丁酸钠通过信号转导和转录激活因子1抑制肝癌细胞吲哚胺2,3-双加氧酶的表达

目的 观察丁酸钠(NaB)对干扰素-γ(IFN-γ)诱导的人肝癌细胞HepG2内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响.方法 利用低浓度(10、20、30、40 mmol/L)的NaB作用于人肝癌细胞HepG2 24 h,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖;利用蛋白印迹法及细胞免疫化学法检测NaB对HepG2细胞内IDO表达的影响;蛋白印迹法检测NaB对IDO基因表达的关键性干扰素应答因子1 (IRF-1)及信号转导和转录激活因子1(STAT1)的影响.结果 低浓度NaB对人肝癌细胞HepG2的增殖具有1％～20％的抑制作用;3 mmol/L的NaB能完全抑制IFN-γ诱导的IDO的表达;这种抑制作用通过抑制STAT-1701位的酪氨酸磷酸化实现.结论 NaB通过抑制STAT1的磷酸化而抑制肝癌细胞HepG2中IDO的表达.     

γ干扰素体外诱导骨髓间充质干细胞的IDO表达及其免疫调节作用

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)体外诱导作用成人骨髓间充质干细胞(MSCs)的吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)的表达及IDO对异基因T淋巴细胞增殖的影响。方法从人骨髓中分离、培养MSCs,观察传代3次以上的细胞形态,应用流式细胞术检测其表面标志,以鉴定其纯度。分别用浓度为0、20、50、100、200 U/ml的IFN-γ诱导作用MSCs后,以逆转录聚合酶链反应检测IDO mRNA的表达,蛋白印迹法检测IDO蛋白的表达,反相高效液相色谱法检测色氨酸的特异代谢产物犬尿氨酸的特异代谢率,以此判断IDO的活性。以丝裂霉素C灭活的外周血单个核细胞为刺激细胞,异基因T淋巴细胞为反应细胞,与经200 U/ml IFN-γ作用的MSCs组成混合淋巴细胞培养体系,MSCs与反应细胞的比例分别为1:5、1:10、1:50及1:100,部分混合淋巴细胞培养体系中加入IDO的特异性抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT),检测T淋巴细胞增殖率及培养体系中IDO活性。结果MSCs培养传代3代以后的纯度达到95%。在无IFN-γ作用时,MSCs没有IDO mRNA表达,经不同浓度的IFN-γ诱导后,均可检测到IDO mRNA表达,且表达强度呈IFN-γ剂量依赖性;IDO蛋白的表达与IDO mRNA一致;随着IFN-γ浓度的增加,MSCs培养上清液中的色氨酸浓度降低,而犬尿氨酸浓度升高。在无MSCs的混合淋巴细胞培养体系中,T淋巴细胞的增殖率为(80.2±5.7)%,当MSCs与反应细胞之比为1:5、1:10、1:50及1:100时,T淋巴细胞的增殖率分别为(28.1±3.2)%、(38.6±4.0)%、(57.2±2.5)%和(84.1±4.6)%,若在相同的混合淋巴细胞培养体系中加入1-MT,则MSCs对T淋巴细胞增殖的抑制作用基本消失;培养体系中IDO的活性与MSCs的数量成正比。结论γ干扰素在体外能诱导MSCs的IDO表达,其表达水平与γ干扰素呈剂量依赖性;IDO能抑制T淋巴细胞增殖。     

白细胞介素6促胆囊癌细胞增殖、侵袭与JAK/STAT3信号通路的关系

目的:探讨炎症因子白细胞介素6(IL-6)对胆囊癌细胞生物学行为的影响及其与JAK/STAT3信号通路的关系.方法:将胆囊癌细胞株GBC-SD用IL-6或IL-6+AG490(JAK/STAT3通路抑制剂)作用后,分别用MTT法检测增殖情况;Transwell法检测侵袭能力;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)活性;Western blot法检测磷酸化STAT3(p-STAT3)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果:IL-6(10,50,100 ng/mL)作用后,GBC-SD细胞增殖呈浓度依赖性增加(均P＜0.05),AG490能取消IL-6对细胞增殖的促进作用.IL-6作用GBC-SD细胞后,细胞侵袭能力及MMP-9的分泌明显增加(均P＜0.05),细胞p-STAT3和VEGF的表达明显上调,加入AG490后,以上作用均被取消.结论:IL-6能促进胆囊癌细胞的增殖通和侵袭,其作用可能与其活化JAK/STAT3信号通路,从而上调下游的MMP-9和VEGF的表达有关.     

