一起CoxA_(l6)引起某幼儿园手足口病暴发调查

[目的]分析CoxAl6引起某幼儿园手足口病暴发的特征。[方法]对幼儿园儿童进行流行病学和临床特征的调查;并采集典型病例粪便、急性期与恢复期血液标本,密切接触者粪便标本进行肠道病毒分离或/和PCR检测,血清中和抗体测定。[结果]发病25例,罹患率9.8%,用RD和Vero细胞自8份患儿和35份密切接触者粪便标本中各分离到3株和9株病毒,对3例病例及10例密切接触者中分离株,诊断为柯萨奇病毒A16型,而EV 71型均为阴性。血清中和抗体测定恢复期中和抗体滴度呈4倍及以上增长。[结论]CoxAl6肠道病毒是导致本次幼儿园手足口病暴发的病原,今后应加强肠道病毒引起的手足口病的监测和防治研究工作。     

2009年山东省手足口病病例的病原学检测分析

目的了解2009年引起山东省手足口病（HFMD）的病原体型别及分布特征。方法采集HFMD临床诊断病例的粪便、咽拭子、疱疹液等标本,应用肠道通用引物和EV71、CoxA16特异性引物对其进行RT-PCR鉴定;使用RD、Hep-2细胞对部分肠道通用引物阳性的粪便标本进行病毒分离。结果共收集1604份HFMD临床诊断病例标本,实验室检测阳性标本990份,其中EV71阳性标本589份,CoxA16阳性标本29份,EV71和CoxA16同为阳性标本2份,EV71和CoxA16的检出率分别为36.72%和1.81%。从80份肠道通用引物阳性的粪便标本中分离出肠道病毒32株,其中EV71型病毒23株,CoxA16型病毒4株。结论引起山东省HFMD的病原体主要为EV71型肠道病毒,EV71感染占EV阳性标本数的59.50%。全省17个地市均有EV71感染的HFMD病例检出。     

湖南省197例手足口病临床诊断病例的病原学检测结果

目的明确2008年引起湖南省手足口病的病原体型别及分布特征，为制定预防控制措施提供实验依据。方法采集手足口病临床诊断病例的疱疹液、咽拭子、肛拭子、粪便等样本，用RD、Hep-2细胞对粪便样本进行病毒分离，应用RT-PCR方法检测原始样本和分离阳性毒株中的EV、EV71和CoxA16病毒的核酸。结果共收集197例手足口病临床诊断病例的样本，实验室检测阳性的105例，其中EV71阳性的72例，CoxA16阳性的14例，EV阳性、EV71和CoxA16阴性的19例。同时，从59份粪便样本中分离出肠道病毒10株，其中EV71型病毒7株，CoxA16型病毒3株。结论引起湖南省手足口病的病原体主要为EV71型肠道病毒，EV71感染的病例占阳性病例数的68．57％。全省除株洲、湘西自治州未检测到EV71感染的手足口病病例外，其余市（州）均有检出。     

ECHO30所致无菌性脑膜炎暴发的病原学检测分析

[目的]明确引起无菌性脑膜炎暴发的病原体，从病原学角度探讨引起暴发的原因。[方法]按照WHO规定的标准方法进行病毒的分离、型别鉴定以及血清中和抗体试验；采用传统的技术测定分离株的生物学特性。[结果]43份大便标本共分离19株肠道病毒阳性株，阳性率44.12％，型别鉴定均为ECHO30；分离株具备强毒株的“D”特征；76.92％双份血清抗体呈4倍升高。[结论]2003年济南章丘市无菌性脑膜炎暴发的病原体为具备强毒株特征的ECHO30。     

2008—2009年广东省手足口病病毒分离和鉴定

目的了解广东省手足口病病原特征,为科学防治手足口病提供依据。方法采集2008—2009年广东省疑似手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液、脑脊液等标本,对其中肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离;分离株用肠道病毒通用引物、EV71引物、CoxA16引物进行RT-PCR鉴定。结果对892份肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离,共分离出毒株484株,分离率为54.26%;其中EV71型302株,占62.40%;CoxA16型143株,占29.55%。2008年和2009年不同类型标本的病毒分离率差异均有统计学意义(均P0.01),2年均以粪便标本的分离率最高,分别为70.79%(126/178)和73.89%(232/314);不同类型病例的病毒分离率之间差异无统计学意义(P0.05),2年死亡和重症病例均以EV71型为主。结论 2008—2009年广东省手足口病疫情主要由EV71和CoxA16引起,今后应加强对多种病原及其变异情况的监测。     

