星点设计-响应面法优选枳实总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺

目的：优选枳实总黄酮的大孔树脂纯化工艺。方法：选择吸附时间、乙醇体积分数、洗脱用量为自变量,总黄酮吸附-洗脱率为因变量,在单因素试验基础上,采用星点设计-响应面法优选大孔树脂纯化工艺。结果：选择AB-8型大孔树脂,最佳纯化工艺为上样液质量浓度3.5 g·L^-1,pH 6.0,上样量0.6 BV,上样速率1 BV·h^-1,水洗用量1 BV,洗脱速率2 BV·h^-1,吸附时间77 min,乙醇体积分数88%,洗脱剂用量2.4 BV;枳实总黄酮吸附-洗脱率达93.0%,与预测值（92.4%）偏差较小。结论：采用星点设计-响应面法优选的大孔树脂纯化工艺条件稳定可行,预测性好。     

棉酚的大孔吸附树脂纯化工艺优选

目的：优选从棉子中分离棉酚的大孔吸附树脂纯化工艺。方法：采用静态吸附-洗脱与动态吸附-洗脱试验筛选 大孔树脂型号,通过单因素试验优选洗脱流速,利用正交试验考察上样液质量浓度、洗脱剂乙醇体积分数、上样液pH及洗脱液中乙醇体积分数对棉酚纯化工艺的影响。结果：选用H103型大孔吸附树脂,最佳纯化工艺为上样液中棉酚质量浓度90 mg·L^-1,上样液pH 7,上样液中乙醇体积分数40%,洗脱剂为80%乙醇;棉酚纯度由提取液的6.2%提高至洗脱液中83.6%,转移率76.7%。结论：优选的工艺稳定可行,H103型大孔树脂适用于棉酚的纯化。     

HP-20型大孔树脂富集纯化南山茶花总黄酮的工艺优选

目的: 优选HP-20型大孔树脂富集纯化南山茶花总黄酮的工艺参数。 方法: 以总黄酮含量和洗脱率为指标,采用单因素试验考察HP-20型大孔吸附树脂的静态饱和吸附量、动态饱和吸附量、乙醇体积分数、乙醇用量等工艺参数。 结果: HP-20型大孔树脂对南山茶花总黄酮的静态饱和吸附量50.5 mg·g^-1。最佳纯化工艺为上样液体积9 BV,分别用3 BV去离子水及15%乙醇洗除杂质,35%乙醇10.5 BV以2 BV·h^-1流速洗脱。总黄酮纯度达54.24%,总黄酮洗脱率29.83%。 结论: HP-20型大孔吸附树脂对南山茶花总黄酮具有良好的纯化效果,优选的工艺合理、稳定可行。     

大孔树脂分离纯化酸枣仁总黄酮的工艺优选

目的: 优选大孔树脂分离纯化酸枣仁醇提物中总黄酮的工艺。 方法: 通过静态和动态吸附-洗脱试验比较6种不同型号大孔树脂对酸枣仁总黄酮的吸附和解吸性能,筛选最佳大孔树脂型号;以总黄酮质量浓度为指标,采用单因素试验考察药液质量浓度、吸附速率、上样体积、洗脱剂浓度、洗脱速率等因素对纯化工艺的影响。 结果: 大孔树脂分离纯化酸枣仁总黄酮的最佳工艺条件为选择SP-207型大孔树脂,上样液质量浓度0.5 g·mL^-1,吸附速率1 BV·h^-1,上样量5 BV,加70%乙醇4.5 BV以4 BV·h^-1的速率洗脱;酸枣仁总黄酮纯度达65.47%。 结论: 该优选工艺稳定可行,适用于酸枣仁总黄酮的分离纯化。     

