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目的 为筛选高活性的蛇足石杉铜胺氧化酶(copper-containing amine oxidase,CAO),通过生物工程方法实现石杉碱甲(huperzine A,HupA)的合成、为加快新药创制进度提供理论依据。方法 基于蛇足石杉转录组测序得到的CAO序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,扩增、拼接并验证获得该基因的全长cDNA序列,并将其命名为HsCAO2。结果 通过RACE技术得到HsCAO2的cDNA全长为2696 bp,CDS为2199 bp,编码732个氨基酸。氨基酸序列同源性比对发现,HsCAO2具有保守的氨基酸位点和Cu2+结合位点;进化树分析结果表明,HsCAO2与蛇足石杉中的另一个CAO(HsCAO1)同源性最高,达91.67%;蛋白质结构分析结果表明,HsCAO2也可能在生物体里以同源二聚体的形式存在。在此基础上,进一步分别构建了超表达载体pOX-HsCAO2和体外蛋白表达载体pET-28a (+)-HsCAO2。结论 HsCAO2很可能是蛇足石杉中的一个新的功能性CAO,且超表达载体和体外蛋白表达载体的成功构建为进一步研究其功能奠定了基础。 相似文献
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【目的】建立宽体金线蛭油酸的气相色谱指纹图谱。【方法】以不同来源地和不同规格的共10批宽体金线蛭为研究对象,选择Agilent 6890N型气相色谱仪,DB-WAX色谱柱(30 mm×0.32 mm×0.25μm),气化温度为270℃,柱温130℃,检测器(FID)温度为280℃。采用中国药典委员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A》进行相似度计算。【结果】不同规格的宽体金线蛭油酸含量差异有统计学意义(F2,7=7.350,P=0.019),清水晒干品分别和矾品、饮片/晒干的油酸含量比较差异有统计学意义(P=0.021,P=0.009)。指纹图谱的相似度在0.458~0.998之间,其中与其他样品和对照指纹图谱的相似度比较,来源于广西荔浦的样品相似度为最低。【结论】大部分样品指纹图谱的相似度非常高,所建立的气相色谱指纹图谱可有效鉴别宽体金线蛭的优劣品,该方法可为宽体金线蛭的日常质量控制提供一定参考。 相似文献
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基于三七转录组测序结果,选择萜类代谢骨架上香叶基香叶基焦磷酸合酶基因(GGPPS),结合RACE技术,克隆得到全长1 203 bp的cDNA序列,最长开放阅读框为1 035 bp,命名为PnGGPPS,GeneBank登录号为KM486564,PnGGPPS基因全长2 370 bp,包含1个内含子和2个外显子,该基因编码344个氨基酸,与蓖麻Ricinus communis、丹参Salvia miltiorrhiza等植物GGPPS的同源性达到73%以上,具有富天冬氨酸区等多个结构域,属于类异戊二烯合成酶超家族。实时荧光定量PCR结果显示,PnGGPPS在一至三年生三七的根、茎、叶和三年生的花等不同器官组织中均有表达,但以三年生叶中具有显著水平的高表达量,暗示其既具有调节三七生长发育的基本功能,也与三七叶绿素和类胡萝卜素的合成、叶绿体的发育、阴生适应性,以及品质的形成有关。 相似文献
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目的研究水忍冬Lonicera dasystyla藤茎的活性物质基础。方法采用硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱及ODS反相柱色谱等进行分离纯化,通过质谱、核磁共振波谱技术等分析手段进行结构鉴定。结果首次从水忍冬藤茎醇提浸膏的醋酸乙酯萃取部位分离得到9个化合物,分别鉴定为二氢芝麻素-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、异阿魏酸(2)、对甲氧基香豆酸(3)、山柰酚-7-O-(2″-E-对香豆酰基)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(4)、灰毡毛忍冬皂苷乙(5)、马钱子苷(6)、山柰酚(7)、合金欢素(8)、槲皮素(9)。结论化合物1为新化合物,命名为二氢芝麻素-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,根据文献报道,化合物5、6为该属植物的特征成分;化合物2~4及8为首次从该属植物中分离得到。这些化学成分的分离鉴定为研究水忍冬藤茎的活性物质奠定了基础,对该植物的化学分类学有一定的指导意义。 相似文献
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目的 测定广西山豆根中的重金属元素的含量.方法 采用微波消解法对样品进行消解,利用电感耦合等离子体质谱仪同时测定14种重金属元素.结果 方法检出限为0.0014~0.4241 μg·L-1,回收率在91.3% ~ 106.5%之间,RSD值在0.43% ~ 3.07%之间.不同产地的山豆根中重金属元素的含量基本符合:Zn> Ba> Cu >Cr >Ni >Pb >As >Sb >Co> Cd> Sn> Tl> Bi> Hg.结论 该方法检出限低,精密度高,操作简单,分析速度快,测定范围宽,是对山豆根药材实施质量控制的理想方法. 相似文献
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鸡血藤为豆科植物密花豆的干燥藤茎,具有补血活血,调经止痛,舒筋活络的功效,在中国及东南亚国家有广泛应用。通过查阅本草及地方志文献记载,对鸡血藤基原及其药用沿革进行考证,研究不同历史时期品种的变迁情况。黄酮类化合物作为鸡血藤主要的活性成分,据文献统计,迄今已有60个黄酮类化合物被分离得到,按其基本骨架,主要分为异黄酮类、二氢黄酮类、黄烷(醇)类、二氢黄酮醇类、原花青素类、查尔酮类、紫檀烷类、异黄酮醇类、异黄烷类以及橙酮类。现代药理学研究表明,这些黄酮类成分具有调节血液系统、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗菌、抑制黑色素沉着等多种药理活性。通过对鸡血藤的本草沿革、黄酮类成分及其药理活性等方面进行综述,旨在为鸡血藤资源的可持续利用和产业发展提供参考。 相似文献