1起幼儿园手足口病暴发疫情分析

目的寻找幼儿园手足口病暴发的危险因素,为有效控制手足口病疫情提供依据。方法制定病例定义开展病例搜索,病例定义：2010年2月24日至3月18日,某幼儿园中儿童手或足出现斑丘疹或疱疹者或口腔黏膜出现疱疹者i病例搜索由调查者在幼儿园所有班级中进行,并开展现场问卷调查和病例对照研究,病例组选取全部病例,对照组选自病例所在班级未发病者;采集病例的粪便或咽拭子样本。采用Real—time荧光PCR方法检测肠道病毒（EV）、肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A16（CoxA16）核酸。结果共搜索到24例病例,罹患率为6．9％（24／346）。首例病例于2月26日发病,末例病例于3月9日发病,首例病例发病后出现2个发病高峰,分别为3月2日和3月6日,每个发病高峰间隔4d,每个高峰间隔为1代病例,共有3代病例。病例对照研究的结果显示,开学前混班上课可能是手足口病暴发的危险因素（OR=2．8,95％CI为1．02～7．72）。采集6份病例粪便样本中检出6份EV核酸阳性,3份CoxA16核酸阳性;5份咽拭子中检出3份EV核酸阳性。结论开学前混班上课儿童密切接触是幼儿园手足口病暴发的危险因素;停课等措施对控制疫情有明显效果。     

1起由CV-A6型肠道病毒引起的手足口病疫情的快速鉴定与分析

目的运用分子生物学方法,对2013年5月河源市1所幼儿园发生的1起由CV-A6型肠道病毒引起的手足口病聚集性疫情进行肠道病毒型别快速鉴定。方法采集该起手足口病聚集性疫情的病例及密切接触者的粪便或咽拭子标本,运用荧光定量PCR方法进行总肠道病毒、EV-A71、CV-A16和CV-A6检测,并结合半巢式PCR方法进行肠道病毒VP1序列扩增,通过对目的条带序列测定及分析进行肠道病毒分型鉴定。结果经荧光定量PCR检测,26例病例35份标本中共有25例34份标本检出总肠道病毒阳性,38名密切接触者38份标本中有11人11份标本检出阳性,肠道病毒阳性率分别为96.15%和28.95%,其中分别有25例病例和7名密切接触者CV-A6阳性,阳性率分别为96.15%和18.42%,全部标本EV-A71和CV-A16检测阴性。7例病例和3名密切接触者的10份标本半巢式PCR扩增阳性,测序结果显示VP1序列均属于CV-A6,且核苷酸同源性为100.0%。结论广东省河源市此次发生于幼儿园的手足口病疫情由肠道病毒CV-A6型引起;荧光定量PCR与半巢式PCR扩增肠道病毒VP1序列相结合的方法有利于对引起手足口病的CV-A6型肠道病毒进行快速及准确鉴定。     

一起由3型腺病毒引起的咽结膜热病原学研究

目的　探讨2 0 0 4年7月上旬广州市某幼儿园暴发的一起咽结膜热的病原学。方法　采集急性咽结膜热患儿急性期眼或咽拭子标本用Hep 2细胞进行病毒分离,并对原始标本及病毒分离物使用PCR方法及序列测定进行检测鉴定。用分离鉴定的毒株作为抗原,测定7例患儿及2名健康儿童(阴性对照)双份血清中病毒的中和抗体。结果　2 2份患儿的咽拭子和眼拭子标本用PCR测定显示12份为腺病毒阳性,2 2份标本中只分离出9株毒株,经鉴定所有病毒株均为3型腺病毒,且与朝鲜分离的3型腺病毒同源性高达97%。以分离到的1株毒株与7例患儿自身急性期和恢复期血清的中和试验显示恢复期中和抗体较急性期有4倍或4倍以上增长,2例阴性对照中和抗体无增长。结论　该起急性咽结膜热暴发是由3型腺病毒引起的     

