金复康口服液诱导肺癌细胞A549凋亡的机制

目的:研究金复康口服液(JFK)诱导人非小细胞肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法:取对数生长期的人非小细胞肺癌细胞A549,随机分为空白组和药物组,采用溴化四甲基偶氮(MTT)比色法,考察不同质量浓度JFK(0.3,1.5,3,7.5,15,30 g·L~(-1))对A549细胞体外增殖能力的影响。通过平板克隆形成实验考察JFK对A549细胞平板克隆形成的影响,利用流式细胞仪考察JFK对A549细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)考察JFK对裂解DNA修复酶(cleaved PARP),活化型半胱天冬酶-3(actived Caspase-3),Wnt/β-联蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达及对促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响,实验中设置空白组和药物组,药物组为A549细胞加入15,30 g·L~(-1)JFK,分别干预24 h,30 min。结果:JFK在1.5~30 g·L~(-1)呈质量浓度依赖性的抑制A549细胞外增殖(P0.01)。JFK抑制A549细胞的平板克隆形成在15~30 g·L~(-1),其中JFK 30 g·L~(-1)时抑制A549细胞的平板克隆最显著(P0.01)。与空白组比较,JFK 15~30 g·L~(-1)可提高AnnexinⅤ和PI双阳细胞率,诱导A549细胞凋亡(P0.05),且呈浓度依赖性提高cleaved PARP和actived Caspase-3的蛋白表达,并抑制β-catenin和cyclin D1在蛋白水平的表达(P0.05,P0.01)。JFK上调MAPK信号通路中JNK和p38的蛋白磷酸化水平(P0.05),同时下调Akt信号通路中Akt在T308和S473的位点磷酸化水平(P0.05)。结论:金复康口服液抑制人非小细胞肺癌细胞A549的体外增殖、平板克隆的形成并诱导其凋亡,部分通过调控JNK/p38/MAPK信号通路和Akt信号通路,抑制β-catenin和cyclin D1,同时提高凋亡相关蛋白cleaved PARP和actived Caspase-3的表达。     

竹节香附素A体外诱导乳腺癌细胞凋亡的作用机制研究

目的：探讨竹节香附素A（RaA）体外抗乳腺癌的作用机制。方法：体外培养乳腺癌细胞（MDA-MB-231）,分别用RaA及RaA联合乙酰半胱氨酸（NAC）干预后检测相关蛋白及信号通路的变化情况。结果：与空白组比较,RaA组抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.01）,促进MDA-MB-231细胞线粒体膜电位坍塌,提升MDA-MB-231细胞的活性氧（ROS）水平（P<0.01）,提升MDA-MB-231细胞B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）/B细胞淋巴瘤-2蛋白（Bcl-2）的比值（P<0.01）,上调MDA-MB-231细胞色素C（Cyt-C）、信号转导及转录激活蛋白3（STAT3）和抑癌基因53（P53）的蛋白水平（P<0.05,P<0.01）,下调MDA-MB-231细胞STAT3的磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）;与RaA组比较,RaA联合NAC组可降低MDA-MB-231细胞的ROS水平（P<0.01）,降低MDA-MB-231细胞Bax/Bcl-2的比值（P<0.01）,下调MDA-MB-231细胞Cyt-C、活化胱天蛋白酶-3（active CASP3,CCASP3)和P53的蛋白水平（P<0.01）,上调STAT3磷酸化水平（P<0.01）。结论：RaA通过激活ROS/STAT3/P53信号通路诱导线粒体凋亡在体外发挥抗乳腺癌作用。     

