3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立、优化及分子指标鉴定

[摘要]：目的：探讨3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）模型建立条件、优化及分子指标鉴定。方法：采用3-异丁基-1-黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX）,地塞米松（Dexamethason,DEX）和胰岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定。采用1μmol·L-1DEX诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞,1μmol·L-1DEX联合10μmol·L-1罗格列酮（Rosiglitazone,ROS）联合诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD）检测不同时间点细胞培养液葡萄糖含量,确认IR-3T3-L1细胞模型最佳诱导时间和IR状态稳定性;甘油磷酸氧化酶法(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)测定胞内甘油三酯（Triglyceride,TG）含量。荧光定量qPCR和Western blot法分别检测脂联素（Adiponectin,ADPN）和葡萄糖转运蛋白-4（Glucose transporter 4,GLUT4）mRNA基因和蛋白质表达水平。结果：DEX作用3T3-L1脂肪细胞96h葡萄糖消耗差值比例最大,为46.84%;DEX ROS作用72h葡萄糖消耗差值比例最大,为22.77%,可确认为两种IR模型建立的最佳时间点,其后可保持稳定IR状态至少60h。两类IR细胞中的GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平较正常组显著降低（P<0.01）,相较于DEX ROS组,DEX单独诱导细胞内GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平降低更显著。结论：DEX组和DEX ROS组两种诱导方法抑制GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平来建立稳定可靠的IR-3T3-L1细胞模型,但DEX单独诱导IR模型方法更稳定可能与更有效抑制了ADPN mRNA和蛋白表达导致葡萄糖消耗下降更为显著。     

红景天苷通过激活3T3-L1前脂肪细胞Nrf2/HO-1信号通路及下调脂肪生成转录因子表达来抑制脂肪生成

目的:研究红景天苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及Nrf2/HO-1信号通路和脂肪生成转录因子的影响。方法:按文献介绍的方法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,然后分别用红景天苷(50和100μM)、吡格列酮(100μM)及红景天苷(100μM)与HO-1抑制剂ZnPP(3μM)共同处理3T3-L1细胞7天,分别于2、5、7天后进行胞内脂质含量测定,7天后进行胞内TG含量检测,实时定量PCR检测细胞中PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、aP2、adiponectin mRNA表达, Western blot检测胞浆和胞核中Nrf2及细胞中HO-1蛋白表达。结果:红景天苷(50和100μM)可显著抑制胞内脂质的积聚和TG生成,降低脂肪生成相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、aP2、adiponectin mRNA表达,抑制Nrf2核易位,上调HO-1蛋白表达,且量效关系明显;当与ZnPP联用后,上述作用被明显削弱。结论:红景天苷对3T3-L1前脂肪细胞分化和脂肪生成具有显著的抑制作用,其作用机制可能与其激活Nrf2/HO-1信号通路及抑制PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、aP2、adiponectin等脂肪生成转录因子的表达有关。     

小檗碱对白介素-6诱导胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响

目的:观察小檗碱对白介素-6(IL-6)诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响。方法:选用IL-6诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型。以20μg·L-1IL-6培养48 h,将3T3-L1脂肪细胞随机分为正常对照组、模型组、吡格列酮组(50μmol.L-1)和小檗碱高、中、低剂量组(10,20,50μmol.L-1),以葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖消耗量,观察小檗碱对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响,鉴定IR模型;采用实时荧光定量PCR技术测定脂肪细胞脂联素基因mRNA水平。结果:模型组葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平与正常对照组比较,均显著降低(P<0.05);小檗碱高、中、低剂量组及吡格列酮组均能显著增加葡萄糖消耗量及脂联素基因表达水平(P<0.05)。结论:小檗碱可增加白介素-6诱导胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞脂联素基因mRNA的表达,改善胰岛素抵抗状态。     

