增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的：观察增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法：利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出成骨细胞，倒置相差显微镜观察其形态，碱性磷酸酶（ALP）染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号作用于成骨细胞，使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析、骨钙素（BGP）含量放免测定、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果：增骨Ⅲ号以剂量依赖方式促进各项指标的表达，促进成骨细胞的增殖及骨形成，增骨Ⅰ、Ⅱ号对体外培养成骨细胞无影响。结论：增骨Ⅲ号促进成骨细胞的增殖，促进骨形成，增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法可有效防治骨质疏松症和促进骨形成。     

蛇床子总香豆素对新生大鼠成骨细胞的作用

目的：研究蛇床子总香豆素（TCFC）在体外对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖及成骨作用的影响。方法：酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞;^3H-胸腺嘧啶和^3H-脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和胶原合成;磷酸苯二钠法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性;并以抗骨质疏松药物异丙黄酮（ipriflavone,IP)作为阳性对照药物。结果：TCFC对新生大鼠成骨细胞的增殖,ALP活性,骨胶原合成具有显的促进作用。结论：TCFC抗骨质惊讶松的作用与其增加成骨细胞的数量,促进细胞胶魇蛋白及ALP的活性有关。     

补肾活血方对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。方法取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞：应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法（PNPP）及茜素红染色方法观察不同浓度补肾活血方对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的补肾活血方均可促进成骨细胞增殖率提高,以中、高浓度组的作用较为明显（P〈0．01）;不同浓度补肾活血方可使ALP活性增强（P〈0．01）;中、高浓度组补肾活血方矿化结节数量,显著多于对照组（P〈0．01）。结论补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的观察增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出成骨细胞,倒置相差显微镜观察其形态,碱性磷酸酶(ALP)染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号作用于成骨细胞,使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析、骨钙素(BGP)含量放免测定、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果增骨Ⅲ号以剂量依赖方式促进各项指标的表达,促进成骨细胞的增殖及骨形成,增骨Ⅰ、Ⅱ号对体外培养成骨细胞无影响。结论增骨Ⅲ号促进成骨细胞的增殖,促进骨形成,增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法可有效防治骨质疏松症和促进骨形成。     

健骨康胶囊配方血清药理学筛选研究

目的:研究健骨康胶囊不同配方不同浓度含药血清对体外培养大鼠成骨细胞活性和及成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:以健骨康胶囊不同配方口服吸收后的血清,加入体外培养大鼠成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞活性,比色法测定培养ALP活性。结果:健骨康胶囊不同配方中药吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,以配方2药物灌胃后10%药物血清浓度最佳。结论:健骨康胶囊药物血清体外具有抗骨质疏松症作用;健骨康胶囊配方2为优选方。     

骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖分化功能的影响

目的：观察中药骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖、分化以及矿化的影响。方法：从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞进行培养,取第3代成骨细胞进行试验,将其分为4组,在各组培养液中分别加入不灌胃骨愈1号的新西兰兔血清（对照组）和灌胃骨愈1号浓度分别12.5、25、50g/kg的新西兰兔血清（高、中、低剂量组）。用MTT法测定细胞增殖功能;用对硝基苯基磷酸二钠法测定碱性磷酸酶（ALP）活性;用茜素红染色法,在40倍光镜下作矿化结节计数。结果：与对照组比较,骨愈1号药物血清高、中、低剂量组在MTT显色的OD值、ALP活性和矿化结节数均明显升高（P〈0.01或者P〈0.05）,且高剂量组优于低剂量组（P〈0.01或者P〈0.05）,在提高ALP活性方面,高剂量组优于中剂量组（P〈0.05）。结论：骨愈1号具有促进成骨细胞增殖、分化及矿化作用,且其作用呈剂量相关性。     

激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓成骨活性下降的研究

目的：观察激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化为成骨细胞的改变。方法：取激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓，建立人骨髓间充质细胞诱导分化成骨细胞的培养体系，采用观察细胞学形态、MTT法、细胞内ALP含量检测及矿化结节形成，并与正常组进行比较。结果：与正常组相比，MTT测定细胞增殖、矿化结节染色及细胞内ALP含量测定表明激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化成骨细胞的能力及活性下降（P〈0．01）。结论：激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的增殖能力和活性下降。     

壮筋续骨汤对大鼠成骨细胞ALP比活性、BGP含量和Cbfα1基因表达影响

目的：探讨壮骨续筋汤对大鼠成骨细胞功能态的影响。方法：采用含药血清的方法体外培养成骨细胞，分壮骨续筋汤组、对照组，观察各组碱性磷酸酶（ALP）比活性、骨钙素（BGP）含量及Cbfα1基因的表达。结果：壮骨续筋汤组的ALP比活性、BGP含量及Cbfα1基因的表达强于对照组（P〈0．05）。结论：壮骨续筋汤能促进成骨细胞功能态的发挥。     