白皮杉醇对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468抗肿瘤作用及机制

目的:考察白皮杉醇(PIC)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖、凋亡及细胞周期的作用,并对其作用机制进行探讨。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法考察PIC(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞成活率的影响,并计算半抑制率(IC50);采用碘化丙啶(PI)染色观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞周期的影响;采用细胞凋亡检测(Annexin V-FITC/PI)双染法观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的诱导凋亡作用;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)观察不同浓度PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡蛋白的影响,并用Western blot对分泌型糖蛋白Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白进行检测。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,PIC(5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L^-1)可呈浓度依赖性地抑制MDA-MB-468细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),IC50为(39.4±4.6)μmol·L^-1;作用48 h,PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)呈浓度依赖性地升高MDA-MB-468细胞处于细胞周期G0/G1期细胞(P<0.01);呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-468细胞凋亡(P<0.01),其中,PIC(20.0μmol·L^-1)诱导细胞凋亡率为49.87%;PIC(10.0,20.0μmol·L^-1)可明显降低MDA-MB-468细胞中β-catenin及原癌基因(C-myc),黏附因子(CD44)蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01);PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)可显著抑制蛋白激酶B(Akt)磷酸化,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白的磷酸化,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达水平(P<0.01);增强半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和磷酸化β-catenin的蛋白表达(P<0.01)。结论:PIC可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制MDA-MB-468细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而诱导其凋亡。     

阳和汤对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡Egr1/p21信号通路的影响

目的:以早期生长反应基因1(Egr1)/细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)信号通路为基础,探讨古方阳和汤含药血清对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响。方法:制备阳和汤大鼠含药血清,体外培养三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞。设空白组,阳和汤高、中、低剂量组(23. 4,11. 7,5. 85 g·kg~(-1)),分别干预MDA-MB-231细胞24,48,72 h,细胞增殖检测(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况。设空白组,阳和汤高、中、低剂量组(23. 4,11. 7,5. 85 g·kg~(-1)),干预MDA-MB-231细胞48 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况以及细胞周期分布情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞Egr1,p21 mRNA的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Egr1,p21蛋白的表达情况。结果:阳和汤干预MDA-MB-231细胞24,48,72 h,与空白组相比,阳和汤高、中剂量组能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖(P 0. 01)。阳和汤干预MDA-MB-231细胞48 h,与空白组相比,阳和汤高、中剂量组细胞的凋亡率明显增加(P 0. 05,P 0. 01);阳和汤高、中剂量组细胞周期G_0/G_1期所占比例降低,G_2/M期所占比例升高(P 0. 05,P 0. 01);阳和汤高、中剂量组细胞Egr1,p21mRNA和蛋白表达均增加(P 0. 05,P 0. 01)。结论:阳和汤可激活MDA-MB-231细胞中Egr1/p21信号通路,增加Egr1,p21的表达,引起G_2/M细胞周期阻滞,从而诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

阳和汤对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及其Akt/mTOR信号通路的影响

目的:通过阳和汤大鼠含药血清干预MDA-MB-231细胞,探索阳和汤对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及其Akt/mTOR信号通路的影响。方法:阳和汤含药血清(或阳性药)干预MDA-MB-231细胞24、48、72h后,CCK-8法检测细胞OD值,计算细胞抑制率。阳和汤含药血清(或阳性药)干预MDA-MB-231细胞24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果:干预24、48、72h后,与空白对照组相比,阳和汤低、高剂量组和阳性药物组细胞抑制率分别均增高(P0.01)。干预24h后,与空白对照组相比,阳和汤低、高剂量组和阳性药物组细胞凋亡率均增高(P0.01);Bcl-2/Bax值均降低(P0.05或0.01)。干预24h后,与空白对照组相比,阳和汤低、高剂量组和阳性药物组mTOR磷酸化率、Akt磷酸化率均降低(P0.05或0.01)。结论:阳和汤治疗乳腺癌的作用机制可能是通过抑制Akt/mTOR信号通路的活化,从而抑制乳腺癌细胞的增殖、诱导其凋亡,发挥抗癌作用。     

27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡

目的:实验以MDA-MB-231为研究对象,观察27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸(DY-17)诱导细胞凋亡作用。方法:采用MTT检测12,24,36,48,60,72 h细胞增殖活性。采用荧光染色技术检测DY-17诱导凋亡实验。运用流式细胞仪测定MDAMB-231的凋亡坏死率。采用Western blotting检测对照组、EGF组、EGF+DY-17 40μmol·L-1组、EGF+SP600125组的JNK,磷酸化JNK,Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达变化。结果:DY-17抑制MDA-MB-231细胞增殖呈剂量和作用依赖性。流式细胞仪检测DY-17(20,40μmol·L-1)诱导MDA-MB-231细胞凋亡坏死率分别为31.86%,49.91%,荧光显微镜下DY-17(20,40μmol·L-1)与对照组比较细胞发生凋亡坏死明显增加。与对照组比较,EGF组磷酸化JNK蛋白表达上调;与EGF组比较,EGF+DY-17组磷酸化JNK蛋白表达下调。与EGF组比较,EGF+DY-17组Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达均上调。结论:DY-17通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡。     