小檗碱对3T3-L1脂肪细胞增殖及糖代谢的影响

目的:研究小檗碱对脂肪细胞增殖、糖代谢及地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA表达的影响。方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞的增殖情况,检测小檗碱对3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞培养基中葡萄糖浓度的影响;采用地塞米松诱导胰岛素抵抗细胞模型,分别给予罗格列酮、小檗碱进行干预,用RT-PCR检测GLUT4 mRNA的表达。结果:在DMEM高糖培养基中,小檗碱可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,抑制3T3-L1脂肪细胞增殖,作用呈明显量效关系;使3T3-L1前脂肪细胞及3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量增加,呈明显量效关系,同时小檗碱组GLUT4 mRNA的表达升高。结论:小檗碱可以显著促进前脂肪细胞的增殖,抑制脂肪细胞的增殖;同时具有显著的降糖作用。且小檗碱能上调脂肪细胞GLUT4 mRNA的表达,这提示小檗碱改善胰岛素抵抗的作用机制可能与罗格列酮不同。     

小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响

目的:探讨小檗碱和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响。方法:检测分别经小檗碱及胰岛素处理后3T3 L1脂肪细胞脂联素表达水平改变,以β actin为内对照,半定量法RT PCR测定脂联素mRNA表达。结果:经小檗碱(10μmol·L^-1)干预后3T3 L1脂肪细胞脂联素表达显著增加(P<0.05),加入胰岛素后脂联素的表达受到抑制,高浓度胰岛素有显著抑制作用(P<0.05)。结论:体外实验中,小檗碱使3T3-L1脂肪细胞脂联素的表达增加,而胰岛素可抑制小檗碱增加脂联素表达的作用。     

小檗碱联合人参皂苷Rb1对脂肪细胞炎症信号通路作用

目的:观察小檗碱联合人参皂苷Rb1对脂肪细胞炎症信号通路的影响。方法:将诱导分化成熟的 3T3-L1 脂肪细胞分在肿瘤坏死因子(TNF-α)作用下给予小檗碱、人参皂苷 Rb1、小檗碱和人参皂苷 Rb1合用处理后,观察药物对脂肪细胞炎症信号通路的作用。 结果:基础状态下,与空白对照组相比,Ber组脂肪细胞的TNF-α和IL-6的mRNA表达量降低更明显(P<0.01)。胰岛素抵抗(TNF-α刺激)状态下,与空白对照组比较,Ber组能显著地抑制TNF-α刺激下上调的TNF-α、IL-6的表达(P<0.01),而Rb1仅抑制TNF-α的表达(P<0.01),Ber+Rb1两药合用,与Rb1单用作用类似,仅抑制了TNF-α的表达(P<0.01)。经TNF-α诱导后,加入Ber处理的脂肪细胞,NF-κB和IKK-β 表达水平下调,而加入Rb1处理的脂肪细胞(无论是否+Ber),NF-κB和IKK-β 表达水平上调。 结论:小檗碱和人参皂苷Rb1两者合用对脂肪炎性细胞未能显示出增效作用。     

肿瘤坏死因子-α诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:应用肿瘤坏死因子d(TNF-α)诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨建立可靠胰岛素抵抗(IR)细胞模型的方法.方法:3T3-L1前脂肪细胞经3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,将其与20,10,5μg·L-1TNF-α共孵育,100 nmol·L-1胰岛素作用30 min刺激脂肪细胞糖转运.以葡萄糖氧化酶法测定培养基上清液葡萄糖含量,观察TNF-α对脂肪细胞糖摄取的影响,鉴定IR模型.结果:TNF-α抑制胰岛素诱导前、后的脂肪细胞糖转运,抑制作用呈剂量依赖性,其中20 μg·L-1TNF-α的抑制率分别为79.2％和81.4％(P＜0.05).结论:肿瘤坏死因子α可诱导3T3-L1脂肪细胞产生IR,这种细胞模型简便、可靠.     

