高良姜素抑制乳腺癌转移作用机制研究

目的探究高良姜素对MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法采用MTT法观察不同浓度高良姜素对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell小室迁移实验考察高良姜素对MDA-MB-231水平迁移能力和垂直迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验分析高良姜素对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法考察高良姜素对MDA-MB-231细胞PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响,免疫荧光染色实验验证高良姜素对MDA-MB-231细胞PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响;Western blotting法和免疫荧光染色实验考察高良姜素对核转录因子(NF-κB)p65磷酸化表达和入核的影响;制备乳腺癌MDA-MB-231细胞株裸鼠移植瘤模型,高良姜素200μg/kg ig给药15 d,检测肿瘤体积和质量,计算抑瘤率,Western blotting分析肿瘤组织PI3K、AKT、MMP-2、MMP-9表达及NF-κB p65磷酸化表达情况。结果高良姜素体外浓度为50、100、200μmol/L时可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖;高良姜素能剂量依赖性抑制PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达,降低NF-κB p65磷酸化表达和入核;200μg/kg高良姜素能抑制裸鼠乳腺癌的生长,抑瘤率为43.66%;高良姜素能抑制瘤组织中PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9表达以及NF-κB p65磷酸化表达。结论高良姜素在体内对MDA-MB-231生长有明显的抑制作用,在体外能抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭,抑制相关蛋白PI3K、Akt和MMP-2、MMP-9蛋白表达,抑制转录因子NF-κB磷酸化表达及入核,阻断其激活。     

黄芩素对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖与迁移的影响

目的 探讨黄芩提取物黄芩素(Baicalein)抑制人乳腺癌细胞增殖作用的机制.方法 利用MTT细胞毒性实验检测黄芩素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖的影响,并采用划痕实验检测器对细胞迁移的影响;通过Western Blotting和免疫荧光实验在蛋白水平检测黄芩素作用下,人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞中MMP-9蛋白变化情况.结果 MTT实验证实黄芩素可以明显抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖,划痕实验证明黄芩素课有效抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞迁移,Western blotting和免疫荧光实验发现黄芩素可抑制MMP-9蛋白表达.结论 黄芩素可能通过抑制MMP-9蛋白表达,抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖和迁移.     

橙皮素抑制P-选择素诱导的乳腺癌转移作用机制研究

目的探究橙皮素对P-选择素介导的MDA-MB-231乳腺癌细胞转移的影响及其作用机制。方法运用计算机虚拟对接技术体外评价橙皮素与P-选择素的结合能力;采用MDA-MB-231乳腺癌细胞为模型,MTS法观察不同浓度的橙皮素/P-选择素对MDA-MB-231生长能力的影响;ELISA法检测橙皮素对活化的血小板表面P-选择素分泌的影响;黏附实验考察橙皮素对P-选择素介导的MDA-MB-231与内皮细胞黏附的影响;Transwell实验分析橙皮素对P-选择素促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的影响;采用Western blotting法考察橙皮素对MDA-MB-231细胞表面糖蛋白(Mucin-1)、整合素(Integrinβ3、β1)及基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)蛋白表达的影响;进一步分析橙皮素对MDA-MB-231细胞Integrin-MMP信号通路的影响,阐明橙皮素抗肿瘤转移的作用机制。结果计算机虚拟对接技术证实橙皮素与P-选择素有较好的结合能力;在体外橙皮素能剂量依赖性抑制MDA-MB-231增殖及其与内皮细胞的黏附;橙皮素能降低活化的血小板表面P-选择素的分泌;迁移实验中橙皮素能显著抑制P-选择素介导的MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移;降低P-选择素诱导的细胞表面糖蛋白Mucin-1、Integrinβ3、Integrinβ1及MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结论橙皮素具有抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞生长能力,阻断P-选择素诱导的乳腺癌MDA-MB-231肿瘤细胞迁移以及其与内皮细胞的黏附,其机制为橙皮素通过竞争性结合P-选择素,阻断其与Mucin-1的结合,抑制PI3K-AKT-Paxillin-FAK-Src信号通路,下调P-选择素调控的Integrins及MMP-2、MMP-9表达。     

