大鼠agrin基因实时定量聚合酶链反应的检测方法

目的：agrin基因对神经肌肉接l头的形成、维持起着决定作用，也对神经元轴突的形成、延长、维持有重要作用．其表达产物在机体内分布广泛。设计绝对定量嵌合荧光法检测大鼠agrin基因mRNA的实时定量聚合酶链反应方法，并检测其特异性、敏感性和可重复性。 方法：实验于2007—04／11在吉林大学基础医学院三综合实验室和吉林大学第一医院传染科实验室完成。以Primer 3软件设计大鼠agrin基因、ACTB基因mRNA嵌合荧光实时定量聚合酶链反应检测引物，经检索Blast验证特异性，并以Primer5设计构建agrin基因标准品引物。选择清洁级Wistar大鼠交配，获取3日龄乳鼠，取脑，获取mRNA、cDNA，常规反转录一聚合酶链反应获取agrin554个碱基DNA片断。PCR填加T7启动子后，T7 RNA Polymerase合成agrin基因标准品，消化模板。分光光度计测定其浓度，1：5倍比稀释3次；经反转录反应合成agrin基因cDNA标准品，测序验证特异性。以ACTB引物反转录cDNA，1：5倍稀释3次，构建ACTB基因标准品。常规聚合酶链反应确定、优化反应条件。标准曲线确定实时定量聚合酶链反应标准曲线的相关性，融解曲线验证检测方法的特异性，作重复性检测。 结果：①agrin基因有意义链引物序列：GAA GGC CAG GTG CGA ATC A，反义链引物序列：CAC AGG TAG CAG TGG AGC CAA G，内标：ACTB基因有意义链引物序列：GGA GAT TAC TGC CCT GGC TCC TA，反义链引物序列：GAC TCA TCG TAC TCC TGC TTG CTG，优化反应条件：95℃变性5S，60℃退火20S，72℃延伸20s。②agrin基因、ACTB基因标准品所获得的标准曲线确定实时定量聚合酶链反应标准曲线的相关性均〉0．95。③聚合酶链反应产物电泳、测序、实时定量聚合酶链反应融解曲线证明特异性高、重复性好、灵敏度达到精确定量要求。 结论：绝对定量嵌合荧光法检测大鼠agrin基因mRNA的实时定量聚合酶链反应方法可以作为大鼠agrin基因mRNA检测的标准方法。     

妊娠合并暴发性1型糖尿病4例诊疗分析

目的 回顾4例妊娠合并暴发性1型糖尿病（FT1DM）的诊治过程,为临床提供参考. 方法 本文通过回顾4例妊娠合并FT1DM患者的诊治过程,对此类患者的抢救及治疗过程进行总结分析. 结果 4例患者均在妊娠晚期发病,3例死胎,1例经剖宫产挽救胎儿生命,4名产妇均经治疗脱离危险. 结论 临床医师接诊已排除妊娠期糖尿病的孕妇,当出现口干、多饮、多尿等高血糖症状或不明原因的胎动变化等症状时,应提高对FT1DM的警惕,及时诊治能降低患者死亡率及死胎率.     

桥本氏甲状腺炎患者年龄、性别分布及自身免疫抗体水平分析

目的:分析桥本氏甲状腺炎(HT)在不同年龄男女性患者分布差异及相关抗体水平变化特点。方法:2014-01-01—2018-12-31五年间本院收治的HT患者共2705例,先按年龄分为儿童组(n=32)、青春期组(n=135)和成人组(n=2538),再将成人组中女性分为≤50岁组(n=1645)及>50岁组(n=519)两组,比较不同年龄组HT男女性占比差异,分析不同年龄组以及50岁前后女性甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)和甲状腺球蛋白抗体(TgAb)的水平变化。结果:在三年龄组中,HT总病例数以成人组最多,儿童组较少。各年龄组间男性、女性HT占比差异有统计学意义(P<0.01);各年龄组内女性占比均显著高于男性,尤以成人组女性占比最高(P<0.01)。三年龄组间TPOAb、TgAb水平有显著统计学意义(均P<0.01)。青春期组及成人组TPOAb水平均低于儿童组(P<0.01),成人组与青春期组TPOAb水平差异无统计学意义(P>0.05);青春期组TgAb水平低于儿童组(P<0.01),儿童组与成人组间、青春期组与成人组间TgAb水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。≤50岁与>50岁女性的TPOAb和TgAb水平比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:成年人(>18岁)HT明显多于非成年人,且女性占比显著高于男性。TPOAb下降可能是成人HT的内分泌影响因素之一。     

非编码长链RNA作为肿瘤标志物的研究进展

非编码长链RNA(lncRNA)是指一类长度大于200个核苷酸的长链RNA分子,lncRNA在真核细胞基因组中被普遍转录,占基因组转录物的绝大部分,其数量巨大,种类繁多,但无蛋白质编码功能,相对于研究较多的microRNA,lncRNA的功能目前尚不完全清楚.近年越来越多的研究发现,lncRNA可在多个水平调控基因的表达,在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用,在肿瘤组织中存在一些lncRNA的异常表达,这些异常表达具有肿瘤特异性.lncRNA 有希望作为肿瘤标志物用于肿瘤的早期诊断及预后评估.全文就近年关于lncRNA作为肿瘤标志物研究成果作一综述.     