青海省手足口病实验室监测结果分析

[目的]了解2008年青海省手足口病(HFMD)的主要致病病原体及基因特征和儿童人肠道病毒71型(HEV71)的抗体水平及自然感染状况。[方法]用RT-PCR进行病毒核酸检测,病毒核酸阳性标本进行病毒分离,阳性分离株病毒进行肠道病毒血清型别的分子定型。对分离到的HEV71阳性分离株进行VP1编码区基因扩增,核苷酸序列测定和同源进化分析。对181名1~6岁儿童血清标本,用中和试验检测HEV71中和抗体,并对检测结果进行统计学分析。[结果]517份标本经RT-PCR检测,HEV71核酸阳性50例、CoxA16核酸阳性13例,阳性率为12.2%。分离到45株病毒,其中HEV7130株(占66.7%),是主要病原体。经VP1区核苷酸序列测定后,它们在VP1区核苷酸水平和氨基酸水平上同源性分别在95.2%~100.0%和96.6%~100%之间,与1998年以来在我国分离的HEV71在核苷酸和氨基酸水平上的同源性都较高。与HEV71代表株构建的亲缘进化树中显示,青海省HEV71分离株属于C4基因亚型C4a进化分支。181名1~6岁儿童中HEV71中和抗体阳性率为37.6%,HEV71中和抗体几何平均滴度(GMT)水平为1︰16.12。随着年龄的增大,抗体阳性率及GMT升高,各年龄组抗体阳性率、GMT差异有统计学意义(χ2=41.89,P﹤0.05;r=0.95,P﹤0.05)。[结论]青海省2008年HFMD主要病原为HEV71,其基因型为C4基因型中的C4a进化分支,并且存在多个传播链。1~6岁儿童尤其是≤3岁儿童HEV71中和抗体阳性率低,是HEV71导致HFMD的易感者,是目前手足口病防控的重点人群,加强对HEV71的分子流行病学和血清流行病学监测,对预防和控制HFMD暴发具有重要意义。     

邹城市1起发生在幼儿园的手足口病暴发

[目的]了解托幼机构手足口病的发病特点,为指导托幼机构手足口病的防控工作提供依据。[方法]对2010年4月发生在邹城市千泉街道一家民办幼儿园的手足口病暴发疫情调查情况进行分析。[结果]2010年4月8~17日,该幼儿园累计发生手足口病病例19例,罹患率为24.36%,无死亡病例。采集病例粪便标本9份,E病毒核酸均阳性,CVA16病毒核酸阳性的8份。[结论]这是一起由CVA 16感染引起的手足口病暴发疫情。     

2008年莱芜市钢城区某幼儿园手足口病暴发的调查

[目的]分析1起手足口病暴发的特点和原因,为手足口病防控提供科学依据。[方法]2008年10月23日至11月7日对钢城区某幼儿园的手足口病病例填写个案调查表,采集典型病例标本进行实验室病毒分离,同时采取疫情控制措施。[结果]此次手足口病波及该幼儿园10个班,发病26例,罹患率为6.67%。年龄2~5岁,患儿多与手足口病病人有接触史且有典型的临床症状,2例典型患者粪便标本分离到肠道病毒71型(EV 71)。[结论]早期首发病例、轻病例未及时采取防控措施,后期未及时采取停课关园措施是造成此次手足口病暴发的主要原因。     