内脏脂肪素诱导血管内皮细胞损伤的MAPK信号通路及丹参酮ⅡA磺酸钠的干预作用

目的:研究内脏脂肪素(visfatin)参与血管内皮细胞损伤的机制及丹参酮ⅡA磺酸钠保护作用的机制。方法:培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC,1×105/mL),用visfatin(250μg·L-1)刺激HUVEC 4 h,以丹参酮ⅡA(30,60,120 mg·L-1))干预24 h,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、金属基质蛋白-9(MMP-9)水平,用Western blotting方法观察丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的活化情况。分别用p38 MAPK,ERK,JNK特异性抑制剂进行预处理细胞,再给予visfatin(250μg·L-1)刺激4 h,检测细胞上清液中hs-CRP,TNF-α,MMP-9水平。结果:与正常组比较,模型组细胞活力显著降低,细胞上清炎症因子hs-CRP,TNF-α,MMP-9显著增高,细胞内p38 MAPK,ERK,JNK磷酸化蛋白表达显著增高。与模型组比较,丹参酮ⅡA呈剂量依赖性地降低visfatin导致的hs-CRP,TNF-α,MMP-9高表达,并能抑制p38MAPK,ERK1/2磷酸化活化,但对JNK无显著抑制作用。用p38 MAPK,JNK,ERK1/2特异性抑制剂预刺激,可阻止visfatin诱导的hs-CRP,TNF-α,MMP-9细胞因子大量表达。结论:visfatin可能通过激活MAPK磷酸化信号通路,诱导炎症细胞因子高表达,促使血管内皮细胞炎症反应,丹参酮ⅡA通过抑制MAPK信号通路p38,JNK的激活,抑制visfatin诱导的炎症因子高表达,从而减少血管内皮细胞损伤。     

汉黄芩素抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭的实验研究

目的：研究汉黄芩素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和增殖的影响,同时观察汉黄芩素对MDA-MB-231细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响,进一步探讨其分子作用机制。方法：MTT法检测汉黄芩素对MDA-MB-231细胞生长的影响;Ki-67法检测汉黄芩素对细胞增殖的影响;划痕实验、黏附试验和侵袭小室法检测对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测对增殖和转移相关蛋白及相关信号通路的影响。结果：汉黄芩素能明显抑制MDA-MB-231细胞生长和增殖;低浓度情况下明显抑制乳腺癌细胞的迁移、黏附和侵袭能力;汉黄芩素有效抑制MDA-MB-231细胞Survivin,Bcl-2,ICAM-1,MMP-2,MMP-9蛋白的表达。结论：汉黄芩素明显抑制乳腺癌细胞生长和增殖,并抑制MDA-MB-231细胞迁移、黏附、侵袭,其对MDA-MB-231细胞的侵袭和黏附影响可能与其降低ICAM-1,MMP-2,MMP-9表达有关。     

冬凌草甲素对肿瘤转移相关酶的影响

目的 探讨冬凌草甲素对肿瘤转移相关酶(乙酰肝素酶,MMP-2,MMP-9)的影响.方法 利用半定量RT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231细胞乙酰肝素酶基因的表达变化,用明胶酶谱检测冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞MMP-2、MMP-9活性的影响.结果 冬凌草甲素可下调乙酰肝素酶在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,并抑制基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性.结论 冬凌草甲素可通过下调乙酰肝素酶基因表达、抑制MMP-2和MMP-9活性,从而抑制肿瘤的侵袭转移.     

蛇葡萄素介导乳腺癌细胞凋亡的机制

目的探讨蛇葡萄素(AMP)体外诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡作用及可能作用机制。方法 0、5、25、50μmol/L AMP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h,MTT法检测细胞活性,Brd U法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,DCFH-DA检测细胞内活性氧簇(ROS)生成,Western blot法检测细胞凋亡、Nrf-2以及内质网应激相关蛋白的变化水平。结果 AMP可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活性和增殖水平,促进细胞活性氧簇生成并诱导细胞凋亡。此外,AMP刺激可明显下调抗氧化蛋白Nfr-2在细胞质和细胞核内的表达水平,并上调内质网应激信号通路ERK蛋白的磷酸化水平以及ATF4、CHOP蛋白的表达水平。结论 AMP通过抑制Nrf-2依赖的抗氧化保护机制和激活PERK/ATF4/CHOP内质网应激反应信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡。     

