桔梗配伍对乳腺癌肺转移细胞株的干预作用

目的:观察桔梗配伍对人乳腺癌高肺转移细胞株MDA231-LM2增殖及侵袭的干预作用,并围绕"自激注入"现象从IL-6、IL-8、MMP1、CXCL1角度,探讨其作用机制。方法:采用MTT法及Transwell法观察桔梗配伍即养阴润肺组(桔梗配伍麦冬含药血清)、活血散结组(桔梗配伍莪术含药血清)对MDA231-LM2细胞增殖及侵袭作用的影响;实时荧光定量PCR法检测桔梗配伍两组对MDA231-LM2细胞IL-6、IL-8、MMP1、CXCL1基因表达的影响;ELISA法检测桔梗配伍两组对MDA231-LM2细胞IL-6、IL-8、MMP1、CXCL1蛋白表达的影响。结果:1桔梗配伍对乳腺癌肺转移有不同程度抑制作用;2与对照组比较,养阴润肺组、活血散结组IL-6、IL-8、CXCL1的mRNA及蛋白表达量明显升高,MMP1的mRNA及蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:桔梗配伍对人乳腺癌高肺转移细胞株MDA231-LM2增殖及侵袭有抑制作用,其作用机制可能与调节IL-6、IL-8、MMP1、CXCL1的表达有关。     

蛇床子素、补骨脂素及丹皮酚配伍对乳腺癌MDA-MB-231BO细胞株的体外抑制及TGF-β1基因表达的影响

目的:探讨蛇床子素、补骨脂素及丹皮酚对人乳腺癌高转移MDA-MB-231BO细胞株的体外抑制及侵袭作用的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用均匀设计实验方案进行组方设计;MDA-MB-231BO细胞体外侵袭实验,实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测,观察药物处理后细胞的侵袭情况及对人转化生长因子TGF-β1基因的表达情况。结果:获取蛇床子素、补骨脂素、丹皮酚3个药物的最佳配伍比例为10.00:7.78:6.67;单体组和阳性药物组在体外作用24h后,可以显著抑制MDA-MB-231BO细胞的侵袭(P0.01)。结论:中药单体组蛇床子素、补骨脂素、丹皮酚对乳腺癌MDA-MB-231BO细胞的生长具有抑制作用,有效抑制其侵袭和转移,其机制可能与抑制TGF-β1基因的表达有关。     

桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌肺转移模型小鼠Smad4、Samd7及TGF-β1的影响

目的:观察桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌肺转移模型小鼠Smad4、Samd7及TGF-β1的影响。方法:乳腺癌高转移4T1细胞接种于小鼠第二对乳房脂肪垫建立乳腺癌肺转移模型,随机分组,于接种后第5天开始灌胃给予桔梗及桔梗配伍不同治则中药煎剂,28天后,处死小鼠。通过免疫组化法检测原位瘤及肺转移灶中转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)及相关蛋白Smad4、Smad7的表达。结果:桔梗及其配伍不同治则中药对小鼠原位瘤和肺转移均有明显抑制作用;各药物组原位瘤组织中Smad4表达升高,桔梗与麦冬组升高明显(P<0.05),Smad7表达下降,统计学处理差异不显著;TGF-β1表达明显降低;在肺转移灶中,各给药组Smad4表明显升高,与莪术、麦冬配伍组效果更显著,Smad7表达明显降低,TGF-β1表达在各配伍组明显降低。结论:桔梗及桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌肺转移动物有明显的治疗作用,其机制可能与上调Smad4及下调TGF-β、Smad7蛋白的表达有关。     

桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌肺转移的影响

目的探讨肺经引经药桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌肺转移的影响。方法乳腺癌高转移4T1细胞接种于BALB/c小鼠第二对乳房脂肪垫建立乳腺癌肺转移模型,随机分组,于接种后第5天开始灌胃,给予桔梗及桔梗配伍不同治则中药煎剂28天后,处死小鼠。通过肺转移灶定量分析考察小鼠肺转移情况;通过蛋白质印迹(Western Blot)法检测原位瘤及肺转移灶中转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)及相关蛋白Smad4、Smad7的表达。结果与模型组比较,桔梗及其配伍组显著抑制乳腺癌肺转移动物的瘤重(P0.01),桔梗配伍莪术组效果显著(63.59%),桔梗配伍麦冬组次之(53.25%),桔梗组、桔梗配伍蛇床子组瘤重抑制率分别为42.69%、38.38%。与模型组比较,桔梗及其配伍组动物肺转移灶面积明显减小(P0.01),但各用药组之间无统计学差异(P0.05)。与模型组比较,桔梗组原位瘤中TGFβ1、Smad7蛋白表达降低,但无统计学差异;桔梗配伍不同治则中药组TGFβ1、Smad7蛋白表达显著降低(P0.05);同模型组比较,桔梗及桔梗配伍不同治则中药组动物原位瘤中Smad4蛋白表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,桔梗及桔梗配伍不同治则中药组动物肺转移灶中Smad7蛋白表达降低(P0.05);桔梗配伍不同治则中药组动物肺转移灶中TGFβ1蛋白表达降低(P0.05);桔梗配伍不同治则中药组动物肺转移灶中Smad4蛋白表达升高(P0.01)。结论桔梗及桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌肺转移动物有明显的治疗作用,其机制可能与下调TGFβ1、Smad7蛋白的表达有关。     

乳移平调控前转移微环境抑制乳腺癌肺转移的实验研究

目的观察抗乳腺癌复发转移方剂乳移平对乳腺癌前转移肺微环境的影响,探讨其可能机制。方法动物实验分两部分,第一部分是乳腺癌前转移时间的确定,第二部分是乳移平对前转移微环境的影响。第一部分实验24只BALB/c小鼠,取对数生长期4T1细胞配成细胞悬液,血细胞计数板计数,细胞浓度调至1×106细胞/m L,无菌条件下接种于24只BALB/c小鼠胸壁右侧第四乳头的脂肪垫上,每只0.1 m L。第二部分动物实验60只BALB/c小鼠,采用随机数字表法分成5组,分别为空白组、模型组、乳移平低、中、高剂量组,每组12只。造模方法同上,各组于接种次日开始给药。乳移平低、中、高剂量组给予5.13、10.26及20.52 g/(kg·d)生药量灌饲,每天给药1次,连续14天。空白组和模型组等体积生理盐水灌饲。动物实验第一部分于10、14、18、22天,每次脱颈处死6只,观察肺转移情况。动物实验第二部分观察各组肺组织的镜下形态(光镜)和肺血管超微结构(电镜),测定各组血管的通透性(依文思蓝法),研究乳移平对前转移微环境形成的影响。通过Western blot和Real time PCR法测定乳移平对前转移因子血管生成素(angiogenin,Angpt)2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白介素(Interleukin,IL)-6和IL-1β表达的影响。结果肺转移还未发生的乳腺癌前转移时期的建模时间定为14天。与模型组比较,乳移平中、高剂量组对瘤重、瘤体积都有显著的抑制作用(P0.05,P0.01),乳移平对肿瘤的重量和体积的抑制作用随着乳移平剂量的增加而增加,呈现明显的剂量依赖关系(P0.05,P0.01)。模型组与乳移平低剂量组都有淋巴细胞浸润的发生,而乳移平中、高剂量组光镜结果发现肺组织形态与空白组无区别。肺部的血管网是由连续的、密集的毛细血管组成。空白组肺脏毛细血管结构正常。模型组血管壁不像空白组平整、规则,毛细血管扩张明显。乳移平给药后,血管的损伤情况得到改善,血管形态基本和空白组无异。与空白组比较,模型组肺组织中依文思蓝渗出量明显增加,Angpt2、VEGF、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,乳移平各剂量组依文思蓝的渗出量均显著降低,且中药剂量越高,降低越明显,呈现剂量依赖关系(P0.01),乳移平中剂量组VEGF、乳移平高剂量组Angpt2、VEGF、IL-6、IL-1β的蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01),乳移平中剂量组IL-6蛋白表达降低(P0.01)。结论乳移平对肿瘤的生长和前转移微环境的形成都有很好的调节作用,它可能通过抑制Angpt2、VEGF、IL-6、IL-1β表达、保护脉管系统的完整性、阻碍前转移微环境的形成,最终抑制肺转移的发生。     

