低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤(U251)细胞凋亡的影响

目的：探讨低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤U251细胞凋亡的影响。方法：35只荷人胶质瘤U251裸鼠,随机分为7个实验组(每组5只),即假照组(0 mGy),D₁组(75 mGy),D₂组(4Gy),D₁-12 h+D₂组(D₁照射后12 h给予D₂),D₁-24 h+D₂组(D₁照射后24 h给予D₂),D₁-48 h+D₂组(D₁照射后48 h给予D₂)和D₁-72 h+D₂组(D₁照射后72 h给予D₂)。各实验组以不同方式照射后4 d,荷瘤裸鼠全部处死,采用TUNEL法检测裸小鼠移植人胶质瘤组织的细胞凋亡。结果：D₁（75 mGy）照射后,细胞凋亡指数（AI）增至(0.19±0.07),但与假照组（0.17±0.07）比较差异无显著性（P＞ 0.05）。D₂（4 Gy）组、D₁+D₂各组细胞凋亡指数均明显增加,分别为0.54±0.05、0.64±0.04、0.63±0.04、0.65±0.11及0.67±0.07,与假照组比较差异均具有显著性（P＜0.01）。与D₂组比较,D₁+D₂各组细胞凋亡指数增加更为明显,两者比较差异均具显著性（P＜0.05）。结论：75 mGy照射对胶质瘤细胞凋亡可能有一定程度的影响,低剂量辐射与大剂量辐射有协同促胶质瘤细胞凋亡的作用。     

虫草素通过ERK1/2、Ezrin和Akt信号通路抑制胆囊癌细胞SNU-308的增殖和迁移

目的:探讨虫草素对胆囊癌细胞SNU-308增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:MTT法和平板集落形成实验检测不同浓度虫草素对胆囊癌SNU-308细胞活力和集落形成能力的影响;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白以及Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平;免疫荧光染色法检测细胞内LC3的表达水平;划痕愈合实验和Transwell实验检测虫草素对胆囊癌细胞迁移能力的影响;划痕实验检测Akt抑制剂和ERK1/2抑制剂及Ezrin基因沉默对细胞迁移能力的影响。结果:虫草素可显著抑制胆囊癌细胞的活力和集落形成能力(P0.05)。流式细胞术结果显示,虫草素可诱导胆囊癌细胞凋亡(P0.05)。Western blot结果显示,虫草素处理后Bcl-2表达降低,Bax、细胞色素C(Cyto C)、Fas、Fas L和cleaved caspase-3蛋白水平升高,自噬标识蛋白LC3-II/I比例和beclin 1表达上调(P0.05)。免疫荧光染色结果显示,虫草素处理后SNU-308细胞胞浆中LC3荧光颗粒的数量明显增多。划痕实验和Transwell实验结果显示虫草素可抑制细胞迁移(P0.05)。虫草素明显抑制Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平(P0.05)。Ezrin基因沉默及Akti-1/2和GDC-0994均可抑制胆囊癌细胞的迁移作用(P0.05)。结论:虫草素通过诱导凋亡和自噬抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与调控ERK1/2,Ezrin和Akt信号通路有关。     

β拉帕醌联合PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235抑制BGC-823细胞增殖和迁移

目的研究β拉帕醌(β-lapachone)与磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/m TOR)抑制剂NVP-BEZ235联合用药对人胃癌BGC-823细胞增殖与迁移的影响及机制。方法将BGC-823细胞分为空白对照组、1μmol/Lβ-lapachone处理组、50 nmol/L NVP-BEZ235处理组及1μmol/Lβ-lapachone联合50 nmol/L NVP-BEZ235处理组。采用MTT法和平板克隆形成实验检测BGC-823细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白水平;划痕实验及TranswellTM迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail及β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平。结果与β-lapachone处理组或NVP-BEZ235处理组相比,β-lapachone联合NVP-BEZ235处理组能更显著地抑制细胞的增殖和克隆形成能力,p-AKT、p-NF-κB、p-ERK及cyclin D1的蛋白表达下调最明显;在联合处理组对细胞迁移的抑制更明显,EMT相关标志物E-cadherin表达上调,vimentin、Snail及β-catenin表达下调最明显。结论β-lapachone联合NVP-BEZ235可有效抑制BGC-823胃癌细胞增殖,可能与p-AKT、p-NF-κB、p-ERK和cyclin D1表达降低有关;并通过调控EMT进程,抑制BGC-823细胞的迁移。     