探讨透骨草总生物碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、迁移侵袭的作用及其机制研究

目的探讨透骨草总生物碱(TTAT)对MDA-MB-231细胞生长、迁移和侵袭的作用,并对其机制进行研究。方法实验分为正常组、实验组和阳性对照组,体外培养MDA-MB-231细胞,MTT法检测TTAT对细胞生长、增殖的影响,Transwell实验和细胞划痕实验检测TTAT对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的作用,Western Blot法测定不同浓度TTAT处理人乳腺癌后,转移相关蛋白金属基质蛋白-2(MMP2)、MMP9、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果TTAT对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长、迁移和侵袭有明显的抑制作用,并具有一定的量效关系,且转移相关蛋白MMP2、MMP9、VEGF的表达均下调。结论透骨草总生物碱能够抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制MMP2/9、VEGF的表达以及二者之间的协同作用有关。     

槲皮素抑制乳腺癌细胞迁移侵袭及分子机制研究

目的:探究槲皮素(naringenin)对乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的影响及其作用机制。方法:MTT法观察经不同浓度槲皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长能力的影响;划痕实验(wound healing)及Transwell实验分析考查槲皮素对MDAMB-231水平运动能力的影响;采用Western blotting考察槲皮素对MDA-MB-231细胞整合素Integrinβ3,β1及基质金属蛋白酶MMP-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),MMP-9蛋白表达的影响;运用计算机虚拟对接技术体外评价槲皮素与整合素Integrinβ3的结合能力。结果:槲皮素可以剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖;Wound healing实验和Transwell小室迁移实验中,随着槲皮素浓度提高,MDA-MB-231迁移数目呈递减趋势;随着槲皮素浓度的提高,乳腺癌细胞侵袭能力呈递减趋势;槲皮素可以剂量依赖性抑制Integrinβ3蛋白表达,而对Integrinβ1的表达不甚明显,此外槲皮素可以显著抑制MMP-2和MMP-9的蛋白表达;计算机虚拟对接结果发现槲皮素与Integrinβ3的结合能力数值为较低负值,表明槲皮素与Integrinβ3有较好的亲和力。结论:槲皮素具有抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞生长能力,阻断MDA-MB-231细胞迁移、运动以及侵袭,其机制为槲皮素与Integrinβ3结合后,下调MMP-2,MMP-9的表达。     

蛇床子素、补骨脂素及丹皮酚配伍对乳腺癌MDA-MB-231BO细胞株的体外抑制及TGF-β1基因表达的影响

目的:探讨蛇床子素、补骨脂素及丹皮酚对人乳腺癌高转移MDA-MB-231BO细胞株的体外抑制及侵袭作用的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用均匀设计实验方案进行组方设计;MDA-MB-231BO细胞体外侵袭实验,实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测,观察药物处理后细胞的侵袭情况及对人转化生长因子TGF-β1基因的表达情况。结果:获取蛇床子素、补骨脂素、丹皮酚3个药物的最佳配伍比例为10.00:7.78:6.67;单体组和阳性药物组在体外作用24h后,可以显著抑制MDA-MB-231BO细胞的侵袭(P0.01)。结论:中药单体组蛇床子素、补骨脂素、丹皮酚对乳腺癌MDA-MB-231BO细胞的生长具有抑制作用,有效抑制其侵袭和转移,其机制可能与抑制TGF-β1基因的表达有关。     

乳康舒颗粒剂对乳腺癌肿瘤组织VEGF和Ki-67表达的影响研究

目的 探讨乳康舒颗粒剂对乳腺癌细胞血管生成因子(VEGF)和肿瘤细胞增殖核抗原(Ki-67)表达的影响.方法 乳腺癌细胞株MDA-MB-231接种于裸鼠右前肢腋下,分别给予高、低剂量乳康舒颗粒剂,连续灌胃两周,脱臼处死,取肿瘤组织称重并计算瘤重系数,免疫组织化学法测定瘤组织中VEGF、Ki-67的表达.结果 乳康舒颗粒剂高剂量组瘤重明显低于对照组,且抑制肿瘤组织中VEGF、Ki-67的过度表达,呈剂量效应关系.结论 乳康舒颗粒剂能抑制MDA-MB-231乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤细胞的生长.     

