刺激组体外单独和共培养,ELISA方法检测诱生的细胞因子IL-2.结果 与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠外周血CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量差异无统计学意义(P＞0.05).HBsAg刺激组,CD4+CD25-T细胞单独或共培养,HBV转基因小鼠CD4+CD25-T细胞诱生IL-2水平显著低于正常小鼠(P＜0.01);ConA刺激组,HBV转基因小鼠CD4+CD25-T细胞诱生IL-2水平与正常小鼠相比则差异无统计学意义(P＞0.05);两组小鼠CD4+CD25-T细胞单独培养时诱生IL-2水平均显著高于共培养(P＜0.01).结论 与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠CD4+、CD4+CD25+调节性T细胞数量和免疫抑制功能差异无统计学意义,但T细胞水平对乙肝病毒存在特异性免疫耐受.CD4+CD25+调节性T细胞可抑制CD4+、CD8+T细胞.     

慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的水平及意义

目的测定慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平并探讨其意义。方法流式细胞术检测12例慢性乙型病毒性肝炎患者,15例乙型病毒性肝炎后肝硬化患者和6例健康对照者外周血中CD4+CD25+Treg的频率。结果 12例慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg占CD4+淋巴细胞的比例为(12.21±1.46)%,15例慢性乙型病毒性肝炎后肝硬化患者外周血中CD4+CD25+Treg占CD4+淋巴细胞的比例为(11.36±1.06)%,与6例健康对照组(9.86±1.00)%相比差异有显著性(P<0.05),慢性乙型病毒性肝炎与慢性乙型病毒性肝炎后肝硬化组间比较差异无显著性(P>0.05)。结论 Treg与CHB患者持续HBV感染密切相关,而是否参与乙肝后肝硬化的发病机制有待进一步研究。     

Th17及CD4~+CD25~+调节性T细胞在结肠癌患者外周血中的表达

目的检测结肠癌患者外周血Th17及CD4+CD25+调节性T细胞水平及功能状态,探讨其在结肠癌发病过程中的免疫机制。方法应用流式细胞仪测定结肠癌患者及对照组外周血中Th17和CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比,采用ELISA法测定两组患者外周血IL-17、IL-23、TGF-β1和IL-6的水平。结果结肠癌患者外周血Th17、CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比及各相关的细胞因子较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);中晚期结肠癌组外周血Th17、CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比及各相关的细胞因子较早期结肠癌组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Th17、CD4+CD25+调节性T细胞分化失衡与结肠癌发生、发展密切相关,为结肠癌免疫治疗提供新思路。     

慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征患者外周血CD4+CD25+T调节细胞功能检测及意义

目的 探讨慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(chronic abacterial prostatitis/chronic pelvic pain syndrome,CAP/CPPS)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量和功能的变化及其临床意义.方法 对45例CAP/CPPS患者和18名正常人采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+,CD4+CD25highT淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率,RT-PCR检测Foxp3mRNA表达,ELISA法检测TGF-β1水平.结果 CAP/CPPS患者外周血CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);CAP/CPPSⅢA、ⅢB组患者外周血单个核细胞(PBMC)中Foxp3mRNA表达水平[(0.69±0.23)、(0.44±0.18)]较对照组(1.37±0.19)明显降低(P=0.035,P=0.014);CAP/CPPSⅢA、ⅢB组患者血清中TGF-β1水平[(18.09±10.45)pg/ml、(14.06±6.22)pg/ml]较对照组[(27.01±13.29)pg/ml]降低(P=0.041,P=0.024).结论 外周血CD44CD25+调节性T细胞数量与CAP/CPPS的发病无明显关联,CD4+CD25+调节性T细胞功能障碍可能参与CAP/CPPS发病机制;Foxp3基因与TGF-β1在CAP/CPPS的发病过程中起重要作用.     

乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞4个分子表达的研究

目的 研究慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者和乙型肝炎病毒携带者(asymptomatic HBV carriers,ASC)外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+ regulatory T cells,Tregs)4个表型分子的表达情况,并分析其可能的作用.方法 收集50例CHB患者、28例ASC和24例健康献血者的外周静脉血,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,应用MACS免疫磁珠和AutoMACS分离系统分选CD4+CD25+ Tregs,提取CD4+CD25+ Tregs总RNA,逆转录成cDNA后,采用SYBR Green I荧光标记技术进行定量PCR检测待测分子的表达水平.结果 荧光定量PCR结果显示,4个待测分子中,CCR5、CTLA-4F和Foxp3的表达水平在各研究组之间差异均无统计学意义(均P ＞0.05);GITR在CHB组外周血CD4+CD25+ Tregs中的表达水平明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而GITR的表达水平在CHB组和ASC组之间及ASC组和健康对照组之间差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CHB组患者外周血CD4+CD25+ Tregs的GITR表达水平显著增高,提示GITR在HBV感染过程中可能对外周血CD4+CD25+ Tregs的功能起着重要的调控作用.     

不同临床类型HCV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞分布比例

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)感染后不同临床类型感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的分布比例。方法:流式细胞术检测59例不同临床类型HCV感染者(慢性丙型肝炎35例、丙型肝炎肝硬化14例、HCV感染后痊愈者10例)及33例健康对照者的外周血CD4+CD25+调节性T细胞。结果:慢性丙型肝炎、丙型肝炎肝硬化、HCV感染后痊愈者和健康对照者外周血CD4+CD25+调节性T细胞分布比例的差异有统计学意义(F=13.944,P<0.001),慢性丙型肝炎和丙型肝炎肝硬化组明显高于HCV感染后痊愈和健康对照组。HCV慢性感染者、丙型肝炎肝硬化患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞分布比例与HCV RNA载量呈正相关(r=0.780和0.870,P<0.05)。结论:外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平影响HCV感染后疾病进程。     

急性淋巴细胞白血病患者化疗前后CD4~+CD25~+调节性T细胞变化及相关因素研究

目的观察急性淋巴细胞白血病(ALL)患者化疗前后外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化。方法选择26例化疗后完全缓解的ALL患者进行自体对照研究,采用流式细胞术对化疗前后外周血中CD4+CD25+调节性T细胞进行检测,并采用ELISA检测血清中白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,另选择同期体检健康志愿者20例为对照组,进行上述检查。比较对照组与ALL患者化疗前后外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化。结果 ALL患者化疗前CD4+CD25+调节性T细胞比例为(5.69±1.39)%,明显高于对照组(P<0.05)。ALL患者化疗后CD4+CD25+调节性T细胞比例明显较化疗前降低(P<0.05)。ALL患者化疗后CD4+CD25+调节性T细胞比例与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ALL患者化疗前IL-10和TGF-β表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。ALL患者化疗后IL-10和TGF-β水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,26例患者化疗前IL-10、TGF-β表达水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例均呈正相关(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞水平在化疗前后具有显著差异,提示其可能与免疫抑制有关,该指标的检测有助于对ALL患者预后及治疗效果的判断。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在HBV宫内感染的表达及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在HBV宫内感染者血液中的表达及意义。方法:流式细胞技术检测157例乙肝大三阳但肝功能正常孕产妇外周血、其分娩新生儿脐血、HBV宫内感染婴幼儿外周血中CD4+CD25+Treg表达水平。结果:HBV宫内感染产妇外周血及新生儿脐血中CD4+CD25+Treg的百分数较未感染组高(P<0.05);HBV持续感染者CD4+CD25+Treg比例较感染转阴组高(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Treg抑制体内HBV清除,宫内感染与其表达上调有关。     

腹腔镜手术对胆结石患者免疫球蛋白、CD4＋、CD8＋及CD4＋／CD8＋的影响机制研究

目的探讨腹腔镜手术对胆结石的临床手术效果,以及对胆结石患者免疫球蛋白、CD4＋,CD8＋及CD4＋／CD8＋的影响机制。方法选择2009年3月-2010年4月间在我院行腹腔镜胆结石取石术患者62例,设立为A组。另选择同期行开腹胆结石取石术的60例患者,设立为B组,观察两组患者的手术效果、并发症及免疫球蛋白、CD4＋、CD8＋及CD4＋／CD8＋的变化情况。结果与B组比较,A组术中出血量少,肛门排气时间早,术后疼痛轻,术后残石率低,A组术后出现肺部感染、腹部感染、出血及、胆漏和切口愈合不良的例数明显少于B组,两组比较．差异有统计学意义（P〈0．05）。A组术前及术后CD4＋,CD8圾CD4＋／CD8＋无明显差异,术后3dA组淋巴细胞亚群下降较B组少,A组机体免疫球蛋白IgA、IgM、IgG虽有降低,但差异不显著,而B组免疫球蛋白在创伤早期明显减少（P〈0．05）。结论腹腔镜手术治疗胆结石手术效果优于开腹手术,具有出血少、恢复快、术后疼痛轻、并发症少等优点,且腹腔镜手术能保护机体的免疫功能,有效减少了术后感染的发生,值得推广和应用。     