蛇葡萄素介导乳腺癌细胞凋亡的机制

目的探讨蛇葡萄素(AMP)体外诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡作用及可能作用机制。方法 0、5、25、50μmol/L AMP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h,MTT法检测细胞活性,Brd U法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,DCFH-DA检测细胞内活性氧簇(ROS)生成,Western blot法检测细胞凋亡、Nrf-2以及内质网应激相关蛋白的变化水平。结果 AMP可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活性和增殖水平,促进细胞活性氧簇生成并诱导细胞凋亡。此外,AMP刺激可明显下调抗氧化蛋白Nfr-2在细胞质和细胞核内的表达水平,并上调内质网应激信号通路ERK蛋白的磷酸化水平以及ATF4、CHOP蛋白的表达水平。结论 AMP通过抑制Nrf-2依赖的抗氧化保护机制和激活PERK/ATF4/CHOP内质网应激反应信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡。     

高良姜素抑制乳腺癌转移作用机制研究

目的探究高良姜素对MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法采用MTT法观察不同浓度高良姜素对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响;划痕愈合实验和Transwell小室迁移实验考察高良姜素对MDA-MB-231水平迁移能力和垂直迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验分析高良姜素对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响;采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法考察高良姜素对MDA-MB-231细胞PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响,免疫荧光染色实验验证高良姜素对MDA-MB-231细胞PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响;Western blotting法和免疫荧光染色实验考察高良姜素对核转录因子(NF-κB)p65磷酸化表达和入核的影响;制备乳腺癌MDA-MB-231细胞株裸鼠移植瘤模型,高良姜素200μg/kg ig给药15 d,检测肿瘤体积和质量,计算抑瘤率,Western blotting分析肿瘤组织PI3K、AKT、MMP-2、MMP-9表达及NF-κB p65磷酸化表达情况。结果高良姜素体外浓度为50、100、200μmol/L时可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖;高良姜素能剂量依赖性抑制PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达,降低NF-κB p65磷酸化表达和入核;200μg/kg高良姜素能抑制裸鼠乳腺癌的生长,抑瘤率为43.66%;高良姜素能抑制瘤组织中PI3K、Akt、MMP-2、MMP-9表达以及NF-κB p65磷酸化表达。结论高良姜素在体内对MDA-MB-231生长有明显的抑制作用,在体外能抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭,抑制相关蛋白PI3K、Akt和MMP-2、MMP-9蛋白表达,抑制转录因子NF-κB磷酸化表达及入核,阻断其激活。     

康艾注射液对人类乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究

目的:本研究旨在研究和探讨康艾注射液对于人类乳腺癌细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究,从而为临床上应用康艾注射液治疗乳腺癌提供一定的理论依据。方法:本研究利用体外细胞实验,研究了康艾注射液对于乳腺癌细胞的增殖、克隆形成以及凋亡的影响。并且采用Western blot的方法检测了乳腺癌细胞中p-AKT蛋白和p-AMPK蛋白的表达。结果:人类乳腺癌细胞MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3以及HCC-1937经康艾注射液干预48h后,细胞活性较对照组分别减少(19.49±2.92)%,(45.41±7.95)%,(53.84±5.53)%,(64.04±4.36)%。经康艾注射液处理2周后,人类乳腺癌细胞MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3以及HCC-1937的细胞克隆数较正常对照组均明显减少。康艾注射液在人类乳腺癌细胞诱导细胞凋亡。其对于MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3以及HCC-1937的凋亡诱导率为(11.67±1.17)%,(17.54±1.83)%,(15.45±1.55)%,(15.54±1.57)%。Western blot显示,康艾注射液处理细胞后磷酸化的AKT蛋白(p-AKT)表达降低,而AMPK(p-AMPK)蛋白表达增加。结论:康艾注射液可以抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。这可能是通过AMPK/m TOR信号传导通路而达成的。     

