苦参碱及其衍生物对人鼻咽癌细胞的耐药逆转作用

目的:探讨中药苦参碱(matrine,MAT)及其衍生物对鼻咽癌耐药细胞HONE1/DDP的耐药逆转作用。方法:采用逐渐增加剂量的方法,诱导建立人鼻咽癌细胞HONE1耐顺铂细胞株HONE1/DDP;将不同浓度苦参碱及其衍生物按倍比稀释浓度分别加入到HONE1/DDP中,测定其细胞毒性;MTT法测定非细胞毒性浓度苦参碱及其衍生物对HONE1/DDP细胞株的逆转作用,流式细胞仪检测细胞周期分布情况,并以Western blot测定MRP1、BAX、BCL-2蛋白表达。结果:HONE1/DDP细胞系对顺铂耐药;经苦参碱、苦参碱衍生物作用24 h后,HONE1/DDP细胞株对顺铂的耐药性下降,逆转指数分别为1.45、1.77;与HONE1/DDP比较,经非细胞毒性浓度苦参碱处理的HONE1/DDP细胞周期G0/G1明显增加(P0.05),经非细胞毒性浓度苦参碱衍生物处理的HONE1/DDP细胞周期S期减少(P0.05);HONE1/DDP细胞的MRP1表达显著高于HONE1(P0.05),而经苦参碱、苦参碱衍生物作用后MRP1表达显著降低(P0.05),且二者作用后BAX表达水平降低,BCL-2表达水平升高,BAX/BCL-2比值降低(P0.05)。结论:人鼻咽癌细胞株HONE1对顺铂耐药,其耐药机制可能与增加MRP1的表达有关;苦参碱及其衍生物可以逆转HONE1/DDP对顺铂的耐药性,其机制可能与其改变细胞周期分布及下调MRP1的表达、降低BAX/BCL-2比值有关。     

消岩汤通过HSPA5逆转肺腺癌耐药的研究

目的 分析肺腺癌耐药细胞株A549/DDP在中药复方消岩汤作用后细胞的差异蛋白并寻找相关耐药靶点。方法 通过Label-free蛋白组学筛选出两组关于耐药方面的差异蛋白,利用GO富集分析,PPI蛋白相互作用网络图的构建筛选核心蛋白,Western blot及qRT-PCR方法验证核心蛋白及基因的表达;利用CCK8法检测A549/DDP细胞增殖活力情况,利用流式细胞术检测A549/DDP细胞凋亡情况。在上调HSPA5蛋白表达的基础上,检测消岩汤对A549/DDP细胞增殖及凋亡的影响,以及A549/DDP细胞对顺铂耐药性的影响。结果 在中药复方消岩汤作用后的A549/DDP细胞蛋白质谱中找到29种耐药相关差异蛋白质,其中14种上调,15种下调。通过PPI蛋白网络互做分析得出核心蛋白,选择HSPA5进行体外实验验证,结果显示与对照组相比,中药复方消岩汤可以降低A549/DDP细胞中HSPA5蛋白及基因的表达,与蛋白组学结果一致。CCK8及细胞凋亡实验显示,消岩汤可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,增强耐药细胞对顺铂的敏感性;上调HSPA5蛋白表达,消岩汤抑制细胞生长及增强细胞对顺铂敏感性的能力减...     

消岩汤逆转肺癌顺铂耐药的机制研究

目的探讨消岩汤逆转肺癌顺铂(DDP)耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;si RNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Werstern blotting检测m RNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/si RNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Westernblotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1(YAP1)、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