大黄酸对乳腺癌肿瘤细胞HER-2蛋白表达的影响研究

目的:对大黄酸用于乳腺癌治疗中对肿瘤细胞的HER-2蛋白表达的影响进行研究,证实大黄酸在乳腺癌治疗中的价值及作用机制,为临床及研究提供参考。方法:64例乳腺癌患者,提取相应的细胞样本,采用MTT法对肿瘤的细胞增殖情况、受体PT心通路蛋白表达水平、磷酸化水平的变化进行检测;使用免疫细胞化学检测法对EGFR和HER-2蛋白表达水平进行检测;HER-2在基因转录水平上的变化使用RT-PCR检测,细胞凋亡和细胞周期使用流式细胞技术(FACS)检测。收集检测结果并进行数据分析。结果:(1)大黄酸对MCF-7、SK-BR-3和MDA.MB-231等乳腺癌细胞、卵巢癌SK-OV-3细胞系和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)均有一定的抑制作用,其半抑制率IC50分别为98μmol/L、86μmol/L、115μmol/L、88μmol/L和205μmol/L。(2)大黄酸的抗肿瘤机制与RHL相似,均是通过1通过抑制EGFR的磷酸化及其下游Raf/MEK/ERK信号通路的磷酸化抑制EGFR高表达和HER-2低表达的MCF-7细胞增殖;2对于EGFR和HER-2高表达的SK-Bf-3细胞,则通过抑制EGFR和HER-2蛋白表达和蛋白磷酸化水平,同时诱导肿瘤细胞通过p53和p21途径发生凋亡,两种方式发挥作用的。结论:大黄酸对HER-2双靶点受体蛋白酪氨酸激酶具有靶向抑制作用,能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡两种途径发挥其抗乳腺癌肿瘤的细胞作用,进而达到治疗乳腺癌,改善患者生活质量的目的。     

蛇床子素配伍补骨脂素对人乳腺癌高骨转移细胞增殖及侵袭的影响

目的:研究蛇床子素配伍补骨脂素对人乳腺癌高骨转移细胞株MDA-MB-231BO增殖与侵袭的影响,并探讨其分子机制。方法:Cell Counting Kit-8（CCK-8）测定蛇床子素、补骨脂素对细胞的毒性大小。根据L₉（3⁴）正交设计表,Transwell侵袭实验筛选最佳配伍浓度。Western blot及real-time PCR检测蛇床子素配伍补骨脂素对Smad2、Smad3、Smad4、Smad7表达的影响。结果:蛇床子素和补骨脂素都能显著抑制细胞的增殖活性,且存在剂量依赖性。150μM的蛇床子素配伍100μM的补骨脂素时细胞侵袭率最低。Western b1ot和real-timePCR结果显示最佳配伍组Smad2、Smad3、Smand4蛋白及mRNA表达量明显降低,Smad7蛋白及mRNA表达量明显增加。结论:蛇床子素和补骨脂素配伍使用对细胞的侵袭抑制作用优于两个单体单用效果。配伍组通过干预TGF-β/Smads信号传导通路的各个环节从而抑制MDA-MB-231BO的增殖与侵袭。     

不同浓度血通灵对人乳腺癌细胞侵袭作用及基质金属蛋白酶-9蛋白表达的影响

目的探讨血通灵对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移作用机制。方法 Transwell侵袭实验检测不同浓度血通灵对细胞侵袭作用的影响,初步明确药物抗肿瘤转移的物质基础;应用明胶酶谱法检测血通灵对MDA-MB-231细胞分泌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响;Western blot检测不同浓度血通灵干预后细胞中MMP-9蛋白表达的变化。结果不同浓度血通灵均能显著抑制细胞分泌MMP-9能力、细胞侵袭能力和细胞内MMP-9蛋白表达,该抑制作用呈剂量依赖关系。结论血通灵可能通过下调MDA-MB-231细胞中MMP-9蛋白表达而降低活性MMP-9的分泌,抑制细胞的侵袭能力。     