刘伟胜教授治疗肺癌用药规律的挖掘分析

目的:基于中医传承辅助系统(V2.5)探讨刘伟胜教授治疗肺癌的中医用药经验及组方规律。方法:收集刘伟胜教授在广东省中医院2016年2月至2017年2月门诊接诊的肺癌病例为研究对象,提取处方,建立数据库,采用该软件集成的规则分析、改进互信息法、复杂系统熵聚类及无监督的熵层次聚类等数据挖掘方法,挖掘分析用药经验。结果:纳入患者290例,并录入处方290个,使用中药共148味。确定处方中药物的使用频次和药物之间的关联规则,其中使用频次高于65的中药共24味,使用频次最高的前5味药依次为半枝莲(267),白花蛇舌草(265),全蝎(238),桃仁(228),淫羊藿(221),5味药所对应的常用剂量分别为20,20,10,10,15 g;支持度为185,置信度为0.95时,共有药物组合32组,使用频次最高的前5位药物组合依次为白花蛇舌草-半枝莲(259),全蝎-半枝莲(226),白花蛇舌草-全蝎(223),白花蛇舌草-全蝎-半枝莲(220),桃仁-半枝莲(218);设置相关度为9,惩罚度为2,演化出22个药物核心组合及11首新方。结论:刘伟胜教授临证以"攻毒扶正"为根本,强调癌毒是肺癌发生的直接因素,而正气不足是肺癌发病的关键,临证主张清热毒、破瘀毒、化痰毒并注重顾护脾肾之气,尤以温补肾阳为主。     

参芪扶正注射液对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究参芪扶正注射液对基底细胞样(basal-like型)乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖和凋亡的影响,探讨参芪扶正注射液对三阴性乳腺癌的治疗作用机制。方法:体外培养人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞,将其分为参芪扶正注射液组和空白组。采用噻唑蓝(MTT)比色法分别于24,48,72 h检测参芪扶正注射液对人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖的影响。采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期分布和凋亡情况。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blot)检测参芪扶正注射液对MDA-MB~(-2)31细胞p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)表达的影响。结果:参芪扶正注射液可抑制MDA-MB~(-2)31细胞增殖,高浓度者抑制作用强,即呈现浓度依赖性,体外培养48 h时抑制作用最显著。参芪扶正注射液将MDA-MB~(-2)31细胞阻滞于细胞周期的S期,进而诱导MDA-MB~(-2)31细胞凋亡。Real-time PCR和Western blot发现参芪扶正注射液可上调MDA-MB~(-2)31细胞PUMA蛋白和基因表达。结论:参芪扶正注射液可显著抑制人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖,导致细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调PUMA基因有关。     

灵芝多糖调控抗氧化因子表达抑制乳腺癌恶性表型研究

目的 研究灵芝多糖对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡的影响及作用机制。方法 MCF-7和MDA-MB-231细胞分别给予灵芝多糖（25、50、75mg/mL）干预后,MTS法检测灵芝多糖对乳腺癌细胞增殖的影响;TUNEL染色及流式细胞术探测灵芝多糖对乳腺癌细胞凋亡的影响;采用流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平;采用qRT-PCR技术检测抗氧化相关基因谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基（glutamate-cysteine ligase regulatory subunit,GCLM）、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC）、人硫氧还蛋白还原酶1（human thioredoxin reductase 1,TXNRD1）、苹果酸酶1（malic enzyme 1,ME1）、硫氧还蛋白（thioredoxin,TXN）mRNA表达;采用Western blotting检测GCLM、TXNRD1蛋白表达。结果 给予灵芝多糖干预后,MCF-7、MDA-MB-231细胞活性明显降低（P＜0.01）,凋亡率显著升高（P＜0.05、0.01）,细胞内ROS水平显著升高（P＜0.05、0.01）,GSH水平明显下降（P＜0.01）;抗氧化因子mRNA及蛋白表达水平显著下调（P＜0.05、0.01）。结论灵芝多糖能够通过抑制GCLM等抗氧化基因表达诱导ROS生成,促进乳腺癌细胞凋亡,进而抑制乳腺癌恶性进展。     