大孔树脂分离纯化楮叶总黄酮的工艺优选

目的: 优选楮叶总黄酮的大孔树脂纯化工艺。 方法: 以楮叶总黄酮为指标,通过大孔树脂静态吸附和动态吸附试验筛选树脂型号,通过单因素试验考察上样液质量浓度、洗脱剂用量、洗脱流速等因素对纯化工艺的影响。 结果: HPD450型大孔树脂分离效果最好,其最佳工艺参数为上样液质量浓度4.4 g·L^-1,径高比1∶8,上样量6 BV,吸附速度1 BV·h^-1,加5 BV水洗除杂,用50%乙醇8 BV以1 BV·h^-1的速度洗脱。总黄酮纯度由精制前的30.65%提高至75.75%,总黄酮保留率达79.89%,除杂率达64.88%。 结论: HPD450型大孔树脂纯化楮叶总黄酮的效果良好,且工艺合理稳定,可推广于工业生产中应用。     

大孔树脂纯化紫心甘薯总黄酮及其抗氧化活性研究

 目的 研究紫心甘薯总黄酮的大孔树脂纯化工艺及其抗氧化活性。方法 以静态饱和吸附量和解析率为指标，对4种大孔树脂(D101，NKA-9，AB-8，NKA-Ⅱ)进行筛选，并以回收率为指标，通过选用L₉(3⁴)正交表设计实验，确立纯化总黄酮的最佳条件；以VC为对照品，采用邻苯三酚自氧化法和邻二氮菲法研究提取物对超氧阴离子(O^{－·₂)和羟基自由基(·OH)的抗氧化活性。结果 AB-8纯化紫心甘薯总黄酮效果最好，最佳纯化工艺：上样液质量浓度为0.81 mg·mL-1，淋洗pH为2，乙醇洗脱液体积分数为70%，洗脱流速为2 mL·min-1；邻苯三酚自氧化法和邻二氮菲法中抗氧化活性以半数抑制浓度(IC₅₀)表示分别为 0.037 4，0.105 mg·mL-1。结论 大孔树脂纯化紫心甘薯总黄酮的效果显著，紫心甘薯黄酮类化合物具有较强的抗氧化活性。}     

响应面法优化秦岭龙胆有效成分的提取工艺

目的：优选鸡血藤总黄酮的聚酰胺树脂纯化工艺。方法：采用UV测定总黄酮含量,检测波长278 nm。选择聚酰胺柱层析法,以总黄酮含量和转移率为指标,通过单因素试验考察上样液质量浓度、吸附流速、洗脱剂用量等对鸡血藤总黄酮纯化工艺的影响。结果：最佳纯化工艺为上样量9.076 mg·g^-1,上样液质量浓度1.261 g·L^-1,吸附、洗脱速度2 BV·h^-1,加水5 BV和20%乙醇3 BV洗脱除杂,加70%乙醇4 BV洗脱,收集第2~4 BV洗脱液;总黄酮纯度达81.5%,转移率77.5%。结论：该纯化工艺稳定可行且重复性好,可有效富集鸡血藤总黄酮部位。     

叠鞘石斛联苄类化合物的大孔树脂纯化工艺优选及抗氧化活性考察

目的：优选叠鞘石斛联苄类化合物的大孔树脂纯化工艺条件并考察其体外抗氧化活性。方法：以静态饱和吸附量和洗脱率为指标,通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号。采用单因素试验考察上样液质量浓度、上样量、乙醇体积分数、洗脱剂用量、上样流速及洗脱流速对纯化工艺的影响,通过体外抗氧化试验考察联苄类化合物的体外抗氧化能力。结果：HPD-300型树脂纯化联苄类化合物的效果最好,其最佳纯化工艺条件为上样液质量浓度9.04 g·L^-1,上样量1.25 BV,上样流速0.5 mL·min^-1,加水和70%乙醇各5 BV以1.0 mL·min^-1的流速洗脱。纯化后联苄类化合物纯度达67.07%,较纯化前提高了4.25倍。联苄类化合物的纯化物和粗提物对超氧阴离子自由基的抗氧化活性以半数抑制浓度（IC₅₀）表示分别为0.408,0.985 g·L^-1,对羟自由基的IC₅₀依次为7.856,7.827 g·L^-1。结论：HPD-300型大孔吸附树脂对叠鞘石斛联苄类化合物的纯化效果较好,纯化物的体外抗氧化能力有所提高。     