CD4~+C25~+Treg细胞与喉鳞状细胞癌的相关性研究

目的:研究CD4+CD25+Treg细胞与喉鳞状细胞癌的相关关系。方法:收集2005年7月至2005年12月山东大学齐鲁医院耳鼻咽喉科手术治疗的30例喉鳞状细胞癌患者和同期13例健康献血者的外周血,应用流式细胞仪检测外周血中CD4+CD25+Treg细胞的百分比,用ELISA法检测外周血中TGF-β,IL-10,IFN-γ的含量。结果:喉鳞状细胞癌患者与正常对照组外周血中CD4+CD25+Treg细胞的百分比分别为(8.72±1.54)%和(4.64±0.93)%,喉鳞状细胞癌组高于正常对照组(P<0.05),但与性别、年龄、临床分期、淋巴结转移无关。喉鳞状细胞癌患者外周血中TGF-β,IL-10含量分别为(10.96±1.19)pg/ml和(15.87±2.17)pg/ml,高于正常对照组的(6.77±0.72)pg/ml,(1.8±2.5)pg/ml(P<0.05);但IFN-γ的含量为(16.67±8.39)pg/ml,低于正常对照组的(21.98±9.64)pg/ml(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Treg细胞在喉癌患者外周血中大量增加,下调T细胞介导的肿瘤免疫。     

自身免疫调节因子对CD4+CD25+Treg细胞的影响

目的：观察自身免疫调节因子（AIRE）对CD4+CD25+Treg细胞的影响,探讨其在外周免疫耐受中的作用及机制。方法：pEGFPC3-AIRE质粒通过脂质体介导转染RAW264.7细胞;通过流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的数量;采用半定量RT-PCR法检测Foxp3和转化生长因子β（TGF-β）mRNA的表达;采用ELISA法检测TGF-β1水平。结果：AIRE转染的RAW264.7细胞可直接或间接诱导CD4+CD25+Treg细胞的产生及Foxp3 mRNA表达增强(P<0.05)。结论：表达在外周抗原提呈细胞（APCs）上的AIRE可直接和（或）间接影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导产生及功能,从而可能在外周免疫耐受中发挥重要作用。     

CD69在慢性乙肝患者CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的表达

目的:观测慢性乙肝患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞早期激活标志CD69的表达。方法:静脉采集慢性乙肝患者普通肝素抗凝血2ml,在植物血凝素(PHA)20μg/ml条件下进行全血培养,4h后用双色免疫荧光标记流式细胞术检测CD4+、CD8+T淋巴细胞CD69的表达。结果:正常人外周血只有很少量CD4+与CD8+T淋巴细胞表达CD69分子,经PHA刺激后CD4+与CD8+T淋巴细胞CD69的表达率明显升高,较刺激前有统计学差异(P<0.01)。同样,慢性乙肝患者在激活前后也有统计学差异(P<0.01);慢性乙肝患者在PHA刺激前有一部分CD4+、CD8+T淋巴细胞表达CD69分子,明显高于对照组(P<0.01)。结论:本研究结果可能与乙肝患者体内病毒免疫紊乱有关系。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肝移植免疫耐受

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞因其独特的免疫抑制功能而备受关注,在诱导和维持移植免疫耐受方面具有重要的作用。肝脏具有移植免疫特性．但肝移植术后如何避免排斥反应、诱导免疫耐受、提高存活率这一问题仍尚未解决。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肝移植免疫耐受中具有重要的作用。本文即从CD4^＋CD25^＋调节性T细胞入手,对其在肝移植排斥反应与免疫耐受中的作用加以综述。     