吴茱萸碱、小檗碱对SGC-7901/DDP耐药性及耐药相关蛋白的影响

目的：探讨吴茱萸碱、小檗碱及其联合使用对顺铂（Cisplatin, DDP）耐药胃癌细胞SGC7901/DDP敏感性的作用。方法：体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,实验分为对照组、DDP组、吴茱萸碱+DDP 组、小檗碱+DDP 组及吴茱萸碱+小檗碱+DDP 组,CCK8 检测各组SGC-7901/DDP 细胞增殖能力;Western Blot 分析耐药及凋亡相关蛋白P-gp、MRP、caspase-3、caspase-9的表达。结果：CCK8实验表明吴茱萸碱、小檗碱在不影响SGC-7901/DDP 细胞活力的情况下可显著增强DDP抑制细胞增殖的作用,且小檗碱（8 μM）与吴茱萸碱（3.2 μM）联合给药增强SGC-7901/DDP化疗敏感性的作用明显强于二者单独给药（P <0.001）;Western Blot结果表明,SGC-7901/DDP细胞经吴茱萸碱、小檗碱处理后,caspase-3、caspase-9表达上调,P-gp、MRP表达下调。结论：吴茱萸碱、小檗碱单用及其联用可在体外显著增强SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性,其效应与凋亡蛋白caspase-3、caspase-9表达升高,耐药相关蛋白P-gp、MRP表达下调相关。     

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响.方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g·kg-1 ·d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15％各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol·L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达.结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P＜0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P＜0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P＜0.01),蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药.     

鸦胆子油乳联合siRNA-ERCC1对肺腺癌 A549/DDP细胞的耐药逆转作用

目的:探讨靶向切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的小干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)和鸦胆子油乳联合应用逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的效果。方法:设计并合成针对ERCC1基因对应序列的siRNA,采用转染试剂Lipofectamine 2000转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP;将实验组细胞分为:空白对照组、鸦胆子油处理组、siRNA处理组及鸦胆子油联合siRNA处理组,利用RT-PCR检测ERCC1 mRNA和Western blot检测ERCC1蛋白质的表达;MTT法检测A549/DDP细胞对顺铂的耐药逆转效果。结果:siRNA、鸦胆子油、鸦胆子油和siRNA联合应用均能降低ERCC1 mRNA和蛋白质的表达,对顺铂的敏感性明显恢复,耐药倍数分别降至9.72,8.89,7.59,6.83,鸦胆子油和siRNA联合应用效果明显提高(P<0.05)。结论:siRNA、鸦胆子油能有效地逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的多药耐药,鸦胆子油和siRNA联合应用效果明显加强。     

参芪扶正注射液对肺癌细胞A549/DDP顺铂耐药性的逆转作用研究

目的:探讨参芪扶正注射液对于顺铂的耐药性A549/DDP细胞的逆转作用。方法:应用细胞毒性检测(CCK-8)、实时荧光定量PCR及Western blot鉴定细胞A549/DDP对于顺铂的耐药性。进一步用不同浓度的参芪扶正注射液预处理A549/DDP,通过以上3种方法检测A549/DDP细胞对于顺铂耐药性的变化。最后通过裸鼠成瘤实验,检测参芪扶正注射液的逆转耐药性的作用。结果:A549/DDP对于顺铂有明显的耐药性,A549和A549/DDP对于顺铂的IC50分别为9.89μmol/L和176.2μmol/L。A549/DDP相比于A549,多药耐药基因(multidrug resistanct,MDR1)和肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)的蛋白表达有显著的升高(P0.05)。当用低浓度(0.1 m L/L)、中浓度(1 m L/L)、高浓度(10 m L/L)的参芪扶正注射液预处理A549/DDP后,该细胞对于顺铂的耐药性随其浓度提高而降低,其半抑制浓度(IC50)分别为11.6μmol/L、30.3μmol/L、104.7μmol/L,并且参芪扶正注射液的预处理抑制了耐药基因MDR1和LRP和蛋白的表达。用中浓度的参芪扶正注射液预处理细胞A549/DDP后,也显著抑制了该细胞在裸鼠体内的成瘤能力(P0.05)。结论:参芪扶正注射液能够逆转A549/DDP对于顺铂的耐药性。     

