增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的观察增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出成骨细胞,倒置相差显微镜观察其形态,碱性磷酸酶(ALP)染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号作用于成骨细胞,使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析、骨钙素(BGP)含量放免测定、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果增骨Ⅲ号以剂量依赖方式促进各项指标的表达,促进成骨细胞的增殖及骨形成,增骨Ⅰ、Ⅱ号对体外培养成骨细胞无影响。结论增骨Ⅲ号促进成骨细胞的增殖,促进骨形成,增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法可有效防治骨质疏松症和促进骨形成。     

生骨注射液对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化影响的实验研究

目的探讨生骨注射液对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化的影响，及探讨生骨注射液促进骨折愈合的细胞机制。方法体外培养大鼠成骨细胞，应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法观察生骨注射液对体外培养成骨细胞的增殖、ALP表达的影响。结果生骨注射液对成骨细胞具有明显的促增殖、分化作用。结论生骨注射液具有刺激体外培养成骨细胞增殖、分化的功能．这可能是生骨注射液促进骨折愈合的机制之一。     

中药增骨Ⅰ号对体外成纤维细胞的影响

为了探讨增骨Ⅰ号的作用机制,进行了体外成纤维细胞的实验.采用酶消化法将人包皮组织进行成纤维细胞的分离, 纯化及培养,并测定骨钙素、细胞钙含量.结果显示成纤维细胞在增骨Ⅰ号组增殖迅速,其OD值明显高于对照组(P＜0.05),但反映成骨表型表达的骨钙素及细胞钙含量未见明显增加.表明增骨Ⅰ号仅有激活成纤维细胞的作用,本实验结果为序贯疗法应用增骨Ⅰ号作为骨重建中的激活药物提供了理论依据.     

右归饮含药血清对人骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的影响

目的：观察右归饮对体外人骨髓分化成骨细胞的影响。方法：将右归饮含药血清加入人骨髓基质干细胞诱导分化成骨细胞的培养体系，采用细胞形态学观察、MTT法及细胞内ALP含量检测反映其促进成骨的功能。结果：形态学观察及椰法表明，右归饮对成骨细胞的增殖起促进作用，钙结节染色及细胞内ALP含量测定表明右归饮对成骨细胞的活性有促进作用（P〈0．05）。结论：右归饮对人骨髓基质干细胞诱导分化的成骨细胞的成骨起促进作用。     

杜仲叶提取物对体外培养的成骨细胞代谢功能调节研究

目的：研究杜仲叶提取物对体外培养成骨细胞（Osteoblast OB)代谢功能的调节作用,从而进一步明确杜仲补肾,强筋健骨的作用机理以及筛选杜仲叶防治骨质疏松药效成分,方法：用杜仲叶三个提取部位（Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ）不同浓度对体外培养的成骨细胞作用,由新生SD大鼠头盖骺作原代培养,用传代的第一代细胞做药效试验,测定指标：（1）细胞增殖情况,用MTT计数法[1,2];（2）碱性磷酸酶（ALP）活性测定,对硝基磷酸盐法。结果：Ⅱ,Ⅲ提取部位对细胞增殖作用与对照组比较,P＜0．001,ALP的活性与对照组比较,三个部位均为P＜0．001,结论：表明Ⅱ,Ⅲ提取部位的10^-5mg/L浓度组具有明显的调节骨代谢功能的药效作用。     

骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖分化功能的影响

目的：观察中药骨愈1号药物血清对成骨细胞增殖、分化以及矿化的影响。方法：从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞进行培养,取第3代成骨细胞进行试验,将其分为4组,在各组培养液中分别加入不灌胃骨愈1号的新西兰兔血清（对照组）和灌胃骨愈1号浓度分别12.5、25、50g/kg的新西兰兔血清（高、中、低剂量组）。用MTT法测定细胞增殖功能;用对硝基苯基磷酸二钠法测定碱性磷酸酶（ALP）活性;用茜素红染色法,在40倍光镜下作矿化结节计数。结果：与对照组比较,骨愈1号药物血清高、中、低剂量组在MTT显色的OD值、ALP活性和矿化结节数均明显升高（P〈0.01或者P〈0.05）,且高剂量组优于低剂量组（P〈0.01或者P〈0.05）,在提高ALP活性方面,高剂量组优于中剂量组（P〈0.05）。结论：骨愈1号具有促进成骨细胞增殖、分化及矿化作用,且其作用呈剂量相关性。     