益气活血中药配伍对慢性间歇性低氧复合胰岛素抵抗介导的动脉粥样硬化动物模型的干预效应

该文研究益气活血中药配伍对间歇性低氧(CIH)复合胰岛素抵抗(IR)介导的动脉粥样硬化(AS)小鼠模型的干预效应,并观察SREBP-1c相关信号分子在其中的作用。实验采用高脂饮食诱导联合STZ注射法建立IR的Apo E-/-小鼠模型,以低氧动物饲养仪处理IR-ApoE-/-小鼠模型,每日处理8 h,连续处理8周,以建立CIH+IR-ApoE-/-小鼠模型。模型小鼠随机分为7组:常氧对照组(NC)、模型组(CIH)、SREBPs抑制剂组(betulin)、阿托伐他汀组(WM)、益气活血中药低剂量组(TCML)、益气活血中药中剂量组(TCM-M)、益气活血中药高剂量组(TCM-H),同时常规饲养的C57BL/6J小鼠10只作为空白对照组(Con)。观察益气活血中药配伍(人参皂苷、川芎嗪)对模型小鼠IR,血脂水平,炎症反应,氧化应激及SREBP-1c相关信号分子的干预效应。结果显示,TCM-H组血糖低于其他实验组(P0.05);betulin组、WM组、TCM-H组HDL-C高于CIH组(P0.05),TCM-M组、TCM-H组LDL-C低于CIH组(P0.05);CIH组血清CRP水平高于其他各组(P0.05);TCM-H组SOD水平较CIH组升高(P0.05);NC组、CIH组小鼠主动脉可见明显的AS斑块,betulin组、WM组、TCM-H组AS斑块减小;主动脉降段,WM组及TCM-H组AS斑块较CIH组减少且面积较小;TCM-H组主动脉、骨骼肌SREBP-1c和FAS的mRNA及蛋白表达水平均较CIH组降低(P0.05);TCM-H组TNF-α和CD106(VCAM-1)蛋白表达水平较CIH组降低(P0.05);TCM-H组主动脉、骨骼肌、肝组织p-IRS-1的蛋白表达水平较CIH组升高(P0.05);TCM-H组主动脉、肝HIF-1α蛋白表达水平较CIH组降低(P0.05)。TCM-H组血糖低于其他实验组;CIH组HDL-C低于其他各组,TCM-H组LCL-C低于CIH组;CIH组CRP水平高于其他各组;TCM-H组SOD水平高于CIH组;NC组及CIH组AS斑块较其他组明显增多;在主动脉降段,WM组及TCMH组AS斑块较CIH组减少且面积较小;在主动脉及骨骼肌,TCM-H组SREBP-1c和FAS的mRNA及蛋白表达水平均较CIH组降低;TCM-H组TNF-α和CD106(VCAM-1)蛋白表达水平较CIH组降低;在主动脉、骨骼肌及肝组织,TCM-H组p-IRS-1的蛋白表达水平较CIH组升高;在主动脉及肝组织,TCM-H组HIF-1α蛋白表达水平较CIH组降低。该研究表明,人参皂苷、TMP配伍能够一定程度改善间歇性低氧复合IR的动脉粥样硬化模型IR及血脂水平,降低炎症反应和氧化应激程度,并最终抑制AS进展,其机制可能与抑制SREBP-1c相关信号分子的表达水平有关。     