补肾化瘀解毒方药对肺癌耐药细胞的耐药逆转及机制研究

目的 :探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞的耐药逆转和逆转机制。方法 :选择人肺腺癌 A5 4 9、A5 4 9/DDP细胞株 ,采用细胞毒试验 (MTT)和流式细胞仪法 (FCM) ,分别观察补肾化瘀解毒方荷瘤动物血清对A5 4 9/DDP细胞的细胞毒和耐药逆转作用 ,以及对 A 5 4 9/DDP细胞肺耐药蛋白 L RP- 5 6的表达、耐药细胞内游离Ca2 +浓度等指标的影响。结果 :补肾化瘀解毒方含药血清对肺癌 A5 4 9/DDP耐药细胞有细胞毒作用和增强A5 4 9/DD对顺铂 (DDP)的敏感性 ,并能显著抑制肺耐药蛋白 L RP的表达 (P<0 .0 1) ,降低细胞内 Ca2 +浓度(P<0 .0 0 1)。结论 :补肾化瘀解毒方药物血清对化疗药物具有增敏和化疗耐药逆转作用 ,其机制与抑制肺癌耐药细胞耐药基因表达 ,阻止肺癌耐药细胞内 ca2 +的内流或释放有密切的关系     

鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780／DDP的耐药逆转作用

目的 研究鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药逆转作用.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察顺铂及鸦胆子油乳对A2780/DDP细胞的生长抑制作用.结果 卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP对顺铂产牛耐药性,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数为5.6倍.经鸦胆子油乳预处理24h后,顺铂对A2780/DDP的耐药倍数显著下降.结论 鸦胆子油乳可逆转卵巢癌耐药细胞A2780/DDP的耐药性.     

姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用研究

目的:研究姜黄素水解物对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用,初步探讨其逆转机制。方法:MTT法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性的变化;免疫组织化学法检测姜黄素水解物处理后K562/A02细胞与其亲本K562细胞膜P-gp的表达;流式细胞术检测K562和K562/A02细胞内柔红霉素(DNR)的平均荧光强度(mean fluo-rescene intendity,MFI);RT-PCR法检测K562/A02细胞mdr1 mRNA。结果:用2.5 mg.L-1姜黄素水解物处理后K562/A02细胞对常用化疗药物敏感性提高;姜黄素水解物能降低K562/A02细胞膜P-gp的表达(P0.05)。K562/A02细胞内DNR的MFI低于K562细胞(P0.01),姜黄素水解物能增加K562/A02细胞内DNR的MFI(P0.05);姜黄素水解物处理后K562/A02细胞内mdr1 mRNA下降。结论:姜黄素水解物具有体外逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,且降低K562/A02细胞膜P-gp的表达降低化疗药物外排增强化疗药物在细胞内的潴留可能是其逆转作用的机制之一。     

消岩汤对A549/DDP细胞自噬及耐药蛋白的影响研究

[目的]通过消岩汤对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药及自噬蛋白的影响,探究消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP的耐药逆转作用及探讨相关分子通路。[方法]建立稳定细胞耐药模型,连续灌胃不同浓度消岩汤10 d后,通过血清药理学的实验方法,提取药物血清,用含药血清作用于肺腺癌细胞耐药细胞A549/DDP,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QPT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Werstern Blot)检测A549/DDP耐药、自噬相关基因的表达及相关通路蛋白的变化。[结果]高剂量消岩汤,低剂量消岩汤和生理盐水作用于肺腺癌耐药细胞A549/DDP,检测A549/DDP细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺抗药性相关蛋白(LRP)及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1m RNA和蛋白表达变化,发现高剂量组消岩汤处理细胞株后P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1 m RNA和蛋白均发生降低(P0.05),进一步发现消岩汤可影响AKT1-m TOR相关基因,消岩汤明显降低AKT1,m TOR蛋白的表达。[结论]消岩汤通过影响AKT1-m TOR分子通路进而影响耐药相关蛋白P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1基因的变化。     