CD4+T淋巴细胞在IgA肾病中致病作用机制研究

目的探讨CD4~+ T淋巴细胞在IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)中致病作用机制。方法选取2017年8月至2018年8月于复旦大学附属闵行医院肾脏科住院治疗且经首次肾活检证实为IgAN患者作为IgAN组(45例),另外纳入我院体检中心体检健康者作为健康对照组(49例),采集健康对照组和IgAN组患者治疗前后的外周血液样本,分离制备外周血淋巴细胞、单核细胞及血清。采用ELISA检测外周血清CD4~+ T淋巴细胞因子,包括γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin,IL)-4、IL-17、IL-21、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)。采用流式细胞仪检测CD4~+ T细胞的分布比例。采用RT-qPCR及Western blot检测JAK/STAT信号通路各信号分子的表达水平。结果 IgAN组血清IL-4、IL-17、TGF-β1、IL-21水平高于健康对照组(P0.05);而IFN-γ水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。使用激素治疗1月后,IgAN组外周血清IL-4、IL-17、TGF-β1、IL-21水平均显著低于治疗前(P0.01)。与健康对照组比较,治疗前IgAN组患者Th2及Treg细胞在T细胞中占比显著升高(P0.05),而Th1的占比在两组受试者之中差异无统计学意义(P0.05)。RT-qPCR及Western blot结果表明,治疗前IgAN组JAK1、JAK3、STAT3和STAT6表达水平显著高于正常对照组(P0.05),而STAT5表达水平显著低于正常对照组(P0.05),两组JAK2、TYK2、STAT1和STAT4表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 CD4~+ T细胞亚群失调可能参与IgAN患者的发病机制,与JAK/STAT信号通路表达失衡有关。因此,CD4~+ T细胞因子(IL-4、IL-17、TGF-β1和IL-21)可能成为治疗IgAN的新靶点和监测IgAN病情的无创生物标志物。     

JAK/STATs信号通路在慢性肾脏病领域作用机制的研究进展

<正>JAK/STATs为酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导因子和转录活化因子(STAT)途径缩写。广泛参与细胞多种生理病理过程,介导细胞生殖分化、免疫调节、迁移凋亡等,是维护机体稳态的重要信号通路,与多器官密切相关。就肾脏而言,JAK/STATs在原发性肾脏病、继发性肾损害、慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)并发症中均发挥重要作用,笔者将近年来相关研究归纳分析,梳理如下。1 JAK/STATs信号通路的结构基础JAK有JAK1、JAK2、JAK3和TYK2,4位家族成员; JAKs下游信号是STAT,STATs家族目前发现共7个成员,包括STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b、STAT6等。     

IL-6在前列腺增生基质细胞上诱导APRE的研究

目的 研究IL-6在前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)的基质细胞上诱导急性期蛋白反应元件(APRE)的活化及STAT3的敲除抑制其活化,推测STAT3介导的JAK/STAT信号及其所激活的ARPE可能作为BPH治疗的靶点.方法 建立IL-6刺激的前列腺基质细胞的体外模型,使用商品化的siRNA,利用Fugene HD进行siRNA转染来敲除STAT3,通过WB检测STAT3表达情况和APRE的活化程度.结果 使用IL-6刺激前列腺基质细胞后,荧光素酶的表达增加水平到9倍,JAK2和STAT3的磷酸化显著性增加.STAT3敲除后,通过荧光素酶的活性检测结果可知在IL-6刺激的情况下,APRE的活性从大约8倍的水平下降到不到2倍.这证实了IL-6介导的JAK/STAT信号通路被严重抑制.结论 JAK2和STAT3的活化能激活APRE的表达,STAT3所介导的JAK/STAT信号及其所激活的ARPE可能作为BPH治疗的靶点.     