人参皂苷Rb1通过上调脂肪组织葡萄糖转运体促进葡萄糖消耗

人参的主要活性成分人参皂苷Rb1(gisenoside Rb1,Rb1)能够激活胰岛素信号通路,促进脂肪细胞葡萄糖转运体(glucose transporters,GLUTs)的转位,增加葡萄糖的转运,但是其对GLUTs表达的影响尚不清楚。该研究利用肥胖糖尿病小鼠和体外脂肪细胞实验,主要研究Rb1对脂肪细胞GLUTs表达以及葡萄糖代谢的影响。在雄性肥胖糖尿病db/db小鼠中,按20 mg·kg-1体重每天腹腔注射Rb1治疗14 d后,Rb1明显降低肥胖糖尿病小鼠的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)(P<0.05,n=5),胰岛素水平和空腹血糖有下降趋势;在糖尿病小鼠附睾脂肪中,Rb1促使GLUT1和GLUT4蛋白表达量以及AKT磷酸化水平上调恢复;体外培养分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中,加入10μmol·L-1Rb1处理24 h后,葡萄糖消耗显著增加(P<0.05,n=4),同时GLUT1和GLUT4的mRNA和蛋白表达量均显著上调(P<0.05,n=3),此外,在3T3-L1脂肪细胞中,Rb1处理3 h后,脂肪细胞的AKT被磷酸化激活。该研究结果表明人参皂苷Rb1不仅能够激活胰岛素信号通路,还能上调葡萄糖转运体的表达,促进葡萄糖的消耗,进一步阐明其改善机体胰岛素抵抗和糖代谢异常的作用机制。     

葛根素改善3T3-L1 脂肪细胞葡萄糖摄取和胰岛素抵抗

目的：探讨葛根素对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）模型葡萄糖利用和IR的影响及其作用机制。方法：诱导分化3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞;用地塞米松诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型。成功建立模型后,将实验分为5组进行,分别为空白组、模型组、葛根素10 mg·L-1组、葛根素100 mg·L-1组、葛根素200 mg·L-1组;其中,空白组不建模,模型组建模但不用药物干预,各葛根素组为在建立模型后,给予不同浓度的葛根素干预。用葛根素干预24小时后,以葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定细胞培养基中葡萄糖浓度,四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimehyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromide, MTT]比色法检测细胞增值活力;然后分别用Real time PCR、Western Blot 方法检测细胞葡萄糖转运蛋白4（glucosetransporter type 4, GLUT4）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）、蛋白激酶B（protein kinaseB, PKB/AKT）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator -activated receptor gamma, PPARγ）mRNA基因和蛋白表达。结果：葛根素干预后,细胞培养基中葡萄糖浓度均较模型组降低（P < 0.01）;GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA水平及蛋白表达较模型组均增加（P < 0.05）。结论：葛根素能增加3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用、改善IR,其作用机制可能与上调P13K、AKT、AMPK、PPARγ基因和蛋白表达,进而增加葡萄糖运转有关。     

黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮质神经细胞凋亡和Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响

目的观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与Caspase-3mRNA及蛋白表达的影响。方法用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型。采用PCR和Western blot技术分别对缺血区皮质Caspase-3 mRNA及蛋白表达情况进行测定。TUNEL染色检测神经元的凋亡情况。结果与脑缺血再灌注组和溶剂对照组相比,黄体酮治疗组大鼠脑部Caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平明显减少(P均0.05),神经元的凋亡数量显著下降(P均0.05)。结论黄体酮能显著减少Caspase-3 mRNA及蛋白表达,抑制神经细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

马齿苋黄酮提取及生物活性研究

目的 研究马齿苋黄酮的抑制脂肪堆积和抗氧化能力.方法 用前脂肪细胞模型及羟基自由基抗氧化模型测定马齿苋黄酮体外影响前脂肪细胞3T3-L1增殖及其清除羟自由基能力.结果 高浓度马齿苋黄酮(>200 μg/ml)极显著抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖.当马齿苋黄酮浓度大于0.061 mg/ml,随浓度增加,其清除羟自由基能力增强;浓度为0.119 mg/ml时清除率达50%,相当于0.130 mg/ml的维生素C溶液.结论 马齿苋黄酮有较强体外清除羟自由基能力,高浓度(>100 μg/ml)时具有显著抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖的能力.     