大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮

目的：研究大孔吸附树脂分离纯化野菊花总黄酮工艺,为野菊花总黄酮的工业化生产提供实验依据。方法：以贵州产野菊花为原料,以野菊花总黄酮含量及回收率等为考察指标,选用大孔吸附树脂对野菊花总黄酮进行分离纯化,分别采用静态试验、动态试验等考察大孔树脂对野菊花总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果：AB-8型大孔吸附树脂对野菊花总黄酮静态饱和吸附量为114.65 mg·g^-1(干树脂),洗脱率94.9%,动态饱和吸附量为94.5 mg·g^-1(干树脂),总黄酮回收率在92.6%、纯度在90%以上,是实验树脂中分离纯化野菊花总黄酮的最佳大孔吸附树脂。结论：分离纯化野菊花总黄酮最佳工艺条件为：AB-8型大孔吸附树脂,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量为2～3倍树脂体积,上柱总黄酮量∶树脂=1∶10.6,上柱液总黄酮质量浓度为19.8 mg·mL^-1,流速2～3 mL·min^-1,上柱液pH 4～5。     

天山雪莲黄酮类成分大孔树脂纯化工艺优选

目的：优选天山雪莲总黄酮的大孔树脂纯化工艺。方法：以芦丁为指标成分,通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,采用单因素试验考察上样量、上样流速、洗脱流速、洗脱剂用量对天山雪莲黄酮纯化工艺的影响。结果：X-5型大孔树脂纯化效果最好,最佳纯化工艺条件为上样液质量浓度50 g·L^-1,上样量6 BV,上样流速3 BV·h^-1,加水3 BV洗去水溶性杂质,加20%乙醇6 BV除去其他杂质,加40%乙醇5 BV洗脱,洗脱流速3 BV·h^-1,收集40%乙醇洗脱液;树脂纯化前后提取物中芦丁质量分数由1.07%提高至12.14%。结论：X-5型树脂可用于富集天山雪莲中黄酮类成分。     

香附子全长转录组测序及生物信息学分析

目的 通过高通量测序技术获得香附子Cyperus rotundus L.全长转录组的信息特征,为深入挖掘香附子功能基因奠定基础。方法 通过PacBio Sequel高通量测序系统,对香附子根、茎、叶、花4个部位的混样进行全长转录组测序及生物信息学分析。结果 共获得195 722条环形一致性序列（CCS）获得188 243个高质量转录本,并注释了148 563个转录本,检测出4349个转录因子和95 118个简单序列重复（simple sequence repeat,SSR）位点,还预测到64 929个长链非编码RNA（lncRNA）和45 337个mRNA,并通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据途径分析了13个参与萜烯合酶合成相关的基因,以及7个参与β-石竹烯合成相关的基因。结论 获得了较为可靠的香附子全长转录组数据,这将显著增强对香附子发育过程中植物化学生物合成调控基础的理解,可为深入研究香附子生物学特性、相关代谢途径、信号通路及分子机制提供数据支持。     

滇龙胆GrCYP450-17基因的克隆、序列分析与原核表达

目的从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成相关酶基因GrCYP450-17,进行序列分析和原核表达。方法根据滇龙胆转录组中GrCYP450-17基因序列,设计引物,通过RT-PCR扩增得到GrCYP450-17开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrCYP450-17,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达。结果 GrCYP450-17 ORF全长1 545 bp,编码514个氨基酸。序列分析表明,GrCYP450-17基因是CYP714家族成员;蛋白质序列系统发育分析表明,GrCYP450-17与番茄SlCYP450亲缘关系最近。构建pGEX-4T-1-GrCYP450-17重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrCYP450-17基因,建立其稳定的原核表达体系,为进一步纯化GrCYP450-17蛋白、研究其结构和功能奠定基础。     