小鼠肠移植术前输注表达吲哚胺2,3双加氧酶的供者树突细胞抑制排斥反应

目的观察干扰素γ(IFN-γ)诱导供者(C57BL/6小鼠)脾树突细胞(DC)表达吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的情况;研究受者(BalB/c小鼠)小肠移植术前输注高表达IDO的供者DC对排斥反应的抑制作用。方法用IFN-γ诱导供者DC表达IDO;半定量逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法及毛细管电泳法检测IDO表达水平及活性,混合淋巴细胞培养(MLR)测定IDO刺激T细胞增殖的能力。利用小鼠异位小肠移植模型,设单纯移植组、DC输注移植组(术前输注供者脾DC 2×10~6个)及诱导DC输注移植组(术前输注经IFN-γ诱导的供者脾DC 2×10~6个),术后观察移植肠存活时间并行病理学检查。结果经IFN-γ诱导的脾DC IDO分子mRNA转录水平(相对量)、IDO蛋白表达水平(相对量)及培养液中犬尿氨酸浓度分别为(1.23±0.02)、(2.74±0.01)以及(76.52±0.44)μmol/L,未经IFN-γ诱导的脾DC分别为(1.05±0.05)、(1.40±0.17)及(43.31±0.48)μmol/L,前者显著增强(P<0.01)。脾DC对同种T细胞增殖的刺激作用在IFN-γ诱导后减弱,在加入IDO的特异性抑制剂后增强。输注诱导DC移植组移植肠中位存活时间(12 d)较单纯移植组(6 d)及输注DC移植组(7.5 d)显著延长(P<0.01),而移植肠病理分级显著性降低(P<0.05)。结论IFN-γ可诱导小鼠脾DC高表达活性的IDO,后者可减弱DC刺激T细胞增殖的能力。受者术前输注高表达IDO的供者DC能够诱导针对供者的特异性免疫耐受而减轻排斥反应。     

吲哚胺2,3双加氧酶在移植中的作用

吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是一种免疫调节酶,可催化色氨酸分子中吲哚环发生氧化裂解,是其沿犬尿氨酸途径分解代谢的限速酶.IDO具有免疫调节作用,树突状细胞(DC)是一种功能强大的抗原递呈细胞(APC),是唯一能够激活初始型T细胞的APC.IFN-γ等可刺激其表面表达IDO,并通过降解色氨酸,使局部组织中的色氨酸耗竭,代谢产物犬尿氨酸含量增加,从而抑制T细胞的增殖.因此DC表面表达IDO可能在移植中诱导免疫耐受方面起着重要的作用.     

Janus激酶-信号转导及转录活化因子通路对内毒素/脂多糖体外诱导大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1合成释放的调节作用

目的探讨Janus激酶(JAK)-信号转导及转录活化因子(STAT)通路对内毒素/脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)合成释放的调节作用。方法取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,培养3d后用LPS刺激,分别于刺激前及刺激10、30、60、120min时观察JAK2、STAT1以及STAT3的活化情况,每时相点重复测定4次,以积分吸光度(IA)值表示;另取细胞分为正常组、LPS刺激组、JAK2抑制组、STAT1抑制组、STAT3抑制组,培养3d后用LPS刺激后4组细胞,刺激前2h,后3组分别加入AG490、氟达拉滨及雷帕霉素,观察各组HMGB1基因表达及蛋白释放情况,每组重复测定4次。结果LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞JAK2、STAT1及STAT3在短时间(120min)内活化,其中STAT3活化最为迅速,10min即可达到峰值(7.47±0.56)。JAK2抑制组、STAT1抑制组、STAT3抑制组HMGB1基因表达均明显受抑制,其表达量均明显低于LPS刺激组(P<0.01),其中JAK2抑制组明显高于正常组(P<0.01),其余两个抑制组则与正常组相近(P>0·05);但3个抑制组HMGB1蛋白表达量与LPS刺激组基本相同,均明显高于正常组(P<0.01).结论JAK-STAT通路可在LPS刺激下早期活化,部分参与了诱导HMGB1合成的信号调控过程。     

微小RNA-184通过Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3途径下调B细胞淋巴瘤/白血病-2样蛋白1介导骨肉瘤的化疗耐药的机制