β-拉帕醌对胃癌细胞生长与侵袭的抑制作用及机制

目的：探讨β-拉帕醌体外抑制胃癌细胞增殖和迁移及诱导凋亡的作用及机制。方法应用噻唑蓝（ MTT）及平板克隆实验检测β-拉帕醌对SGC-7901与AGS胃癌细胞增殖的影响,划痕实验检测β-拉帕醌抑制胃癌细胞的迁移能力,流式细胞术检测β-拉帕醌诱导胃癌细胞凋亡的作用。应用Western b1ot法检测β-拉帕醌处理胃癌细胞前后其增殖、迁移、上皮-间质转化（ epithe1ia1-mesenchyma1 transition,EMT）及凋亡分子标志物的变化。结果β-拉帕醌可显著抑制SGC-7901和AGS胃癌细胞的增殖能力,并下调增殖与周期相关Skp2和DEK蛋白的表达（ P均<0.05）;经β-拉帕醌处理后,胃癌细胞的迁移能力明显下降,且显著下调MMP-2/9和Ezrin蛋白以及EMT间质标志物的表达,上调EMT上皮标志物表达水平;另外,β-拉帕醌增加胃癌细胞的凋亡,下调BCL-2/Bax比值以及上调活化型Caspase-3/8/9的表达。结论β-拉帕醌对胃癌细胞有明显的抑制增殖及诱导凋亡的作用,并可通过MMPs和EMT途径抑制胃癌细胞的迁移能力。     

宫颈鳞癌组织中MMP-2、MMP-9的表达变化及意义

目的观察宫颈鳞癌组织中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测46例宫颈鳞癌（A组）、34例宫颈原位癌（B组）和20例正常宫颈上皮（c组）组织中的MMP-2和MMP-9。结果A、B、C组MMP-2蛋白阳性率分别为78．3％（36／46）、50．0％（17／34）、25．0％（5／20）,A组与B、C组比较,P均〈0．01;B、C组间比较,P〉0．05。A、B、C组MMP-9蛋白阳性率分别为71．7％（33／46）、70．6％（24／34）、25％（5／20）,A、B组与C组比较,P均〈0．01;A、B组间比较,P〉0．05。MMP-2、MMP-9蛋白表达与宫颈鳞癌淋巴结转移有关（P均〈0．05）。MMP-2和MMP-9在宫颈鳞癌中的表达呈正相关（L=0．372,P〈0．05）。结论宫颈鳞癌组织中MMP-2-和MMP-9高表达,MMP-2、MMP-9与宫颈癌的发生发展有关。     

The clinicopathological significance of transforming growth factor-β1, transforming growth factor-β1 receptor Ⅱ ,Smad4 and Smad7

Objective To investigate the clinicopathological significance of transforming growth factor-β1 (TGF-β1), transforming growth factor-β1 receptor Ⅱ (TGF-βRⅡ ), Smad4 and Smad7 protein expressions in gastric carcinomas. Methods 109 cases of gastric carcinomas,28 of high grade dysplasia,20 of low grade dysplasia,30 of chronic atrophic gastritis,29 of intestinal metaplasia, and 21 of normal gastric mucosa were selected for the detection of the expression level of TGF-β1,TGF-βRⅡ , Smad4 and Smad7 proteins by immunohistochemistry. Results The expression of TGF-β1,TGF-βRⅡ and Smad7 proteins in gastric carcinomas and dysplasia (high and low grade) were significantly higher than those in chronic atrophic gastritis, intestinal metaplasia and normal gastric mucosa (all P <0. 001 ) ,whereas the expression of Smad4 was significantly increased in high and low grade dysplasia (cytoplas-mic IS :4.89±2.38,5.80±1.54, respectively; nuclear IS: 3.89± 1.52,3.80±1.33, respectively), and decreased in gastric carcinomas (cytoplasmic IS:2.41±2.27,nuclear IS:2.02±2. 14) (P <0.001 ,P <0.001 ,respective-ly). Meanwhile,the expressions of TGF-β1,TGF-βRⅡ and Smad7 were higher in advanced gastric cancer (4.36± 2.66,3.05±1.93,4.84±3.06, respectively) than those in early gastric cancer ( 2.93±1.85,2. 17±1.87, 4. 14±2.46, respectively) ( P < 0.01, P < 0.05, P < 0. 05, respectively ) ; however the expression of Smad4 protein was much higher in early gastric cancer (P < 0. 001 ). The expression of Smad4 protein was significantly correlated with tumor size( P < 0.05 ), lymph node metastasis ( P < 0. 001 ), T stage ( P < 0. 001 ) and chnical stage ( P < 0.001) ,and the expressions of TGF-βRⅡ and Smad4 proteins were correlated with patients' 5-year survival rate (P<0.05 ,P < 0.01 ). TGF-β1 showed the positive correlation with TGF-βRⅡ and Smad7 (r1= 0.45 ,P <0. 05; r2 = 0.49, P <0. 05), but negative correlation with Smad4 ( r = - 0.21,P < 0.05 ). Conclusion TGF-β1, TGF-βR Ⅱ, Smad4 and Smad7 protein may play an important role in the carcinogenesis of gastric carcinoma,and smad4 is the key in TGF-β pathway. Also, the detection of these proteins expression can be a useful marker for predicting the gas-tile cancer invasion,metastasis and patients' prognosis.     