肺癌患者淋巴细胞亚群CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关分析

目的观察非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达水平,分析其表达水平与肺癌肿瘤免疫逃逸的相关性。方法采集34例肺癌患者外周血,按照TNM分期分为早期组(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期组(Ⅲ期、Ⅳ期),用流式细胞仪检测外周血,分析淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+及其表面受体NKG2D、NKG2A的表达及相关性。结果晚期组CD3+CD4+的表达水平较早期组降低,而CD3+CD8+的表达水平升高(P<0.05);晚期组肺癌患者CD3+CD4+NKG2D表达率(6.69±3.58%)高于早期组的表达率(2.38±1.13%),CD3+CD4+NKG2A表达率(2.28±0.88%)低于早期组的表达率(5.46±2.09%)(P<0.01);晚期组肺癌患者CD3+CD8+NKG2D表达率(90.57±2.49%)低于早期组的表达率(93.51±3.19%),CD3+CD8+NKG2A表达率(12.32±4.24%)高于早期组的表达率(7.15±3.30%)(P<0.01)。结论非小细胞肺癌病理分期间淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+表达水平的改变,NKG2D、NKG2A在CD3+CD4+和CD3+CD8+表面的表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

老年男性外周血CD4+和CD8+T细胞中CD45RA+和HLA-DR+的表达研究

目的 探讨不同年龄组老年男性外周血CD4+和CD8+T细胞中CD45 RA+和HLA-DR+的表达.方法 采用逐步人组方法入组101例老年男性,分青老年组(65岁及以上),中老年组(75岁及以上)和老老年组(85岁及以上)三组,用多色流式细胞仪检测外周血CD45 RA+和HLA-DR+的表达,随访两年.结果 各组间C...     

NOD小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能变化研究

目的：观察NOD小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能变化。方法：流式细胞仪分析NOD小鼠胰腺引流淋巴结（PLN）CD4^＋CD25^＋T细胞频率,CD4^＋CD25^＋T细胞中FoxP3^＋细胞的比例,CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋T细胞的FoxP3平均荧光强度（MFI）;检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能。结果：在不同的年龄阶段,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量未发生明显变化,而随时间的推移,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞中FoxP3表达水平降低,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能也下降。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能降低可能是NOD小鼠糖尿病发作的根本原因。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+和CD8~+细胞端粒长度及端粒酶活性的研究

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD 4+、CD 8+和CD 19+细胞端粒长度和端粒酶活性变化及其在发病中的作用。方法:用免疫磁珠法,从外周血单个核细胞分离CD 4+、CD 8+和CD 19+淋巴细胞,提取细胞蛋白后,用PCR为基础的端粒酶测定法(T e lom eric repeats am p lification protoco l,TRAP)测定端粒酶活性;Sou thernB lot测定细胞端粒长度。结果:SLE患者CD 4+、CD 8+和CD 19+细胞端粒酶活性均高于正常对照,但只有CD 19+细胞端粒酶活性与正常对照相比差异有显著性(P<0.05)。SLE患者CD 4+和CD 8+淋巴细胞的端粒长度均较正常对照明显缩短,CD 19+淋巴细胞的端粒长度无明显缩短。结论:SLE患者CD 19+细胞端粒酶活性显著增高,维持了细胞端粒长度;而CD 4+和CD 8+细胞端粒酶活性可能不足以维持由于细胞分裂所导致的细胞端粒缩短。     

正常人外周血自然杀伤T细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例

目的：探讨正常人外周血中自然杀伤T（NKT）细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的95%参考值范围。方法：取141名正常成年人和30例肺癌患者外周血,直接双色荧光抗体染色,溶血洗涤后用流式细胞仪检测NKT细胞和T细胞各亚群的数量。分析获取的结果以百分位数计算95%的正常值范围。结果：141名正常人外周血NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）的百分率平均数为4.16%,标准差为4.13%,以百分位数法获得95%参考值范围为（0.78～11.71）%;18～30岁组、31～50岁组和51～70岁组的NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的平均数分别为4.64%,3.91%和3.57%,差异无统计学意义（P〉0.05）;30例肺癌患者组与正常组该项指标的差异亦无统计学意义（P〉0.05）。同时检测到正常人CD3^＋细胞、CD3^＋CD4＋细胞、CD3^＋CD8＋细胞、CD3^＋CD4＋/CD3^＋CD8＋比值以及NK细胞（CD3-CD16^＋CD56^＋）的比例均与大多数报道的正常值相似。结论：正常人外周血中NKT细胞（CD3^＋CD16^＋CD56^＋）比例的95%参考值范围是（0.78～11.71）%,平均数为4.16%,中位数为2.97%,虽然NKT细胞比例随年龄增加而减少,但两者之间无直线相关关系。未发现肺癌组患者NKT细胞比例与正常人有显著性差异。