延胡索乙素对大鼠低O_2高CO_2肺动脉高压及FAK、ERK和Caspase 3表达的影响

目的:研究延胡索乙素对慢性低O2高CO2性肺动脉高压的作用及粘着酶激酶FAK、ERK和凋亡蛋白酶Caspase 3表达的影响。方法:常压低O2高CO2舱制备低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型,延胡索乙素ip 40mg/kg。右心导管法测肺动脉压;光镜下测定肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、肺细小动脉中膜厚度(PAMT);免疫组化法检测细胞外信号调节激酶(ERK2)、Ⅰ型胶原的表达量;原位杂交法检测FAKmRNA、Caspase3 mRNA的表达量。结果:延胡索乙素组mPAP显著低于低O2高CO2组;延胡索乙素组的WT/TA、PAMT也显著低于低O2高CO2组;延胡索乙素组肺细小动脉ERK2、I型胶原的相对含量、FAKm-RNA、Caspase3 mRNA的表达均显著低于低O2高CO2组。结论:延胡索乙素能明显抑制肺动脉高压的形成,延缓肺动脉血管的重构,抑制FAK表达、增强Caspase3的表达可能是其重要的机制之一。     

梓醇与小檗碱及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的影响

目的观察梓醇与小檗碱及其配伍对地塞米松诱导的胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗、转运及这一过程中过氧化物体增殖物激活受体(PPAR-γ)mRNA表达的影响。方法采用地塞米松诱导胰岛素抵抗细胞模型,分别给予罗格列酮、小檗碱、梓醇、梓醇 小檗碱进行干预,以葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,以RT-PCR检测PPAR-γmRNA的表达。结果含或不含10nmol/L胰岛素的条件下,梓醇、小檗碱及其配伍组胰岛素抵抗脂肪细胞的葡萄糖消耗量和转运率较模型组明显改善(P<0.05、0.01),配伍组效应优于梓醇、小檗碱单药组(P<0.05、0.01);且小檗碱组及配伍组PPAR-γmR-NA的表达降低(P<0.05、0.01)。结论梓醇、小檗碱均能增加葡萄糖消耗和转运,改善胰岛素抵抗,其作用不依赖胰岛素的存在,且小檗碱及两药配伍还能下调脂肪细胞PPAR-γmRNA的表达水平,提示梓醇、小檗碱改善胰岛素抵抗的作用机制可能与罗格列酮不同。     

红芪多糖3中4个组分的单糖组成分析及多糖含量测定

 目的 对红芪多糖3（HPS-3）进行分离纯化,研究红芪多糖3中4个组分单糖组成以及多糖含量测定。方法 红芪多糖经水提醇沉,Sevag法脱蛋白,H₂O₂脱色,醇沉,透析,再经DEAE-cellulose 52和 Sephadex G-100柱色谱纯化,得到HPS-3-A、HPS-3-B、HPS-3-C、HPS-3-D 4个组分;HPGPC法分析, 4个组分均为单一组分; TLC法与GC法分析4个组分单糖组成;改良苯酚硫酸法测定4个组分中多糖含量。结果 HPS-3-A主要由葡萄糖组成,多糖含量为99.2%;而HPS-3-B、HPS-3-C、HPS-3-D主要由阿拉伯糖与半乳糖组成。多糖含量依次为96.5%,95.3%,95.2%。结论 本实验为红芪多糖3构效关系研究提供基础。
     

通幽汤及其拆方对食管鳞癌细胞的抑制作用及其机理研究

目的：从细胞凋亡信号通路角度揭示通幽汤对食管鳞癌细胞抑制作用的机理,确定从功效分类的有效药物群。方法：体外培养食管鳞癌EC109细胞,通幽汤全方及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定细胞存活率,免疫印迹法观察Caspase-3凋亡信号通路蛋白表达变化情况。结果：全方组IC50=798μg/mL,活血行气拆方组IC50=1413μg/mL,滋阴养血拆方组IC50=1709μg/mL,3组方均可促进p53、cyto-C、Caspase-3、Bax凋亡蛋白表达,作用强弱依次为全方〉活血行气拆方〉滋阴养血拆方。结论：通幽汤抑制食管鳞癌细胞增殖与促Caspase-3凋亡信号通路有关,其药效在于活血行气、滋阴养血类药物的协同作用。     