三物白散逆转胃癌细胞多药耐药效应机制研究

目的:研究三物白散对胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药(MDR)的逆转作用,明确其耐药逆转机制。方法:分别以不同浓度的三物白散作用于体外培养的SGC7901和SGC7901/DDP细胞,以MTT法检测细胞增殖抑制率,确定三物白散的非毒性剂量;以不同浓度顺铂(DDP)作用上述细胞,确定没有三物白散干预时各组细胞生长抑制50%的DDP浓度(IC50)和SGC7901/DDP细胞的耐药指数(RF);采用非毒性剂量三物白散,分别与不同浓度顺铂(DDP)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的DDP浓度,计算RF和耐药逆转倍数(RI);利用流式细胞术检测三物白散联合DDP作用后SGC7901/DDP细胞内DDP的荧光强度、P-gp的表达和P-gp功能活性。结果:三物白散的非细胞毒性剂量为10-7g/mL;单独顺铂作用后SGC7901/DDP细胞的耐药指数(RF)为3.94;三物白散协同DDP作用后,SGC7901/DDP细胞的RF为3.75,RI为6.12;与三物白散未干预组比较,三物白散可显著增加DDP在SGC7901/DDP细胞内的蓄积(P0.05),SGC7901/DDP细胞的P-gp表达亦显著降低(P0.01),而P-gp功能显著抑制(P0.01)。结论:三物白散与DDP联合运用既有复合抗癌之效,又能逆转胃癌细胞SGC7901/DDP多药耐药。其主要机制可能是通过三物白散下调SGC7901/DDP细胞P-gp表达、抑制P-gp功能实现的。     

补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株裸鼠移植瘤作用及其机制的研究

目的探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP裸鼠移植瘤的作用机制。方法 60只裸鼠随机分为6组,空白对照组给予生理盐水0.5ml灌胃,其余5组以5×106/L的A549/DDP接种于裸鼠皮下,待成瘤后,分别给予生理盐水0.5ml灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射同时生理盐水灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射顺铂和高、中、低剂量的补中益气汤灌胃。观察A549/DDP细胞在各组裸鼠的致瘤率,计算抑瘤率;采用免疫组化方法、RT-PCR(real time PCR)检测移植瘤组织中PI3K、AKT的表达水平。结果补中益气汤高、中、低剂量组能不同程度的抑制移植瘤的生长,其中以高、中剂量组最显著,与顺铂组抑瘤率比较有明显的统计学差异(P0.05);移植瘤中PI3K、AKT蛋白表达和mRNA基因的表达在补中益气汤高、中、低剂量组中均有下降,高、中剂量组降低较多,与顺铂组和小剂量比较有统计学差异(P0.05)。结论补中益气汤联合顺铂对肺腺癌移植瘤的增殖有明显的抑制作用,补中益气汤能通过调控PI3K、AKT基因和蛋白的表达而干预顺铂的耐药机制,这种干预作用具有一定的量效关系。     

基于p62-NRF2通路探讨黄芪甲苷对白血病耐药细胞株化疗敏感性的影响

目的基于p62-NRF2通路探讨黄芪甲苷(AST)对白血病耐药细胞株化疗敏感性的影响机制。方法复制白血病细胞模型,cck-8法测L1210、L1210/DDP细胞株对DDP的敏感性;将L1210/DDP细胞随机分成5组,即L1210组、L1210/DPP组、给药1组(L1210/DDP+8μg/ml DDP)、给药2组(L1210/DDP+8μg/ml DDP+100μg/ml AST)、给药3组(L1210/DDP+8μg/ml DDP+70μg/ml verapamil组),评价AST对L1210/DDP耐药性的逆转作用;流式细胞仪检测各组细胞周期、凋亡率变化,DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内ROS变化;real time RT-PCR检测p62-NRF2通路各节点基因的表达变化。结果 L1210/DDP细胞对DDP的敏感性明显弱于L1210细胞,相对耐药指数为2.56;100μg/ml AST作用24h后,相对逆转倍数为13.67,70μg/ml verapamil的相对逆转倍数为20.46;与L1210组相比,含L1210/DDP各组内ROS水平低(P0.05);与L1210/DDP组相比,给药2、3组肿瘤细胞G_1期阻滞,S期缩短,细胞增殖受到抑制(P0.05);给药各组细胞p62、NRF2基因mRNA表达下调,除给药1组外,细胞HO-1基因mRNA表达均下调,而各给药组细胞cyclinD、Caspase3 mRNA表达均上调,但无统计学意义。结论 AST具有增强L1210/DDP细胞株对DDP敏感性,逆转L1210/DDP细胞株耐药的功效,其机制可能通过调控p62-NRF2通路及其靶基因的表达有关。     