杜仲叶β-谷甾醇对成骨细胞和卵巢颗粒细胞的影响

目的研究杜仲叶β-谷甾醇(β-sitosterol)对骨代谢平衡的调控作用及其机制。方法采用溶剂法、柱层析与重结晶等技术从杜仲叶提取部位Ⅰ中分离得到白色针状晶体B,根据理化性质和光谱分析鉴定化学结构为β-谷甾醇;建立体外大鼠成骨细胞、卵巢颗粒细胞单独培养与混合培养模型,研究杜仲叶β-谷甾醇对骨代谢平衡的调节作用。结果杜仲叶β-谷甾醇可明显促进卵巢颗粒细胞分泌雌二醇E2,有效提高成骨细胞护骨素与破骨细胞分化因子的比值(OPG/ODF),是调节骨代谢平衡的机制之一。结论杜仲叶β-谷甾醇通过提高成骨细胞OPG/ODF比值和刺激卵巢颗粒细胞分化E2,从而促进和加强成骨作用。     

红芪活性组分抗骨质疏松作用的谱效关系研究

目的研究红芪抗骨质疏松药效与HPLC指纹图谱的相关性。方法建立去卵巢大鼠所致骨质疏松模型,红芪(S1)的不同提取部位ig给药,选择红芪抗骨质疏松活性最强的提取部位。采用HPLC法建立10批不同产地红芪乙醇提取部位指纹图谱,获取相应的药效数据,运用偏最小二乘法,进行相关性分析。将筛选出的活性物质单体作用于成骨细胞,验证其抗骨质疏松活性。结果红芪乙醇提取部位抗骨质疏松药效最强。经过相关性分析,该组分指纹图谱共确定9个共有峰,鉴定出的3种化合物中,腺苷、毛蕊异黄酮与药效呈正相关,芒柄花苷与药效呈负相关。体外验证实验结果表明毛蕊异黄酮可以提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。结论红芪抗骨质疏松作用是其所含各种成分共同作用的结果,腺苷、毛蕊异黄酮对药效有一定的贡献,且毛蕊异黄酮有促进成骨细胞分化的作用。     

基于肾主骨理论观察肾小球系膜细胞对成骨细胞增殖及功能的影响

目的:研究肾小球系膜细胞对成骨细胞的影响。方法:应用体外细胞培养法,将成骨细胞分为正常血清组和系膜细胞组。检测培养24h、48h7、2h、120h后的成骨细胞增殖情况,并在72h后检测碱性磷酸酶(ALP)及骨桥蛋白(OPN)浓度。结果:系膜细胞组上清液的成骨细胞增殖要明显高于正常血清组,在72h后系膜细胞组上清液的AKP及OPN浓度要明显高于正常血清组。结论:肾系膜细胞能直接作用于成骨细胞,促进成骨细胞的增殖及功能,为中医"肾主骨"理论体系提供了新的实证。     

补肾中药对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响

目的:观察补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响.方法:体外培养成骨细胞,观察补肾中药含药血清对成骨细胞增殖率和ALP活性的影响.结果:补肾中药含药血清对成骨细胞增殖能力和ALP活性有增强作用.结论:补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞的增殖和功能有促进作用.     

人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究人参皂苷Rb1对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法:不同浓度的人参皂苷Rb1作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测药物对成骨细胞增殖功能的影响,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA,分析药物对破骨细胞分化的影响。结果:人参皂苷Rb1(1.12×10-9-1.12×10-5mol/L)作用于体外培养的大鼠成骨细胞3d时,1.12×10-8-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的增殖(P0.05或P0.01);1.12×10-7-1.12×10-6mol/L人参皂苷Rb1可显著促进成骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-9-1.12×10-8mol/L人参皂苷Rb1可显著上调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P0.01);1.12×10-7-1.12×10-5mol/L人参皂苷Rb1可显著下调成骨细胞中OPG/RANKLmRNA的比值,促进破骨细胞的分化(P0.01)。结论:人参皂苷Rb1对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。     

羊胎素对体外骨髓基质细胞的增殖和向成骨细胞分化的影响

目的探讨羊胎素对体外培养的SD大鼠骨髓基质细胞(Marrow Stroma Cells,MSCs)的影响。方法用MTT法检测MSCs的增殖;PNPP偶氮法检测MSCs碱性磷酸酶(ALP)的活性;细胞ALP染色观察成骨细胞的形成。结果在含羊胎素原液的0.625%,1.25%,2.5%和5%时对体外培养的SD大鼠MSCs有明显的促进增殖的作用(P<0.01);在含羊胎素原液的2.5%及5% 成骨诱导剂时,ALP的活性明显高于诱导剂对照组(P<0.05),而在含羊胎素原液的2.5%和5%浓度组,ALP的活性明显高于空白对照组及诱导剂对照组(P<0.001);细胞ALP染色呈强阳性,加药组颜色明显深于对照组和诱导剂对照组。结论羊胎素对体外培养的SD大鼠MSCs的增殖和向成骨细胞分化具有明显的促进作用。     