19份手足口病临床标本的病原学分离与鉴定

目的：为探索手足口病的病原并为该病的防治提供科学依据,对本省徐州地区采集的19份手足口病临床标本进行病原学分离与鉴定。方法：采集的患者咽拭子（6份）和肛拭子（13份）标本,接种Hep-2细胞进行病毒分离,经培养3代,对有明显致细胞病变效应并能连续传代的毒株,用肠道病毒通用引物real-time-RT-PCR方法鉴定确认为肠道病毒后,用肠道病毒分子分型引物（E187/E222）对肠道病毒VP1区进行扩增,将扩增产物测序获得的序列与GeneBank中肠道病毒核苷酸序列进行比对,确定毒株血清型别。结果：19份标本中分离到9株病毒,均为肠道病毒。对其VP1区部分核苷酸序列测定和比较分析后,鉴定出其中有6株为CoxB5,1株为CoxB3,2株为Echo6。结论：虽然肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CoxA16）是引起手足口病暴发流行的主要病原,但引起手足口病的肠道病毒存在多种血清型,CoxB5、CoxB3和Echo6等均能引起手足口病。因此,对手足口病的病原学检测,除EV71和CoxA16外,不能忽视对其他肠道病毒的病原学检测和鉴定。     

克拉玛依市153例手足口病病例病原学分析

[目的]了解克拉玛依市手足口病病原类型及流行规律,为防治工作提供科学依据。[方法]对克拉玛依市2008～2010年报告的部分手足口病(HFMD)病例采集粪便标本进行病原学检测,医疗机构和基层疾控机构负责病例标本的采集和送检,克拉玛依市疾病预防控制中心实验室将送检标本处理后,用RT-PCR方法对粪便标本进行肠道病毒核酸检测。[结果]2008～2010年合计检测手足口病病例粪便标本153份,肠道病毒通用阳性率为52.29%,CoxA16阳性率为27.45%,EV71阳性率为20.92%,其他肠道病毒阳性率为3.92%。不同年份肠道病毒阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。不同单位采集标本阳性率的差异有统计学意义(P<0.01)。2008～2009年以EV71毒株(63.89%)占优,2010年以CoxA16毒株(77.27%)占优;医疗机构采集标本的阳性检出率(67.35%)高于疾控机构(45.19%)。[结论]引起克拉玛依市手足口病的病原体主要是CoxA16和EV71,流行模式为2种毒株在不同年份同时存在、交替流行。     

2010～2011年玉林市手足口病病原学检测结果分析

[目的]掌握玉林市手足口病病例的病原学特点,为有效控制疫情提供科学依据。[方法]对2010～2011年玉林市手足口病病原学检测结果进行分析。[结果]2010～2011年合计检测手足口病病例标本753份,肠道病毒核酸阳性的633份,阳性检出率为84.06%。其中,2010年336份标本的阳性率为94.35%,2011年417份标本的阳性率为75.78%。2年中,EV71核酸阳性率为44.62%,CoxA16核酸阳性率为18.46%,其他肠道病毒核酸阳性率为20.98%。2010年EV71、CoxA16、其他肠道病毒核酸阳性率分别为87.74%、4.46%、7.14%,2011年EV71、CoxA16、其他肠道病毒核酸阳性率分别为13.51%、29.74%、32.13%。[结论]2010年玉林市手足口病病原主要是EV71,2011年主要为CoxA16和其他肠道病毒。     

一起急性呼吸道感染症暴发疫情的病原学和流行病学研究

目的：对一起急性呼吸道感染症暴发疫情进行流行病学和病原学研究，以明确诊断，控制疫情。方法：通过流行病学调查描述疫情流行特征；采用病例对照研究分析流行因素；患者的咽拭子标本中提取核酸；PCR法检测病毒特异性基因片段；组织培养法（Hep-2细胞）分离病毒；电子显微镜观察病毒形态；型特异血清及型特异引物鉴定分离毒株型别；中和实验检测患者急性期和恢复期血清抗体效价。结果：疫情报告病例871例，波及10个乡镇，主要为在校中小学及幼儿园学生（占94．37oA），具有班级聚集性。病例对照研究显示危险因素为与病人的接触、与鸡接触及家庭内共用毛巾等。35份咽拭子标本分离出15株病毒，分离阳性率42．9％。分离病毒经鉴定为腺病毒3型。PCR法检测腺病毒DNA，112份咽拭子标本中68份阳性，阳性率60．7％。18例双份血清中13例中和效价呈4倍以上增长或转阳，阳性率72．2％。对病毒进行全基因序列测定，确定为腺病毒3型。结论：本起急性呼吸道感染症暴发疫情由腺病毒3型引起，传播途径以呼吸道传播和密切接触为主。     