槐定碱调控B7-H1基因逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的:探讨苦豆子提取物槐定碱(SR)I调控B7-H1基因对人胃癌细胞多药耐药的调节机制。方法:人胃癌细胞SGC7901和多药耐药细胞SGC7901/DDP常规培养,苦豆子提取物槐定碱干预48h后,MTT法检测SGC7901/DDP细胞对化疗药敏感性的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡情况,流式细胞术检测B7-H1蛋白表达情况。结果:人胃癌多药耐药细胞SGC7901/DDP对DDP的敏感性明显低于SGC7901敏感细胞(P<0.01);槐定碱干预SGC7901/DDP细胞48h后,耐药细胞增殖受到抑制,凋亡率增加,B7-H1蛋白表达下调(P<0.05)。结论:槐定碱通过降低B7-H1基因表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转SGC7901/DDP细胞株的多药耐药性。     

泽漆乙酸乙酯提取物对SGC7901/DDP多药耐药性的逆转及机制

目的探索泽漆乙酸乙酯提取物(EAE)对人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP是否具有逆转作用,并探索其机制。方法实验共分4组,胃癌细胞SGC7901作为阴性对照组;胃癌耐药细胞SGC7901/DDP为空白对照组;耐药细胞SGC-7901/DDP加入终质量浓度为10μg/mL的EAE为EAE低剂量组,耐药细胞SGC-7901/DDP加入终质量浓度为20μg/mL的EAE为EAE高剂量组。MTT法分别检测4组细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂的敏感性;PCR和Western blot分别检测4组细胞耐药相关基因MDR1和LRP基因与对应蛋白P-gp和LRP蛋白的表达情况。结果 SGC-7901/DDP对5-FU和顺铂(DDP)表现出耐药性,其中对顺铂(DDP)耐药更为明显;阴性对照组中检测到耐药基因MDR1和LRP及对应蛋白P-gp和LRP蛋白的极低表达量,空白对照组表达量最高,与空白对照组相比较,EAE低剂、高剂量组细胞中的MDR1和LRP的基因与对应蛋白P-gp和LRP蛋白的表达均下降,且EAE高剂量组下降更为明显。结论 EAE可以逆转人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP多药耐药,其机制可能与MDR1和LRP基因的下调有关。     

浙贝母碱对A549/顺铂耐药肺癌细胞株核苷酸ERCC1基因及LRP表达的影响

目的观察浙贝母碱对肺癌A549/顺铂(DDP)耐药细胞切除修复互补基因1(excision repair cross-complementation 1,ERCC1)及肺耐药蛋白(lung resistant protein,LRP)表达的影响。方法体外培养肺癌A549/DDP细胞,将对数生长期的细胞分为空白对照组、DDP组、川芎嗪组(DDP加川芎嗪)及浙贝母碱组(DDP加浙贝母碱)。药物作用48 h后,采用RT-PCR法检测ERCC1 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测细胞LRP表达水平。结果 DDP组与空白对照组ERCC-1 mRNA及LRP蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。与DDP组比较,川芎嗪及浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显降低(P0.05);浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显低于川芎嗪组(P0.05)。结论浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与抑制ERCC1 mRNA表达及LRP表达有关。     