红景天对乳腺癌治疗的研究

目的：研究红景天提取物对乳腺癌MDA-MB-435细胞株增殖及血管新生相关因子的影响。方法：人乳腺癌MDA-MB-435细胞培养后，加入红景天提取物10mg／ml、20mg／ml，设置空白对照组。药物治疗24小时后，使用流式细胞仪进行分选、MTT法测定细胞增殖能力，以及VEGF表达的影响。结果：红景天处理后，MDA-MB-435细胞株的形态学特征发生显著变化，且随着药物浓度增加而愈加明显；阻滞MDA-MB-435细胞增殖周期的作用，主要阻滞于S期，该作用随着药物浓度增加亦增强；显著抑制MDA-MB-435细胞的增殖活性：处理24小时，各剂量组肿瘤细胞表达VEGF mRNA无明显差异，44小时后，给药组明显地抑制MDA-MB-435细胞表达VEGF的作用。结论：红景天提取物在体外可阻滞乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖周期、降低乳腺癌MDA-MB-435细胞的增殖活性、减少促血管新生因子VEGF表达。     

十全大补汤对乳腺癌患者术后早期恢复及切口引流液血管生成因子的影响

目的:观察十全大补汤对乳腺癌患者术后早期恢复的作用,并探讨对切口引流液血管生成因子的影响以及引流液对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的作用。方法:将61例乳腺癌病例随机分为对照组30例和治疗组31例,两组术后均采用西医常规治疗,治疗组于术后第1天起服用十全大补汤,连续7 d;观察两组患者治疗前后中医证候疗效、切口引流时间及不同时点引流量,CCK-8法检测引流液对MDA-MB-231细胞增殖的影响、Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力的变化,蛋白质芯片法筛选两组引流液中血管生成因子的表达。结果:(1)十全大补汤组中医证候疗效总有效率为89.66%,高于对照组的63.33%(P<0.05)。(2)十全大补汤组切口引流时间短于对照组引流时间,分别为(12.48±2.11)d、(14.23±1.94)d(P<0.05)。两组引流量均呈下降趋势,其中第7天十全大补汤组引流量低于对照组(P<0.05)。(3)引流液对MDA-MB-231细胞有促增殖作用,十全大补汤组引流液对MDA-MB-231乳腺癌细胞的促增殖作用低于对照组(P<0.05)。(4)Transwell结果发现引流液能促进MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力,而十全大补汤组的引流液促迁移和侵袭能力较对照组降低(P<0.05)。(5)人血管生成因子抗体芯片筛选发现43种血管生成因子在引流液中均有表达,部分促血管生成因子上调≥2倍,其中十全大补汤组IL-8、Leptin的表达水平低于对照组(P<0.05)。结论:十全大补汤能改善乳腺癌患者术后早期气血两虚症候,有效缩短术区引流时间、减少术区引流量;切口引流液能促进MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭,十全大补汤可能通过降低引流液中IL-8、Le Ptin等促血管生成因子的表达进一步抑制引流液对MDA-MB-231细胞的促增殖、迁移及侵袭能力。     

山慈菇-蜂房药对抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭转移的机理研究

目的 研究山慈菇-蜂房药对对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）法检测山慈菇-蜂房药对大鼠含药 血清对细胞活力的影响,Transwell小室法测定其侵袭力,实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）基 因的表达。结果 山慈菇-蜂房药对组MDA-MB-231细胞体外生长杀伤率为35.86 %;能明显抑制MDA-MB-231 细胞的侵袭能力（P＜ 0.01）,其抑制率为34.8 %;MMP-9 mRNA明 显降低,TIMP-1 mRNA明显升高,MMP-9 mRNA/ TIMP-1 mRNA值显著降低（P＜ 0.05,P＜ 0.01）。结论 山慈菇-蜂房药对能够抑制MDA-MB-231 细胞侵袭能力,其机制可能与 下调MMP-9mRNA表达,上调TIMP-1mRNA的表达,降低MMP-9 mRNA/ TIMP-1 mRNA比值有关。     