骨康方对大鼠MSCs体外向成骨细胞分化和ALP的影响

目的:观察骨康方对大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)体外增殖并向成骨细胞分化和其对碱性磷酸酶(ALP)活性的作用。方法:用流式细胞仪鉴定第3代MSCs表面抗原,采用不同浓度的含骨康方药血清联合诱导剂对大鼠MSCs定向诱导分化,观察MSCs诱导前后形态学变化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线,检测ALP活性。结果:CD34表达为阴性,CD44表达为阳性。原代MSCs及诱导后形态正常。细胞生长曲线示各组MSCs数量均随时间延长增加,联合使用高、中浓度骨康方药加诱导剂可显著提高MSCs增殖,并向成骨细胞增殖。联合使用高、中、低不同浓度骨康方药加诱导剂均可显著提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性。结论:骨康方能促进大鼠体外MSCs增殖,并向成骨细胞分化。且能提高成骨细胞的ALP活性,从而增强其成骨能力。     

华中五味子含药血清对成骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨甘肃产华中五味子对大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法:采用血清药理学方法,对体外培养的大鼠成骨细胞作MTT法细胞增殖测定、PNPP法ALP活性测定、以及茜素红染色矿化结节计数。结果:培养48h,10%、15%和培养72h,5%、10%华中五味子95%乙醇提取物血清组的细胞增殖速度比对照组快(P<0.01);培养48h,10%、15%和培养72h,10%华中五味子乙醇提取物血清组的ALP活性较对照组增加(P<0.05和P<0.01);培养2周,矿化结节计数显示10%华中五味子乙醇提取物血清组多于对照组(P<0.01),华中五味子水提取物各血清组对成骨细胞增殖分化没有显著作用。结论:甘肃产华中五味子95%乙醇提取物对体外大鼠成骨细胞的增殖和分化具有促进作用。     

塞隆骨提取物对体外大鼠成骨样细胞ROS17/2.8的影响

目的研究塞隆骨提取物对体外培养大鼠成骨样细胞ROS17/2.8代谢功能的调节作用,从而在细胞水平上阐述塞隆骨防治骨质疏松的作用机制及药效成分的筛选。方法采用超临界萃取法制备塞隆骨的脂、醇、水提液及水煎提取液,用MTT法测定塞隆骨脂、醇、水提液及水煎液对成骨样细胞的增殖作用;测定碱性磷酸酶(ALP)活性,观察上述提取液对细胞分化的影响。结果10mg/mL塞隆骨脂提液和水提液对大鼠成骨样细胞ROS17/2.8有显著的增殖作用(P<0.01);ALP检测结果显示,10mg/mL脂提液能极显著增强成骨样细胞内ALP活性(P<0.01),1.0、0.1mg/mL能提高ALP活性(P<0.05);10mg/mL水提液能使ALP活性升高(P<0.05)。结论塞隆骨脂和水提取液中分别存在有较高活性的促成骨样细胞增殖、分化的物质,可作为虎骨的替代中药。     

巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK-1表达的影响

目的探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK-1蛋白表达的影响。方法源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预。MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P-nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK-1蛋白表达的影响。结果巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P<0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P<0.01)。此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达。结论巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK-1蛋白的表达影响骨代谢。     

含骨松宝的老龄大鼠血清对兔成骨细胞增殖作用的实验研究

目的：观察骨松宝对体外培养成骨细胞增殖和代谢的影响。方法：给18月龄老年大鼠灌胃骨松宝1．5g／kg体重,每日2次,连续3天,末次灌胃后1h取血分离血清,用D8900培养基分别配成含药鼠血清7．5％和15％的培养基,并用于培养成骨细胞24h,同时以加有7．5％和15％未用药老龄大鼠血清的D8900培养基、含20μmol／L氟化钠(NaF)的D8900无血清培养基及D8900无血清培养基作对照,用MTT法检测细胞增殖,并测定培养基上清液中Ca^2+浓度及碱性磷酸酶(ALP)的含量变化。结果：与加有相同浓度鼠血清的D8900培养基组、D8900培养基加NaF组和D8900培养基组比较,含药鼠血清组的成骨细胞增殖明显,差异有显著性(P<0．01),培养基中的Ca^2+消耗量明显增加(P<0．05,P<0．01),ALP浓度明显升高(P<0．05,P<0.01)。结论：骨松宝能促进成骨细胞DNA合成和提高对Ca2^2+的利用,促进成骨细胞的生长增殖。     

淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的机制研究

目的：探讨淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)和RT-PCR方法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和OPG mRNA,RANKL mRNA表达的影响。结果:淫羊藿总黄酮能刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,增强OPG mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:淫羊藿总黄酮能促进成骨细胞的增殖、分化,增加OPG mRNA的表达,对RANKL的表达无明显影响。