蜗牛卵液对小鼠S_(180)肉瘤的抑制作用

[目的 ]探讨蜗牛卵液对小鼠S180 肉瘤的抑制作用 .[方法 ]按标准方法给 4 0只小鼠接种S180肉瘤细胞后 ,随机分成 4个组 ,即对照组 :每日灌胃生理盐水 10mL/kg ;实验 1组 :每日灌胃蜗牛卵液1 5 g/kg ;实验 2组 :每日灌胃蜗牛卵液 3 0 g/kg ;实验 3组 :每日灌胃蜗牛卵液 3 8g/kg ;连续 8d后 ,观察肿瘤质量变化及胸腺 (脾脏 )指数 .[结果 ]每日 1 5 ,3 0 ,3 8g/kg的蜗牛卵液对小鼠S180 肉瘤的生长抑制率分别为 38 2 % ,4 0 5 % ,5 4 4 % ,实验 3组的肿瘤抑制率高于对照组 ,两组间有显著性差异 ;实验2组和实验 3组的胸腺 (脾脏 )指数低于对照组 ,与对照组相比较亦有显著性差异 .[结论 ]蜗牛卵液对小鼠S180 肉瘤有抑制作用 .     

子宫颈癌△Np63蛋白表达的临床病理学意义

目的探讨△Np63蛋白表达在子宫颈癌不同组织学类型中的临床病理学意义。方法43例子宫颈上皮内瘤变(cervi-calintraepithelialneoplasia,CIN)(包括15例CIN1,6例CIN2和22例CIN3),21例角化型和33例大细胞非角化型宫颈鳞状细胞癌(鳞癌)、40例腺癌、4例神经内分泌癌、4例腺鳞癌、2例移行细胞癌、2例玻璃样细胞癌和1例腺瘤样基底细胞癌的标本选自韩国高丽大学安岩附属医院和延边妇幼保健医院病理科,应用免疫组化染色方法检测△Np63蛋白在上述病变组织中的表达情况。结果△Np63蛋白在所有子宫颈鳞癌标本中呈阳性表达,而在所有腺癌则为阴性。随着CIN病变级别的增加,△Np63蛋白表达的分布范围也逐渐增多,而且在不同组织学类型的子宫颈癌中,合并鳞状细胞分化(associatedwithsquamousdifferentiationofuterinecervix)的病变区△Np63表达增强,但在腺性分化和神经内分泌分化的区域△Np63则不表达。结论△Np63蛋白检测对区分子宫颈癌组织学类型的具有重要意义,且对子宫颈腺癌的鉴别诊断是一个非常有用的指标。     

BEZ235体内外抑制人乳腺癌细胞系增殖

目的探讨BEZ235体内外抑制乳腺癌细胞的作用。方法选用人三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231及三阳乳腺癌细胞系MCF-7,用MTT检测细胞增殖;用裸鼠荷瘤实验分析乳腺癌细胞系体内增殖;用Western blot法检测PI3K/Akt相关信号通路蛋白的表达。结果 BEZ235对乳腺癌细胞具有明显的增殖抑制作用(P0.01),尤其是对三阴性乳腺MDA-MB-231细胞具有较强的体内外抑制作用(P0.01)。结论 BEZ235可体内外抑制乳腺癌细胞,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路蛋白的磷酸化修饰而实现的。