乳移平含药血清对乳腺癌4T1细胞增殖和侵袭影响的实验研究

  目的：研究乳移平含药血清对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖与侵袭的影响,并探讨其作用机制。  方法：①制备不同浓度的乳移平含药血清(10%、20%、30%、40%),并以10%、20%、30%、40%空白血清作对照,采用噻唑蓝(MTT)方法测定含药血清对4T1细胞存活率的影响,筛选最佳作用浓度和最佳作用时间。②设空白对照组、TGF-β1对照组、TGF-β1 10%乳移平含药血清组、TGF-β1 20%乳移平含药血清组;除空白对照组外,其他组细胞都用2 mg/L的TGF-β1预处理3 h,再分别选择空白血清或含药血清作用48 h。采用Transwell侵袭实验检测含药血清对TGF-β1预处理的4T1细胞侵袭率的影响;Western blotting及Real-time PCR检测乳移平含药血清对经TGF-β1预处理的4T1细胞Smad4和Smad7表达的影响。  结果：①乳移平含药血清显著抑制4T1细胞的增殖活性;选择10%和20%作用浓度,48 h作用时间用于后续实验。②乳移平含药血清显著抑制TGF-β1诱导的4T1高侵袭能力,并且存在浓度依赖性;Western blotting和Real-time PCR结果显示,乳移平含药血清明显逆转了TGF-β1诱导的Smad4蛋白及mRNA的高表达,但对TGF-β1诱导的Smad7蛋白及mRNA表达量上调没有影响。  结论：乳移平含药血清能够抑制4T1的增殖和侵袭能力,其作用机制可能与调控TGF-β/Smads信号通路相关因子的表达有关。     

蛇床子素配伍补骨脂素对人乳腺癌高骨转移细胞增殖及侵袭的影响

目的:研究蛇床子素配伍补骨脂素对人乳腺癌高骨转移细胞株MDA-MB-231BO增殖与侵袭的影响,并探讨其分子机制。方法:Cell Counting Kit-8（CCK-8）测定蛇床子素、补骨脂素对细胞的毒性大小。根据L₉（3⁴）正交设计表,Transwell侵袭实验筛选最佳配伍浓度。Western blot及real-time PCR检测蛇床子素配伍补骨脂素对Smad2、Smad3、Smad4、Smad7表达的影响。结果:蛇床子素和补骨脂素都能显著抑制细胞的增殖活性,且存在剂量依赖性。150μM的蛇床子素配伍100μM的补骨脂素时细胞侵袭率最低。Western b1ot和real-timePCR结果显示最佳配伍组Smad2、Smad3、Smand4蛋白及mRNA表达量明显降低,Smad7蛋白及mRNA表达量明显增加。结论:蛇床子素和补骨脂素配伍使用对细胞的侵袭抑制作用优于两个单体单用效果。配伍组通过干预TGF-β/Smads信号传导通路的各个环节从而抑制MDA-MB-231BO的增殖与侵袭。     

桔梗皂苷D配伍不同中药有效成分对乳腺癌4T1和MDA-MB-231细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨肺经引经药桔梗的有效成分桔梗皂苷D分别配伍不同治则下中药有效成分麦冬总皂苷、莪术醇、蛇床子素对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响。方法：应用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法确定各成分抑制乳腺癌细胞4T1和MDA-MB-231增殖的有效剂量;采用均匀设计法进行桔梗皂苷D与不同治则下中药有效成分的配伍优化;通过MTT法和Transwell实验比较和验证各优化配伍抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭的作用。结果：逐步回归分析得到桔梗皂苷D加麦冬总皂苷、桔梗皂苷D加蛇床子素、桔梗皂苷D加莪术醇抑制乳腺癌细胞增殖的最佳配伍剂量。验证实验显示,桔梗皂苷D加莪术醇、桔梗皂苷D加蛇床子素优化配伍对4T1和MDA-MB-231细胞增殖的抑制效果明显优于桔梗皂苷D加麦冬总皂苷及各成分单用（P〈0.05或P〈0.01）;对于4T1细胞,桔梗皂苷D加麦冬总皂苷和桔梗皂苷D加蛇床子素优化配伍对细胞侵袭能力的抑制作用优于桔梗皂苷D加莪术醇及各成分单用（P〈0.05或P〈0.01）;对于MDA-MB-231细胞,则以桔梗皂苷D加蛇床子素和桔梗皂苷D加莪术醇对细胞侵袭能力的抑制作用最强,优于桔梗皂苷D加麦冬总皂苷（P〈0.01）。结论：桔梗皂苷D与不同治则中药有效成分优化配伍抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭效果明确,不同的桔梗皂苷D配伍对效应指标的作用存在一定的差异。