增骨Ⅱ号注射液对大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达的影响

目的:研究增骨Ⅱ号注射液对体外培养的大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达的影响,探讨增骨Ⅱ号注射液防治骨质疏松症的分子机制.方法:体外培养大鼠成骨细胞,分别给予不同浓度、时间的增骨Ⅱ号注射液进行干预实验,然后用RT-PCR技术分别检测各组细胞的OC and OPN mRNA表达,并进行定量分析.结果:增骨Ⅱ号注射液在不同浓度时连续干预至1～5 d,以1 mg/ml浓度条件下,OC and OPN mRNA表达最强;而以1 mg/ml生骨注射液干预防1～5 d,OC和OPN mRNA的表达随时间逐渐增强.结论:增骨Ⅱ号注射液对体外培养的大鼠成骨细胞OC和OPN mRNA表达有明显促进作用,其作用强度随浓度、时间而改变.     

增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外破骨细胞的影响

为阐明增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法治疗骨质疏松症的机理.从新生1天内的兔长骨骨干分离出破骨细胞,与骨磨片、盖玻片及添加增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号后共同培养,用相差显微镜及光镜观察骨吸收陷窝形态与破骨细胞形态变化,并进行骨陷窝计数.结果显示增骨Ⅰ号明显增加吸收陷窝数目(P＜0.01),破骨细胞形态小、数多、核少;增骨Ⅱ号明显抑制吸收陷窝数目(P＜0.01),破骨细胞形态大、数少、核多;增骨Ⅲ号对破骨细胞无影响(P＞0.05).表明增骨Ⅰ号能激活破骨细胞活性,增骨Ⅱ号能抑制骨吸收,增骨Ⅲ号对破骨细胞无作用.     

补肾益精中药调控体外培养成骨细胞IGF-Ⅰ分泌与表达的研究

目的 观察补肾益精中药对体外培养成骨细胞类胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)分泌和表达的影响,探讨补肾益精中药调节骨重建的作用机理.方法 采用连续酶消化法培养大鼠颅盖骨成骨细胞,观察补肾益精药物血清对成骨细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节数目以及成骨细胞不同分化时期IGF-Ⅰ分泌和mRNA表达的影响.结果 与对照组比较,补肾益精中药能明显增加成骨细胞增殖率,提高成骨细胞ALP分泌量,增加矿化结节数;中药组IGF-Ⅰ的分泌在第7d、第21d时与对照组比较无差异,但在第14d时IGF-Ⅰ的分泌量明显高于对照组,同时其成骨细胞IGF-Ⅰ mRNA表达下调.结论 补肾益精中药可能通过调控细胞因子IGF-Ⅰ的表达与分泌发挥促进骨形成的作用.     

激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓成骨活性下降的研究

目的：观察激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化为成骨细胞的改变。方法：取激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓，建立人骨髓间充质细胞诱导分化成骨细胞的培养体系，采用观察细胞学形态、MTT法、细胞内ALP含量检测及矿化结节形成，并与正常组进行比较。结果：与正常组相比，MTT测定细胞增殖、矿化结节染色及细胞内ALP含量测定表明激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓体外分化成骨细胞的能力及活性下降（P〈0．01）。结论：激素性股骨头坏死患者股骨近端骨髓间充质干细胞诱导分化成骨细胞的增殖能力和活性下降。     