四君子汤提取物对人乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的抑制作用

目的探究四君子汤提取物(Sijunzi Decoction extract,SDE)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的作用。方法采用不同质量浓度SDE作用于MDA-MB-468细胞,CCK-8实验和细胞划痕实验检测SDE对细胞增殖和迁移能力的影响;克隆形成实验检测SDE对细胞集落形成能力的影响;Hoechst33342染色技术和流式细胞术(FCM)检测SDE对细胞凋亡和周期的影响;Western blotting技术检测SDE对信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)表达的影响。结果与对照组比较,SDE对MDA-MB-468细胞有一定的抑制作用(P0.05),且呈质量浓度和时间依赖性。克隆形成实验结果表明SDE能够抑制细胞克隆形成。细胞迁移实验结果显示,SDE中、高质量浓度能够明显减弱细胞划痕愈合能力(P0.001)。FCM检测凋亡结果显示,SDE各质量浓度组细胞早期凋亡率和总凋亡率逐渐上升,呈质量浓度依赖性,且中、高质量浓度的SDE能显著诱导细胞凋亡(P0.01、0.001)。SDE能够影响细胞周期,使G2期细胞显著减少(P0.01)。Westernblotting结果显示,SDE处理细胞后,STAT3蛋白表达水平显著降低。结论 SDE能够抑制MDA-MB-468细胞的增殖和克隆形成,促进其凋亡,使G2期细胞减少。其机制可能与调控STAT3通路有关。     

黄芪甲苷逆转人乳腺癌细胞MDA-MB-231对阿霉素多药耐药的体外研究

目的探讨黄芪甲苷对耐药人乳腺癌细胞MDA-MB-231/DOX多药耐药的逆转作用。方法以噻唑蓝(MTT)法测定黄芪甲苷的细胞毒性及其处理前后乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性或耐药性变化。采用乙醇注入法-硫酸铵梯度法构建共载阿霉素-黄芪甲苷的脂质体(LPs-DOX/AS),并评价其对乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用,采用流式细胞术测定LPs-DOX/AS对细胞凋亡的影响。结果黄芪甲苷在实验浓度范围内对乳腺癌细胞无明显细胞毒性;与黄芪甲苷联用后,阿霉素对MDA-MB-231、MDA-MB-231/DOX细胞的半数抑制浓度(IC_(50))值均下降(P0.05),并且对耐药细胞的干预效果更明显(P0.01)。脂质体包载后的LPs-DOX/AS-IV比游离DOX/AS-IV对2种乳腺癌细胞的IC_(50)值均下降(P0.05),同样对耐药株的效果更明显(P0.01)。经LPs-DOX/AS-IV处理的耐药株细胞凋亡率也显著高于游离药物组(P0.05)。结论黄芪甲苷对人乳腺癌细胞MDA-MB-231对阿霉素多药耐药具有很好的逆转作用,黄芪甲苷与阿霉素联用及其脂质体共递送体系的开发可以有效逆转或增敏乳腺癌的多药耐药。     