基于~1H-NMR代谢组学牛黄解毒片中人工牛黄、石膏、冰片对雄黄配伍减毒作用的研究

目的利用~1H-NMR为基础的代谢组学研究牛黄解毒片中人工牛黄、石膏、冰片3味中药对雄黄的配伍减毒作用。方法 42只大鼠随机分成6组:A组(对照组)、B组(雄黄组)、C组(牛黄解毒片组)、D组(牛黄解毒片去人工牛黄组)、E组(牛黄解毒片去石膏组)、F组(牛黄解毒片去冰片组)。对各组大鼠尿液及血清样品~1H-NMR谱图进行模式识别分析。结果雄黄组大鼠样品代谢轮廓和对照组差异明显,其他各组大鼠代谢轮廓同对照组相似,向对照组回归。结论牛黄解毒片中人工牛黄、石膏、冰片3味中药对雄黄配伍减毒作用不明显。     

娑罗子基原物种的DNA条形码鉴定研究

目的 筛选出适用于鉴定七叶树属药用植物的条形码序列。方法 考察了七叶树属10个物种42份样品的核ITS、ITS2与叶绿体psbA-trnH、rbcL、matK序列的PCR扩增和测序效率、种内及种间变异、鉴定效率,对初筛后的序列进行barcoding gap检验及NJ树聚类分析。结果 psbA-trnH序列的PCR扩增和测序效率均为100%,种间最小变异大于其种内最大变异,且鉴定效率为候选序列中最高,barcoding gap检验结果表明该序列在种间、种内变异重合比例较小,且NJ树聚类分析结果也表明psbA-trnH序列能够提供充分的辨析效果。结论 psbA-trnH序列能准确鉴定七叶树属药用植物,可作为七叶树属药用植物条形码序列。     

小叶山葡萄的化学成分研究

目的 研究中国台湾传统中药材小叶山葡萄Vitis thunbergii var.taiwaniana的化学成分.方法 利用大孔树脂、Sephadex LH-20、ODS及正相硅胶柱等色谱手段进行分离,通过多种波谱学数据分析进行单体化合物的结构鉴定.结果 从小叶山葡萄60％乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为白藜芦醇(1)、trans-ε-viniferin (2)、(7R,8R)-threo-4,7,9,9’-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-8-O-4'-neolignan 7-O-β-D-glucopyranoside (3)、(7S,8R)-urolignoside (4)、schizandriside (5)、vitisin A(6)、vitisin B(7)、davidiol A(8)、3,5,4'-trihydroxystilbene 4'-O-β-D-glucopyranoside (9)、蛇葡萄素C(10)、(7R,8S)dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9-O-β-D-glucopyranoside (11)、表儿茶素(12).结论 化合物3～5为首次从葡萄属中分离,化合物8、9、11、12为首次从小叶山葡萄中分离.     

半夏及其炮制品姜半夏HPLC特征指纹图谱系统性研究

目的 对半夏Pinelliae Rhizoma及其炮制品姜半夏Pinelliae Rhizoma Praeparatum cum Zingibere et Alumine不同提取部位的HPLC特征指纹图谱进行研究,阐明半夏炮制前后主要药效物质变化。方法 通过HPLC梯度洗脱建立半夏及其炮制品姜半夏的水及75%、95%乙醇提取部位的特征指纹图谱,并运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”和SPSS 17.0软件进行相似度和主成分分析（PCA）。结果 分别建立了半夏及其炮制品姜半夏不同部位的HPLC特征指纹图谱共有模式,指认了肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱、6-姜辣素6个特征峰。姜半夏与半夏HPLC特征指纹图谱相比,姜半夏在保留时间18.3、73.5 min附近新增2个峰（10号峰、19号峰6-姜辣素）。结论 首次建立了半夏及其炮制品姜半夏不同提取部位的HPLC特征指纹图谱,该方法稳定、简便、可靠,可有效地控制半夏药材及姜半夏饮片的质量。     