EGb761逆转NF-κB介导的胃癌细胞耐药及协同增敏的机制研究

目的 探讨银杏叶提取物（ginkgo biloba extract, EGb761）对顺铂诱导的胃癌细胞SGC-7901及胃癌耐药细胞SGC-7901/CDDP增殖和凋亡的影响及其对胃癌细胞化疗耐药的影响及其机制。方法 采用EGb761、顺铂单用及EGb761与顺铂联合应用处理人胃癌细胞株SGC-7901及耐药细胞SGC-7901/CDDP,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测两种细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测两种细胞中NIBP、NF-κB P65 mRNA和蛋白的表达。结果 顺铂和EGb761均对两种胃癌细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性,但SGC-7901/CDDP细胞对顺铂的敏感性较差。EGb761与顺铂联合应用可明显增强SGC-7901及SGC-7901/CDDP细胞株对顺铂的敏感性并促进细胞的凋亡。SGC-7901/CDDP细胞中NIBP和NF-κB p65的mRNA及蛋白相对表达水平均高于SGC-7901细胞（P＜0.05）,EGb761能明显抑制由顺铂诱导的NIBP和NF-κB p65的表达（P＜0.05）。结论 EGb761具有显著的化疗增敏效果,并能逆转胃癌细胞耐药,增强顺铂对胃癌细胞生长的抑制作用并促进细胞凋亡。其逆转肿瘤细胞耐药和化疗增敏的作用机制可能是通过抑制NF-κB通路的活性,减少NIBP和NF-κB p65的表达而实现。     

增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药相关基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响

目的研究增免抑瘤方(ZMYL)对顺铂耐药卵巢癌裸鼠耐药调控基因HIF-1α、Glut1、MDR1、P-gp表达的影响。方法采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组,中药高、中、低剂量组,顺铂组(DDP),联合组(DDP联合中药),各组给予相应干预措施共3周。定期测量瘤体最大、最小径线,绘制肿瘤生长曲线,给药结束后处死裸鼠,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率,免疫组化测定瘤体HIF-1α、Glut1的表达,定量RT-PCR测定瘤体MDR1、P-gp的表达。结果①抑瘤率:联合组抑瘤率最高,达(59.26±6.86)%,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.01);中药各剂量组均有一定的抑瘤作用,抑瘤率低于顺铂组(P<0.01)。②免疫组化结果:联合组HIF-1α的表达最低(P<0.01);中药高、中剂量组HIF-1α的表达较顺铂组降低(P<0.01);低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组以及中药高剂量组Glut1的表达低于顺铂组(P<0.01);中剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组高于顺铂组(P<0.05),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。③定量RT-PCR结果:顺铂组MDR1、P-gp的表达较对照组升高(P<0.01);联合组以及中药各剂量组MDR1、P-gp的表达较顺铂组降低(P<0.01)。结论增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用;其作用机制可能通过下调瘤体内缺氧标记物Glut1、HIF-1α的表达,下调多药耐药基因MDR1、P-gp的表达,从缺氧介导的"药泵"耐药机制途径改善卵巢癌化疗耐药。     

大蒜辣素对多药耐药HepG2细胞中MDR1基因表达影响

目的多药耐药(MDR)是肿瘤化疗的主要障碍,该研究旨在体外建立MDR人肝癌HepG2细胞株(HepG2/mdr),并探讨大蒜辣素(Allicin)对MDR1表达的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC)提纯Allicin,采用间歇逐步增加阿霉素(adramycin,ADM)剂量法建立人肝癌MDR细胞株HepG2/mdr,运用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8)检测耐药细胞株耐药性,运用倒置显微镜观察不同浓度Allicin孵育下HepG2/mdr细胞形态学变化,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)测定不同浓度Allicin作用下,HepG2/mdr细胞MDR1mRNA与蛋白表达情况。结果 Allicin经HPLC法提纯后其纯度达到99%。在2000nmol/L ADM作用下,HepG2/mdr细胞生长良好,而HepG2细胞生长停滞与死亡,且Allicin能阻止HepG2/mdr细胞生长,促进其死亡,随着Allicin浓度增加越加明显。Allicin能降低MDR1 mRNA和蛋白表达,呈现剂量依赖性。结论成功建立人肝癌MDR细胞株HepG2/mdr,Allicin能通过抑制MRD1基因的表达,恢复肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。