孔石莼抗病毒蛋白多糖的提取分离及抗柯萨奇病毒B3活性

目的 从绿藻孔石莼中分离具有抗病毒活性蛋白多糖提取物. 方法 新鲜孔石莼经pH 7.0的磷酸盐缓冲液提取和硫酸铵沉淀得到粗提取物,大孔树脂层析分离得到蛋白多糖.经紫外扫描、高温高压处理(121℃,15min)和糖苷酶水解测定提取物的性质.MTT法检测蛋白多糖对Hela细胞的毒性,细胞病变法(CPE)检测蛋白对柯萨奇病毒B3(CVB3)引起的细胞病变抑制作用.通过样品对细胞的保护作用、对CVB3增殖的影响、对CVB3感染细胞的综合作用,初步研究了样品抗病毒作用的机理.结果 从孔石莼中提取了蛋白多糖,得率为0.5%.毒性试验结果表明,孔石莼蛋白多糖对HeLa细胞的半数中毒浓度TC50大于8mg·ml-1.孔石莼蛋白多糖具有显著的抗CVB3活性,通过试验测得孔石莼蛋白多糖对CVB3主要是预防作用和直接杀灭作用,其IC50为3.7μg·ml-1.结论 从孔石莼中分离到具有抗病毒活性的蛋白多糖,具有很好的抗CVB3活性.     

宫颈CIN免疫相关转录因子T-bet、GATA3、Foxp3的表达

目的 研究各级宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中T-bet、GATA3、Foxp3的表达.方法 将宫颈组织按病变程度分为宫颈炎症组、CIN Ⅰ级组、CIN Ⅱ级组和CIN Ⅲ级组,组织包埋、切片后进行镜下观察及免疫组化检测.结果 各组病变组织中T淋巴细胞数量无显著性差异(P>0.05);T-bet阳性细胞数量随病变进展增多...     

毛喉鞘蕊花中的萜类成分

目的：研究毛喉鞘蕊花（Coleus forskohlii）全草中萜类成分。方法：利用多种色谱法对毛喉鞘蕊花乙醇提取物进行成分分离，运用多种光谱技术确定化合物结构。结果：分得6个化合物，其中2个属8，13-环氧-14-烯-11-酮半日花烷型二萜，分别为3-羟基佛司可林（1）、3-羟基异佛司可林（2）；2个齐墩果烷型三萜，分别为2d，3p，19α-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸（3）、2α，3β，19α，23-四羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸（4）；2个乌索烷型三萜，分别为2α，3α，19α-三羟基乌索烷．12-烯-28-酸（5）、2α，3α，19α，23-四羟基乌索烷-12-烯-28-酸（6）。结论：化合物1—2为新天然产物，首次对它们的碳氢信号进行归属；化合物3—6均为首次从该种植物中分得。     

Inhibition of preadipocyte differentiation and lipid accumulation by Orengedokuto treatment of 3T3-L1 cultures

Obesity is a major cause of metabolic syndrome and is due to an increase in the number and hypertrophy of adipocytes. Accordingly, inhibition of the differentiation and proliferation of adipocytes may be used in the treatment and prevention of metabolic syndrome. This study investigated the effects of 50 commonly used Kampo medicines on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes to search for a drug with an antiobesity effect. Kampo medicines were screened, and the strongest differentiation-inhibitory effect was noted with Orengedokuto. To explore the active ingredients in Orengedokuto, the effects of four crude drug components of Orengedokuto were investigated. It was found that the differentiation-inhibitory effect of Orengedokuto was accounted for by Coptidis rhizome and Phellodendri cortex. Furthermore, berberine, a principal ingredient common to Coptidis rhizome and Phellodendri cortex, showed a differentiation-inhibitory effect. The effect of berberine involves an inhibition of the mRNA and protein expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) and CCAAT/enhancer binding protein α (C/EBPα). Moreover, berberine inhibited lipid accumulation in adipocytes. These findings suggest that an antiobesity effect could be a new indication for Orengedokuto and that its active ingredient is berberine, with a mechanism involving the inhibition of PPARγ and C/EBPα expression.