不同清热中药对干燥综合征小鼠颌下腺水分子转运功能的调控作用

目的:探讨不同清热中药对干燥综合征(SS)模型鼠颌下腺水分子转运功能的干预作用。方法:利用C57小鼠建立SS动物模型,共设立12组,即白花蛇舌草组4.51 g·kg-1,紫草组4.51 g·kg-1,青蒿组4.51 g·kg-1,蒲公英组4.51 g·kg-1,大青叶组4.51 g·kg-1,板蓝根组2.25 g·kg-1,半枝莲组2.72 g·kg-1,玄参组2.25 g·kg-1,积雪草组2.25 g·kg-1,七叶一枝花组2.25 g·kg-1。各组小鼠于造模第14天开始ig给予相应药物,正常组、模型组均ig生理盐水20 m L·kg-1,每日1次,连续4周,并于造模前以及造模后2,4,6周固定时间测量小鼠饮水量、唾液流量以及检测各组小鼠水通道蛋白5(aquaporins 5,AQP5)表达。结果:与正常组比较,模型组饮水量增加,在第4,6周差异均有显著统计学意义(P0.05);与模型组比较,治疗组小鼠从治疗2周后小鼠饮水量均有减少,第4周时白花蛇舌草组、青蒿组、大青叶组、半枝莲组与模型组相比差异显著(P0.05),第6周时蛇舌草组、青蒿组、蒲公英组、板蓝根组、半枝莲组、玄参组、大青叶组、积雪草组与模型组比降低,差异显著(P0.05)。与正常组比较,模型组唾液流量降低,在第4,6周时差异显著(P0.05);唾液流量在第4周时板蓝根组、青蒿组、大青叶组、半枝莲组、积雪草组与模型组相比差异显著(P0.05),第6周时各治疗组与模型组比较,增加都比较明显(P0.05)。与正常组比较,模型组AQP5积分吸光度差异有显著统计学意义(P0.05);各治疗组AQP5积分吸光度与模型组相比,各治疗组均有不同程度的提高,其中以青蒿组(76.2±8.1),大青叶组(77.1±6.6),半枝莲组(65.4±9.5)与模型组(41.9±3.9)差异明显(P0.05)。结论:青蒿、大青叶、半枝莲可以通过对SS小鼠降低饮水量、增加唾液流量以及颌下腺AQP5的影响发挥对其颌下腺水分子转运功能的治疗作用。     

红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的机制研究

目的研究红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用及其作用机制。方法将MDA-MB-435细胞分为对照组和红花多糖0.5、1.0 mg/mL组。MTT法及流式检测仪分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞生长及凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting法分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组比较,红花多糖0.5 mg/mL组MDA-MB-435细胞抑制率为(21.52±2.43)%,红花多糖1.0 mg/mL组细胞抑制率为(27.73±3.75)%,显著高于红花多糖0.5 mg/m L组(P0.05);与对照组比较,红花多糖能够显著提高MDA-MB-435细胞凋亡率(P0.01),且呈剂量依赖性。RT-PCR及Western blotting实验结果显示,与对照组比较,红花多糖能够使MDA-MB-435细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05、0.01)。结论红花多糖能有效抑制MDA-MB-435细胞的生长,促进其凋亡,作用可能是通过对PI3K/Akt/mTOR通路的阻断实现的。     

裸花紫珠提取物的抗乳腺癌转移作用及其机制

目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extracts from Callicarpa nudiflora,ECN)的抗乳腺癌转移作用及其作用机制。方法:采用尾静脉注射肿瘤细胞法建立裸鼠实验性肺转移模型,24 h后将实验动物随机分为空白组,ECN低、中、高剂量组(0.125,0.25,0.5 g·kg-1),空白组给予等量溶剂,每日ig给药1次,连续8周。给药结束后,采用巢式PCR法检测裸鼠肺组织中人细胞角蛋白19(CK19)基因的表达,以确定肿瘤细胞的肺转移程度(n=10)。建立肿瘤细胞体外迁移、侵袭模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94(阳性对照)处理MDA-MB-231细胞14 h(n=4),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭的影响;建立肿瘤细胞体外黏附模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94处理MDA-MB-231细胞60 min(n=3),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外黏附能力的影响;采用Western blot法,检测MDA-MB-231细胞分别经100,200 mg·L-1ECN处理24 h后p-锌指转录因子(p-Snail)和上皮性钙黏附蛋白(Ecadherin)的表达情况。结果:体内研究表明,ECN可显著降低裸鼠肺组织中人CK19 mRNA的表达(P0.01);体外迁移实验发现,ECN 100,200 mg·L-1组的迁移细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外侵袭实验显示,ECN低、高剂量组的侵袭细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外黏附实验表明,ECN可干扰肿瘤细胞与细胞外基质蛋白之间的黏附(P0.01);Western blot实验结果表明,ECN可显著抑制p-Snail,并增加E-cadherin的表达。结论:ECN具有明显的抗乳腺癌转移作用。抑制细胞内p-Snail的活化可能是抗转移作用的机制之一。