吡格列酮对2型糖尿病合并脑梗死患者颈动脉粥样硬化的影响

目的探讨吡格列酮对2型糖尿病合并脑梗死患者颈动脉IMT的影响。方法将入选的60例糖尿病合并脑梗死患者随机分为吡格列酮治疗组和常规治疗组,应用彩色超声诊断仪检测IMT,并检测两组治疗前后血糖、血脂、HOMA-IR、血清hs-CRP、MMP-9水平。结果①吡格列酮治疗12周时颈动脉IMT较治疗前及同期对照组均显著变小(P<0.05),血清hs-CRP、MMP-9、FPG、HbA1c、TC、TG、LDL-C、HOMA-IR亦显著降低(P<0.05)。HDL-C水平明显增加(P<0.05)。②Pearson相关分析显示颈动脉IMT分别与年龄、FPG、LDL-C、SBP、HOMA-IR、hs-CRP、MMP-9呈正相关(P<0.05)。结论吡格列酮能有效降低血清hs-CRP、MMP-9水平,减轻血管炎性反应,减少颈动脉内膜中层厚度,有益于糖尿病合并脑梗死等大血管病变的防治。     

22L感染BALB/c模型小鼠脑多肽差异表达的质谱组织成像分析

用MALDI-TOF质谱成像技术分析羊痒病感染因子22L毒株感染BALB/c模型小鼠脑多肽的差异表达。22L感染后引起脑组织21个多肽表达下降,其中m/z 758.7725 和m/z 5432.2069下降最为明显,提示这两个多肽可能是朊蛋白病的分子标记物,并与朊蛋白病的发病有关。     

新诊断2型糖尿病患者内脂素、vaspin与颈动脉粥样硬化的相关性

目的 探讨初发2型糖尿病（T2DM）患者血清内脂素（visfatin）、vaspin水平与颈动脉粥样硬化（AS）的关系.方法 将100例初发2型糖尿病患者根据颈动脉内膜中层厚度（CIMT）分为非AS组,早期AS组和严重AS组,并配对选取33例无糖尿病的健康者为对照组.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清visfatin、vaspin水平.结果 （1）糖尿病早期AS组和严重AS组的visfatin水平明显高于对照组和糖尿病非AS组（P＜0.01）;糖尿病非AS组和早期AS组的vaspin水平均高于对照组（P＜0.01）,严重AS组的vaspin水平明显低于糖尿病早期AS组（P＜0.05）.（2）偏相关分析显示visfatin与腰臀比（WHR）、三酰甘油（TG）、CIMT呈正相关（P＜0.05）,vaspin水平与HOMA-IR呈正相关（P＜0.05）,visfatin与vaspin无统计学关联（P＞0.05）.（3）Logistic回归分析结果显示,患者年龄、收缩压（SBP）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、visfatin为CIMT的独立危险因素（P＜0.05）.结论 初发2型糖尿病患者血清visfatin和vaspin水平与肥胖、胰岛素抵抗密切相关;血清visfatin水平升高可能与颈AS形成密切相关.     

携带T-bet基因的重组腺病毒载体的构建

目的包装携带人T细胞转录因子T-bet基因的重组腺病毒，为研究T-bet在人鼻黏膜中作用的分子机制奠定基础。方法采用RT-PCR方法从健康人PBMC中扩增出转录因子T-bet的cDNA序列，构建重组穿梭载体pDC316-T-bet；采用阳离子脂质体介导将重组穿梭载体pDC316T-bet与pBHGlox△E1，3Cre质粒共转染293细胞，包装出携带T-bet基因的重组腺病毒rAdT-bet，空斑纯化，PCR鉴定阳性rAdT-bet。结果以空斑纯化后的rAdT-bet为模板，作PCR均扩增出含1633bp的片断，阳性率达100％，证实T-bet稳定整合于重组腺病毒。结论利用AdMaxTM腺病毒包装系统成功包装了rAdT-bet，为进一步研究T-bet基因在鼻黏膜中作用的分子机制和探讨变应性鼻炎治疗新手段均具有重要意义。     

依帕司他联合甲钴胺口服治疗糖尿病痛性神经病变疗效观察

目的观察依帕司他联合甲钴胺口服治疗糖尿病痛性神经病变的疗效。方法50例糖尿病痛性神经病变患者分为两组。对照组25例在降糖降脂改善循环等常规治疗的基础上,应用甲钴胺片0．5mg／次,3次／d口服;观察组25例在对照组治疗的基础上加用依帕司他片50mg／次,3次／d口服治疗。结果观察组有效率为96％,对照组有效率为84％,两组比较差异有统计学差异（P〈0．05）。与对照组比较,观察组震动感觉阈值有更好的改善,两组比较差异有统计学差异（P〈0．05）。结论依帕司他联合甲钴胺治疗糖尿病痛性神经病变患者的临床症状改善明显。