27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡

目的:实验以MDA-MB-231为研究对象,观察27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸(DY-17)诱导细胞凋亡作用。方法:采用MTT检测12,24,36,48,60,72 h细胞增殖活性。采用荧光染色技术检测DY-17诱导凋亡实验。运用流式细胞仪测定MDAMB-231的凋亡坏死率。采用Western blotting检测对照组、EGF组、EGF+DY-17 40μmol·L-1组、EGF+SP600125组的JNK,磷酸化JNK,Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达变化。结果:DY-17抑制MDA-MB-231细胞增殖呈剂量和作用依赖性。流式细胞仪检测DY-17(20,40μmol·L-1)诱导MDA-MB-231细胞凋亡坏死率分别为31.86%,49.91%,荧光显微镜下DY-17(20,40μmol·L-1)与对照组比较细胞发生凋亡坏死明显增加。与对照组比较,EGF组磷酸化JNK蛋白表达上调;与EGF组比较,EGF+DY-17组磷酸化JNK蛋白表达下调。与EGF组比较,EGF+DY-17组Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达均上调。结论:DY-17通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡。     

白花蛇舌草-半枝莲药对组分诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制

目的:考察白花蛇舌草-半枝莲药对的活性组分诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及其作用机制。方法:超高效液相色谱法对药对活性组分中化学成分进行测定,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖力,克隆形成实验考察克隆形成的数量变化,流式细胞仪检测凋亡细胞的比例,蛋白质免疫印迹法检测蛋白及信号通路的变化。结果:制备药对以3种配比(1∶1,1∶2,2∶1)进行水煎后脱脂浸膏的乙酸乙酯组分(YDW11,YDW12,YDW21)。YDW11含有对羟基苯乙酮、野黄芩苷、木犀草素和芹菜素4种成分。通过比对这3个组分对乳腺正常上皮细胞10A1和三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外增殖的影响,发现YDW11在25~50 mg·L-1对10A1细胞无细胞毒性,且抑制MDA-MB-231的体外增殖(P0.01),其抑制活性强于YDW12,YDW21。YDW11呈质量浓度和时间依赖性抑制三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,HS578T,BT549的体外增殖(P0.05,P0.01),但对MCF-7体外增殖影响不大。YDW11呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231的克隆形成(P0.01),并诱导其凋亡(P0.01)。YDW11提高p21 mRNA和蛋白表达的同时,抑制增殖细胞核抗原(PCNA)的表达(P0.05,P0.01),抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中p38,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外调节蛋白激酶(ERK)的磷酸化(P0.05)。YDW11处理MDA-MB-231后,VASP在Ser157位点和Ser239位点的磷酸化水平提高(P0.05,P0.01),提示激活环状核苷酸(c AMP)和环磷酸鸟苷(c GMP)信号通路的活化。结论:白花蛇舌草-半枝莲药对等比配伍的乙酸乙酯组分(YDW11)在对乳腺正常上皮细胞10A1无毒的剂量25,50 mg·L-1,呈剂量和时间依赖性显著抑制三阴性乳腺癌细胞MDAMB-231的体外增殖、克隆形成并诱导凋亡。呈浓度依赖性提高周期抑制蛋白p21在mRNA和蛋白的表达水平,抑制PCNA的表达,抑制p38,JNK,ERK的磷酸化水平,提高VASP在Ser157和Ser239位点的磷酸化,部分通过c AMP/c GMP和抑制MAPK信号通路而诱导MDA-MB-231的凋亡。     

康艾注射液对人类乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究

目的:本研究旨在研究和探讨康艾注射液对于人类乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究,从而为临床上应用康艾注射液治疗乳腺癌提供一定的理论依据。方法:本研究利用体外细胞实验,研究了康艾注射液对于乳腺癌细胞的增殖、克隆形成以及凋亡的影响。并且采用Western blot的方法检测了乳腺癌细胞中p-AKT蛋白和p-AMPK蛋白的表达。结果:人类乳腺癌细胞MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3以及HCC-1937经康艾注射液干预48h后,细胞活性较对照组分别减少(19.49±2.92)%,(45.41±7.95)%,(53.84±5.53)%,(64.04±4.36)%。经康艾注射液处理2周后,人类乳腺癌细胞MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3以及HCC-1937的细胞克隆数较正常对照组均明显减少。康艾注射液在人类乳腺癌细胞诱导细胞凋亡。其对于MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3以及HCC-1937的凋亡诱导率为(11.67±1.17)%,(17.54±1.83)%,(15.45±1.55)%,(15.54±1.57)%。Western blot显示,康艾注射液处理细胞后磷酸化的AKT蛋白(p-AKT)表达降低,而AMPK(p-AMPK)蛋白表达增加。结论:康艾注射液可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。这可能是通过AMPK/m TOR信号传导通路而达成的。