菟丝子总黄酮对成骨细胞骨代谢的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮(TFCC)对体外培养大鼠成骨细胞骨代谢的影响。方法:取新生SD大鼠的颅盖骨,采用改良的组织块法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP),放射免疫法及ELISA法分别测定TFCC0.01,0.1,1,10,100μg.L-1对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(BGP)含量及Ⅰ型胶原(COL-I)分泌的影响。结果:TFCC在48 h和72 h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;48 h时TFCC可促进细胞上清液中BGP和COL-I的分泌。结论:TFCC能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,并通过提高COL-I的分泌影响骨代谢。     

蛇床子总香豆素对新生大鼠成骨细胞的作用

目的：研究蛇床子总香豆素（TCFC）在体外对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖及成骨作用的影响。方法：酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞;^3H-胸腺嘧啶和^3H-脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和胶原合成;磷酸苯二钠法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性;并以抗骨质疏松药物异丙黄酮（ipriflavone,IP)作为阳性对照药物。结果：TCFC对新生大鼠成骨细胞的增殖,ALP活性,骨胶原合成具有显的促进作用。结论：TCFC抗骨质惊讶松的作用与其增加成骨细胞的数量,促进细胞胶魇蛋白及ALP的活性有关。     

补肾活血方对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。方法取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞：应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法（PNPP）及茜素红染色方法观察不同浓度补肾活血方对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的补肾活血方均可促进成骨细胞增殖率提高,以中、高浓度组的作用较为明显（P〈0．01）;不同浓度补肾活血方可使ALP活性增强（P〈0．01）;中、高浓度组补肾活血方矿化结节数量,显著多于对照组（P〈0．01）。结论补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

昆山接骨片对体外培养大鼠成骨细胞骨的影响

为研究昆山接骨片对体外成骨细胞骨形成功能的影响,探讨昆山接骨片促进骨折愈合的机理,分别用MTT法观察了含昆山接骨片Ⅰ号和昆山接骨片Ⅱ号的药物血清对成骨细胞增殖功能的影响,用PNPP法观察昆山接骨片Ⅰ号对成骨细胞碱性磷酸酶比活性的影响,以及用矿化结节计数法观察了昆山接骨片Ⅰ号对成骨细胞矿化功能的影响。成骨细胞增殖率测定结果显示,昆山接骨片Ⅰ号组为0.092±0.016,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05);而Ⅱ号组为0.230±0.026,与对照组比较无差异。ALP比活性测定结果显示,昆山接骨片Ⅰ号组为0.034±0.021,对照组为0.026±0.008,两组比较有显著性差异(P＜0.05))。矿化结节计数结果提示,昆山接骨片Ⅰ号组为25.833±7.782,对照组为13.333±6.153,两组比较有显著性差异(P＜0.05)。综合研究结果表明,以活血化瘀药物为主制成的昆山接骨片Ⅰ号具有促进成骨细胞的增殖、分化与矿化、成骨细胞的骨形成功能,从而发挥其促进骨折愈合的作用,单纯用螃蟹粉制成的昆山接骨片Ⅱ号则无此作用。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的：从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法：通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果：用5％和10％的血清培养第7天时三组的0D值均为最高，而20％的血清培养第5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论：骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果^[1]已经证实，骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度，改善生物力学性能，调节体内激素水平，具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组，通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用分光光度计测定含药血清对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果：成骨细胞在10％的血清中培养7天时，用分光光度计测定ALP活性。发现骨康含药血清和罗盖全含药血清均能明显提高成骨细胞的ALP活性，骨康血清组和罗盖全血清组对成骨细胞ALP活性的平均影响率分别为128．1％和129．1％。结论：中药骨康含药血清能明显提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

槲皮素通过抑制 lncRNA DANCR 的表达促进 骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化