紫苏及其变种的分子鉴定和亲缘关系研究

目的 构建紫苏属种、变种之间系统发育关系,准确鉴别紫苏Perilla frutescens var.arguta、白苏P.rutescens与其他变种.方法 提取紫苏、白苏及其他变种的DNA,对ITS和sbA-trnH序列扩增和测序,计算物种种内(变种内)种间(变种间)Kimura 2-parameter (K2P)遗传距离.采用最简约法(MP)和邻接法(NJ)构建分子系统树,进行系统发育和鉴定分析.结果 ITS和sbA-trnH MP系统树显示白苏和紫苏的不同地域的样本聚为一单系分支(支持率为100％和93％),紫苏与回回苏构成姐妹群分支(支持率为95％和90％),野生紫苏和耳齿紫苏构成一单系分支(支持率为100％和90％);白苏、紫苏与其他变种间的ITS和sbA-trnH序列遗传距离0.008 21～0.018 18和0.002 38～0.029 31,明显大于白苏与紫苏间遗传距离0～0.001 65和0,大于各变种内遗传距离.结论 白苏和紫苏合并为一个种紫苏;紫苏与回回苏亲缘关系最近,野生紫苏与耳齿紫苏亲缘关系最近;ITS和sbA-trnH序列可以准确鉴别紫苏与其他变种.     

姜半夏产地加工炮制一体化方法及工艺研究

目的对姜半夏产地加工炮制一体化方法和工艺进行客观评价和优化。方法以草酸钙针晶质量分数为指标筛选加姜方式和加热方法,以草酸钙针晶质量分数、水溶性浸出物得率及白矾残留量为指标,采用正交设计法和综合评分法优选鲜半夏的炮制工艺。结果优选出的炮制方法及工艺为每100 g鲜半夏,加白矾10g、生姜(捣烂)20 g,共同加热至沸腾30min后浸泡3 d,再以120℃加压蒸煮40 min,清水洗净,晾半干,切片后干燥。结论优选的姜半夏产地加工炮制一体化方法和工艺降低刺激性毒性成分草酸钙针晶质量分数,提高饮片质量。     

冬虫夏草西洋参复合物的遗传毒性研究

目的通过遗传毒性研究,评价冬虫夏草西洋参复合物的毒理学安全性。方法按照Ames实验、小鼠骨髓细胞微核试验及小鼠精子畸形实验方法进行研究,并对实验结果进行判定。结果冬虫夏草西洋参复合物对雌、雄小鼠的急性毒性最大耐受剂量均大于12.0 g/kg;Ames实验中5个剂量组回变菌落数均未超过自发回变组的2倍,且无剂量-反应关系;复合物3个剂量组骨髓细胞微核实验中雌鼠微核率分别为0.32%、0.36%、0.40%,雄鼠微核率分别为0.30%、0.32%、0.40%;小鼠精子畸形实验中精子畸形率分别为2.4%、2.3%、2.3%,微核率和精子畸形率与对照组比较均无显著性增加(P0.05)。结论冬虫夏草西洋参复合物对小鼠无毒,且未显示遗传毒性。     

不同比例甘草配伍祖师麻抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究

目的 观察不同比例甘草配伍祖师麻对大鼠佐剂性关节炎（AA）模型的治疗作用,筛选两者配伍比例,探讨其配伍意义。方法 采用足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备AA模型,将140只模型大鼠随机分成14组：模型组,雷公藤多苷片组,祖师麻低、中、高剂量组,甘草低、中、高剂量组,祖师麻-甘草（3：1）低、中、高剂量组,祖师麻-甘草（3：2）低、中、高剂量组,另取10只正常大鼠为对照组,给药组大鼠造模前2 d开始ig给药,连续给药31 d,观察各组大鼠体质量变化,计算足肿胀度、关节炎指数（AI）,采用ELISA法检测大鼠血清炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的水平,观察大鼠膝关节组织病理变化,通过免疫组化法测定大鼠膝关节滑膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）、巨噬细胞游走抑制因子（MIF）的表达。结果 与模型组比较,祖师麻组、祖师麻甘草配伍组能够明显抑制AA大鼠体质量减轻的趋势,对抗AA大鼠足肿胀度及AI的增加,降低异常升高的血清TNF-α、IL-1β水平,改善关节病理组织变化,减少滑膜组织VEGF、MIF的表达,其中以祖师麻-甘草（3：2）配伍组效果最优。结论 祖师麻甘草配伍后,对AA大鼠各项指标改善作用显著,作用优于单用祖师麻,其最佳配伍比例为祖师麻-甘草（3：2）。调节血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1β及滑膜组织VEGF、MIF的表达,可能是祖师麻甘草配伍治疗类风湿性关节炎机制之一。