目的探究微小RNA(miRNA, miR)-184通过Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路影响B细胞淋巴瘤/白血病-2样蛋白1(BCL2L1)参与骨肉瘤细胞化疗耐药性的机制。方法选用骨肉瘤细胞株MG63, 采用聚合酶链反应(PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)等方法检测其中miR-184表达水平以及JAK2/STAT3、BCL2L1蛋白表达;转染miR-184模拟物、抑制物序列, 观察对MG63、顺铂培养下的MG63(DPP-MG63)的影响, 另将JAK2/STAT3通路抑制剂AG490与细胞一起培养, 观察细胞变化。采用独立样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析及组内两两比较LSD-t检验进行统计学分析。结果 miR-184在骨肉瘤细胞中降低(t=9.074, P<0.05), 在过表达miR-184后骨肉瘤细胞的增殖、侵袭能力减弱, 凋亡率升高(F=13.810、57.090、59.660, P<0.05), 且其中JAK2/STAT3通路的蛋白表达、BCL2L1蛋白(0.92±0.04)均被抑制, 细胞耐药性...     

人重组TNF相关凋亡诱导配体联合塞来昔布诱导胆囊癌细胞凋亡的作用研究

目的于体外实验观察人重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)联合环氧化酶-2选择性抑制剂塞来昔布对胆囊癌的疗效,初步探讨产生疗效的机制.方法用western-blot法检测塞来昔布作用于胆囊癌细胞株后,抗凋亡蛋白c-FLIP和死亡受体DR4、DR5表达状况.rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞株SGC-996后,采用3种方法检测细胞凋亡状况:(1)细胞的相差显微镜观察;(2)caspase 3、7活性检测;(3)Annexin染色后凋亡细胞流式细胞仪检测.结果塞来昔布可下调SGC-996细胞c-FLIPs的表达,上调DR5的表达,且呈浓度、时间依赖性.rhTRAIL联合塞来昔布作用于胆囊癌细胞后,细胞凋亡水平明显高于单独用药组和对照组.结论塞来昔布可通过下调c-FLIPs表达和上调DR5表达,显著增强rhTRAIL诱导胆囊癌SGC-996细胞凋亡的作用.     

不同浓度γ干扰素诱导大鼠脾脏来源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的变化及对T淋巴细胞增殖的影响

目的 观察不同浓度γ干扰素(IFN-γ)作用下大鼠脾脏来源的树突状细胞(DC)中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO) mRNA和蛋白表达的变化及IDO对同种异体T淋巴细胞增殖的影响.方法 应用细胞因子体外诱导培养大鼠脾脏来源DC,应用流式细胞仪测定大鼠DC特异性分子OX62 和表面分子CD80、CD86的表达.分别用不同浓度(0、100、300、500 U/ml)的IFN-γ诱导作用DC后,实时聚合酶链反应( Real-time PCR)测定DC中IDO mRNA的相对表达水平,Westemblot检测DC中IDO蛋白在DC中的表达水平.同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测不同浓度IFN-γ诱导后的DC对同种异体T淋巴细胞增殖的影响.结果 体外诱导培养的DC光学显微镜下观察,具有典型的树枝状突起.0X62表达率达到80％以上,CD80、CD86的阳性表达也在80％左右;DC的IDOmRNA(2 -△△Ct值分别为:1.010 ±0.094、1.340±0.114、1.700±0.087、2.080±0.150)和蛋白的相对表达量(分别为:0.861 ±0.612、1.155±0.059、1.308±0.068、1.755±0.118)随着IFN-γ作用浓度的增大逐渐增大,分别为:不同浓度组间差异有统计学意义(P＜0.05);各组IFN-γ作用后DC与对照组比较,T淋巴细胞的增殖率显著降低(P＜0.05);且随着IFN-γ作用浓度的增大T淋巴细胞的增殖率逐渐降低,A值分别为:0.458±0.041、0.423±0.030、0.349±0.019、0.312±0.036,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用改良的培养黏附法体外获得纯度较高的大鼠脾脏来源的DC;IFN-γ可以诱导大鼠脾脏来源DC表面活性IDO的表达增加,减弱脾脏DC对同种T细胞增殖的刺激能力.     