〔摘 要〕 目的：前期研究发现槲皮素可促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖和成骨分化,但其调控机制尚不 完全清楚。长链非编码 RNA（lncRNA）分化拮抗非蛋白质编码 RNA（DANCR）能够抑制 BMSCs 的增殖和成骨分化。 本研究进一步研究槲皮素是否能通过调控 DANCR 的表达促进 BMSCs 的增殖和成骨分化。方法：BMSCs 在添加了 10 μmol·L-1 槲皮素的完全培养基中培养。细胞计数试剂 –8（CCK–8）试剂盒检测 BMSCs 的增殖;采用碱性磷酸酶 （ALP）分析试剂盒测定 ALP 活性;荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测 DANCR、骨形态发生蛋白 2（BMP–2）、 runt 相关转录因子 2（RUNX2）以及骨钙素（osteocalcin）的表达。结果：槲皮素处理能够增强 BMSCs 增殖、ALP 活性以及 BMP–2、RUNX2 和 osteocalcin 表达。与成骨分化培养基诱导组（阳性对照组）相比,槲皮素组能够更好的 维持 BMSCs 的增殖,但是诱导 BMSCs 成骨分化的效果显著降低。进一步研究表明槲皮素诱导的 BMSCs 成骨分化过 程中 DANCR 的表达显著降低。过表达 DANCR 能够逆转槲皮素对 BMSCs 增殖和成骨分化。结论：槲皮素通过抑制 DANCR 的表达促进 BMSCs 的增殖和成骨分化。     

阿魏酸对大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性及骨保护素与骨活素mRNA表达的影响

目的:观察阿魏酸对体外培养大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)及骨活素(OA)表达的影响,探讨阿魏酸在骨折后骨愈合中的作用。方法:以培养基为空白对照,MTT法检测阿魏酸200、20、2μg/L培养后0、1、2、3、4、5、6 d成骨细胞增殖的变化,给药后6 d,ELISA法检测细胞上清液ALP活性,RT-PCR检测OPG mRNA和OA mRNA表达的变化。结果:阿魏酸可剂量依赖性促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖,显著性增加ALP的活性、OPG mRNA和OA mRNA的表达(P0.05)。结论:阿魏酸具有骨形成促进效应,其机制可能与其促进成骨细胞增殖与分化、改善骨代谢有关,适用于临床骨折的辅助治疗。     

骨髓基质成骨细胞—生物活性陶瓷复合培养及其体外成骨的观察

目的：观察骨髓来源的成骨细胞(Marrow stromal osteoblasts，MSO)与生物活性陶瓷(Bioactive Glass Ceramic，BGC)复合培养后，细胞生长状况及其体外成骨能力。方法：将新西兰仔兔MSO与BGC体外复合培养，观察细胞形态、细胞活性、碱性磷酸酶(Alkaline plaosphatase，ALP)活性及基质钙化情况。结果：实验组在培养7、14天后，BGC表面和孔隙内有成骨细胞生长；ALP阳性细胞数多于对照组；培养21天后，可看到钙化结节，对照组没有钙化结节产生。结论：体外培养的骨髓基质成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞；BC)C可用作组织工程骨的细胞外基质材料。     

强骨宝方糖尿病模型鼠不同时效与量效的含药血清对成骨细胞增殖的影响

目的：探讨强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清促进体外培养成骨细胞增殖的最佳时相与量效。方法：采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从1—2日龄SD大鼠颅盖骨中分离出成骨细胞，鉴定细胞后，用不灭活的不同时效（灌胃3d、5d，末次灌胃后1h、3h）、不同浓度（5％、10％、20％）的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清加入成骨细胞培养体系，培养镐、72h，应用MTT比色法来检测其对成骨细胞增殖功能的影响。结果：各时相的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清对成骨细胞的增殖作用呈浓度依赖性，即20％〉10％〉5％；其中以3d末次灌胃后1h、20％的含药血清作用最明显，在成骨细胞培养48h、72h后均具有显著促进其增殖作用。结论：灌胃3d、末次灌胃后1h、20％不灭活的强骨宝方糖尿病模型鼠含药血清对成骨细胞增殖作用最明显。