德阳市2010年手足口病监测结果分析

[目的]了解2010年德阳市手足口病患者中肠道病毒的主要血清型及EV71毒株的基因型别,为德阳市手足口病的预防控制提供科学依据。[方法]采用实时荧光PCR方法对四川省德阳市手足口病疑似病例的68份咽拭子或疱疹液标本进行肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)型和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)的病毒核酸检测。并对2份EV71阳性标本进行VP1区核苷酸序列测序和进化树分析。[结果]68份标本中,CoxA16阳性率41.18%(28/68),EV71阳性率17.65%(12/68),其他肠道病毒阳性率为7.35%(5/68)。2份EV71毒株VP1区的核苷酸序列进化树分析,证实均属C4基因亚型。[结论]2010年德阳市手足口病以CoxA16感染为主,EV71及其他非CoxA16、非EV71肠道病毒并存。2份德阳EV71毒株经VP1区测序证实为C4基因亚型,与中国内地流行株基因亚型一致。     

上海市手足口病患者肠道病毒71型的分离

2 0 0 0年 10～ 11月 ,上海市杨浦区某幼儿园发生手足口病流行 ,采集了 2 5例粪便标本分离病毒 ,用RD细胞分离出肠道病毒 (EV) ,经用标准血清鉴定为EV71型 13株 ,埃可病毒 13型 (ECHO13 ) 1株 ,EV71型分离率为 5 2 %。病人血清与EV71型分离株的中和抗体滴度较高 ,多数 >1∶2 5 6 ,而与柯萨奇病毒A组 16型 (Cox .A16)的中和试验滴度多数 <1∶2。 5例双份血清有 1例EV71型抗体呈 4倍升高 ,而Cox .A16型均无 4倍升高 ,表明本次流行由EV71型引起。     

2002年福建省急性出血性结膜炎病原分离和鉴定

[目的]查明2002年我省急性出血性结膜炎(AHC)流行的病原。[方法]采集福州和漳州市临床诊断为AHC的患者眼拭子57份、双份血清7份。分别用Hep-2和Vero细胞对标本进行病原分离；用免疫血清微量中和试验对分离出的毒株进行鉴定；用诊断血清鉴定的4株病毒，对7例患者的双份血清进行中和抗体效价测定。[结果]从57份眼拭子标本中分离出47株(阳性率82．5％)；经诊断血清微量中和试验鉴定，均为柯萨奇病毒24变异株(CA24v)；7例患者双份血清经微量中和试验测定，中和抗体均呈≥4倍增长。[结论]CA24v是引起2002年我省AHC流行的病原。     

咽拭子标本对手足口病疫情监测的应用研究

[目的]明确致手足口病肠道病毒的主要型别,并对咽拭子标本的核酸检测结果进行评价.[方法]2007年收集青岛市5家医院手足口病患者的咽拭子152份,提取病毒RNA. 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对病毒RNA进行肠道通用引物及肠道病毒71(EV71)型和柯萨奇病毒16型(CoxA16)特异性引物的检测.[结果]152份咽拭子标本中,83份标本肠道通用引物扩增阳性,阳性率为54.61%.其中,EV71阳性10份,占肠道病毒的12.05%(10/83);CoxA16阳性者42份,占肠道病毒的50.60%(42/83).[结论]手足口病疫情的病原主要以EV71和CoxA16为主,咽拭子标本在手足口病疫情的监测中具有方便、快捷的优点,而且检出率较高.     

重庆市2009年手足口病病原学分析

[目的]对重庆市2009年手足口病进行病原学调查,了解重庆市肠道病毒的感染情况。[方法]采用实时荧光定量PCR方法(real-timePCR),对临床诊断为手足口病的261例患者进行肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)的核酸检测。[结果]261例患者中,158例EV71、49例CoxA16、2例其他肠道病毒;4月份为疫情高峰期,10～11月出现一个次高峰。[结论]2009年重庆市儿童手足口病以EV71为主,CoxA16也有散发病例。