TLR4在人胆囊癌细胞株SGC-996的表达及对裸鼠移植瘤生长的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)在人胆囊癌细胞SGC-996的表达及RNA干扰TLR4基因表达后对裸鼠体内成瘤能力的影响.方法 采用免疫组化及逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4在SGC-996细胞的表达.将12只BALB/C裸鼠随机分为两组,实验组皮下注射6×106个经TLR4小干扰RNA稳定转染后的SGC996细胞,对照组注射同数量未经处理的SGC996细胞,连续观察5周,比较两组肿瘤的生长情况,计算成瘤率、生长体积和生长率.结果 SGC-996细胞阳性表达TLR4.两组裸鼠成瘤率均为100%,瘤体平均体积分别为(277.94±7.60)mm3和(474.47±9.99)mm3,平均生长率分别为7.941%和13.556%,瘤体质量分别为(0.76±0.16)g和(1.78±0.23)g,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TLR4表达于人胆囊癌细胞SGC-996,小干扰RNA转染后可以降低TLR4基因表达,从而使SGC996细胞体内成瘤能力下降.     

JAK-STAT途径mRNA在肾癌的表达及临床意义简

目的 研究JAK STAT途径mRNA在人肾透明细胞癌的表达状况及其临床意义。方法 收集人肾细胞癌组织标本20例,良性肾脏组织标本10例。采用RT PCR的方法测定组织内JAK STAT信号途经相关基因IFNAR、TYK2、JAK1、STAT1、STAT1、STAT2 mRNA 的相对表达量,比较肾癌组织和良性肾组织内表达量的差异。结果 肾癌组织中JAK1和STAT1相对表达量分别为0.697±0.122 和0333±0.078;良性肾组织内的表达量为0.957±0.103 和 0.547±0.082。 JAK1和STAT1 mRNA相对表达量显著低于良性肾脏组织（P＜0.05）。IFNAR、TYK2、JAK1和STAT2 mRNA相对表达量与良性肾脏组织无显著差异。结论 肾癌组织JAK1和STAT1 mRNA的表达量降低可能是导致干扰素抵抗的潜在原因。     

胆囊良恶性组织中蛋白质组差异表达及膜联蛋白A3的功能

目的 分离并鉴定胆囊癌和胆囊良性组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断胆囊癌的肿瘤标志物.观察RNA干扰沉默膜联蛋白A3(AnnexinA3)基因对胆囊癌细胞增殖及周期的影响.方法 提取人胆囊癌和胆囊良性组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱和生物学分析.miRNA干扰胆囊癌细胞株中AnnexinA3的表达后,通过噻唑蓝(MTT)实验及流式细胞仪观察癌细胞增殖能力及细胞周期的变化.结果 筛选出在胆囊癌组织中明显差异表达的46个蛋白点,共有17个蛋白质被成功鉴定,其中在胆囊癌组织中高表达的为9个,低表达的为8个,包括AnnexinA3、TTR蛋白等.RNA干扰胆囊癌细胞株AnnexinA3蛋白的表达后,MTT显示干扰后细胞增殖明显下降效率为44.14%(P<0.05).流式细胞仪观察显示干扰后G1期增加(P<0.05),S期减少(P<0.05).结论 胆囊癌组织相对于胆囊良性组织蛋白存在明显差异.干扰AnnexinA3蛋白的表达可以改善胆囊癌细胞的某些恶性生物学行为.     

RNA干扰人膜联蛋白A3对胆囊癌细胞增殖的影响

目的 构建人膜联蛋白A3(annexinA3)基因RNA干扰(miRNA)表达载体,体外研究其对人胆囊癌细胞SGC-996的增殖及凋亡作用.方法 构建4组针对annexinA3的pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR/miRNA表达载体和1组阴性对照序列.脂质体介导瞬时转染人胆囊癌细胞株SGC-996.用RT-PCR和Western印迹检测转染前后annexinA3基因的表达.挑选干扰效率最强的一组表达载体,以MTT法和流式细胞仪检测经miRNA干扰annexinA3对人胆囊癌细胞SGC-996的体外作用.结果 经测序鉴定,annexinA3-miRNA载体构建成功,转染人胆囊癌细胞SGC-996后荧光定量PCR和westem印迹检测显示:annexinA3基因表达及蛋白表达明显降低(P＜0.05);干扰后细胞体外增殖缓慢,增殖明显受抑(P＜0.05).annexinA3基因干扰对细胞周期无明显影响,但能明显增加胆囊癌细胞的凋亡(P＜0.05).结论 AnnexinA3-miRNA表达载体能有效抑制胆囊癌SGC-996细胞annexinA3的表达,抑制肿瘤细胞生长,引起胆囊癌细胞凋亡.AnnexinA3可能是胆囊癌治疗的一个分子靶点.     

吡咯替尼抑制胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭并诱导凋亡的作用研究

背景与目的:胆囊癌是胆道系统中最常见的恶性肿瘤,早期诊断困难,预后较差。研究显示,人表皮生长因子受体2(ErbB2)表达的异常可能在胆囊癌的发生发展中起了重要作用,故本研究通过体外实验观察ErbB2抑制剂吡咯替尼对胆囊癌细胞基本生物学行为的影响,以期为相关的研究与临床引用提供理论与实验基础。方法:选择胆囊癌NOZ细胞与SGC-996细胞为研究对象,用CCK-8法检测吡咯替尼对两种胆囊癌细胞作用的时间与浓度效应;根据CCK-8实验结果,选择最适作用时间下吡咯替尼对两种细胞相应25%(IC25)、50%(IC50)、75%(IC75)抑制浓度为后续实验浓度,通过细胞克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞分析法以及Western blot法分析吡咯替尼对两种胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭能力、凋亡以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:吡咯替尼处理24、48、72 h对NOZ细胞与SGC-996细胞的IC50分别为11.5、3.6、1.4 μmol/L和5.5、5.2、2.4 μmol/L。选择采用作用48 h时各自的IC25、IC50、IC75吡咯替尼浓度(NOZ细胞:1、3.5、12 μmol/L;SGC-996细胞:2.5、5、10 μmol/L)作用后,两种胆囊癌细胞均表现为集落的形成明显减少、迁移和侵袭能力明显减弱、细胞凋亡率明显增加、促凋亡蛋白(Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、cleaved-PARP)明显表达上调、抗凋亡蛋白(Bcl-2、Bcl-2/Bax比值)表达明显下调,且以上变化均呈明显的浓度依赖性(均P<0.05)。结论:吡咯替尼在体外能够抑制胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭,并通过促进凋亡发挥了细胞杀伤作用,为胆囊癌的分子靶向药物治疗提供了新的选择。     

Influence of immunosuppressive agents on tryptophan degradation and neopterin production in human peripheral blood mononuclear cells

The anti-proliferative and immunomodulatory enzyme indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) degrades the essential amino acid tryptophan via the kynurenine pathway. IDO is stimulated during cellular immune responses preferentially by Th1-type cytokine interferon-γ (IFN-γ). IDO activity is estimated by calculating the kynurenine to tryptophan ratio (Kyn/Trp). In human monocyte-derived macrophages and dendritic cells, GTP-cyclohydrolase I is induced in parallel to IDO and produces neopterin. This study investigated the effects of common immunosuppressants on freshly isolated human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in vitro. PBMC were incubated with compounds for 30 min and then either left unstimulated or stimulated with mitogen phytohaemagglutinin (PHA). Concentrations of tryptophan, kynurenine and neopterin were measured in supernatants after 48 h. Kyn/Trp, neopterin and IFN-γ concentrations were significantly higher in PHA-stimulated vs. unstimulated PBMC. Tacrolimus (FK506), cyclosporine A (CsA), sirolimus and methylprednisolone dose-dependently inhibited tryptophan degradation and neopterin production. FK506, CsA and sirolimus showed significant inhibition at concentrations as low as 0.1 μg/ml, whereas prednisolone and methylprednisolone required higher doses to suppress tryptophan degradation. Mycophenolate-mofetil suppressed neopterin formation more efficiently than Kyn/Trp. All tested drugs also strongly decreased mitogen-induced IFN-γ concentrations. Overall the investigated immunosuppressants are effective to inhibit IDO activity and neopterin production in a similar and dose-dependent manner, however with some differences in IC50s when comparing individual compounds. The corresponding changes of IFN-γ concentrations are in line with its role as a trigger of both biochemical changes.